CC BY
26
Приложение 1
Использование плазмафереза с целью коррекции реперфузионной травмы при трансплантации почки
Салимов Э.Л., Рагимов А.А., Каабак, М.М., Байрамалибейли И.Э., Нечаев И.А. Кафедра клинической трансфузиологии ГБОУ ВПО Первый МГМУ им. И.М.Сеченова Минздрава России, Москва
Введение. Одна из центральных ролей в развитии синдрома ишемии-реперфузии (И/Р) принадлежит циркулирующим факторам, таким как хемокины, цитокины и молекулы адгезии, которые регулируют процесс проникновения лейкоцитов в травмированный орган.
Цитокины - низкомолекулярные белки, чья биологическая активность осуществляется через специфические рецепторы, расположенные на клеточных мембранах. Именно цитокины являются медиаторами первого ряда, которые сами способны вызывать каскады гуморальных реакций.
Коррекция синдрома ишемии-реперфузии с помощью плазмафереза осуществляется благодаря снижению иммунного ответа организма в ранние сроки после экспозиции ал-лоантигенов путем удаления циркулирующих цитокинов и хемокинов, т.е. происходит минимизация последствий репер-фузионного повреждения вследствие снижения интенсивности развития процессов, приводящих к усилению иммуно-генности трансплантата.
Материалы и методы. Оценка эффективности использования плазмафереза после пересадки трупной почки для коррекции реперфузионного повреждения основана на наблюдении за 15 больными, которым проводился интраопера-ционный плазмаферез с заменой 1 объема циркулирующей плазмы. В качестве замещения использовали 10% альбумин с физиологическим раствором (1:1) и свежезамороженную
донорскую плазму. Контрольную группу составили 15 реципиентов парных почек, плазмаферез которым не проводили.
Результаты и обсуждение. Следует полагать, что чем менее выражена степень реперфузионного синдрома, тем скорее восстанавливается функция пересаженной почки. Именно исходя из этого положения мы взяли следующие критерии для оценки эффективности проводимого плазмафереза: диурез в течение первых 24 ч, количество сеансов гемодиализа после операции, время субнормализации концентрации кре-атинина крови (Сгр < 3 мг%). В основной группе первичная функция трансплантата была лучше, чем в соответствующей контрольной: диурез в 1-е сутки после операции - 2636 против 2104 мл в контрольной группе; снижение креатинина до 3 мг% наступило через 12,8 против 18,6 сут в контроле (р < 0,05); количество сеансов гемодиализа на одного больного в послеоперационном периоде составило 0,83 против 2,21 в контроле (р < 0,05); количество больных с послеоперационным гемодиализом - 40 против 67% в контроле (р < 0,05).
Заключение. Сравнение обеих групп показало, что начальная функция трансплантированной почки была значительно лучше в основной группе. Таким образом, можно говорить об эффективности использования интраопера-ционного плазмафереза после трансплантации почки для коррекции посттрансплантационного синдрома ишемии-реперфузии.
Мезенхимные стволовые клетки, экспрессирующие чужеродный ген, отторгаются при переносе в организм
Сац Н.В., Шипунова И.Н., Костюшев Д.С., Дризе Н.И. ФГБУ Гематологический научный центр Минздрава России, Москва
Введение. Мезенхимные стволовые клетки (МСК) переносят кроветворное микроокружение и являются привлекательным объектом для генотерапии. Считается, что они им-мунотолерантны и длительно функционируют в организме реципиента. Маркирование МСК открывает новые возможности для изучения отдела стволовых клеток стромы. Так как МСК редко делятся в условиях физиологической стабильности, для переноса маркерного гена в них удобно использовать векторную систему на основе лентивирусов.
Цель работы. Изучить судьбу МСК, несущих ген зеленого флюоресцентного белка (EGFP), в организме реципиента.
Материалы и методы. МСК мыши в длительной культуре костного мозга инфицировали лентивекторами, несущими ген EGFP с активным или инактивированным промотором. Маркированные МСК имплантировали под капсулу почки сингенных мышей. В очагах эктопического кроветворения, образованных из МСК, анализировали долю маркированных колониеобразу-ющих единиц фибробластов (КОЕф) методом ПЦР.
