CC BY
56
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
Екатерина Геннадиевна Зенит-Журавлева', Людмила Александровна Седакова2, Натан Танфелевич Райхлин3, Екатерина Михайловна Уханова4, Саида Шамильевна Каршиева5, Ирина Алексеевна Букаева6, Елена Михайловна Трещалина7
ИНГИБИРОВАНИЕ РОСТА МЕЛАНОМЫ В16^10 ДИКАРБАМИНОМ, ОБУСЛОВЛЕННОЕ ЕГО СПОСОБНОСТЬЮ РЕГУЛИРОВАТЬ СОДЕРЖАНИЕ МАРКЕРОВ ПРОЛИФЕРАЦИИ Ю-67, В23/НУКЛЕОФОЭМИНА И С23/
НУКЛЕОЛИНА
' Младший научный сотрудник, лаборатория комбинированной терапии опухолей НИИ экспериментальной диагностики и терапии опухолей ФГБУ «РОНЦ им. Н. Н. Блохина» РАМН (''5478, РФ, г. Москва, Каширское шоссе, д. 24) 2 Старший научный сотрудник, лаборатория комбинированной терапии опухолей НИИ экспериментальной диагностики и терапии опухолей ФГБУ «РОНЦ им. Н. Н. Блохина» РАМН (''5478, РФ, г. Москва, Каширское шоссе, д. 24)
3 Д. м. н., профессор, ведущий научный сотрудник, лаборатория гистохимии и электронной микроскопии
НИИ клинической онкологии ФГБУ «РОНЦ им. Н. Н. Блохина» РАМН (''5478, РФ, г. Москва, Каширское шоссе, д. 24)
4 Лаборант-исследователь, лаборатория комбинированной терапии опухолей НИИ экспериментальной
диагностики и терапии опухолей ФГБУ «РОНЦ им. Н. Н. Блохина» РАМН (''5478, РФ, г. Москва, Каширское шоссе, д. 24) 5 К. б. н., старший научный сотрудник, лаборатория комбинированной терапии опухолей НИИ экспериментальной диагностики и терапии опухолей ФГБУ «РОНЦ им. Н. Н. Блохина» РАМН (''5478, РФ, г. Москва, Каширское шоссе, д. 24) 6 К. б. н., старший научный сотрудник, отдел патологической анатомии опухолей человека НИИ клинической онкологии ФГБУ «РОНЦ им. Н. Н. Блохина» РАМН (''5478, РФ, г. Москва, Каширское шоссе, д. 24) 7 Д. м. н., профессор, руководитель, лаборатория комбинированной терапии опухолей НИИ экспериментальной диагностики и терапии опухолей ФГБУ «РОНЦ им. Н. Н. Блохина» РАМН (''5478, РФ, г. Москва, Каширское шоссе, д. 24)
Адрес для переписки: 115478, РФ, г. Москва, Каширское шоссе, д. 24, НИИ экспериментальной диагностики и терапии опухолей ФБГУ «РОНц им. Н. Н. Блохина» РАМН, лаборатория комбинированной терапии опухолей, Трещалина Елена Михайловна; е-mail: [email protected]
Известно, что индуктор дифференцировки дикарбамин ингибирует рост некоторых перевиваемых опухолей, в том числе мышиной меланомы В16^10. Механизм противоопухолевого эффекта дикарба-мина до конца не ясен, но предварительные исследования показали, что он может реализоваться через уменьшение продукции регуляторных белков, ответственных за пролиферацию клеток. цель данного исследования заключалась в оценке влияния дикарбамина на экспрессию маркеров пролиферации Ю-67 и аргирофильных белков областей ядрышковых организаторов (Ag-ОЯОР-белков) В23/нуклеофоз-мина и С23/нуклеолина в процессе ингибирования роста перевиваемой меланомы В16^10. Были получены данные, свидетельствующие о сопряженности ингибирующего действия известного индуктора цитодифференцировки дикарбамина на эту опухоль с более чем двукратным снижением экспрессии всех исследованных маркеров.
