CC BY
98
УДК 616.12-008.331.1-07:575.174.015.3(470.345)
ИНСЕРЦИОННО-ДЕЛЕЦИОННЫЙ ПОЛИМОРФИЗМ ГЕНА АНГИОТЕНЗИН-ПРЕВРАЩАЮЩЕГО ФЕРМЕНТА У ЛИЦ С ЭССЕНЦИАЛЬНОЙ АРТЕРИАЛЬНОЙ ГИПЕРТЕНЗИЕЙ
Людмила Никитична Гончарова, Валерий Алексеевич Снеговской,
Оксана Николаевна Кузовенкова
Кафедра факультетской терапии (зав. — канд. мед. наук В.Н. Антипова) Мордовского государственного университета, г. Саранск, e-mail: glnsm@mail.ru
Реферат
С целью выявления генетических факторов риска развития гипертонической болезни изучался инсерци-онно-делеционный полиморфизм гена ангиотензин-превращающего фермента у пациентов с семейной и эссенциальной артериальной гипертонией — коренных жителей Республики Мордовия. Обследовано 427 человек. Проведен сравнительный анализ встречаемости аллелей и генотипов гена ангиотензин-превращающего фермента у пациентов данных категорий.
Ключевые слова: гипертоническая болезнь, ген ан-гиотензин-превращающего фермента, полиморфизм.
В настоящее время наиболее распространенной сердечно-сосудистой патологией среди населения Республики Мордовии (РМ), как и в Российской Федерации, остается артериальная гипертензия (АГ) [3]. Выборочные исследования, проводимые на территории РМ, показывают, что распространенность АГ варьирует от 20 до 50%. С учетом определенной схожести поведенческих и социальных факторов, влияния окружающей среды вызывает интерес изучение генетических причин у больных с отчетливой семейной линией наследования АГ и больных с эссенциальной АГ.
Многочисленные исследования позволили определить круг генов-кандидатов, вовлеченных в патогенез АГ. Наиболее изучен ген ренин-ангиотензиновой системы — ангиотензин-превращающий фермент (АСЕ) [5]. Под действием этого фермента происходят образование ангиотензина II — наиболее активного сосудосуживающего пептида и деградация бради-кинина — важного сосудорасширяющего фактора [1]. Существует ряд полиморфизмов в гене ACE, один из них обусловлен присутствием (insertion) или отсутствием (deletion) элемента Alu размером 287 пар оснований в интроне 16 [6].
Целью настоящего исследования являлось изучение роли инсерционно-де-леционного полиморфизма гена ACE в 564
развитии АГ у пациентов с семейной и эссенциальной АГ, у которых повышение АД в семье выявлялось только по анамнезу. В соответствии с поставленной целью проводились сравнительные исследования встречаемости аллелей и генотипов гена ACE у пациентов с семейной и эссенциальной АГ, а также анализ ассоциации гена ACE с уровнем АД, гипертрофии левого желудочка (ГЛЖ), липидным спектром, индексом массы телла (ИМТ) и индексом талии/бедер (ИТ/Б) в обеих группах.
Исследование охватывало 427 человек, из них у 171 пациента была определена четкая семейная линия АГ, т.е. наличие семейной отягощенности по АГ хотя бы у одного родственника (бабушка/дедушка/ отец/мать/брат/сестра). В исследование вошли 95 семейных пар: мать—дочь (23), мать—сын (20), бабушка—мать—дочь (1), отец—сын (5), сестра—сестра (25), брат— брат (6), брат—сестра (15). У 256 пациента АГ была выявлена по семейному анамнезу. Контрольная группа состояла из 102 практически здоровых лиц (мужчин — 42, женщин — 60), без признаков сердечно-сосудистых и других хронических заболеваний.
Пациенты были сопоставимы между собой по возрастному, половому составу, уровню систолического и диастолического АД. Основная и контрольная группы были этнически однородными.
Обследование включало сбор жалоб, анамнеза, определение антропометрических показателей (масса тела, ИМТ, ИТ/Б), лабораторные методы исследования, ЭКГ в 12 стандартных отведениях, эхокардио-графию (ЭхоКГ). За АГ принимали уровень АД>140/90 мм Hg (ВОЗ/МОАГ, 1999; ВНОК, 2004). Для выявления ожирения проводилось взвешивание на стандартных весах. ИМТ (индекс Кетле) рассчи-
тывали по формуле: ИМТ=масса тела (кг) /рост (м2). объем талии и бедер измеряли для выявления типа ожирения с последующей оценкой их соотношения.
Эхокардиографические исследования выполняли на аппарате А1ока-5500 (Япония). Определяли конечный систолический (КСР) и диастолический (КДР) размеры ЛЖ, толщину задней стенки ЛЖ (ТЗСЛЖ) и межжелудочковой перегородки (ТМЖП). Массу миокарда левого желудочка рассчитывали по формуле L. Teicholz. При обследовании у пациентов семейной АГ независимо от их национальной принадлежности были выявлены достоверно сопоставимые параметры эхокардиографии (табл. 1). Из исследования исключались пациенты с симптоматической АГ, острым коронарным синдромом.
