CC BY
95
Иммунотропные свойства анаферона и анаферона детского
Е. С. ЖАВБЕРТ, Ю. Л. ДУГИНА, О. И. ЭПШТЕЙН
Общество с ограниченной ответственностью «Научно-производственная Фирма «Материа Медика Холдинг», Москва
Immunotropic Properties of Anaferon and Anaferon Pediatric
E. S. ZHAVBERT, YU. L. DUGINA, O. I. EPSTEIN
Materia Medica Holding, Ltd, Moscow
Препараты анаферон и анаферон детский, созданные на основе релиз-активных антител к интерферону-гамма (Р-А антител к ИФН-гамма), эффективны в лечении целого ряда вирусных инфекций. В серии доклинических исследовании, проведённых в ведущих российских и зарубежных научных организациях, были выявлены иммуномодулирующие (иммунотропные) свойства препаратов, обзор которых представлен в настоящей статье. Анаферон и анаферон детский стимулируют гуморальный и клеточный иммунный ответ, повышают фагоцитарную активность нейтрофилов и макрофагов. Ключевым механизмом иммунотропного действия Р-А антител к ИФН-гамма является влияние на систему интерферонов, в частности на ИФН-гамма, и функционально сопряжённых с ней цитокинов, приводящее к нормализации функциональной активности естественных факторов иммунной защиты и к усилению противовирусного действия. Благодаря широкому спектру иммунотропной активности препараты анаферон и анаферон детский более 10 лет успешно применяются в лечении и профилактике заболеваний, в основе которых лежат нарушения функционального состояния иммунной системы.
Ключевые слова: анаферон, анаферон детский, релиз-активные антитела к ИФН-гамма, иммуннотропная активность, иммуномодулятор, противовирусный препарат.
Anaferon and pediatric anaferon based on release-active antibodies to interferon-y (R-A antibodies to INF-y) proved to be efficient in the treatment of many viral infections. Immunomodulating (immunotropic) properties of the drugs were revealed in the preclinical studies at many Russian and foreign research medical institutions and are reviewed herein. Anaferon and pediatric anaferon stimulated the humoral and cellular immune responses and increased the neutrophil and macrophage activity. The crucial mechanism of the immunotropic action of R-A antibodies to INF-y was the effect on the system of interferons and in particular on INF-y and functionally conjugated cytokines, resulting in normalization of the functional activity of the innate factors of the immune defense and increasing of the antiviral action. The broad spectrum of the immunotropic activity provided the success of anaferon and anaferon pediatric for more than 10 years in the treatment and prophylaxis of the diseases associated with disorders in the immune system functional state.
Key words: anaferon, pediatric anaferon, release-active antibodies to INF-y, immunotropic activity, immunomodulators, antivirals.
Введение
Среди современных препаратов, применяемых для лечения вирусных инфекций, в особую группу выделяют препараты, которые в дополнение к противовирусной активности обладают иммунотропными свойствами. Иммунотропные лекарственные средства (иммуномодуляторы) — это препараты, регулирующие и восстанавливающие деятельность иммунной системы. Иммунная система человека выполняет важную функцию по сохранению постоянства внутренней среды организма, распознавая и удаляя из организма чужеродные антигены как эндогенной (клетки, измененные вирусами, ксенобиотиками, злокачественные клетки и т. д.), так и экзо-
© Коллектив авторов, 2013
Адрес для корреспонденции: E-mail: [email protected]
генной природы (вирусы, бактерии, грибы, ксенобиотики). В осуществлении данной функции участвуют факторы врождённого (нейтрофилы, моноциты, макрофаги, дендритные клетки, естественные киллеры) и приобретённого (адаптивного) иммунитета (Т- и В-клетки) [1]. Интерфе-роны — естественные цитокины, обладающие универсальными антивирусными свойствами — способностью к подавлению репликации многих РНК- и ДНК-содержащих вирусов за счёт инги-бирования процессов транскрипции и трансляции вирусных матриц [2]. Помимо противовирусного действия, интерфероны (ИФН) влияют на клеточный и гуморальный иммунитет, пролиферацию и дифференцировку клеток, продукцию и активность различных цитокинов, внутриклеточных ферментов (аденилатциклазы, фосфодиэстеразы), онкогенез, апоптоз, нейро-эндокринные и обменные процессы, происходя-
щие в клетках. В настоящее время выделяют 3 основных свойства системы интерферонов: антимикробное действие, иммуномодулирующую активность, антипролиферативные эффекты. Особый интерес для лечения многих заболеваний, в том числе вирусной природы, представляют препараты, способные оказывать иммуно-модулирующее действие, заключающееся в разнонаправленном действии на иммунную систему в зависимости от её исходного состояния и способные восстанавливать нормальное функционирование иммунной системы (обеспечивать эффективную иммунную защиту).
