CC BY
61
DOI: 10.24411/0235-2990-2019-10023
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ
Ингибирование репликации вируса денге препаратом Инфлюцид in vitro
*О. В. ПЬЯНКОВ', С. А. БОДНЕВ', А. В. ЗАЙКОВСКАЯ', В. КАЗАКОВ2, Г. ШМИДТ2
1 Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор» Роспотребнадзора, р.п. Кольцово, Новосибирская область
2 Дойче Хомеопати-Унион (ДХУ), Карлсруэ, Германия
Inhibiting the Replication of the Dengue Virus Using In Vitro Influcid
*O. V. PYANKOV1, S. A. BODNEV1, A. V. ZAYKOVSKAYA1, V. KAZAKOV2, G. SCHMIDT2
1 State Research Center of Virology and Biotechnology VECTOR, Koltsovo, Novosibirsk Oblast
2 Deutsche Homoopathie-Union (DHU), Karlsruhe, Germany
Отсутствие в настоящее время специфических противовирусных препаратов против лихорадки денге делает актуальной задачей поиск новык терапевтических средств терапии этой болезни. Цель работы — выявление ингибирующей активности препарата Ифлюцид in vitro. Материал и методы. В работе использовали штамм вируса денге DENV-2/RUS/TH-Novosibirsk02/2012 (субтип 2). Было изучено влияние препарата Инфлюцид на репликацию вируса в культуре клеток Vero на основании уменьшения цитопатического действия и накопления вируса в культуральной жидкости. Результаты и выводы. 50-процентная ингибирующая концентрация для препарата Инфлюцид составила 58 мг/мл. Успешное использование Инфлюцида при терапии острых респираторных инфекций и полученные в данном исследовании результаты говорят о возможности его применения при лечении лихорадки денге в качестве вспомогательной терапии.
Ключевые слова: вирус денге, Инфлюцид, противовирусная активность.
Given the lack of specific antiviral medicines to treat dengue fever, finding new medicinal products, including natural products, remains a highly pertinent goal. The objective of the study was to determine the antiviral activity of Influcid against dengue virus replication in vitro. Material and methods. Dengue virus DENV-2/RUS/TH-Novosibirsk02/2012 subtype 2 was used in this study. Vero cells were infected with dengue virus. Reduction of cytopathic effect and virus accumulation in culture fluid with the influence Influcid has been studied. Results and conclusions. The 50% inhibiting concentration of Influcid was determined as 58 mg/ml. The results obtained from these in vitro investigations show that Influcid is able to effectively inhibit dengue virus (subtype 2) replication in Vero cells. Since Influcid has a favorable benefit-risk profile it might be an option that can be used as treatment in addition to conventional medicine in patients suffering from dengue fever. The transferability of in vitro data to humans must show further investigations.
Keywords: dengue virus, Influcid, antiviral activity.
Введение
Лихорадка денге — острое инфекционное заболевание, передаваемое комарами и связанное с высокой смертностью и заболеваемостью [1]. Переносчиками вируса денге являются женские особи комаров, в основном вида Aedes aegyptiи, в меньшей степени, A.albopictus. Возбудитель лихорадки денге входит в семейство Flaviviridae, род Flavivirus. Существует четыре субтипа вируса денге. На сегодняшний день около 50% населения мира в 125 странах проживают в районах, которые являются эндемичными для лихорадки денге [2]. Во всем мире ежегодно регистрируют около 50 млн случаев денге, из которых до 500 тыс. эпизодов протекают в тяжёлой форме и 20 тыс. случаев заканчиваются летальным исходом [3].
© Коллектив авторов, 2019
*Адрес для корреспонденции: e-mail: pyankov@vector.nsc.ru
Спектр клинических проявлений денге может варьировать от недифференцированного ограниченного лихорадочного состояния до тяжёлой геморрагической формы лихорадки денге (ГЛД), при которой часто наблюдают желудочно-кишечные кровотечения, полиорганную недостаточность, ДВС-синдром и шок, реже — острую печёночную и почечную недостаточность, энцефалопатию, кардиомиопатию [4].