Ключевые слова: меланома В16^10, маркеры пролиферации, дикарбамин.
Интерес к Ag-ОяОР-белкам как прогностически значимым маркерам возник более 20 лет назад. В ходе клинических исследований по морфометрическому анализу Ag-ОяОР-белков у больных меланомой различной степени генерализации были получены противоречивые данные о роли этих белков в прогнозе данного заболевания [1—5]. Известно, что основную часть Аg-ОЯОР-белков (до 70%) составляют В23/нуклеофозмин и С23/нуклеолин. Эти белки участвуют в регуляции функций РНК-полимеразы, в транскрипции, репликации и рекомбинации ДНК, в процессинге рРНК, в стабилизации структуры хроматина и мРНК, в процессах митоза и апоптоза. Гиперэкспрессия С23/нуклеолина и В23/нуклеофозмина коррелирует со скоростью пролиферации в активно делящихся клетках, в том числе злокачественных [1; 6—13]. Эти белки рассматриваются в качестве биомаркеров цитопролиферации у онкологических больных, а также в различных моделях опухолевого роста [14—24]. Обнаружение способности цитодифференцирующего агента дикарбамина инги-бировать рост опухоли в эксперименте параллельно с уменьшением суммарного содержания Ag-ОяОР-белков стало причиной углубленного изучения механизма его антипролиферативного действия с контролем уровня экспрессии вышеперечисленных маркеров [25—28]. Для настоящего экспериментального исследования была выбрана чувствительная к дикарбамину перевиваемая мышиная метастазирующая меланома B16/F10.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Меланому B16/F10 из коллекции опухолевых штаммов ФГБУ «РОНц им. Н. Н. Блохина» РАМН (2-й пассаж) трансплантировали мышам-самкам BDF1 массой тела 20—22 г из разведения ФБГУ «РОНц им. Н. Н. Блохина» РАМН, которых содержали в виварии. Взвесь опухолевых клеток трансплантировали мышам по стандартной методике [29] по 40 мг подкожно, после чего мышей делили на группы (n = 15). Опытная группа ежедневно получала дикарбамин по 5 мг/кг внутрь с 3-х по 13-е сутки, контрольная группа — питьевую воду в аналогичном режиме. На 1, 6 и 11-е сутки после окончания лечения у всех мышей измеряли опухоли и определяли стандартный показатель эффективности торможения ее роста (ТРО, %).
На 6-е сутки после лечения 7—8 мышей из обеих групп умерщвляли, выделенные опухолевые узлы фиксировали в 10% нейтральном формалине и заключали в парафин. На гистологических срезах толщиной 5—8 мкм определяли показатели пролиферации по следующим параметрам: суммарное содержание Ag-ОяОР-белков — с помощью гистохимической окраски азотнокислым серебром [30], содержание регуляторных белков Ki-67 и отдельных Ag-ОяОР-белков — В23/нуклеофозмина и C23/ нуклеолина — с помощью иммуногистохимической реакции с использованием специфических моноклональ-ных антител (nucleophosmin n/23, клон mouse mAbB23, «Labvision»; nucleolin/4E2, клон mouse mAb4Е2, «Abcam»; клонMIB-1, «Dako»). Количественный анализ гистохими-
© Зенит-Журавлева Е. Г., Cедакова Л. А., Райхлин Н. Т., Уханова Е. М., Каршиева С. Ш., Букаева И. А., Трещалина Е. М., 2013
УДК 616-006.81-092.9:577.2.088:615.277.3
ческих показателей проводили по числу специфически окрашенных гранул серебра по сравнению с контролем. Для оценки пролиферативной активности опухоли подсчитывали процент окрашенных клеток из 500 клеток в «горячих» точках среза. О содержании белков судили по доле иммуногистохимически окрашенных клеток, интенсивность реакции оценивали как слабую ( + ), умеренную (++) или высокую (+ + +).
Статистическую обработку полученных данных проводили по Стьюденту с определением критерия t и оценкой достоверности различий (р) между группами.
