CC BY
16© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ 2017
М.П.Костинов, И.В.Лукачев, А.К.Мещерякова, Е.В.Дмитриева*, Н.К.Ахматова, Е.А.Хромова, О.О.Магаршак, А.А.Сависько
ИНДУКЦИЯ ЭФФЕКТОРОВ ВРОЖДЕННОГО И АДАПТИВНОГО ИММУНИТЕТА В ПРОЦЕССЕ ЛЕЧЕНИЯ ТОПИЧЕСКОЙ ФОРМОЙ РЕКОМБИ-НАНТНОГО ИНТЕРФЕРОНА-а2Ь ПРИ РЕСПИРАТОРНЫХ ИНФЕКЦИЯХ У БЕРЕМЕННЫХ
НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова, *Федеральный научно-исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф.Гамалеи, Москва
Цель. Изучить иммунологический фенотип лимфоцитов в процессе лечения топической формой рекомбинантного интерферона-а2Ь при респираторных инфекциях у беременных. Материалы и методы. В исследовании приняли участие 74 беременных от 14 недель гестации, из них 55 женщин — в первые сутки с симптомами острой респираторной инфекции (ОРИ) легкой и средней тяжести течения, не нуждающиеся в госпитализации. I группа— 34 беременные с ОРИ, получавшие базисную терапию в сочетании с человеческим рекомбинантным интерфероном-а2Ь в форме геля. II группа —21 беременная с ОРИ, получавшие только базисную терапию. Контрольную группу составили 19 беременных без признаков ОРИ. Методом проточной цито-флуометрии исследовали относительное содержание основных субпопуляций лимфоцитов: CD3+, CD3+CD4+, CD3+CD8+, CD3-CD19+, CD3-CD16+56+, CD3-CD8+, рассчитывали иммунорегуляторный индекс в крови в первые сутки от начала заболевания и спустя 8 — 10 дней. Результаты. У беременных с острыми респираторными инфекциями легкого и среднетяжелого течения выявлен дисбаланс субпопуляций лимфоцитов, характеризующийся повышением содержания CD3—CD16+56+ и CD3+CD8+, а также снижением содержания CD3+ и CD3+CD8+. Включение в комплекс базисной терапии беременных топической формы рекомбинантного интерферона-а2Ь в первые дни развития заболевания оказывает системное влияние на клеточное звено иммунитета и приводит к восстановлению субпопуляционного состава лимфоцитов крови, характерного для физиологического течения беременности. Заключение. Назначение топической формы рекомбинантного интерферона у беременных с легкой и средней тяжестью ОРИ может сопровождаться активацией факторов врожденного и адаптивного иммунитета.
Журн. микробиол., 2017, № 2, С. 38—45
Ключевые слова: острые респираторные инфекции, беременные, клеточный иммунитет, иммуномодуляторы
M.P.Kostinov, I.V.Lukachev, A.K.Mescheryakova, E.V.Dmitrieva*, N. К. Akhmatova, E.A.Khromova, O.O.Magarshak, A.A.Savisko
INDUCTION OF EFFECTORS OF INNATE AND ADAPTIVE IMMUNITY IN THE PROCESS OF THERAPY OF TOPIC FORM OF RECOMBINANT INTERFERON-a2b DURING RESPIRATORY INFECTIONS IN PREGNANT
Mechnikov Research Institute of Vaccines and Sera, *Gamaleya Federal Research Centre of Epidemiology and Microbiology, Moscow, Russia
Aim. Study immunologic phenotype of lymphocytes in the process of therapy of topic form of recombinant interferon-a2b during respiratory infections in pregnant. Materials and methods. 74 pregnant women from 14 weeks of gestation took part in the study, among them 55 — within 24 hours with symptoms of acute respiratory infection (ARI) of light and medium, severe course of infection, who do not need hospitalization. Group 1 — 34 pregnant
women with ARI receiving basic therapy with human recombinant interferon-a2b in gel form. Group II — 21 pregnant with ARI receiving only basic therapy. Control group had 19 pregnant women without signs of ARI. Relative content of principle lymphocyte subpopulations was studied by flow cytofluorimetry: CD3+, CD3+CD4+, CD3+CD8+, CD3-CD19+, CD3-CD16+56+,CD3-CD8+; immune regulatory index was calculated in blood within 24 hours from the onset of the disease and 8 — 10 days later. Results. A disbalance of lymphocyte subpopulations was noted in pregnant women with light or medium severity course of acute respiratory infections, that was characterized by an increased content of CD3—CD 16+56+ and CD3+CD8+, as well as a reduced content of CD3+ and CD3+CD8+. Inclusion of a topical form of recombinant interferon-a2b during the first days of development of the disease has a systemic effect on cell immunity and results in normalization of subpopulation composition of blood lymphocytes that is characteristic for physiological course of pregnancy. Conclusion. Administration of topic form of recombinant interferon in pregnant with light or medium severity of ARI can be accompanied by activation of factors of innate and adaptive immunity.