При флавивирусных инфекциях, включая ГЛД, важную роль играет феномен антитело-зависимого усиления инфекции (antibody-dependent enhancement, ADE). Феномен ADE заключается в том, что вирусоспецифические антитела усиливают проникновение вируса в фагоцитирующие клетки посредством взаимодействия с рецептором FcR и/или рецепторами комплемента на поверхности фагоцитирующих клеток. Первая инфекция, вызванная вирусом денге, чаще всего протекает у человека бессимптомно и даёт пожизненный иммунитет к вирусу серотипа, её вызвав-
шего. Однако в случае инфицирования вирусом другого серотипа, вследствие феномена FcR-ADE, болезнь протекает в тяжёлой форме с большой вероятностью летального исхода (до 50%) [5].
Лечение вирусных геморрагических лихорадок в основном сводится к поддерживающей терапии, поддержанию водно-солевого баланса и коррекции гемодинамики. Рекомендуется обратить особое внимание на поддержание баланса жидкостей и электролитов, противошоковые мероприятия, возмещение потери крови, предотвращение развития почечной недостаточности у пациентов. Лечение таких больных может потребовать интенсивного ухода и специфических вмешательств, таких как механическая вентиляция лёгких, диализ и неврологическая помощь.
Таким образом, учитывая отсутствие специфических противовирусных препаратов против лихорадки денге, в настоящее время является актуальной задачей поиск новых терапевтических средств, включая препараты природного происхождения.
Цель исследования — выявление ингибирую-щей активности препарата Ифлюцид in vitro.
Материал и методы
Требования биобезопасности. Все работы с вирусом денге были проведены в ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора, в отделе «Коллекция микроорганизмов», имеющего санитарно-эпидемиологическое заключение: 77.ПЧ.01.000.М.000091.11.16 от 10.11.2016 г. на право проведения исследований с вирусами I—II групп патогенности.
Исследования проводили в соответствии с требованиями санитарно-эпидемиологических правил СП 1.3.3118-13 «Безопасность работы с микроорганизмами I—II групп патоген-ности (опасности)».
Препарат. Инфлюцид (Infucid) был получен от компании «Deutsche Homöopathie-Union DHU-Arzneimittel GmbH&Co. KG», Германия; серия 399; годен до 10/2018. Препарат Инфлюцид имеет сложный состав, который включает в себя следующие основные компоненты: Aconitum D3, Gelsemium D3, Ipecacuanha D3, Phophorus D5, Bryonia D2, Eupatonum perfoliatum D1.
Вирус и клетки. В работе использовали штамм вируса денге DENV-2/RUS/TH-Novosibirsk02/2012 (субтип 2), полученный из «Государственной коллекции микроорганизмов» ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора.
Гетероплоидные перевиваемые клетки почек зелёной африканской мартышки Vero (African green monkey kidney) получены из ФГБУ «ГИСК им. Л. А. Тарасевича» на уровне 181 пассажа.
Культуру клеток Vero культивировали при температуре 37°C и 5% содержании CO2. В качестве ростовой среды использовали среду DMEM (GIBCO, #41965-062) с 10% фетальной телячьей сывороткой (GIBC0,#10500064), 100 ед/мл бензилпе-нициллина натриевой соли и 100 мкг/мл стрептомицина сульфата. Для достижения 85—100% конфлюэнтности монослоя клеток на момент использования (24 ч) посевная концентрация должна быть 7,4х104 кл/см2. Конфлюэнтность монослоя клеток контролировали с помощью инвертированного микроскопа при небольшом увеличении. Для последующих пересевов для снятия клеток использовали 0,25% раствор трипсина.
После инфицирования клеток вирусом в качестве поддерживающей среды использовали среду DMEM с 2% феталь-ной телячьей сывороткой и теми же антибиотиками (полная среда DMEM).