РЕЗУЛЬТАТЫ Динамика роста меланомы В16^10 под действием дикарбамина
Под действием дикарбамина скорость роста меланомы В16^10 существенно замедляется, о чем свидетельствует ТРО, равный 70, 76 и 81% (р < 0,05) соответственно на 1, 6 и 11-е сутки после окончания лечения (рис. 1).
Пролиферативная активность меланомы В16^10 под влиянием дикарбамина
На 6-е сутки после курса лечения дикарбамином, когда наблюдалось торможение роста меланомы на 76%, проводили патоморфологическое исследование и оценивали содержание маркеров пролиферации в опухоли. На срезах, окрашенных гематоксилином и эозином, видно, что в контрольной группе опухоль состоит из полиморфных клеток, образующих сплошные поля, реже — тяжи или отдельные ячейки (рис. 2, А). В цитоплазме многих клеток содержится пигмент меланин, в опухоли встречаются очаги некроза. В группе с дикарбамином опухолевые клетки также полиморфны, их размеры колеблются в небольших пределах (рис. 2, В). Клетки образуют солидные поля, отдельные ячейки или тяжи. В цитоплазме не-
5000 4500
0 13 17 22
Время после трансплантации меланомы B16/F10, сут
Рисунок 1. Динамика роста меланомы В16^10 у мышей BDF1 после воздействия дикарбамином. 1 — контроль, 2 — дикарбамин.
2
которых клеток содержится пигмент меланин. Сосуды в опухоли развиты, встречаются некрозы.
Динамика суммарного содержания Ag-ОЯОР-белков под действием дикарбамина отражена на рис. 2, Б, Г. Видно, что в контрольной группе большинство клеток меланомы продуцируют Ag-ОЯОР-белки. Число гранул серебра на ядро клетки составило 4,0 ± 0,29. В отдельных участках в некоторых клетках содержалось по 1—2 гранулы серебра. В группе с дикарбамином в большинстве участков опухоли обнаружены клетки с относительно малым числом гранул на ядро клетки (1,8 ± 0,03), что в 2,2 раза меньше, чем в контрольной группе ф < 0,05).
Динамика содержания В23/нуклеофозмина и С23/ нуклеолина под действием дикарбамина отражена в таблице и на рис. 3. В контрольной группе в 90% клеток обнаружен высокий, а в оставшихся 10% клеток — умеренный уровень продукции В23/нуклеофозмина (см. рис. 3, А). В этой же группе высокий уровень С23/нукле-олина выявлен в 85—90%, а умеренный — в 10—15% опухолевых клеток. В отдельных опухолевых клетках С23/ нуклеолин локализовался на плазматической мембране
(см. рис. 3, Б). Индекс Ю-67 в контроле колебался от 15 до 25% и в среднем составил 20% (см. рис. 3, В).
В группе с дикарбамином уровень экспрессии В23/ нуклеофозмина был низким в 90% опухолевых клеток и лишь в 10% клеток — умеренным; клеток с высоким содержанием белка не выявлено (см. рис. 3, Г). Уровень экспрессии С23/нуклеолина в 90—95% опухолевых клеток был низким, а в 5—10% клеток — умеренным, клеток с высоким содержанием белка также не обнаружено. В отдельных клетках С23/нуклеолин локализовался на плазматической мембране (см. рис. 3, Д). Индекс Ю-67 после лечения дикарбамином колебался от 10 до 20% и в среднем был равен 12,5% (см. рис. 3, Е). Таким образом, содержание маркеров пролиферации в группе с дикар-бамином достоверно отличалось от такового в контрольной группе ф < 0,05).
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
В срезах меланомы В16^10 после 10-дневного применения дикарбамина в разовой дозе 5 мг/кг выявлено достоверное уменьшение содержания маркеров проли-
Рисунок 2. Морфологическое строение подкожного узла меланомы В16 у мышей и содержание гранул Ад-ОЯОР-белков на 18-е сутки роста опухоли (6-е сутки после применения дикарбамина) (х400).