В 2001 году на основе релиз-активных (Р-А) антител к ИФН-гамма специалистами компании ООО «НПФ «Материа Медика Холдинг» были разработаны препараты, влияющие на систему интерферонов: анаферон детский (РУ PN000372/01 от 31.05.2007, разрешён к применению у больных с 1 месяца) и анафе-рон (РУ PN003362/01 от 06.11.2009, разрешён к применению у больных с 18 лет). Р-А антитела к ИФН-гамма также являются компонентом нового эффективного противовирусного препарата эргоферон, зарегистрированного в 2010 году (РУ ЛСР-007362/10 от 29.07.2010).
Используемая в производстве препаратов субстанция антител к ИФН-гамма, аффинно очищенных, произведена в Великобритании в компании Angel Biotechnology Inc в полном соответствии с международными требованиями надлежащей производственной практики (GMP). Как и другие препараты релиз-активных (Р-А) антител, Р-А антитела к ИФН-гамма оказывают специфическое модифицирующее действие на антиген, к которому они выработаны. С помощью метода ядерно-магнитного резонанса было показано, что Р-А антитела к ИФН-гамма вызывают кон-формационные изменения в молекуле ИФН-гам-ма. В подтверждение данного феномена, в радиолигандных исследованиях in vitro было выявлено, что Р-А антитела к ИФН-гамма усиливают взаимодействие ИФН-гамма с его рецептором (количество ИФН-гамма связавшегося с рецептором). Кроме того, Р-А антитела к ИФН-гамма изменяют аффинность связывания ИФН-гамма с антителами к ИФН-гамма, что было обнаружено с использованием иммуносенсорного метода и метода иммуноферментного анализа [3, 4].
Целью настоящего обзора явился анализ данных экспериментальных исследований, посвященных изучению иммунотропных свойств Р-А антител к ИФН-гамма (препараты анаферон и анаферон детский).
По заказу ООО «НПФ «Материа Медика Холдинг» было проведено 76 доклинических исследований фармакологической активности и безопасности препаратов Р-А антител к ИФН-гамма:
56 исследований в ведущих научных учреждениях России, в том числе в НИИ фармакологии СО РАМН, Волгоградском медицинском университете, ГНЦ вирусологии и биотехнологии «Вектор», НИИ гриппа РАМН и др., и 20 исследований в зарубежных научных институтах и контрактных организациях, в том числе в компании Арс18 8А, Франция, университете Питтсбур-га, США, компании Ешгесгееп, Бельгия, в государственном университете штата Юта, США, компании Сегер, Франция и др. В настоящее время идут и запланированы ряд новых исследований с целью углублённого изучения механизмов действия и эффектов препаратов.
Анаферон и анаферон детский давно и успешно используются в клинической практике для профилактики и лечения острых и хронических вирусных инфекций: гриппа, острых респираторных вирусных инфекций (ОРВИ), герпесвирусных инфекций и др. В доклинических исследованиях была доказана противовирусная эффективность Р-А антител к ИФН-гамма как при профилактическом, так и при лечебном применении в условиях экспериментального заражения животных РНК-Вирусы гриппа А/Н3Ш, А/Н3Ш, «птичий грипп» А/Н5Ш, несколько штаммов пандемического «свиного» гриппа А/Н1Ш) и ДНК- (вирус простого герпеса II типа, штаммы М8 и ЕС) содержащими вирусами [5—7]. Клиническая эффективность и безопасность анаферона и анаферона детского была изучена при следующих инфекциях: грипп (вирусы гриппа А, В), ОРВИ (вызванные аденовирусом, респираторно-синцитиальным вирусом, коронавирусом, вирусом парагриппа, ми-коплазмой, а также микстинфекцией); герпесви-русные инфекции (ветряная оспа, инфекционный мононуклеоз, генитальный герпес); острые кишечные инфекции вирусной этиологии (вызванные калицивирусом, коронавирусом, ротавиру-сом) и др. [8—14].
Ключевым механизмом действия Р-А антител к ИФН-гамма является влияние на функциональное состояние системы интерферонов, в том числе через систему естественных аутоантител к ИФН-гамма [15]. Влияние на систему интерферонов является триггерным механизмом, через который анаферон/анаферон детский вовлекают в реализацию своей фармакологической активности естественные факторы врождённого и приобретённого иммунитета (клеточный и гуморальный иммунитет, фагоцитарная активность нейтрофилов и макрофагов). В клинических исследованиях подтверждено наличие у препаратов Р-А антител к ИФН-гамма противовирусной и иммунотропной активности. Иммунотропные свойства препарата были отмечены при различных патологиях (ОРВИ, грипп, мононуклеоз, ка-лицивирусная, коронавирусная, ротавирусная
инфекция) как при профилактическом, так и при лечебном введении [15—19].
