CC BY
12
DOI: 10.24412/2074-5036-2022-3-50-55 УДК 619:636:615.98
Ключевые слова: иммуномодуляторы, телята, иммунотропные препараты, биогенный препарат, парагрипп-3, ревакцинация
Keywords: immunomodulators, calves, immunotropic agents, biogenic agent, parainfluenza-3, revaccination
Шаньшин Н. В., Лунёва А. А.
ИММУНОТРОПНЫЕ ПРЕПАРАТЫ ПРИ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКЕ ПАРАГРИППА-3, РЕСПИРАТОРНО-СИНЦИТИАЛЬНОЙ ИНФЕКЦИИ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
IMMUNOTROPIC AGENTS FOR SPECIFIC PREVENTION OF PARAINFLUENZA-3, RESPIRATORY SYNCYTIAL INFECTION IN CATTLE
ФГБНУ «Федеральный Алтайский научный центр агробиотехнологий» (ФГБНУ ФАНЦА)
отдел «Всероссийский научно-исследовательский институт пантового оленеводства» Адрес: 656910 Российская Федерация, Алтайский край, г. Барнаул, Научный городок, 35 Federal State Budget-Funded Scientific Institution "Federal Altai Scientific Center for Agrobiotechnologies" (FGBNUFANCA) Department "All-Russian Scientific Research Institute of Deer Farming" Address: 656910 Russian Federation, Altai Territory, Barnaul, Science town, 35
Шаньшин Николай Васильевич, кандидат ветеринарных наук, ведущий научный сотрудник, е-mail: wniipo@rambler.ru Shanshin Nikolay Vasilyevich, PhD of Veterinary Science, Leading Researcher, e-mail: wniipo@rambler.ru Лунёва Александра Андреевна, младший научный сотрудник, e-mail: wniipo@rambler.ru Luneva Aleksandra Andreevna, Junior Researcher, e-mail: wniipo@rambler.ru
Аннотация. Из вирусов, циркулирующих в популяции крупного рогатого скота, вирус парагриппа-3 чаще проявляет свое патогенетическое действие в ассоциации с другими возбудителями респираторных инфекций, его роль в инфекционной патологии связана с повсеместным распространением, а также c риском возникновения вторичных бактериальных инфекций. Следовательно, разработка и совершенствование методов специфической профилактики острых респираторно-вирусных инфекций крупного рогатого скота, а также внедрение их в производство не теряет своей актуальности и остается в центре внимания научного поиска. Цель исследований -изучить эффективность применения иммунотропных препаратов на фоне специфической профилактики пара-гриппа-3, респираторно синцитиальной инфекции крупного рогатого скота. Для этого сформировали 6 опытных и 1 контрольную группы телят 14-дневного возраста, по 10 животных в каждой. Животным контрольной группы вводили вакцину Бовилис Бовипаст RSP, телятам опытных групп, соответственно вакцину и одновременно иммуномодуляторы отдельно и различных сочетаниях. В ходе исследований выявлено, достоверное увеличение БАСК и ЛАСК в 1 опытной группе, где инъецировали риботан, соответственно во 2 и 4-6 опытных группах, гамма-глобулиновой фракции, которая содержит основную массу антител, обеспечивающих гуморальную защиту организма, при этом гематологические показатели крови находились в референтных пределах. Позитивным моментом при оценке иммунного ответа на одновременное введение вакцины и иммуномодуляторов, можно считать увеличение количества антител к вирусу ПГ-3 и РСИ КРС в опытных группах по сравнению с контролем.