А. Контроль (окраска гематоксилином и эозином): опухоль состоит из полиморфных клеток, образующих солидные поля, видны отдельные клетки с признаками митоза. Б. Контроль (гистохимическая реакция с азотнокислым серебром): в большинстве опухолевых клеток в ядрах содержится 4—5 гранул серебра. В. После применения дикарбамина (окраска гематоксилином и эозином): полиморфные опухолевые клетки образуют солидные поля. Г. После применения дикарбамина (гистохимическая реакция с азотнокислым серебром): большинство опухолевых клеток содержат 1 —2 гранулы серебра.
ферации Ki-67, В23/нуклеофозмина и С23/нуклеолина, сопряженное с ингибированием роста опухоли на 70— 81%. Суммарное содержание Ag-ОЯОР-белков уменьши-
лось в среднем в 2,2 раза, а содержание отдельных белков, В23/нуклеофозмина и С23/нуклеолина, — в 9,0—9,5 раза, исходя из количества клеток с высокой интенсивностью
в- V *
В
V *
ШВпш^ЕЙ
ШШ
1Щ1
д
H шр
¥
' 'i&îlr v
>// * л • \ '
T -V.4 -, ml j
«
9i
y i
,A
ъ - - . • - - *
. ' ^ 4
Рисунок 3. Содержание маркеров пролиферации В23/нуклеофозмина, С23/нуклеолина и Ki-67 в срезах меланомы В16/F10 на 18-е сутки роста опухоли (6-е сутки после применения дикарбамина) (х400).
А. Контроль: во всех опухолевых клетках наблюдается высокий уровень В23/нуклеофозмина. Б. Контроль: в большинстве опухолевых клеток отмечается высокий уровень С23/нуклеолина. В. Контроль: в большинстве опухолевых клеток наблюдается высокий уровень Ki-67. Г. После применения дикарбамина: наблюдается низкий уровень В23/нуклеофозмина. Д. После применения дикарбамина: наблюдается низкий уровень С23/нуклеолина. Е. После применения дикарбамина: количество Ki-67-положительных клеток умеренное.
Е
Таблица
Содержание В23/нуклеофозмина, С23/нуклеолина и Ki-67 в срезах меланомы B16/F10 после применения дикарбамина
Группа Интенсивность иммуногистохимической реакции Доля иммуногистохимически окрашенных клеток, %
В23/нуклеофозмин С23/нуклеолин Ki-67®
Контроль + 0 0 15—25 (20)
++ 10—15 10—15
+++ 85—90 85—90
Дикарбамин + 90 90—95 10—20 (12,5)
++ 10 5—10
+++ 0 0
а В скобках указаны средние значения.
иммуногистохимического окрашивания. Динамика маркера Ki-67 также подчинялась выявленной тенденции: индекс Ki-67 под действием дикарбамина уменьшился в 1,6 раза. Полученные данные свидетельствуют о способности дикарбамина оказывать антипролиферативное действие на клетки меланомы путем снижения экспрессии основных маркеров, контролирующих скорость пролиферации и количество пролиферирующих клеток.
ЛИТЕРАТУРА
1. Nucleolin protein expression in cutaneous melanocytic lesions / Moumouras V., Cevenini G., Cosci E., Epistolato M. C., Biagioli M., Bar-bagli L., Luzi P., Mannucci S., Miracco C. //J. Cutan. Phatol. — 2009. — Vol. 36, N 6. — P. 637—646.
2. Apoptosis in leukemia cells is accompanied by alterations in the levels and localization of nucleolin / Mi Y., Thomas S. D., Xu X., Casson L. K., Miller D. M., Bates P. J. // J. Biol. Chem. — 2003. — Vol. 278. — P. 8572—8579.
3. Moshari A., McLean W. Uveal Melanoma: Mean of the Longest Nucleoli Measured on Silver-Stained Sections // Investigat. Ophthalmol. Visual Sci. — 2001. — Vol. 42, N 6. — P. 1160—1163.