Zh. Mikrobiol. (Moscow), 2017, No. 2, P. 38—45
Key words: acute respiratory infections, pregnant, cell immunity, immune modulators ВВЕДЕНИЕ
Интерфероны (ИФН) представляют собой семейство цитокиновых медиаторов, играющих важную роль в формировании иммунитета и обладающих выраженным противовирусным, противомикробным, радиопротективным и иммуномодулирующим действием [1]. Проведены обширные клинические испытания интерферонов, доказывающие их преимущество в использовании при острых респираторных вирусных инфекциях, герпесе, гепатитах В и С [2, 4, 7].
В настоящее время для профилактики и лечения острой респираторно-вирусной инфекции предпочтение отдается неинъекционным формам реком-бинантных интерферонов [5]. Установлено, что сочетание рекомбинантного интерферона с одним из антиоксидантных препаратов усиливает противовирусное действие ИФН [2]. Нежелательные явления в виде повышения температуры, лихорадки, гриппоподобных симптомов, возникающих при парентеральном введении препаратов ИФН, практически отсутствуют [7]. Кроме того, при применении таких комбинированных препаратов в течение 2 лет не образуются антитела, нейтрализующие антивирусную активность рекомбинантного ИФН-альфа [1, 7].
Для борьбы с инфекцией в области ее проникновения в организм разработаны наружные лекарственные формы рекомбинантного интерферона: мазь и гель. В отличие от других путей введения интерферона, интраназальное применение препарата обеспечивает наибольшую эффективность при наименьшем числе неблагоприятных реакций [15].
В качестве средства профилактики ОРИ интерфероны относятся к мерам экстренного назначения, то есть могут быть использованы сразу же после контакта больного с респираторно-вирусной инфекцией или при первых симптомах заболевания. Даже в случае, если появились первые симптомы, интраназальное применение ИФН позволяет избежать манифестации заболевания более чем в 80% случаев [14]. Лекарственные формы рекомбинантного интерферона-а2Ь в виде мази и геля при интраназальном введении обладают большей эффективностью, чем человеческого [15].
Зарубежные исследователи при интраназальном применении предпочитают использование высоких доз интерферона (2 500 ООО — 10 ООО ООО МЕ/ сут.), что повышает токсичность терапии и способствует возникновению побочных явлений (кровянистые выделения из носа) [16]. Отечественные ин-траназальные препараты ИФН основаны, преимущественно, на взаимодействии с антиоксидантами, что позволяет значительно снизить курсовые дозы [Алпенидзе Д.Н. и др., 2010].
В акушерско-гинекологической практике препараты интерферона применяются давно, и доказана их безопасность и эффективность как для беременной, так и для плода. В 2009 — 2010 гг. в период пандемии вируса гриппа A/H1N1 рекомбинантные интерфероны в форме суппозиториев вошли в стандарты лечения беременных с респираторными инфекциями и гриппом. В последующем была разработана лекарственная форма рекомбинантного интерферона-а2Ь в виде геля, которая может быть назначена по показаниям у беременных с 14 недель гестации. Так как препарат предназначен для интра-назального применения, по протоколу исследования изучалось его влияние на параметры мукозального иммунитета, и была дана характеристика клинической безопасности и эффективности. Оценка влияния топической формы рекомбинантного интерферона-а2Ь на иммунологический фенотип лимфоцитов не только у беременных, но и у других групп населения не проводилась. Это представляет интерес для выявления взаимосвязи между регуляторными системами иммунитета при назначении топической формы иммуномодуля-тора и полученным клиническим эффектом.