Summary. Among viruses affecting the cattle population, the parainfluenza virus-3 (PG-3) more often manifests its pathogenetic effect is association with its other pathogens of respiratory infections, its role in infectious pathology is associated with its ubiquitous distribution, as well as the risk of secondary bacterial infections. Therefore, the development, improvement and application of methods for the specific prevention of acute respiratory viral infections in cattle is still relevant and remains the focus of scientific research. The purpose of the research is to study the effectiveness of the use of immunotropic agents against the background of specific prevention of the parainfluenza-3, respiratory syncytial infection (RSI) in cattle. For this purpose, we assigned 6 experimental and 1 control group of 14-day-old calves, each group consisting of 10 animals. The animals in the control group were given the vaccine Bovilis Bovipast RSP; the calves of the experimental groups were, respectively, given the vaccine and immunomodulators (separately and in various combinations). The study revealed a significant increase in the serum bactericidal activity and the serum lysozyme activity in the 1st experimental group, which was administered injections of ribotan; the 2nd and 4-6th experimental groups showed an increase in the gamma globulin fraction, which contains the larger part of the antibodies that provide the body's humoral protection, whereas the haematological blood parameters were within the reference limits. The quantitative increase in the number of antibodies to the virus can be considered as a positive factor in assessing the immune response to the simultaneous administration of the vaccine and immunomodulators.
Введение
В настоящее время, наряду с улучшением технологии кормления и содержания животных, актуальной задачей является совершенствование вакцинопрофилактики против инфекционных болезней самой разной этиологии, посредством иммунотроп-ных препаратов, способных стимулировать и формировать стойкий и продолжительный поствакцинальный иммунитет [2, 5]. Биогенные тканевые препараты при их применении существенно не изменяют физиологические процессы здорового организма, но повышают его устойчивость к неблагоприятным факторам окружающей среды [11, 12]. При заболевании животных биогенные стимуляторы способствуют восстановлению и активизации деятельности важнейших систем организма, улучшают обмен веществ, обладают антиоксидантной, противовоспалительной активностью и другими свойствами [4]. В связи с этим актуальным является изучение и усовершенствование существующих схем применения иммуномодуляторов, на фоне специфической профилактики респи-раторно-вирусных болезней телят, что позволит оптимизировать схемы вакцинаций, повысить напряженность формируемого иммунитета, расширить арсенал иммунотроп-ных лекарственных средств, доступных для применения в производственных условиях.
Цель исследований - изучить эффективность применения иммунотропных препаратов на фоне специфической профилактики
парагриппа-3, респираторно синцитиальной инфекции крупного рогатого скота.
Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:
- изучить эффективность введения имму-номодуляторов миксоферона, риботана, биогенного препарата при специфической профилактике ПГ-3 РСИ КРС;
- изучить эффективность сочетанного использования иммуномодулятора и биогенного препарата при специфической профилактике ПГ-3, РСИ КРС.
Материалы и методы