4. AgNOR (nucleolar organizer regions) staining in malignant melanoma / Nagatani T., Iemoto G., Miyakawa K., Ichiyama S., Takahashi Y., Uchiya-ma M., Nakajima H. //J. Dermatol. — 1991. — Vol. 18, N 12. — P. 731—735.
5. AgNOR counts in conjunctival malignant melanoma lack prognostic value / Paridaens A. D., Seregard S., Minassian D., Hungerford J. L., McCartney A. C. // Br. J. Ophthalmol. — 1992. — Vol. 76. — P. 621—623.
6. Роль аргирофильных белков областей ядрышковых организаторов в пролиферативной активности опухолей человека / Полковниченко Е. М., Зенит-Журавлева Е. Г., Каршиева С. Ш., Лушникова А. А., Трещалина Е. М., Райхлин Н. Т., Букаева И. А., Пе-реверзева Э. Р. // Рос. биотер. журн. — 2011. — № 1. — С. 50—51.
7. Пожарисский К. М., Леенман Е. Е. Значение иммуногистохими-ческих методик для определения характера лечения и прогноза опухолевых заболеваний // Арх. патол. — 2002. — № 5. — С. 3—11.
8. Nucleolin is regulated both at the level of transcription and translation / Bicknell K., Brooks G., Kaiser P., Chen H., Dove B. K., Hiscox J. A. // Biochem. Biophys. Res. Commun. — 2005. — Vol. 332, N 3. — P. 817—822.
9. Leong A.S.-Y., Gilham P. Silver Staining of Nucleolar Organizer Regions in Malignant Melanoma and Melanotic Nevi // Human. Pathol. — 1989. — Vol. 20, N 3. — P. 257—262.
10. Patent US № 20090191224. Nucleolin-Mediated Cancer Diagnostics and Therapy [Электронный ресурс] // Yongzhang L., Hubing Sh.— 2009.07.30. — Tsinghua University Protogen Ltd. — IPC8 Class: AA61K-39395FI. — USPC Class: 4241781. — URL: http://www.faqs.org/patents/ app/20090191224#ixzz2jwna5bKD.
11. Sirri V., Roussel P., Hernandez-Verdun D. The AgNOR proteins: qualitative and quantitative changes during the cell cycle // Micron. — 2000. —Vol. 31. —P. 121—126.
12. Amount variability of total and individual Ag-NOR proteins in cells stimulated to proliferate / Sirri V., Roussel P., Trer D., Derenzini M., Hernandez-Verdun D. // J. Histochem. Cytochem. — 1995. — Vol. 43, N 9. — P. 887— 893.
13. Inactivation of nucleolin leads to nucleolar disruption, cell cycle arrest and defects in centrosome duplication / Ugrinova I., Monier K., Ivaldi C., Thiry M., Storck S., Mongelard F., Bouve Ph. // Br. Mol. Biol. — 2007. — Vol. 8, N 1. — P. 66.
14. Прогностическое значение исследования плотности сосудов микроциркуляторного русла в опухоли и перитуморозной зоне по данным выявления белка CD31 и количества аргирофильных белков области ядрышкового организатора (AgNOR) в эндотелии при лейомиосаркоме тела матки / Авдалян А. М., Бобров И. П., Клима-чев В. В., Круглова Н. М., Лазарев А. Ф. //Рос. журн. гастроэнтерол., гепатол. и колопроктол. — 2006. — Т. 16, № 5. — С. 31—37.
15. Характеристика активности аргентофильных белков, ассоциированных с областью ядрышкового организатора (AgNOR), при раке почки: клинико-морфологические параллели / Бобров И. П., Черданцева Т. М., Климачев В. В., Брюханов В. М., Гервальд В. Я., Лазарев А. Ф., Авдалян А. М. // Актуальные вопросы диагностики и лечения урологических заболеваний / Под ред. А. И. Неймарка. — Барнаул: Алтайский дом печати, 2011. — С. 20—21.
16. Гаджиева С. Ш., Полосухина Е. Р., Седакова Л. А., Трещалина Е. М., Барышников А. Ю., Небольсин В. Е. / Сравнительная эффективность комбинированной терапии с использованием дикар-бамина и других индукторов дифференцировки // Рос. биотер. журн. — 2005. — № 3. — С. 106—111.