Анализ противовирусной активности. Для определения ци-тотоксичности препарата Инфлюцид в конфлюэнтный монослой клеток Vero в 96-луночныгх культуральных планшетах (Costar, Corning) добавляли разведения препарата в диапазоне от 1/2 до 1/256 объёмом 200 мкл и инкубировали в течение 72 ч (контроль под микроскопом). Цитотоксичность определялась с помощью МТТ теста. Цитотоксическая концентрация, вызывающая гибель 50% жизнеспособныгх клеток (CC50), составила 37,5 мг/мл — 1/4 эквивалентной доли 1 таблетки препарата. Конфлюэнтный монослой клеток Vero в 96-луночныгх куль-туральныгх планшетах (Costar, Corning) быи инфицирован в трёх повторах вирусом денге, разведённым в полной среде DMEM для получения множественности заражения 0,01. Через один час адсорбции вируса на клетки при 37°C вирусный инокулят удаляли, и монослой клеток промывали трёхкратно раствором Хенкса. Далее препарат Инфлюцид вносили в лунки с инфицированными клетками. Диапазон исследованныгх концентраций препарата Инфлюцид составлял от 1/4 до 1/128. Для разведения препаратов использовали полную среду DMEM. Планшеты с инфицированными и обработанными препаратом клетками инкубировали в течение десяти суток при температуре 37°C, 5% СО2 в увлажнённой среде, после чего забирали супернатанты из каждой лунки. Часть аликвот была помещена в лизирующий буфер для постановки ПЦР, другую часть аликвот закладывали на хранение на минус 80°C для последующего вирусологического анализа.
Определение инфекционной активности вируса. Инфекционную активность вируса денге определяли по методу ЦПД на монослое культуры клеток Vero и выражали титр в ЦПД50/мл. Конфлюэнтный монослой клеток Vero в 96 луночныгх культу-ральныгх планшетах быи инфицирован в трёх повторах сериями 10-кратных разведений аликвот, полученных при проведении антивирусного анализа и исходным вирусом. Вирус адсорбировали в течение 1 ч, затем удаляли и замещали полной средой DMEM. Клетки инкубировали при 37°C, 5% СО2 в увлажнённой воздушной среде. Через 10 сут. после заражения проводили учёт результатов с помощью инвертированного микроскопа по цитопатическому действию (ЦПД) вируса на клетки и рассчитывали инфекционный титр с помощью метода Рида—Менча [6].
Молекулярно-биологический анализ с помощью ПЦР. Подготовку образцов и выделение РНК проводили в соответствии с МУ 1.3.2569-09 «Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I—IV групп патогенности».
Выделение вирусной РНК из образцов культуры клеток проводили с помощью набора QIAmpViral RNA Mini Kit (Qiagen, США). ПЦР проводили с использованием набора реагентов ABAmbion Ag Path-ID One-Step RT-PCR Kit (Applied Biosystems, США) с набором праймеров и зондом к субтипу 2 вируса денге, описанныгх в патенте № 2483115 (ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор», РФ). Термоциклирование и считывание флуоресценции проводили с помощью прибора RotorGene 6000 (Corbett Research, Австралия) по программе, описанной в патенте.
Результаты и обсуждение
Для оценки противовирусной активности препарата Инфлюцид in vitro было изучено его влияние на репликацию вируса денге в культуре клеток Vero. Для этого чувствительные клетки были заражены штаммом DENV-2/RUS/TH-Novosibirsk02/2012 (субтип-2). Через 1 ч адсорбции инфицированные клетки подвергли лечению препаратом Инфлюцид. На 10-й день после заражения были отобраны су-пернатанты для вирусологического и молекулярно-биологического анализов.