Лечение беременных с респираторными инфекциями обосновано тем, что присоединение бактериальной или вирусной инфекции к физиологической беременности ведет к значительному дисбалансу в иммунной системе женщины, что находит отражение не только на течении периода гестации, но и I на развитии ребенка в постнатальном периоде. Поэтому поиск методов профилактики и лечения респираторных инфекций у беременных является одним из приоритетных. С другой стороны, изучение состояния иммунной системы беременной и плода является важнейшей проблемой современного акушерства.
Цель исследования — изучить иммунологический фенотип лимфоцитов в процессе лечения топической формой рекомбинантного интерферона-а2Ь при респираторных инфекциях у беременных.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Исследование проводилось в 2009 — 2013 гг. в НИИВС им. И.И.Мечникова и в отделении женской консультации городской клинической больницы г. Жуковский Московской области. Работа выполнена в соответствии с протоколом исследования, рассмотренном и утвержденном Локальным этическим комитетом НИИВС им. И.И.Мечникова. Все пациенты подписывали информированное согласие для участия в клиническом исследовании.
В исследовании приняли участие 74 беременных от 14 недель гестации, из них 55 женщин — в первые сутки с симптомами острой респираторной инфекции легкой и средней тяжести течения, не нуждающиеся в госпитализации. Наблюдение за беременными проводилось совместно с врачом акушером-гинекологом в соответствии с требованиями Приказа Минздравсоцразвития РФ от 02.10.2009 № 808н «Об утверждении порядка оказания акушерско-гинекологической помощи». После консультации акушера-гинеколога и отоларинголога и подписанного информированного согласия для участия в ис-
следования они были распределены: I группа — 34 беременные с ОРИ, получавшие базисную терапию в сочетании с человеческим рекомбинантным интерферон-а2Ь в форме геля, разрешенным к применению у беременных от 14 недель гестации. Препарат назначали интраназально объемом 1 мл 3 раза в сутки в течение 7 дней. II группа — 21 беременная с ОРИ, получавшие только базисную терапию: назальные деконгестанты, 0,9% раствор хлорида натрия интраназально, мирамистин для обработки носа и/или глотки. При выявлении бактериальных осложнений JIOP-органов назначали антибактериальные препараты местно (фузафунгин) или внутрь (амоксициллин) согласно общепринятым схемам сроком до 7 дней. Контрольную группу составили 19 беременных без признаков ОРИ.
При первичном обращении у всех беременных исследовали относительное содержание основных субпопуляций лимфоцитов: Т-лимфоцитов (CD3+), Т-хелперов (CD3+CD4+), цитотоксических Т-лимфоцитов (CD3+CD8+), B-лимфоцитов (CD3—CD19+), натуральных киллеров (CD3—CD16+56+) и NK-клеток с высокой цитотоксичностью (CD3—CD8+). Рассчитывали имму-норегуляторный индекс (ИРИ) — соотношение Т-хелперов и цитотоксических Т-лимфоцитов. Фенотипическую характеристику лимфоцитов периферической крови оценивали методом проточной цитофлуометрии на проточном цитометре Beckman Coulter FC-500 с использованием FITC- и РЕ-меченных МКат (Beckman Coulter) согласно инструкции производителя. Кровь для исследования брали в день обращения в первые сутки от начала заболевания и спустя 8—10 дней.
Статистическая обработка полученных данных проводилась методами вариационной статистики с использованием пакетов прикладных программ Microsoft Excel, версия 7, Statistica for Windows, версия 7, Biostat. При подтверждении нормальности распределения признаков были использованы параметрические критерии и численные данные представлены как М+гп. При отсутствии нормального распределения для описания результатов были рассчитаны медиана и интерквантильный размах (25 и 75 перцентилей). Для сравнения значений показателей в двух группах были использованы методы параметрической и непараметрической статистики: критерий Стьюдентадля нормального распределения показателей и критерий Манна-Уитни для оценки статистической значимости различий показателей выборок, не подчиняющихся закону нормального распределения. Для сравнения динамических показателей в группе использовали критерий Вилкоксона. С целью обнаружения связи между исследуемыми показателями проводили корреляционный анализ путем вычисления коэффициента ранговой корреляции Спирмена. Различия между показателями считали статистически значимыми при р<0,05. При корреляционном анализе связь между показателями оценивали как сильную при абсолютном значении коэффициента корреляции Спирмена г>0,70, имеющую среднюю силу при г от 0,69 до 0,30, и как слабую при г<0,29.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Анализ полученных результатов исследования исходных значений содержания основных субпопуляций лимфоцитов у женщин с физиологическим течением беременности показал: тенденцию к увеличению содержания CD3+, уменьшению содержания CD3-CD19+ и CD3-CD16+56+ по сравнению с нормальными показателями у здоровых взрослых (табл. 1). Значения CD3+CD4+, CD3+CD8+, ИРИ, NK CD3-CD8+ у беременных без ОРИ не отличались от нормальных значений, характерных для здоровых взрослых.