Опытная партия инъекционного биогенного препарата изготовлена по ранее запатентованной технологии [9], в отделе ВНИИПО ФГБНУ «ФАНЦА». Механизм действия препарата сводится к изменению обменных и энергетических процессов в организме, в результате воздействия на ферментные системы, процессы ассимиляции, газообмен, фосфорный обмен. В его состав входит 14 аминокислот, в том числе 6 из них незаменимые. Иммуномоду-ляторы миксоферон и риботан закуплены через ветеринарную сеть аптек. Научно-производственный опыт по изучению эффективности использования иммунотроп-ных препаратов на фоне специфической профилактики ПГ-3, РСИ КРС, провели на телятах симментальской породы в ООО «АКХ Ануйское». Для этого сформировали 6 опытных (О-1 - О-6) и 1 контрольную
51
Таблица 1
Схема опытов по использованию иммунотропных препаратов при одновременном введении с вакциной Бовилис Бовипаст
Группа Количество телят, голов Вакцинация и, ревакцинация телят, через 28 дней Препарат
доза вакцины, мл возраст, неделя Риботан, мл Миксоферон, доз Биогенный препарат, мл
К-1 10 5,0 2-6 - - -
О-1 10 5,0 2-6 1,0 - -
О-2 10 5,0 2-6 - 10,0 -
О-3 10 5,0 2-6 0,5 5,0 -
О-4 10 5,0 2-6 0,5 - 2,5
О-5 10 5,0 2-6 - 5,0 2,5
О-6 10 5,0 2-6 - - 5,0
Таблица 2
Общее количество белка и его фракций в сыворотке крови телят опытных и контрольной групп
Группа Общ. кол. белка, г/л Альбумины, % Глобулины, % А/Г, ед
А в У
исходные показатели
- 56,6±1,02 41,5±2,56 13,4±1,21 10,5±0,59 34,6±3,38 0,7±0,17
показатели сыворотки крови через 21 день после повторной вакцинации
К-1 53,9±2,48 44,2±2,40 16,0±0,73 9,9±0,58 29,7±3,37 0,8±0,11
О-1 51,0±4,52 42,0±4,20 13,4±1,21** 11,5±4,95 32,9±5,26 0,7±0,10
О-2 50,6±5,40 38,7±1,93** 12,3±1,47** 9,5±4,00 39,4±4,46** 0,6±0,01
О-3 55,3±9,04 43,6±1,55 11,9±3,32 11,0±4,88 33,3±4,20 0,7±0,05
О-4 51,7±1,27 43,5±5,74 10,8±2,38** 9,1±2,90 36,4±1,96** 0,7±0,20
О-5 54,4±2,18 43,5±5,74 15,5±3,81 7,8±3,43 36,4±1,96** 0,7±0,10
О-6 52,2±1,27 39,8±0,62** 12,0±1,64** 10,6±1,01 37,5±1,85** 0,7±0,11
Примечание: **Р<0,01 относительно контроля.
(К-1) группы телят 14-дневного возраста, по 10 животных в каждой. Животным контрольной группы вводили вакцину Бови-лис Бовипаст RSP, телятам опытных групп, соответственно вакцину и одновременно иммунотропные препараты согласно схеме, представленной в таблице 1.
Оценку эффективности использования иммуномодуляторов и биогенного препарата в отдельности и сочетании на фоне специфической профилактики ПГ-3 КРС, проводили по следующим методикам:
- клинико-физиологическое состояние (развитие поствакцинальных осложнений) -по общепринятым в ветеринарии методам;
- морфологические исследования крови -определение количества эритроцитов, лейкоцитов, содержание гемоглобина [10];
- биохимические исследования сыворотки крови - содержание общего количества белка рефрактометрическим (ИРФ-22), фракции белка - нефелометрическим методом [5];
- титр сывороточных антител к ПГ-3 в реакции торможения гемагглютинации (РТГА), РСИ непрямой гемагглютинации (РНГА).
- бактерицидную и лизоцимную активность сыворотки крови фотонефелометриче-ским методом [3].
Иммунотропные препараты и вакцину Бови-лис Бовипаст RSP вводили подкожно в область
Таблица 3
Гематологические показатели телят в опытных и контрольной группах
Группа Общее количество Цветной показатель, ед
лейкоциты, 109/л эритроциты, 1012/л гемоглобин, г/л
исходные показатели
- 5,24±0,761 6,82±0,395 98,5±6,86 0,89±0,038
показатели сыворотки крови через 21 день после повторной вакцинации
К-1 6,50±1,044 6,57±0,351 101,0±3,60 0,84±0,052
О-1 5,76±0,709 6,89±0,265 106,6±7,63 0,85±0,056
О-2 5,10±0,529* 6,91±0,550 110,0±8,66 0,87±0,025
О-3 5,60±0,200 6,86±0,416 109,6±10,50 0,87±0,029
О-4 6,00±0,529 6,86±0,321 108,3±7,63 0,86±0,021
О-5 6,03±0,987 6,73±0,306 110,0±5,00 0,89±0,041
О-6 4,93±0,306** 6,96±0,551 110,0±5,00 0,96±0,059**
Примечание: * Р<0,05, **Р<0,01 к контролю.