Инфлюцид
ИНФОРМАЦИЯ для специалиста
Натуральный индуктор интерферона с выраженной противовирусной активностью, для превентивной и поддерживающей терапии при гриппе и ОРВИ для всей семьи
Инфлюцид оказывает комплексное терапевтическое действие при гриппе и ОРВИ*:
s/ противовирусное
V' цитопротекторное
s/ иммуномоделирующее s/ симптоматическое
*Хаселен ван Р и др. Журнал "Glob Pediatr Health". 2016 год, №3, стр. 1-11. Еропкин М. Ю. и др. Журнал "Русский медицинский журнал". 2011 год, №18, стр. 1151-1155.
Инфлюцид
Influcid®
Гомеопатическое лекарственное средство для профилактики и лечения простудных заболеваний
60 таблеток для рассасывания
Дойче Хомеопати-Унион ДХУ-Арцнаймиттель ГмбХ & Ко. КГ Карлсруэ, Германия
Сделано в Германии
Официальный представитель в России: ООО «Альпен Фарма» Тел.: +7 495 609 6572, info.russia@alpenpharma.com www.alpenpharma.ru
Таблица 1. Ингибирование репликации вируса денге DENV-2/RUS/TH-Novosibirsk02/2012 (субтип-2) препаратом Инфлюцид
№ п/п Концентрация активных компонентов препарата Инфлюцид, мг/мл* (эквивалентная доля таблетки) Титр вируса (logio ЦПД50/МЛ +<х**)
1 1,17 (1/128) 4,37+0,17
2 2,34 (1/64) 4,26+0,17
3 4,69 (1/32) 3,99+0,17
4 9,38 (1/16) 3,56+0,18
5 18,75 (1/8) 2,96+0,18
6 0 (контроль вируса) 4,57+0,17
Примечание. * - Таблетированная форма препарата: Aconitum D3 - 25 мг; Gelsemium D3 - 25 мг; Ipecacuanha D3-25 мг; Phophorus D5 - 25 мг; Bryonia D2 - 25 мг; Eupatonum perfoliatum D1 - 25 мг. Шесть активных компонентов в равных долях в составе таблетки имеют суммарную массу 150 мг. ** - Среднеквадратичное отклонение.
Таблица 2. Эффективные концентрации препарата Инфлюцид, ингибирующие репликацию вируса денге в культуре клеток Vero
Параметр ÑC50 (I95)ft IC50 (I95)* IC90 (195)* IC99 (I95)*
Эквивалентная доля таблетки 0,25 0,014 0,062 0,206
(0,006-0,022) (0,037-0,218) (0,088-2,442)
Концентрация активных компонентов 37,5 2,10 9,30 30,90
препарата Инфлюцид, мг/мл (0,90 - 3,30) (5,55 - 32,70) (13,20 - 366,30)
Примечание. * — Доверительный интервал для р=0,95.
В клетках Vero препарат Инфлюцид уменьшал цитопатический эффект (ЦПЭ), начиная с концентрации 4,69 мг/мл, и снижал на 1,61 log10 ЦПЭ при 18,75 мг/мл (табл. 1).
50-процентная ингибирующая концентрация (IC50) препарата Инфлюцид была определена и составила 2,11 мг/мл (табл. 2). Значения IC90 (снижение ЦПЭ на 1 логарифм, т. е. в 10 раз) и IC99 (снижение ЦПЭ на 2 логарифма, т. е. в 100 раз) также быши определены (см. табл. 2). Как видно из табл. 2, значение концентрации препарата Инфлюцид для эффективного ингибирования вируса денге достаточно велико, что может ограничить его использование для терапевтического применения.
Показатели ингибирующих концентраций препарата Инфлюцид в отношении вируса денге, полученные в данном исследовании, демонстрируют, что он способен эффективно ингибировать репликацию вируса денге 2-го типа в культуре клеток Vero. Низкая токсичность препарата в испытаниях in vitro свидетельствует о безопасности его применения. Анализируя полученные результаты можно предположить, что его использование в качестве вспомогательной терапии для лечения пациентов с лихорадкой денге будет эффективным. Необходимы дальнейшие испытания эффективности инфлюцида при лечении лихорадки денге на животных моделях и пациентах.