Таблица 1. Субпопуляционный состав лимфоцитов у беременных при первичном обращении
Значения субпопуляций лимфоцитов крови
Показатели Норма здоровых взрослых У беременных без ОРИ (п=12) У беременных с ОРИ <п*55)
CD3+(%) CD3+CD4+ (%) CD3+CD8+ (%) ИРИ
CD3-CD19+ (%) NKCD3-CD16+56+ (%) NK CD3-CD8+ (%)
6038311,21110
-76 -46 -40 -2,0 -16 -19
1,5-6
Примечание. *р<0,001,*' с фуппой беременных без ОРИ.
80,84± 1,07 73,3610,99*
43,81±1,24 42,94±1,04
33,07±0,87 27,76±0,94*
1,34±0,05 1,71 ±0,08
9,44±0,9 9,61 ±0,47
8,43±0,83 13,5±0,66*
2,98±0,33 5,85+0,38"
р<0,01 — по сравнению
Таблица 2. Субпопуляционный состав лимфоцитов в динамике лечения у беременных с ОРИ
Выявленные изменения относительного количества Т-лим-фоцитов и их разновидностей, B-лимфоцитов у беременных без ОРИ отмечены и другими исследователями, при этом одни указывают на увеличение, другие — на уменьшение, некоторые выявляли только тенденцию роста субпопуляций лимфоцитов или не обнаруживали значимых изменений Т-клеток в период беременности [6, 11, 12].
При сопоставлении групп беременных с физиологическим течением беременности без ОРИ и с симптомами респираторной инфекции у последних выявлены изменения в сторону уменьшения относительного количества отдельных субпопуляций лимфоцитов (содержание CD3+ и CD3+CD8+) и увеличения концентрации CD3— CD16+56+ и CD3-CD8+ (табл. 1). Значения CD3+CD4+, ИРИ и CD3—CD19+ у беременных с проявлениями респираторного заболевания и без него были сопоставимы. Обнаруженные изменения численности Т-цито-токсических лимфоцитов у беременных во II и III триместрах с симптомами ОРИ может указывать на процесс активации иммунокомпетентных клеток под воздействием вирусной или бактериальной инфекции. В норме такие изменения количества Т-лимфоцитов с превалированием субпопуляции цито-
токсических лимфоцитов, выявляющиеся в I триместре беременности, являются адаптивными в репродуктивной системе и не имеют существенного значения в процессах иммуномодуляции [12].