Способность препарата увеличивать количество ИФН-гамма, связывающегося со своим рецептором, позволяет сделать предположение, что Р-А антитела к ИФН-гамма увеличивают количество фукнционально активныгх рецепторов на клеточной мембране и, возможно, являются аллостериче-ским модулятором рецептора ИФН-гамма. Выгав-ленныш эффект нашёл подтверждение и в клинических исследованиях препарата — анаферон детский увеличивал субпопуляцию лимфоцитов, экспрессирующих на клеточной мембране рецепторы к ИФН-гамма (СВ119+-лимфоциты) [20].
В экспериментальных исследованиях ex vivo бышо показано, что Р-А антитела к ИФН-гамма стимулируют продукцию ИФН-гамма. Важно отметить, что использование Р-А антител к ИФН-гамма не приводит к гиперпродукции ИФН-гам-ма. Так в условиях экспериментальной модели меланомы В-16 было показано отсутствие усиления роста и метастазирования на фоне курсового введения Р-А антител к ИФН-гамма крысам, что позволило сделать вывод об отсутствии гиперпродукции ИФН-гамма, так как известно, что данный цитокин приводит к увеличению мета-стазирования в лёгкие и резистентности клеток меланомы к терапии [21].
Материал и методы
Эксперименты проведены на 246 мышах (180 самцах и 66 самках) линии СВА, 25 мышах-гибридах F1 (CBAxC57Bl/6) и 36 мышах-самцах линии C57B1/6 массой 16-18 г. Препараты Р-А антител к ИФН-гамма вводили животным в виде водного раствора внутрижелудочно.
При проведении опытов по оценке влияние Р-А антител к ИФН-гамма на пролиферативную активность Т- и В-лим-фоцитов в качестве источника материала была использована периферическая кровь 10 здоровыгх доноров в возрасте от 22 до 36 лет.
При исследовании влияния Р-А антител к ИФН-гамма на гуморальный иммунный ответ эксперименты были проведены на мышах-самцах линии СВА (16—18 г) и мышах-самцах линии C57B1/6 (16—18 г). Мышей иммунизировали минимальными дозами эритроцитов барана (ЭБ) [22] — 5х106/мышь (однократно внутрибрюшинно в объёме 0,2 мл). Для моделирования иммуносупрессии мышам однократно внутрибрюшинно вводили циклофосфан в дозе 125 мг/кг (1/2 максимально переносимой дозы). Мышам линии СВА Р-А антитела к ИФН-гамма (n=36) и дистиллированную воду (контроль, n=36) вводили внутрижелудочно в дозе 0,2 мл/мышь в течение 5 дней. Исследования проводили на здоровых мышах, мышах с иммуносупрессией, иммунизированных мышах и иммунизированныгх мышах с иммуносупресси-ей. Введение ЭБ и циклофосфана осуществляли в первый день введения дистиллированной воды или Р-А антитела к ИФН-гамма. 6 мышей оставались интактными.
Мышам линии C57B1/6 (здоровым мышам и мышам с иммуносупрессией) Р-А антитела к ИФН-гамма (n=15) и дистиллированную воду (контроль, n=15) вводили внутрижелудочно в дозе 0,2 мл/мышь в течение 5 дней. Шесть мышей оставались интактными. На 5-е сутки после иммунизации общепринятыми методами [22, 23] определяли общее количество лейкоцитов в периферической крови (ОКЛ), весовые ин-
дексы (ИТ и ИС) и клеточность (ОКТ и ОКС) иммунокомпе-тентных органов (тимуса, селезёнки), а также относительное (%) и абсолютное (х106) количество антителообразующих клеток (АОК) в селезёнке мышей по методу A. Cunningham [24] и титр антител (АТ) в сыворотке крови с помощью стандартной реакции гемагглютинации (РГА).
Клеточный иммунный ответ изучали в реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) на мышах-самках линии СВА (16—18 г) и мышах-самцах гибридах F1 (CBAxC57Bl/6) (16—18 г). Р-А антитела к ИФН-гамма (n=9) и дистиллированную воду (контроль, n=9) вводили мышам внутрижелудочно в дозе 0,2 мл/мышь в течение 10 дней. В конце курсового введения Р-А антитела к ИФН-гамма или дистиллированной воды проводили сенсибилизацию мышей ЭБ 1х107/мышь (подкожно в объёме 0,1 мл), разрешающую дозу ЭБ (1х108 в объёме 20 мкл) вводили в подушечку задней лапы на 5-й день после сенсибилизации [22]. Параллельно в кон-тралатеральную лапу вводили физиологический раствор в том же объёме. Интенсивность реакции оценивали через 24 ч по индексу реакции (ИР), который вычисляли индивидуально для каждого животного по формуле:
ИР (%) = (Ро-Рк)/Рк X 100,
где Ро — масса опытной лапы; Рк — масса контрольной лапы.