17. Каршиева С. Ш. Роль индукторов дифференцировки в комбинированной терапии опухолей (экспериментальное исследование): Автореф. дис... канд. мед. наук. — М., 2009. — 25 с.
18. Особенности роста различных моделей меланомы животных и человека при цитодифференцирующей терапии дикарбамином / Каршиева С. Ш., Николаева Т. Г., Райхлин Н. Т., Трещалина Е. М., Барышников А. Ю., Небольсин В. Е. // Рос. биотер. журн. — 2008. — № 1. — С. 42.
19. Возможности цитодифференцирующей терапии меланомы в эксперименте / Каршиева С. Ш., Райхлин Н. Т., Зимакова Н. И., Трещалина Е. М., Небольсин В. Е. // Рос. биотер. журн. — 2010. — № 2. — С. 71.
20. Interphase argyrophilic nucleolar organizer regions and nucleolar counts in transitional cell bladder tumours / Korneyev I. A., Mamaev N. N., Kozlov V. V., Rybakova M. G., Al-Shukri S. H. // Mol. Pathol. — 2000. — Vol. 53. — P. 129—132.
21. Коршунов А. Г., Шишкина Л. В., Голанов А. В. Пролиферативные маркеры в менингиомах: иммуногистохимическое исследование и анализ
прогностической значимости // Арх. патол. — 2002. — № 1. — С. 29—33.
22. Лазарев А. Ф., Кобяков Д. С., Климачев В. В. Количественный анализ аргирофильных белков районов ядрышковых организаторов в аденомах толстой кишки и морфологические критерии риска ма-лигнизации // Рос. журн. гастроэнтерол., гепатол. и колопроктол. — 2006. — Т. 16, № 5. — С. 31—37.
23. Shome D. K., Khurana N. Distinctive AgNOR patterns of myeloid and lymphoid blasts in acute leukemia // Am. J. Hematol. — 1999. — Vol. 61, N 2. — P. 149—152.
24. Randomized phase II trial of the nucleolin targeting aptam-er AS1411 combined with high-dose cytarabine in relapsed/refractory acute myeloid leukemia (AML) / Stuart R. K., Stockerl-Goldstein K., Cooper M., Devetten M., Herzig R., Medeiros B., Schiller G., Wei A., Acton G., Rizzieri D. //J. Clin. Oncol. — 2009. — Vol. 27, N 15. — Р. 7019.
25. Experimental evaluation of nucleolin or nucleophosmin expression in human melanoma xenografts in nude mice after cell differentiating therapy with dicarbamin / Polkovnichenko E., Zenit-Zhuravleva E., Karshieva S., Treshalina H., Lushnikova A., Nebolsin V. // Abstract Book 23rd Int. Congress on Anti-cancer Treatment (ICACT), France, Paris, 2012. — Р. 287—288.
26. Влияние дикарбамина на экспрессию Ag-ОЯОР-белков, регулирующих скорость клеточной пролиферации / Райхлин Н. Т., Бука-
ева И. А., Каршиева С. Ш., Небольсин В. Е. // Рос. биотер. журн. — 2008. — № 1. — С. 50—51.
27. Динамика роста перевиваемых опухолей мышей при проведении химиотерапии под защитой дикарбамина / Седакова Л. А., Трещалина Е. М., Ситдикова С. М., Небольсин В. Е. // Вопр. он-кол. — 2010. — Т. 56, № 5. — С. 591—596.
28. Efficacy of combined chemotherapy with dicarbamin on murine and human tumor models / Treshalina H., Sedakova L., Andronova N., Karshieva S., Baryshnikov A., Nebolsin V. // Abstract Book 22nd International Congress on Anticancer Treatment (ICACT), Paris, France, 2011. — Р. 358—359.