Таблица 4
Иммунобиологические показатели крови телят опытных и контрольной групп
Группа ЛАСК, % БАСК, % Титр антител к вирусу
ПГ-3 РСИ
исходные показатели
- 10,0-25,0 14,2±6,30 35,6-48,5 42,5±5,91 1:4-1:32 17,2±11,03 1:8-1:64 27,0±17,59
показатели сыворотки крови через 21 день после повторной вакцинации
К-1 16,8-54,3 35,2±13,93 70,0-85,3 75,2±6,48 1:32-1:128 73,6±47,82* 1:32-1:128 92,0±39,88*
О-1 38,4-72,7 52,8±11,55** 82,4-90,8 87,5±3,17* 1:128-1:256 166,4±61,80*(*) 1:64-1:512 240,0±183,42*(**)
О-2 12,5-72,7 37,0±22,21 74,8-82,9 79,7±3,03 1:64-1:128 96,0±33,71* 1:64—1:128 104,0±33,12*
О-3 29,0-66,6 45,2±16,88 75,4-92,1 81,8±6,27 1:64-1:256 96,0±62,19* 1:64-1:256 136±79,77
О-4 21,3-70,0 38,2±19,73 74,8-86,2 81,6±4,35 1:32-1:256 118,4±60,43* 1:64-1:256 160,0±83,79*
О-5 30,7-60,2 53,8±18,18 56,5-93,1 71,0±15,48 1:128-1:512 268,8±140,86*(*) 1:128-1:512 304,0±180,20*(*)
О-6 33,3-61,5 47,9±10,06 46,9-87,2 69,0±14,89 1:128-1:512 217,6±121,40*(*) 1:128-1:512 272,0±159,54*(*)
Примечание: * Р<0,05, **Р<0,01 к исходным данным, (*) по отношению к контролю
средней трети шеи с обеих сторон, разными шприцами с соблюдением правил асептики.
Забор крови для исследований провели перед первой вакцинацией и спустя 21 день после 2-го введения вакцины животным. Достоверность средних значений оценивали по критерию достоверности Стьюдента-Фишера.
Результаты исследований
Через 21 день после ревакцинации у телят отмечали снижение общего количества белка в сыворотке крови ниже референтных значений в контрольной группе на 13,0 %, в опытных, соответственно на 10,8-18,3 %, а-глобулинов на 1,2 % в О-4, р-глобулинов на 0,9-2,2 % в О-2, О-4, О-5 группах. Данные изменения в биохимическом составе крови связаны с несбалансированностью рациона подопытных животных. Увеличение у-глобулиновой фракции у опытных телят на 3,2-9,7 % в сравнении с контрольной группой при достоверных различиях в О-2, О-4, О-5, О-6 группах (Р<0,01) указывает на усиление активации иммунного ответа, так как эта фракция содержит основную массу антител, которые обеспечивают гуморальную защиту организма (табл. 2).
Гематологические показатели крови у телят подопытных групп находились в пределах физиологической нормы с достоверным снижением общего количества лейкоцитов во О-2, О-6 группах по отношению к контролю (табл. 3). Незначительные изменения в содержании общего количества эритроцитов, гемоглобина, лейкоцитов крови подопытных телят, в пределах допустимых нормативных значений, после 2-кратного введения вакцины против вирусных респираторных инфекций говорит о безвредности применяемых препаратов [7].
Цветной показатель был выше в опытных группах в сравнении с контролем, соответственно на 1,1-14,2 %.
Бактерицидная и лизоцимная активность сыворотки крови (БАСК и ЛАСК) относятся к факторам неспецифической резистентности организма, являются показателями активности нейтрофилов, моноцитов и других форменных элементов, а также указывают на антимикробные свойства крови и общее состояние иммунной системы. Максимальное увеличение БАСК на 12,3 % (Р<0,05) и ЛАСК на 50,0 % (Р<0,01) отмечали после одновременного введения вакцины и иммуномодулятора риботан в
53
О-1, в сравнении с контрольной группой, соответственно повышение ЛАСК на 52,8 и 36,0 % и снижением БАСК на 4,2 и 6,2 % после со-четанных инъекций миксоферон + биогенный препарат в половинных дозах в О-5 группе и биогенного препарата в О-6 группе. Незначительное повышение ЛАСК и БАСК на 5,1 % и 4,5 % регистрировали во О-2 группе телят после введения миксоферона, соответственно в О-4 на 8,5 % и 6,4 %, где дополнительно к вакцине инъецировали риботан + биогенный препарат в половинных дозах. В О-3 группе ЛАСК превышала контроль на 28,4 %, а БАСК соответственно на 6,6 % после введения половинных доз риботан + миксоферон (табл. 4). Лизоцимная и бактерицидная активность сыворотки крови в контрольной группе увеличились на 21,0 и 32,5 % в сравнении с исходными показателями, а в опытных группах, соответственно ЛАСК на 22,8-39,6 %, БАСК на 26,545,0 %.