В отдельной серии экспериментов при постановке реакции ГЗТ у части опытных и контрольных животных (в каждой группе n=6, кроме контроля, где n=7) на 4-й и 5-й дни после инъекции сенсибилизирующей дозы ЭБ внутрибрюшинно вводили специфический ингибитор NO-синтазы — NMMA (NG-монометил-Ь-аргинин). Интенсивность реакции оценивали у каждого животного по индексу реакции.
Фагоцитарную активность Р-А антител к ИФН-гамма оценивали на мышах-самках линии СВА (n=48). Мышам-самкам линии СВА (16—18 г) внутрижелудочно в течение 10 дней вводили Р-А антитела к ИФН-гамма (n=24) и дистиллированную воду (контроль, n=24) в дозе 0,2 мл/мышь. Фагоцитарная активность нейтрофилов и макрофагов перитонеаль-ного экссудата оценивалась через 24 ч после окончания 10-дневного курса введения Р-А антител к ИФН-гамма или дистиллированной воды по способности этих клеток поглощать суточную культуру S.aureus, штамм 209; концентрация взвеси микробов — 100 млн/мл); учитывали процент нейтро-филов, либо макрофагов, поглотивших микробы (фагоцитарный индекс) и среднее число стафилококков, поглощённое одной клеткой (фагоцитарное число).
Пролиферативную активность Т- и В-лимфоцитов оценивали с помощью реакции бласттрансформации [22], основанной на способности некоторых лектинов вызывать поли-клональную активацию и пролиферацию лимфоцитов, которая оценивается радиометрически по интенсивности включения в клетки 3Н-тимидина. Для активации Т-лимфо-цитов использовали фитогемагглютинин (ФГА); для активации В-лимфоцитов — митоген лаконоса (МЛ). В исследовании использовали взвесь мононуклеаров периферической крови 10 здоровых доноров. Пролиферативную активность оценивали с помощью реакции индуцированной (смешивая 50 мкл мононуклеаров, 50 мкл митогена и 50 мкл Р-А антител к ИФН-гамма) и спонтанной (смешивая 50 мкл мононуклеаров, 50 мкл Р-А антител к ИФН-гамма и 50 мкл ростовой среды) бласттрансформации. В контроле вместо Р-А антител к ИФН-гамма добавляли 50 мкл ростовой среды (РС). Оценку результатов опыта определяли по индексу стимуляции (ИС): ИС = О/К,
где О — радиоктивность в лунках с митогеном; К — радиоактивность в лунках без митогена.
Те же супернатанты культур мононуклеаров использовали и для оценки активности ИЛ-1 по методу Mizel S. B. [25]. Получали 4 вида супернатанта: 1) от клеток, стимулированных липополисахаридом (ЛПС, 75 мкг/мл) — для индукции продукции ИЛ-1 в присутствии препарата (50 мкл/мл); 2) от кле-
ток, стимулированных ЛПС; 3) от клеток, культивируемых в присутствии препарата; 4) от клеток, культивируемых только в РС. Оценку результатов опыта определяли по индексу стимуляции (ИС), который рассчитывался по вышеприведённой формуле.
При оценке влияния Р-А антител к ИФН-гамма in vitro на функциональную активность естественных киллеров (ЕК) в качестве источника ЕК была также использована суспензия мононуклеарных клеток (МНК) периферической крови здоровых доноров. Функциональную активность ЕК определяли в цитотоксической реакции по их способности лизировать клетки миелобластоидной линии К-562, используя радиометрический метод. Р-А антитела к ИФН-гамма в виде водного раствора добавляли в полную ростовую среду из расчёта 50 мкл на 1 мл среды.
Эксперименты по изучению влияния Р-А антител к ИФН-гамма на выработку ИФН-гамма, ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-10 проведены на мышах-самцах линии CBA/CaLac (18—20 г, 2—2,5 мес). Мышам-самцам линии CBA/CaLac ежедневно в течение 10 дней внутрижелудочно вводили Р-А антитела к ИФН-гамма (n=48) или дистиллированную воду (контроль, n=48) в дозе 0,2 мл/мышь. 6 мышей были интактными. Продукцию цитокинов определяли на 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 10 дни введения препаратов у 6 мышей в каждой точке. Лимфоциты выделяли из взвеси селезёночных клеток мышей на градиенте Фиколла-Пака (плотность 1,077), дважды отмывали средой 199 с 5% эмбриональной телячьей сывороткой. Жизнеспособные лимфоциты опытных и контрольных групп, а также фона доводили до концентрации 2х106 клеток/мл и инкубировали в течение суток без (спонтанный вариант) или с добавлением 20 мкг/мл ФГА (стимулированный вариант). ИФН-гамма в культуральных супернатантах тестировали им-муноферментным (ИФА) методом.