В результате фенотипирования лимфоцитов в цельной крови у беременных в динамике заболевания ОРИ отмечено изменение соотношения некоторых показателей в зависимости от проводимой терапии (табл. 2). Так, в I группе, получавшей в комплексе препарат интерферона-а2Ь, к 8 — 10 дню лечения наблюдали повышение содержания CD3+ и CD3+CD4+ лимфоцитов по сравнению с исходными значениями. Во II группе беременных, использовавших при лечении ОРИ только базисную терапию, указанные показатели в
Значения субпопуляций лимфоцитов крови
Показатели Исходно I+II 1 группа после II группа после
группы (п=55) лечения (п=34) лечения (п=21)
CD3+ M±S.E. 73,36±0,99 77,85±1,5 75,83±1,47
(%) median 73,6 77,9 76,6
LQ-UQ 68,5-80,5 73,7-82,1* 69,1-80,2
CD3+ M±S.E. 42,94± 1,04 45,9±0,8 44,57±1,49
CD4+ median 42,9 45,9 43,9
(%) LQ-UQ 39,8-48,2 43,9-48,5* 41,6-48,8
CD3+ M±S.E. 27,76±0,94 30,05±1,02 29,16±1,52
CD8+ median 27,8 30,4 26,9
(%) LQ-UQ 22,6-31,7 26-33,6 23,5-34,4
ИРИ M±S.E. 1,71±0,08 1,62±0,08 1,69±0,12
median 1,6 1,6 _ 1,9
LQ-UQ 1,3-2 1,3-1,8 1,2-2,1
CD3- M±S.E. 9,61 ±0,47 10,02±0,5 11,49±0,7
CD19+ median 9,3 9,5 11
(%) LQ-UQ 6,8-12,3 8-11,9 9-14
NKCD3- M±S.E. 13,5±0,66 11,33±0,55 12,35+0,92
CD16+56+ median 13 11,3 12,7
(%) LQ-UQ 11-16,5 8,8-12,6 9,6-14,3
NKCD3- M±S.E. 5,85±0,38 4,5±0,28 4,2±0,4
CD8+ median 5,6 4,3 4,2
(%) LQ-UQ 3,9-7,7 3,3-5,6 2,7-5,8
Примечание. *По сравнению с исходными данными, р<0,01.
процессе наблюдения не изменились. Значения других исследуемых субпопуляций лимфоцитов были сопоставимы как между группами, так и с исходными данными.
Таким образом, при физиологическом течении беременности были выявлены следующие особенности субпопуляционного состава лимфоцитов: более высокое содержание Т-лимфоцитов — 80,84+1,07% и натуральных киллеров — 8,43±0,83% при сниженном В-лимфоцитов — 9,44±0,9%, что характерно для иммунных механизмов в развитии и сохранении беременности. При сравнении значений отдельных субпопуляций у беременных с симптомами ОРИ и без них выявлено снижение содержания CD3+ и CD3+CD8+ у беременных без ОРИ (73,36+0,99% и 80,84±1,07%; 27,76±0,94% и 33,07+0,87% соответственно). У беременных с признаками ОРИ содержание натуральных киллеров CD3—CD 16+56+ и CD3-CD8+ повышалось (13,5±0,66% и 5,85±0,38% соответственно) по сравнению с женщинами с физиологическим течением беременности (8,43±0,83% и 2,98+0,33% соответственно). Изданных литературы известно, что хронические эндотелиотропные вирусные инфекции во II и III триместрах приводят к снижению абсолютных показателей CD3+ CD4+ и уровня секретируемых Th-2 цитокинов (IL-4, IL-10), повышению численности клеток с цитотоксическим потенциалом (CD8+, CD16+, 56+) и секретируемых этими клетками цитокинов (IL-2, IL-6, TNF-a). Избыточное количество провоспалительных цитокинов вызывает развитие эндотелиопатии и активацию системы комплимента, что является триггерным фактором в патогенезе синтеза антифосфолипидных AT и молекул адгезии с последующим развитием тромбофилии и плацентарной недостаточности [12]. Поскольку в наших исследованиях развитие ОРИ у беременных были вызваны не перси-стирующими эндотелиотропными вирусами, а респиратоными вирусами (27,8%) и другими микробными патогенами, то можно предположить, что изменения в субпопуляции лимфоцитов являлись транзиторными и не сопровождались развитием патологии беременности [8].
В литературе описана супрессия клеточного механизма иммунного ответа у беременных с острым риносинуситом при отсутствии активации гуморального звена, что клинически может проявляться затяжным течением заболевания, увеличивая риск развития рецидивов и осложнений гестации [3]. Наше клиническое наблюдение за беременными показало, что в группе пациенток, получавших только базисную терапию, частота бактериальных осложнений (гнойные синуситы, трахеобронхиты) составила 38,1% против 11,8% случаев (р<0,05) в группе, принимавших дополнительно рекомбинантный интерфе-рон-а2Ь в форме интраназального геля [9]. Кроме того, потребность в назначении антибиотиков на фоне комплексного лечения топической формой иммуномодулятора сократилась до 11,8% по сравнению с группой, получавшей только базисную терапию — 39% случаев (р<0,05).