Реальное количество случаев заболевания денге не отражается в полной мере, и многие случаи заболевания классифицируются неправильно. Согласно одной недавней оценке, ежегодно лихорадкой денге заражаются 390 млн человек (95% доверительный интервал — 284+528 млн человек), из которыж у 96 млн (67+136 млн) имеют-
ся клинические проявления (разной тяжести болезни) [7]. По оценке из другого исследования, посвящённого распространённости денге, риску заражения вирусами денге подвергаются 3900 млн человек в 128 странах [8].
В 2010 г. денге была впервые зарегистрирована во Франции и Хорватии, а завезённые случаи заболевания были выявлены в трёх других европейских странах. В 2012 г. вспышка денге на островах Мадейра (Португалия) насчитывала более 2 000 случаев заболевания, а завезённые случаи заболевания были выявлены в 10 других странах Европы, помимо континентальной Португалии.
Для 2015 г. были характерны крупные вспышки денге во всем мире — в Филиппинах было зарегистрировано более 169 тыс. случаев заболевания, а в Малайзии — более 111 тыс. предполагаемых случаев денге, то есть число случаев заболевания возросло по сравнению с предыдущим годом на 59,5 и 16%, соответственно. Кроме того, в 2015 г. в Дели (Индия) была зарегистрирована самая крупная вспышка за весь период с 2006 г. — более 15 тыс. случаев заболевания.
Все это является основанием для поиска новых терапевтических препаратов, возможно, не направленных на вирус как таковой или его взаимодействие с клеткой (специфическая терапия), например, стимулирующих клеточную резистентность, выработку интерферонов, иммунную защиту. Вследствие этого остаётся актуальным использование неспецифических препаратов, включая растительные и гомеопатические препараты. В частности, на возможность такого подхода указывают данные по использованию экстракта папайи при заболевании, вызванном вирусом денге.
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ
Кровотечение разной степени тяжести наблюдается в основном при тяжёлой форме лихорадки денге, т. е. геморрагической лихорадке ден-ге. Патогенез кровотечения включает потерю плазмы. Это, как представляется, происходит из-за разрушения тромбоцитов, опосредованного системой комплемента и/или угнетением костного мозга вирусной инфекцией. Кроме того, отмечается, что тромбоциты, избежавшие разрушения становятся нефункциональными или менее функциональными [9].
По данным с недавней вспышки лихорадки денге в Индии, было отмечено резкое увеличение спроса на сок из листьев папайи. Ажиотаж был вызван сообшением по использованию папайи в лечении лихорадки денге, в связи с его предполагаемым благотворным влиянием на количество тромбоцитов [Ю]. В некоторых публикациях был представлен состав папайи, включаюший несколько активных компонентов (флавоноиды, алкалоиды и ферменты), которые могут обладать антиоксидантным и иммуномо-дулируюшим действием и которое, как предполагается, будет давать терапевтический эффект от применения водного экстракта из листьев папайи (Carica papaya) [11].
Хотя, в соответствии с руководящими принципами ВОЗ, количество тромбоцитов не считается одним из критериев для ГЛД и рассматривается только как предупреждаюший симптом, тем не менее, в исследованиях показана прогностическая способность количества тромбоцитов для оценки тяжести лихорадки денге [12]. Количество тромбоцитов также коррелирует с интенсивностью кровоизлияний и повреждениями печени [13].