Результаты и обсуждение
B экспериментальных исследованиях in vivo Р-А антитела к ИФН-гамма стимулировали гуморальный иммунный ответ. Курсовое введение препарата в течение 5 дней мышам способствовало повышению эффективности гуморального иммунного ответа на корпускулярный тимусзависимый антиген (эритроциты барана) (иммунизация минимальными дозами антигена одновременно с первым введением препарата), при этом отмечалось повышение функциональной активности антите-лообразующих клеток в селезёнке в 1,5 раза (p<0,05 vs контрольная группа) и нарастание титров гемагглютининов в сыворотке крови в 1,6 раза (p<0,05 vs контрольная группа). B условиях имму-носупрессии, индуцированной введением мышам циклофосфана в дозе 125 мг/кг, также отмечено усиление иммунологических реакций под действием Р-А антител к ИФН-гамма, а именно: зарегистрировано увеличение относительного содержания антителообразующих клеток в селезёнке в 1,7 раза (p<0,05 vs контрольная группа). Важно отметить, что стимулирующее влияние Р-А антител к ИФН-гамма было зарегистрировано в условиях минимальных доз антигена, индуцировавших весьма слабый иммунный ответ [14, 26, 27].
Курсовое введение Р-А антител к ИФН-гамма мышам в течение 10 дней повышало активность Т-эффекторов, что выражалось в усилении реакции гиперчувствительности замедленного типа, в
ответ на сенсибилизацию эритроцитами барана: индекс реакции увеличился в 1,7 раза по сравнению с контрольной группой (р<0,05). Эффектор-ное звено этой реакции как в контроле, так и при введении Р-А антител к ИФН-гамма в основном реализовывалось через NO-зависимые механизмы. Как известно, основным индуктором синтеза оксида азота при иммунном ответе является ИФН-гамма. Подавление продукции NO при введении ингибитора NO синтазы NMMA in vivo отменяло это усиление (индекс реакции ГЗТ снизился в 3,3 раза (p<0,05) по сравнению с группой, в которой не вводили NMMA) [14, 26, 27].
При изучении фагоцитарной активности ней-трофилов и макрофагов перитонеального экссудата мышей, которую оценивали через 24 часа после 10-дневного курса введения препарата, была выявлена способность Р-А антител к ИФН-гамма стимулировать фагоцитоз за счёт увеличения доли нейтрофилов и макрофагов, способных поглощать стафилококки на 37,4 и 62% по сравнению с контрольной группой соответственно (p<0,05). При этом количество поглощённых каждой клеткой микроорганизмов статистически значимо не менялось [26].
In vitro Р-А антитела к ИФН-гамма при добавлении в культуру мононуклеаров оказывали умеренное комитогенное действие в реакции бласт-трансформации, стимулируя пролиферацию как Т-, так и В- лимфоцитов. Добавление Р-А антител к ИФН-гамма к культуре мононуклеаров совместно с Т или B митогеном способствовало повышению индекса стимуляции в 1,7 и 1,6 раза соответственно (p>0,05). При этом Р-А антитела к ИФН-гамма не оказывали влияния на спонтанную бласттрансформацию лимфоцитов [14].
В культуре мононуклеаров Р-А антитела к ИФН-гамма в 1,8 раза повышали выработку лимфоцитами ИЛ-1 (со стимуляцией ЛПС) и в 1,7 раза (без стимуляции ЛПС) по сравнению с контролем (p>0,05), а также увеличивали функциональную активность естественных киллеров, которые играют важную роль в защите организма от различных внутриклеточных микроорганизмов и опухолевых клеток, на 12,7% по сравнению с контролем (p<0,05) [14].
При изучении влияния Р-А антител к ИФН-гамма на продукцию ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-10 было показано, что препарат стимулировал преимущественно функциональную способность Т-хелперов I типа, функциональными маркёрами которых являются ИФН-гамма и ИЛ-2. При стимуляции лимфоцитов фитогемагглютинином на фоне введения исследуемого препарата происходило усиление продукции как ИФН-гамма и ИЛ-2, так и ИЛ-4 и ИЛ-10, что также говорит и о стимуляции Т-хелперов II типа [14]. На фоне курсового введения Р-А антитела к ИФН-гамма достоверно по-
вышали спонтанную продукцию лимфоцитами ИФН-гамма относительно контроля на 1-е и 3-7-е сут наблюдения, с максимумом на 3-и сут введения — более чем в 8 раз по сравнению с исходным уровнем и в 6,5 раз по сравнению с контролем (р<0,05). Повышение ФГА-стимулированной выработки ИФН-гамма было менее выраженным, максимум приходился на 7-е сут введения, а повышение составило 9,5% относительно контроля (р<0,05).