В проведённом исследовании у женщин в периоде гестации с ОРИ, исходно имевших более низкое содержание Т-лимфоцитов — 73,36±0,99% и Т-хелперов — 42,94± 1,04, отмечено их нарастание на фоне интерферонотера-пии до 77,85±1,5 и 45,9±0,8 соответственно (р<0,01), чего не выявлено у беременных, получавших только базисную терапию — 75,83±1,47 и 44,57±1,49 соответственно. Активизация функций субпопуляции Т-лимфоцитов на фоне местной интерферонотерапии у беременных с симптомами ОРИ сопровождалась уменьшением воспалительного процесса и снижением в назальном смыве IL-8 с 1353 (781 - 1007) пг/мл до 623 (495 - 1024) пг/мл (р<0,05) [10]. IL-8 является хемоатграктантом для нейтрофилов, которые мигрируют в шей-
ку матки и вырабатывают мактриксную металлопротеиназу-8 (нейтрофильную коллагеназу) и нейтофильную эластазу — ферменты, участвующие в разрушении межклеточного матрикса [13,17]. Провоспалительные цитокины активируют цитотоксические свойства NK-клеток и фагоцитарную активность макрофагов, которые находятся в повышенном количестве в децидуа и при восходящей инфекции могут оказывать прямое повреждающее действие на трофобласт и плаценту, провоцируя механизмы активации сократительной деятельности матки [13, 17].
В группе женщин, получавших в комплексе терапии препарат интерферона, в динамике более выражена тенденция к снижению NK-клеток, что наблюдается при физиологическом течении беременности.
Содержание B-лимфоцитов как у беременных с признаками ОРИ, так и без них во все периоды исследования было сопоставимо и ниже нормальных значений здоровых взрослых. Это характерно для беременности, поскольку в каждом из триместров достоверно снижалась численность B-лимфоцитов, но пропорция существенно смещалась в пользу Т-лимфоцитов в соотношении с нормой небеременных [12].
Следовательно, полученные данные свидетельствуют о том, что у беременных с острыми респираторными инфекциями легкого и среднетяжелого течения выявлен дисбаланс субпопуляций лимфоцитов, характеризующийся повышением содержания CD3—CD16+56+ и CD3+CD8+, а также снижением содержания CD3+ и CD3+CD8+. Включение в комплекс базисной терапии беременных топической формы рекомбинантного интерферона-а2Ь в первые дни развития заболевания оказывает системное влияние на клеточное звено иммунитета и приводит к восстановлению субпопуляционного состава лимфоцитов крови, характерного для физиологического течения беременности, и уменьшает риск развития воспалительных явлений.
ЛИТЕРАТУРА
1. Деньгин В.В., Делении Н.В. Виферон: применение при инфекционно-воспа-лительных заболеваниях. Фарматека. 2005, 12: 53-57.
2. ЕршовФ.И., КиселевО.И. Интерфероны и их индукторы (от молекул до лекарств). М., ГЕОТАР-Медиа, 2005.
3. Ершов Ф. И., Григорян С. С., Орлова Т. Г и др. Противовирусная терапия ОРВИ у детей. Детские инфекции. 2006, 3: 56-61.
4. Золин В.В. Липосомальный противовирусный препарат рекомбинантного альфа-2Ь интерферона человека: получение и свойства. Автореф. дис. канд. мед. наук. Кольцово,2010.
5. Защитников А. Л. Иммунопрофилактика и иммунотерапия острых респираторных инфекций у детей. Лечащий врач. 2006,9: 50-56.
6. Казимирко Н.К. и др. Иммунология физиологической беременности. Молодой ученый. 2014,3(6): 132-137.
7. Малиновская В.В., Деленян Н.В., Ариненко Р.Ю., Мешкова E.H. Виферон. Комплексный противовирусный и иммуномодулируюший препарат для детей и взрослых. Руководство для врачей. М., ИНКО-ТНК, 2005.
8. Мещерякова А.К., Фошина Е.П., Тарбаева Д.А., Сависько A.A., Зайцева Е.В. Клиническое течение острой респираторной инфекции и состояние микробиоценоза верхних дыхательных путей у беременных. Журн. микробиол. 2012, 5: 1216.