Результаты и обсуждение. Доля в культуре маркированных клеток, экспрессирующих ЕGFP, составила 43,3 ± 11%, а КОЕф, полученных из подслоя, - 32 ± 4,3%. При имплантации таких подслоев под капсулу почки образовывались очаги эктопического кроветворения, в которых не всегда выявлялись маркированные стромальные клетки. Ни в одном эксперименте не обнаружены светящиеся клетки. В очагах эктопического кроветворения, образованных МСК, несущими ген EGFP, было выявлено 6,3 ± 2,8% КОЕф. При использовании ленти-вектора, несущего ген ЕGFP с инактивированным промотором, обнаруживалось 68 ± 6% маркированных КОЕф. В обоих случаях флюоресцентный белок в КОЕф не обнаружен.
Заключение. Процент КОЕф, маркированных EGFP с активным промотором, снижен в 10 раз, что указывает на возможное иммунологическое отторжение клеток с чужеродным белком. При использовании МСК, несущих встроенный ген интереса, необходимо включать анализ на их иммуното-лерантность.
Ингибиторы защитных систем клетки усиливают эффект противолейкозных лекарственных средств in vitro
Свирновский А.И., Пасюков В.В., Дрейчук Н.А., Тарас И.Б., Федуро Н.А., Сергиевич О.В. ГУ Республиканский научно-практический центр трансфузиологии и медицинских биотехнологий, Минск, Беларусь
Введение. При повреждении опухолевых клеток в них запускаются несколько репаративных систем, восстанавливающих определенный тип повреждений, что вносит вклад в формирование устойчивости опухолевых клеток к терапии.
Цель работы. Оценить возможность модификации лекарственной резистентности клеток хронического лим-фоцитарного лейкоза (ХЛЛ) в присутствии ингибиторов
выведения из клетки цитостатиков, их детоксикации и репарации ДНК.
Материалы и методы. В культуре клеток ХЛЛ определяли их чувствительность к повреждению в условиях соче-танного воздействия лекарственных средств, циклоспорина А, бутионин сульфоксимина, кофеина, ванилина, Ки 7026 и CGK 733 с помощью проточной цитофлюориметрии и теста на цитотоксичность.
Гематол. и трансфузиол., 2014, т. 59, № 1
Результаты и обсуждение. Сочетанное влияние ингибиторов белков множественной лекарственной резистентности и системы метаболизма глутатиона усиливает эффект флу-дарабела, лейкладина, доксорубицина, иматиниба на клетки при ХЛЛ. Комплекс ингибиторов эффективней, чем их использование по отдельности.
Заключение. Разработка экспериментальной модели для выяснения оптимального сочетания лекарственных средств и изученных ингибиторов в клеточной культуре является основой создания системы максимально возможного подавления резистентности лейкозных клеток к лекарственным средствам.
Печеночные порфирии в России: мутационный анализ
Селиванова Д.С., Сурин В.Л., Лучинина Ю.А., Финк О.С., Пустовойт Я.С., Карпова И.В., Кравченко С.К., Пивник А.В. ФГБУ Гематологический научный центр Минздрава России, Москва
Введение. Порфирии - группа наследственных заболеваний, обусловленных дефицитом одного из ферментов системы биосинтеза гема. Группа печеночных порфирий объединяет острую перемежающуюся порфирию (ОПП), вариегатную порфирию (ВП), врожденную копропорфирию (ВКП) и позднюю кожную порфирию (ПКП). Первые три заболевания выделяются в группу острых печеночных пор-фирий. Для них характерен доминантный тип наследования, почти все пациенты являются гетерозиготами по дефектному гену: для ОПП это ген порфобилиногендезаминазаы (PBGD), для ВКП - ген копропорфириногеноксидазы (СРОХ), для ВП - ген протопорфириногеноксидазы (РРОХ). Эти заболевания проявляются в виде приступов разной степени тяжести, провоцируемых различными экзогенными и эндогенными факторами, и имеют достаточно низкую пенетрантность мутантного гена (15-20%). ПКП имеет две формы - спорадическую и наследственную, обусловленную мутациями в гене уропорфириноген-1-декарбоксилазы (UROD).
Цель работы. Анализ мутаций у российских больных печеночными порфириями.
Материалы и методы. В исследование включены неродственные больные, поступившие в Гематологический научный центр в период с 1997 по 2013 г., среди них с ОПП 122 больных, ВКП 4 больных, ВП 7 больных и ПКП 19 больных, а также 240 родственников больных ОПП из 86 семей. Диагностику типа порфирии проводили по сочетанию клинических и биохимических данных. Поиск мутаций проводили с использованием секвенирования кДНК или всех функционально важных фрагментов генов PBGD, СРОХ, РРОХ и
UROD, полученных с помощью ПЦР или ОТ-ПЦР. У больных ПКП анализировали также мутации в гене HFE.