На фоне введения Р-А антител к ИФН-гамма повышение спонтанной выработки ИЛ-2 лимфоцитами селезёнки мышей отмечали со 2-х по 7-е сутки. Однако статистически значимое увеличение в 1,5 раза в продукции исследуемого цитоки-на наблюдалось лишь на 3-е и 7-е сутки опыта (р<0,05). Повышение ФГА-стимулированной продукции ИЛ-2 лимфоцитами по сравнению с контролем было менее выраженным и составило 17—29% (р<0,05).
Повышение спонтанной выработки ИЛ-4 лимфоцитами в 3 раза и в 1,4 раза относительно контрольной группы было зарегистрировано на
7-е и 10-е сутки соответственно (р<0,05). Влияние введения Р-А антител к ИФН-гамма на ФГА-сти-мулированную продукцию ИЛ-4 было разнонаправленным в разные сроки наблюдения. Так на 1-е, 2-е и 4-е сутки это влияние было стимулирующим: отмечено увеличение продукции на 41, 38 и 19% соответственно по сравнению с группой контроля (р<0,05). А на 6-е и 10-е сутки ФГА-сти-мулированная продукция ИЛ-4 была, напротив, снижена на 17 и 26,8% относительно группы контроля соответственно (р<0,05).
Курсовое введение Р-А антител к ИФН-гам-ма не влияло на спонтанную выработку ИЛ-10 лимфоцитами селезёнки, но достоверно повышало его ФГА-стимулированную продукцию на 40,6—84,5% по сравнению с контрольной группой на 1—5-е сутки эксперимента (р<0,05).
Необходимо отметить, что возрастание продукции того или иного цитокина в спонтанном тесте, вероятно говорит о функциональном состоянии клеток продуцентов, в то время как в стимулированном варианте обусловливается преимущественно резервными возможностями лим-
Механизмы иммунотропного действия Р-А антител к ИФН-гамма.
фоцитов экспериментальных животных секрети-ровать исследуемые клеточные факторы.
В клинических исследованиях была подтверждена способность препаратов на основе P-A антител к ИФH-гамма стимулировать синтез функционально активных ИФH-гамма и ИФ^альфа, а также активировать функции и повышать функциональный резерв Т хелперов и других иммунокомпетентных клеток (В-лимфоцитов, цитотоксических Т-лимфо-цитов, EK-клеток, фагоцитов и др.) [28—30].
Проведённые исследования позволяют предположить следующий механизм иммунотропного действия P-A антител к ИФ^гамма (см. рисунок).
Выводы
В серии экспериментальных исследований им-мунотропного действия было выявлено, что P-A антитела к ИФ^гамма (препараты анаферон и анаферон детский) in vivo стимулируют гуморальный иммунный ответ, в том числе на фоне имму-носупрессии: повышают функциональную активность антителообразующих клеток в селезёнке; активизируют функцию Т-эффекторов, что выражается в усилении реакции гиперчувствительности замедленного типа; повышают фагоцитарную активность нейтрофилов и макрофагов перитоне-ального экссудата за счёт увеличения процента активных фагоцитов. In vitro культуре мононуклеар-ных клеток P-A антитела к ИФ^гамма стимулируют пролиферативную активность Т- и В-лимфоцитов; повышают функциональную активность естественных киллеров; стимулируют выработку ИЛ-1 (в присутствии липополисахари-да). Ex vivo было обнаружено стимулирующее действие P-A антител к ИФ^гамма на продукцию
ЛИТЕРАТУРА
1. Aфuнoгенoвa B.П., Лyкaчев È.B., Kocmrnœ МП.Иммунотерапия: механизм действия и клиническое применение иммунокорриги-рующих препаратов. Леч врач 2010; 4: 75—78.
2. Eршoв Ф.И., Kuселёв O.È. Интерфероны и их индукторы (от молекул до лекарств). М.: «ГЭOTAP-Медиа». 2005; 368.
3. Тарасов СЛ. Экспериментальная фармакология анаферона детского: спектр противовирусной активности и механизмы действия. Aвтореф. дисс. ... канд. мед. наук. Томск. 2012; 22.
4. Эnшmейн O.È. Феномен релиз-активности и гипотеза «пространственного» гомеостаза. Успехи физиол наук 2013; 3: 54—76.