В обзорной публикации были приведены данные по рандомизированным контролируемым испытаниям 377 пациентов с подтверждённым диагнозом ГЛД, которые принимали экстракт из листьев папайи. Было показано достоверное увеличение количества тромбоцитов у пациентов, которые принимали экстракт по сравнению с контрольной группой и снижение
ЛИТЕРАТУРА
1. Гаращенко Т.И., Гаращенко М.В., Мезенцева М.В. Клинико-имму-нологическое обоснование гомеопатических препаратов в профилактике и лечении гриппа и ОРВИ. Русский медицинский журнал. - 2GG5. - T. 13. - № 13. - С. 1432-1437. / Garashchenko T.I., Garashchenko M.V., Mezentseva M.V. Kliniko-immunologicheskoe obosnovanie gomeopaticheskikh preparatov v profilaktike i lechenii grippa i ORVI. Russkiy meditsinskiy zhurnal 2GG5: 13 (13): 1432-1437.
2. Krishnamurti C., Kalayanarooj S., Cutting M.A., Peat R.A., Rothwell S. W., Reid T.J., Green S., Nisalak A., Endy T.P., Vaughn D. W, Nimmannitya S., Innis B.L. et al. Mechanisms of hemorrhage in dengue without circulatory collapse. Am J Trop Med Hyg 2GG1; 65: 84G-847.
3. Еропкин М.Ю., Григорьева B.A., Гудкова Т.М., Коновалова НИ., Т.Г. Лобова, Байбус Д.М., Ягловская И.Б. Активность препарата «Ин-флюцид» в отношении вирусов гриппа в модельных системах. МЕДЛАЙН-Экспресс. - 2GG7. - № 6. - С. 23-26. / Eropkin M.Yu., Grigor'eva V.A., Gudkova T.M., Konovalova N.I., T.G. Lobova, Baybus D.M., YAglovskaya I.B. Aktivnost' preparata «Inflyutsid» v otnoshenii virusov grippa v model'nykh sistemakh. MEDLAYN-Ekspress 2GG7; 6: 23-26. [in Russian]
дней госпитализации. Но в тоже время, не было представлено данных по побочным явлениям и смертности.
На данный момент времени мало публикаций, в которых был бы изучен фактический механизм терапевтического действия экстракта из листьев папайи на вирус денге. Ряд исследователей считают, что положительный эффект может быть связан с улучшением стабилизации мембран эритроцитов или способностью флавонидов ингиби-ровать протеазы, участвующие в сборке вируса денге, или с антиоксидантными свойствами экстракта, которые могут помочь в предотвращении гемолиза и кровотечений.
В нашем исследовании в экспериментах in vitro показано, что препарат Инфлюцид ингиби-рует репликацию вируса денге. Ранее другими исследователями было показано его противовирусное действие в отношении целого ряда актуальных штаммов вируса гриппа — сезонных штаммов A(H1N1) и пандемического штамма 2009 г. — A(H1N1)pdm, A(H3N2), A(H5N1) и штаммов гриппа В, а также вирусов герпеса человека 1-го и 2-го типов и аденовируса III типа [14]. Кроме того, в исследованиях с вирусом гриппа и ОРВИ было показано, что Инфлюцид оказывает стимулирующее действие на продукцию интерферона клетками и увеличивает резистентность клеток к цитопатогенному действию вирусов, что так же может являться ключевым моментом при лечении вирусных инфекций [15].
Заключение
Инфлюцид можно рассматривать как канди-датный этиотропный препарат для лечения больных лихорадкой денге. С учётом результатов, полученных в данном исследовании in vitro, изучение противовирусной активности препарата Инфлю-цид целесообразно продолжить в тестах in vivo.
Конфликт интересов. Авторы подтверждают отсутствие конфликта финансовых/нефинансовых интересов, связанных с написанием статьи.
4. Reed L.J., Muench H.A. A simple method for estimating fifty percent endpoints. Am J Hygien 1938; 27: 493-497. DOI: 10.1093/oxfordjour-nals.aje.a118408
5. Ho T.S., Wang S.M., Lin Y.S., Liu C.C. Clinical and laboratory predictive markers for acute dengue infection. J Biomed Sci 2013; 20: 75. DOI: 10.1186/1423-0127-20-75.