Таблица 1
Характеристика обследованных групп (M±m)
Генетический полиморфизм исследовали в лаборатории молекулярной генетики РКНПК им. А.Л. Мясникова. После получения информированного согласия у пациентов из локтевой вены забирали 5 мл крови в пробирки типа вакутейнера с ЭДТА. Кровь замораживали при —70°С, затем транспортировали в Москву и для этого использовали изометрические контейнеры с аккумуляторами холода, не допускающими размораживания. Геном-
ную ДНК выделяли из лимфоцитов периферической крови методом фенольнохлороформной экстракции, описанным M.B. Johns et al. Локус ACE анализировали методом ПЦР с использованием стандартных олигонуклеотидных праймеров. Продукты амплификации изучали в 2%-ном агарозном геле, окрашивали бромистым этидием и идентифицировали в ультрафиолетовом свете.
Статистический анализ результатов был произведен с помощью пакетов программ Statistica 6.0, программного обеспечения MS Excel XP. Количественные непрерывные показатели проверялись на нормальность распределения с помощью критерия Колмогорова — Смирнова, а также по величине асимметрии и эксцесса кривой Гаусса. Из методов параметрической статистики использовался критерий t Стьюдента для оценки количественных непрерывных величин при нормальном распределении. При ненормальном распределении количественные показатели оценивали методами непараметрической статистики: критерий Манна—Уитни. При попарном сравнении частот генотипов и аллелей в группах больных и здоровых лиц использовался индекс %2. Достоверным принималось значение р< 0,05.
Распределение частот генотипов ин-серционно-делеционного полиморфизма гена ACE среди пациентов с четкой семейной наследственностью по АГ было следующим: II — 22,81%; ID — 50,88%; DD — 26,31%. I-аллель был выявлен в 48,25%, D-аллель — в 51,75% случаев (р<0,05). У пациентов с наличием эссенциальной АГ по анамнезу соотношение II:ID:DD-геноти-пов составило 33,33%:44,83%:21,84%, а частоты I и D-аллелей — 55,75%:44,25%. Эмпирическое распределение частот генотипов гена ACE соответствовало теоретически ожидаемым равновесным распределениям Харди—Вайнберга. Распределение генотипов и аллелей в группе контроля: II — 21,95%, ID — 41,46%, DD — 36,59%.
Таким образом, среди пациентов как с отчетливой семейной АГ (50,88%), так и с эссенциальной АГ (44,83%) имело место достоверное накопление промежуточного I/D генотипа гена АСЕ (р<0,05). Частота встречаемости II, DD генотипов среди пациентов обеих групп достоверно не различалась. При анализе частот аллелей
Показатели Наследственная АГ (n=171) Эссенци-альная АГ (n=174) Р
Возраст, лет 50,37±1,04 52,79±0,68 0,346
Пол, муж./жен. Ж-120, М-51 Ж-138, М-36
Продолжительность АГ, лет 14,62±1,08 15,16±0,68 0,664
Масса тела, кг 87,55±1,23 87,26±1,41 0,877
САД, мм Щ 170,12±2,15 170,16±2,46 0,989
ДАД, мм Щ 100,89±1,07 102,50±1,24 0,324
ЧСС, уд. в 1 мин 80,56±1,08 78,20±1,20 0,142
ОХС, ммоль/л 5,19±0,14 5,49±0,12 0,087
ТГ, ммоль/л 1,15±0,32 1,22±0,27 0,342
Глюкоза крови, ммоль/л 5,60+0,21 5,45+0,16 0,622
КСР, см 3,65±0,09 3,38±0,10 0,054
КДР, см 5,23±0,08 5,12±0,08 0,302
ТЗСЛЖ, см 1,22±0,02 1,18±0,02 0,112
ТМЖП, см 1,28±0,02 1,31±0,03 0,468
ММЛЖ, г 142,19±5,31 127,92±4,97 0,051
ФВ, % 54,24±1,36 56,37±0,84 0,171
Таблищ 2
Клиническая характеристика больных с разным типом генетического полиморфизма гена ACE
Показатели Наследственная АГ Эссенциальная АГ
II ID DD II ID DD
САД, мм Hg 178,48±5,33 172,73±3,58 171,18±4,72 172,35±8,72 167,33±5,35 181,24±8,59
ДАД, мм Hg 105,65±2,51 102,17±1,73 97,39±2,38 101,58±3,94 101,82±2,44 106,82±3,87
ИМТ 32,85±0,95 31,82±0,83 32,46±1,05 30,48±0,83 32,29±0,97 31,36±1,24
ОХС, ммоль/л 5,49±0,31 5,11±0,19 5,19±0,28 5,19±0,15 5,33±0,21 4,93±0,23
ТГ, ммоль/л 2,9±0,33 2,98±0,23 3,01±0,32 1,89±0,17 2,2±0,17 2,65±0,28
Глюкоза, ммоль/л 5,59±0,39 5,39±0,29 5,14±0,37 4,81±0,20 5,34±0,38 5,06±0,23
КДР, см 5,32±0,16 5,18±0,12 5,21±0,18 5,06±0,14 5,15±0,21 4,95±0,22
КСР, см 3,75±0,19 3,58±0,12 3,65±0,19 3,22±0,20 3,59±0,24 3,31±0,32
МЖП, см 1,25±0,02 1,28±0,03 1,34±0,04 1,31±0,04 1,35±0,04 1,37±0,09
ЗСЛЖ, см 1,18±0,02 1,23±0,03 1,25±0,03 1,23±0,02 1,21±0,03 1,27±0,04
ММЛЖ, г 139,33±9,10 141,85±8,04 146,32±11,6 126,77±10,9 128,64±13,6 135,98±15,7
ФВ, % 51,38±2,77 56,00±1,62 53,57±1,79 57,22±1,44 54,13±2,30 53,50±2,41
I/D полиморфизма гена АСЕ у больных с семейной и эссенциальной АГ также статистически значимых различий не выявлено.