5. Сергеев А.Н., Пъянков O.B., Шишкина Л.Н., Дyбенъ Л.Г., Пеmрuшен-ко B.A., Жyкoв B.A., Пъянкова O.L, CвяmченкoЛ.И., Шерcmoбoев EM., Kaрримова T.B, Maрmюшев-Пoклaд A.B., Сергеева C.A., Эnшmейн O.È., ^moe AT., Глomoвa Т.И. Противовирусная активность сверхмалых доз антител к гамма-интерферону при пероральном введении: экспериментальное исследование гриппозной инфекции у мышей. abto-биотики и химиотер 2004; 49, 11: 7—11.
6. Шишкина Л.Н., Сергеев А.Н., Жбанов A.С., Скарнович M.O., Eв-mrn H.K., Maзyркoвa H.A., Сергеев A.A., Белотлъская M.B., Хей-фец È.A., Дyгuнa Ю.Л., Тарасов С.A., Сергеева С.A., Эnшmейн O.È. Изучение эффективности лечебно-профилактического действия анаферона детского при гриппозной инфекции у мышей. Бюлл эксперим биол 2008; 146, 12: 671—673.
7. Tarasov S.A, Zarubaev V.V., Gorbunov E.A. et al. Activity of ultra-low doses of antibodies to gamma-interferon against lethal influen-
ИФН-гамма и функционально сопряжённых ци-токинов (ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-10).
Ключевым механизмом иммунотропного действия Р-А антител к ИФН-гамма является влияние на систему интерферонов и функционально сопряжённых с ней цитокинов, приводящее к нормализации функциональной активности естественных факторов иммунной защиты (клеточный, гуморальный иммунный ответ, фагоцитарная активность нейтрофилов и макрофагов).
Фармакологической мишенью Р-А антител к ИФН-гамма является ИФН-гамма и его рецептор, а точкой приложения иммунотропной активности Р-А антител к ИФН-гамма — клетки иммунной системы, чувствительные к действию эндогенного ИФН-гамма. Р-А антитела к ИФН-гамма способны стимулировать продукцию не только самого ИФН-гамма, но и ряда функционально сопряжённых с ним цитокинов: вырабатываемых макрофагами (ИЛ-1), Т-хелперами I типа (ИЛ-2) и Т-хелперами II типа (ИЛ-4, ИЛ-10) [13, 26]. Это объясняет способность Р-А антител к ИФН-гамма стимулировать клеточный и гуморальный иммунный ответ, а также увеличивать фагоцитарную активность нейтрофилов и макрофагов перитонеального экссудата [13, 25].
Полученные данные позволяют сделать вывод, что применение препаратов на основе Р-А антител к ИФН-гамма (препараты анаферон и анаферон детский) эффективно для лечения и профилактики развития инфекционных заболеваний, а также для коррекции дисбаланса иммунной системы у иммунокомпрометированных пациентов (в том числе у пациентов в период реконвалесценции после инфекционных заболеваний).
za A (H1N1)2009 virus infection in mice. Antiviral Res 2012; 93, 2: 219—224.
8. Савельева K.B., Учайкин В.Ф., Кладова О.В., Дриневский В.П., Оси-дак Л.В., Петров В.А., Бобров М.В., Егоров В.Б., Тарасов С.А., Ел-фимова У.В., Мартюшев-Поклад А.В., Сергеева С.А., Эпштейн О.И. Результаты клинических исследований лечебной эффективности анаферона при гриппе и других ОРВИ у детей. Мед иммунол 2006; 8: 2—3: 461—462.
9. Тарасов С.А., Качанова М.В., Жавберт Е.С., Дугина Ю.Л., Эпштейн О.И., Сергеева С.А. Применение сверхмалых доз антител к интерферону-у в комплексной терапии бактериальных инфекций и профилактике бактериальных осложнений. Бюлл экспер биол мед 2009; 148, 8. Прил.: 43—44.
10. Скрипченко Н.В., Моргацкий Н.В., Иванова Т.П., Аксенов О.А., Иванова М.В., Карасев В В., Пульман Н.Ф., Вильниц А.А., Мурина Е.А., Горелик Е.Ю. Современные возможности экстренной неспецифической профилактики клещевого энцефалита у детей. Педиатр фармакол М.: 2007; 4, 7: 23—26.
11. Фомин В В., Тункина Е.Е., Горелышева И.Ю., Лагерева Ю.Г., Сабурова Е.Б., Старопорова Е.Ю., Бацкалевич Н.А. Опыт применения ацикловира и анаферона детского при инфекционном мононук-леозе у детей. Вест Урал Государ мед акад 2004; 14: 54—56.