Результаты и обсуждение. У 122 ОПП больных обнаружено 77 различных мутаций в гене PBGD, из них 47 ранее в мировой популяции не встречались. Наиболее распространенными оказались 5 мутаций: 53delT - (12), Arg173Trp (10), Gly111Arg (6), Arg149Term (5) и Cys247Arg (4). С помощью гаплотипирования показано, что мутация 53delT, обнаруженная только в России, имеет монофилетическое происхождение. Для двух пациентов показано возникновение мутации de novo. Из 240 обследованных родственников больных ОПП (86 семей) 93 оказались бессимптомными носителями му-тантного гена PBGD. У 7 больных ВП в гене PPOX были обнаружены 7 различных мутаций. Пять из них - 356 ins19bp, IVS9+1 G^A, IVS10-2 delA, CD 369-370(1107_1109) delG и Gly111Ser - ранее в мировой популяции не встречались. Анализ гена CPOX у 4 больных ВКП выявил 3 мутации, одна из которых (His327Arg) встретилась дважды и оказалась новой, как и мутация сплайсинга IVSI+1 G^A. Проведен полный мутационный анализ гена UROD для 19 больных ПКП. У 6 из них установлена наследственная форма заболевания. Выявлены в гетерозиготном состоянии мутации Val90Ala, Val134Gln (3 случая) и Gln206Term (2 случая).
Заключение. Наиболее распространенной мутацией в гене HFE оказалась H63D. Она была выявлена у 4 пациентов в гомозиготном и у 9 пациентов в гетерозиготном состоянии (частота встречаемости мутантного аллеля 44,7%). Мутация C282Y была обнаружена только 1 раз в гетерозиготном состоянии. Мутация S65C не зафиксирована ни разу.
Нишеобразующие элементы стромы костного мозга и лимфатических узлов при хроническом
лимфолейкозе
Семенова Н.Ю., Бессмельцев С.С., Ругаль В.И. ФГБУ Российский НИИ гематологии и трансфузиологии ФМБА России, Санкт-Петербург
Введение. Актуальной проблемой в современной гематологии является анализ стромально-паренхиматозных взаимодействий в костном мозге и в лимфатических узлах (ЛУ) в норме и при лимфопролиферативных заболеваниях. В то же время структурная организация элементов кроветворного и лимфоидного микроокружения, участвующих в формировании ниши клеток-предшественниц гемолимфо-поэза при одном из самых распространенных лимфопро-лиферативных заболеваний - хроническом лимфолейкозе (ХЛЛ), мало изучена.
Цель работы. Определить морфофункциональные особенности стромальных элементов кроветворного и лимфоид-ного микроокружения, участвующих в формировании ниши лимфоидных клеток-предшественниц при ХЛЛ.
Материалы и методы. Исследованы полученные до начала терапии трепанобиоптаты подвздошной кости 79 больных ХЛЛ в возрасте 49-73 лет и биопсии ЛУ 57 больных той же возрастной группы. Использовали гистологические, гистохимические, морфометрические (VideoTest®) и имму-ногистохимические методы.
Результаты и обсуждение. При изучении паренхимы костного мозга больных ХЛЛ было выделено три типа опухолевой инфильтрации: нодулярный, интерстициальный и диффузный. Морфологические признаки реакции стромы костного мозга имелись при всех трех видах опухолевой инфильтрации. Импрегнация препаратов серебром показала увеличение количества ретикулиновых нитей с заметным формированием очагов ретикулинового склероза при интерстициальном и диффузном типах, включая эндостальные зоны. Также прослеживается тенденция увеличения количества сосудов микроциркуля-торного (МЦР) русла при прогрессировании инфильтрации костного мозга. При диффузной инфильтрации площадь сосудов увеличилась почти в 2 раза по сравнению с контрольной группой (17,9 ± 4,7 против 9,1 ± 1,2%), и, что особенно важно, отмечено увеличение количества сосудов в субэндостальных пространствах. Анализ эндостальных клеток показал увеличение количества клеток на единицу площади при интер-стициальной (1,8 ± 0,4 против 1,4 ± 0,2 в группе сравнения) и диффузной (2,3 ± 0,7) инфильтрации, а также изменение морфологии клеток. В биоптатах ЛУ больных ХЛЛ отмечались