9. Мещерякова А. К., Костинов М.П., Кытько О.В., Малиновская В.В., Тарбаева, Д.А. Никонова A.A., Черданцев А.П. Клинический эффект применения различных лекарственных форм Виферона у беременных с острой респираторной инфекцией. Эффективная фармакотерапия в акушерстве и гинекологии, 2010,4:46-49.
10. Мещерякова А.К., Костинов М.П., Магаршак О.О., Гусева Т.С., Паршина О.В. Влияние препарата рекомбинантного интерферона а-2Ь в форме геля на течение ОРИ и состояние мукозального иммунитета у женщин в периоде гестации от 14 недель. Вестник оториноларингологии. 2014, 6: 50-53.
11. Севостьянова О.Ю., Теплова С.Н., Радзинский В.Е. Иммунный гомеостаз в динамике неосложненной беременности. Вестник РУДН, сер. Медицина. Акушерство и гинекология. 2005, 4 (32): 39-42.
12. Смирнова Т.Л., ПортноваЕ.В., СергееваВ.Е. Иммунитет и беременность. Вестник Чувашского университета. 2009, 2:79-85.
13. Сидельникова В.М., Сухих Г.Т. Невынашивание беременности. М., МИА, 2010.
14. Феликсова JI., Шебекова В., Целипанова Е. и др. Гриппферон у детей, больных ОРВИ. Врач. 2001, 1:40-41.
15. Шумилов В.И., Шевцов В.А., Лобов С.П. Грипп и ОРВИ: неспецифическая профилактика с использованием генно-инженерного-а 2 интерферона и его новых форм. Лечащий врач. 2000, 9: 20-21.
16. Kneyber М.С., Moll H.A., de Groot R. Treatment and prevention of respiratory virus infection. Eur. J. Pediatr. 2000, 159 (6): 399-411.
17. Romero R., ChaiworapongsaT., GotschF. etal. The diagnosis and management of preterm labor with intact membranes. Clin. Maternal. Fetal. Med. Online. 2012, 29. http://clini-calmaternalfetalmedicineonline.com/.
Поступила 19.09.16
Контактная информация: Костинов Михаил Петрович, д.м.н., проф.,
105064, Москва, М.Казенный пер., 5А, р.т. (495)917-41-49
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2017
АА.Ртищев, Р.Р.Минтаев, В.Ю.Кост, И.Б.Коптяева, И.И.Акопова, К.В.Лисовская, С.Г.Маркушин
ВКЛЮЧЕНИЕ САЙТ-СПЕЦИФИЧЕСКИХ МУТАЦИЙ В КОНСЕРВАТИВНЫЕ УЧАСТКИ РА-ГЕНА ПРИВОДИТ К АТТЕНУАЦИИ ВИРУЛЕНТНОГО ШТАММА ВИРУСА ГРИППА А/\У81Ч/33
НИИ вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова, Москва
Цель. Исследование возможности получения аттенуированных вариантов вируса гриппа с помощью включения специально подобранных сайт-специфических мутаций в консервативную последовательность РА-гена (концевую часть СООН-домена РА-гена) вирулентного штамма. Материалы и методы. В работе был использован вирулентный штамм вируса гриппа А/ЛУБЫ/ЗЗ. Включение сайт-специфических мутаций в РА-ген вирулентного штамма А/\УБМ/33 проводили с помощью двуступенчатой мутационной ПЦР. Клонирование осуществляли, используя СоШепСа1е реакцию. Использовали 8-плазмидную трансфекционную систему на основе вектора рН\У2000. Трансформацию проводили на рубидиевых компетентных бактериальных клетках штамма Е)Н5а. Трансфекцию делали при помощи реагента Lipofectamine ЬТХ (1пукго-gen) в кокультуре клеток 293Т и МОСК. Результаты. Показано, что трансфекганты, содержащие замену Р658А в СООН-домене РА-гена, приобрели 15-фенотип и резко снизили способность к размножению в легких мышей. Включение замены Р658А в СООН-домен РА-гена в комбинации с включением в геном вирулентного штамма 15-мутаций из генов ХА штаммов вируса гриппа приводило к получению трансфек-тантов, обладающих фенотипическими характеристиками, типичными для кандидатов в живые гриппозные вакцины. Заключение. Показана возможность получения аттенуированных вариантов вируса гриппа путем включения специально подобранных сайт-специфических мутаций в консервативную последовательность РА-гена.