12. Кудин М.В., Федоров Ю Н. Динамика кожного и гипертермического синдрома у детей с ветряной оспой на фоне лечения анаферо-ном. Вопр совр педиатр М.: 2006; 5, 1: 735—736.
13. Дондурей Е.А., Осидак Л.В., Головачева Е.Г., Голованова А.К., Амосова И.В., Гладченко Л.Н. Острые вирусные инфекции с сочетан-
ным поражением респираторного и желудочно-кишечного трактов у детей. Интерферонотерапия. Бюл экспер биол мед 2009; 148, 8: 31-34.
14. Эпштейн О.И. Сверхмалые дозы (история одного исследования). М.: Издательство РАМН; 2008; 336.
15. Мартюшев-Поклад А.В. Механизмы противовирусных и иммуно-модулирующих эффектов сверхмалых доз антител к гамма-интерферону. Автореф. дисс. ... канд. мед. наук. Томск; 2003; 22.
16. Дондурей Е.А., Осидак Л.В., Головачева Е.Г., Данини Г.В., Голованова А.К., Габбасова Ф.А., Николаева В.А., Минченко С.И., Сирот-кин А.К. Эффективность Анаферона детского при смешанных инфекциях у детей. Дет инфекц 2006; 5, 1: 55—60.
17. Семенченко Л.В. Сравнительная оценка клинико-иммунологичес-кой эффективности индукторов интерферона в реабилитации ре-конвалесцентов острых респираторных заболеваний. Автореф. дисс. ... канд. мед. наук. М.: 2006; 24.
18. Раздъяконова ИВ. Клинико-иммунологическая характеристика калицивирусной инфекции у детей и тактика терапии. Автореф. дисс. ... канд. мед. наук. СПб.; 2009; 20: 18.
19. Кондюрина Е.Г., Малахов А.Б., Ревякина В.А. Анаферон детский. Клинические и иммунотропные эффекты в педиатрии. Фармако-тер альман 2008; 1: 80—87.
20. Сизякина Л.П., Мелъникова О.М. Иммуномодулирующие эффекты Анаферона детского, проявляющиеся при лечении детей с рецидивирующими респираторными инфекциями. Фармакотер аль-ман 2009; 3: 52—62.
21. Taniguchi K, Petersson M, Hoglund P., Kiessling R, Klein G, Karre K. Interferon-gamma induces lung colonization by intravenously inoculated B16 melanoma cells in parallel with enhanced expression of class I major histocompatibility complex antigens. Proc Natl Acad Sci USA 1987 May; 84: 10: 3405—3409.
22. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / Под ред. В.П. Фисенко. М.: ЗАО «ИИА «Ремедиум»; 2000; 398.
23. Голъдберг Е.Д., Дыгай А.М., Шахов В.П. Методы культуры ткани в гематологии. Томск; 1992; 264.
24. Cunningham A.J. A method of increased sensitivity for detecting single antibody-forming cells. Nature 1965; 207: 5001: 1106—1107.
25. Mizel S.B. Studies on the purification and structure-function relationships of murine lymphocyte activating factor (Interleukin 1). Mol Immunol 1980; 17: 571—577.
26. Шерстобоев Е.Ю., Масная Н.В, Чурин А.А., Борсук О.С., Мартю-шев А.В., Эпштейн О.И. Иммунотропные свойства гомеопатических доз антител к интерферону-у человека. Бюлл эксперим биол 2001; 3: 37—39.
27. Шерстобоев Е.Ю., Масная А.В., Чурин А.А., Борсук О.С., Белъ-ский Ю.П., Мартюшев А.В., Осидак Л.В., Дриневский В.П, Эпштейн О.И. Иммунотропные свойства сверхмалых доз антител к гамма-интерферону. Цитокин воспаление 2002; 1: 2: 40.
28. Головачева Е.Г. Клинико-лабораторное обоснование применения иммунокорригирующей терапии при респираторно-синцитиаль-ной вирусной инфекции у детей. Автореф. дис. ... канд. мед. наук. СПб.: 1998; 18.
29. Афанасъева О.И., Осидак Л.В., Головачева Е.Г., Милъкинт К.К., Дриневский В.П., Образцова Е.В., Калинина Н.М., Эпштейн О.И. Результаты изучения лечебной эффективности препарата «Ана-ферон детский» при гриппе у детей. Дет инфекц 2003; 2: 48—53.
30. Удилова Е.Е. Клиника, иммунокоррегирующая терапия и функциональное состояние Т-клеточного и фагоцитарного звеньев иммунитета при инфекционном мононуклеозе у детей. Автореф. дисс. ... канд. мед. наук. Екатеринбург. 2007; 24.