Следующим этапом был анализ ассоциации I/D полиморфизма гена ACE у лиц с семейной АГ и эссенциальной АГ в зависимости от уровня АД, ИТ/Б, общего ХС и ГЛЖ. Результаты представлены в табл. 2.
Мы не выявили взаимосвязи гомози-готности по D-аллелю гена ACE с величиной АД, с увеличением массы миокарда ЛЖ и частотой эхокардиографически определяемой ГЛЖ, что согласуется с проведенными ранее исследованиями [4]. Не было получено различий в распределении анализируемых аллелей и генотипов ин-серционно-делеционного полиморфизма гена АСЕ между пациентами с четкой семейной линией наследования АГ и пациентами с эссенциальной АГ. По некоторым данным, аллель DD ассоциирована с гипертрофией миокарда при АГ [2]. По другим данным, этот структурный вариант гена не оказывает влияния на массу миокарда ЛЖ, что согласуется с нашими результатами. Таким образом, необходимо дальнейшее накопление материала по оценке роли генов — кандидатов в развитии АГ.
ЛИТЕРАТУРА
1. Майданник В.Г., Хайтович Н.В., Досенко В.Е. и др. Делеционный полиморфизм гена ангиотензин-превра-щающего фермента у детей и подростков с артериальной гипертензией//Педиатрия. — 2007. — № 86 (2). — С. 24—28.
2. Мустафина О.Е, Туктарова И.А., Бикмеева А.М. и др. Исследование инсерционно-делеционного полиморфизма гена ангиотензин-превращающего фермента в популяциях Волго-Уральского региона//Генетика. — 2001. — № 37 (3). — С. 426—430.
3. Оганов Р.Г., Масленникова Г.Я. Сердечно-сосудистые заболевания в Российской Федерации во второй половине ХХ столетия: тенденции, возможные причины, перспективы//Кардиология. — 2000. — № 40 (4). — С. 4—8.
4. Lindpaintner K., Lee M, Larson M.G. et al. Absence of association or genetic linkage between the angiotensinconverting enzyme gene and left ventricular mass// N. Engl. J. Med. — 1996.— Vol. 334(16).— P. 1023—1028.
5. Shunkert H, Hense H, Holmer S. et al. Association between a deletion polymorphism of the angiotensinconverting enzyme gene and left ventricular hypertrophy// N. Engl. J. Med. — 1994. — Vol. 330. — P. 1634—1638.
6. Staessen J.A., Wang Ji.G, Ginocchi G. еt al. The deletion/insertion polymorphism of the converting enzyme gene and cardiovascular-renal risk//J. Hypertens. — 1997. — Vol. 1. — P. 48.
Поступила 01.07.08.
INSERTION-DELETION GENE POLYMORPHISM OF THE ANGIOTENSIN-CONVERTING ENZYME GENE IN PATIENTS WITH ESSENTIAL HYPERTENSION
L.N. Goncharova, V.A. Snegovskoi, O.N. Kuzovenkova
Summary
In order to identify genetic risk factors for the development of hypertension conducted was an investigation of the insertion-deletion gene polymorphism of the angiotensin-converting enzyme gene in patients with a family history of essential arterial hypertension, the indigenous inhabitants of the Republic of Mordovia. Examined were 427 people. Conducted was a comparative analysis of occurrence of alleles and genotypes of the angiotensin-converting enzyme gene in patients of the given categories.
Key words: hypertension, angiotensin converting enzyme gene, polymorphism.