6. Subenthiran S, Choon T.C., CheongK.C., Thayan R., TeckM.B., Muniandy P.K., Afzan A., Abdullah N.R., Ismail Z. Carica papaya leaves juice significantly accelerates the rate of increase in platelet count among patients with dengue fever and dengue hemorrhagic fever. Evid. Based Complement Alternat Med 2013; 2013: 616737. DOI: 10.1155/2013/616737
7. Verdeal J., Filho R.C., Vanzillotta C, De Macedo G.L., Bozza F.A., ToscanoL, PrataA., Tanner A.C., MachadoF.R. etal. Guidelines for the management of patients with severe forms of dengue. Rev Bras Terlntensiva 2011; 23 (2): 125-133.
8. Boonnak K, Slike B.M., Burgess T.H., Mason R.M., Wu S.J., Sun P., Porter K, Rudiman I.F., Yuwono D, Puthavathana P., Marovich M.A. et al. Role of dendritic cells in antibody-dependent enhancement of
dengue virus infection. J Virol 2008; 82 (8): 3939-3951. DOI: 10.1128/JVI.02484-07.
9. Brady O.J., Gething P.W., Bhatt S, Messina J.P., Brownstein J.S., Hoen A.G. Moyes C.L., Farlow A.W., Scott T.W, Hay S.I. et al. Refining the global spatial limits of dengue virus transmission by evidence-based consensus. PloS Negl Trop Dis 2012; 6: e1760. DOI: 10.1371/journal.pntd. 0001760.
10. Srichaikul T., Nimmannitya S. Haematology in dengue and dengue haemorrhagic fever. Baillieres Best Pract Res Clin Haematol 2000; 13: 261-276.
11. Sarala N., Paknikar S. Papaya extract to treat dengue: A novel therapeutic option? Ann Med Health Sci Res 2014; 4: 320-324. DOI: 10.4103/2141-9248.133452.
12. Bhatt S, Gething P.W., Brady O.J., Messina J.P., Farlow A.W., Moyes C.L., Drake J.M., Brownstein J.S., Hoen A.G., Sankoh O., Myers M.F.,
СВЕДЕНИЯ ОБ АВТОРАХ:
Пьянков Олег Викторович — к. б. н., зав. отделом, ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора, р. п. Кольцово, Новосибирская область, https://orcid.org/0000-0003-3340-8750 Боднев Сергей Александрович — к. б. н., зав. лабораторией, ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора, р. п. Кольцово, Новосибирская область, https://orcid.org/0000-0003-0599-3817
George D.B., Jaenisch T, Wint G.R., Simmons C.P., Scott T.W., Farrar J.J., Hay S.I. et.al. The global distribution and burden of dengue. Nature 2013; 496 (7446): 504-507. DOI: 10.1038/nature12060496:504-507.
13. Jayashree K, Manasa G.C., Pallavi P., Manjunath G.V. Evaluation of platelets as predictive parameters in dengue fever. Indian J Hematol Blood Transfus 2011; 27: 127-130. DOI: 10.1007/s12288-011-0075-1.
14. Rajapakse S, Rodrigo C, Rajapakse A. Treatment of dengue fever. Infect. Drug Resist 2012; 5: 103-112. DOI: 10.2147/IDR.S22613.
15. WHO Dengue Guidelines for diagnosis, treatment, prevention and control. New editionWorld Health Organization, Geneva (2009) Available from: http://www.who.int/tdr/publications/documents/dengue-diag-nosis.pdf [Accessed on 14th May, 2016].
Зайковская Анна Владимировна — к. б. н., с. н. с., ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора, р. п. Кольцово, Новосибирская область, https://orcid.org/0000-0002-0450-5212 Казаков Вячеслав — проект-менеджер международного отдела, Дойче Хомеопати-Унион (ДХУ), Карлсруэ, Германия Шмидт Георг — руководитель международного отдела, Дойче Хомеопати-Унион (ДХУ), Карлсруэ, Германия