29. Методические рекомендации по доклиническому изучению противоопухолевой активности лекарственных средств / Трещалина Е. М., Жукова О. С., Герасимова Г. К., Андронова Н. В., Гарин А. М. // Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Ч. I, гл. 39. — М.: Гриф и К., 2012. — С. 642—657.
30. Jmprovement in staining and visualization of the argyrophilic proteins of the nucleolar organizer region at the optical level / Ploton D., Menanger M., Jeannesson P., Himber G., Pigeon F., Adnet M. // Histo-hem. J. — 1986. — Vol. 18. — P. 5—14.
Поступила 22.10.2012
Ekaterina Gennadievna Zenit-Zhuravleva1, Lyudmila Alexandrovna Sedakova2, Natan Tanfelevich Raikhlin3, Ekaterina Mikhailovna Ukhanova4, Saida Shamilievna Karshiyeva5, Irina Alexeyevna Bukayeva6, Helena Mikhailovna Treschalina7
DICARBAMIN INHIBITION OF MELANOMA В16/F10 GROWTH ASSOCIATED WITH DICARBAMIN ABILITY TO REGULATE EXPRESSION OF PROLIFERATION MARKERS Ki-67, B23/NUCLEOPHOSMIN
AND C23/NUCLEOLIN
' Junior Researcher, Combination Tumor Therapy Laboratory, Tumor Experimental Diagnosis and Therapy Research
Institute, N. N. Blokhin RCRC, RAMS (24, Kashirskoye sh., Moscow, RF, ''5478) 2 Senior Researcher, Combination Tumor Therapy Laboratory, Tumor Experimental Diagnosis and Therapy Research Institute, N. N. Blokhin RCRC, RAMS (24, Kashirskoye sh., Moscow, RF, ''5478) 3 MD, PhD, DSc, Professor, Leading Researcher, Histochemistry and Electronic Microscopy Laboratory, Clinical Oncology Research Institute, N. N. Blokhin RCRC, RAMS (24, Kashirskoye sh., Moscow, RF, ''5478) 4 Laboratory Researcher, Combination Tumor Therapy Laboratory, Tumor Experimental Diagnosis and Therapy Research
Institute, N. N. Blokhin RCRC, RAMS (24, Kashirskoye sh., Moscow, RF, ''5478) 5 PhD, Senior Researcher, Laboratory Researcher, Combination Tumor Therapy Laboratory, Tumor Experimental Diagnosis and Therapy Research Institute, N. N. Blokhin RCRC, RAMS (24, Kashirskoye sh., Moscow, RF, ''5478) 6 PhD, Senior Researcher, Human Tumor Pathology Anatomy Department, Clinical Oncology Research Institute, N. N. Blokhin RCRC, RAMS (24, Kashirskoye sh., Moscow, RF, ''5478) 7 MD, PhD, DSc, Professor, Head, Combination Tumor Therapy Laboratory, Tumor Experimental Diagnosis and Therapy Research Institute, N. N. Blokhin RCRC, RAMS (24, Kashirskoye sh., Moscow, RF, ''5478)
Address for correspondence: Treschalina Helena Mikhailovna, Combination Tumor Therapy Laboratory, Tumor Experimental Diagnosis and Therapy Research Institute, N. N. Blokhin RCRC, RAMS, 24, Kashirskoye sh., Moscow, RF,
115478; e-mail: [email protected]
The differentiation inducer dicarbamin is known to inhibit growth of some transplantable tumors including murine melanoma B16/F10. Mechanism of the dicarbamin antitumor effect is unclear, though preliminary data suggest that it might act via reduction in production of regulatory proteins responsible for cell proliferation. The purpose of this study was to assess dicarbamin effect on expression of proliferation markers Ki-67 and argyrophilic proteins of the nucleolar organizer regions B23/nucleophosmin and C23/nucleolin in growth inhibition of transplantable melanoma B16/F10. Our results demonstrated that dicarbamin inhibiting effect on this tumor was associated with a more than two-fold reduction in expression of all the markers studied. Key words: melanoma B16/F10, Ki-67, B23/nucleophosmin, C23/nucleolin, dicarbamin.