Обсуждение результатов
После введения вакцины Бовилис Бовипаст RSP и иммунотропных препаратов, титр антител к вирусу ПГ-3 и РСИ достоверно увеличился во всех опытных и контрольной группах в сравнении с исходными данными (Р<0,05). В контрольной группе регистрировали увеличение количества антител к вирусу ПГ-3 и РСИ в 4,2 и 3,4 раза, соответственно в О-1 в 9,6 и 8,8 раза, в О-2 в 5,5 и 3,8, в О-3 в 5,5 и 5,0 раз, в О-4 в 6,8 и 5,9 раза, в 15,6-12,6 и 11,2-10,0 раз в О-5 и О-6 группах. После 2-кратной иммунизации телят, достоверные отличия по содержанию антител к вирусу ПГ-3 и РСИ в сравнении с контрольной группой животных отмечены в сыворотки крови О-1 группы в 2,2 и 2,6 раза, которым дополнительно инъецировали рибо-тан, а О-5 - О-6 группах в 3,6-2,9 и 3,3-2,9 раза (Р<0,05), соответственно миксоферон + биогенный препарат в половинных дозах и биогенный препарат.
В работе соавторов Н. Ю. Басовой, М. А. Староселова и др. при использовании иммуномодулятора «полиоксидоний вет раствор» при вакцинации телят инакти-вированной вакциной «Комбовак-Р» через 30 дней после вакцинации отмечали наличие антител в сыворотке крови, к вирусу
54
ПГ-3 в контрольной группе от 1:16-1:128 в среднем 1:48±2,6, в опытной соответственно 1:32-1:256 в среднем 1:151,4±3,8, нормализацию гематологических и иммунологических показателей [1].
Введение биостимулятора (препарат на основе фракции АСД-2) за 24 часа перед вакцинацией и в день проведения вакцинации против вирусных болезней легких, обеспечивает выраженную стимуляцию им-мунобиохимических процессов, что является необходимым фоном для выработки специфических антител к вирусам ПГ-3, ВД-БС, ИРТ, РСИ крупного рогатого скота [8].
В период проведения опыта не выявлено нежелательных явлений в клинико-физиоло-гическом состоянии телят и побочных реакций на одновременное введение вакцины Бовилис Бовипаст RSP в сочетании с иммунотропны-ми препаратами. По результатам исследований установили, что не совсем корректно использовать сочетание иммуномодуляторов как друг с другом, так и риботан с биогенным препаратом в половинных дозах, что не дает препаратам в полной мере вызывать максимальный иммунный ответ из-за недостатка действующего вещества или фармакологических свойств, которые по-разному влияют на адаптационно-приспособительные механизмы иммунной системы животных. В тоже время необходимо отметить возможность использования миксоферона и биогенного препарата в половинных дозах в качестве иммуномодуля-торов, положительно влияющих на биохимические и иммунологические показатели крови телят, способных индуцировать иммунологическую реактивность, средний титр антител 1:268 к вирусу ПГ-3 регистрировали в данном сочетании и 1:304 к вирусу РСИ КРС.
Определение поствакцинального иммунного ответа против пастереллеза не проводили, акцент был сделан на респираторно-ви-русные инфекции телят.
Заключение
Фактом положительного влияния иммуно-модуляторов, различных по фармакологическим свойствам, в отдельности и их сочетании на поствакцинальный иммунный ответ и общую резистентность организма телят, являет-
ся достоверное увеличение БАСК и ЛАСК в 1 опытной группе, где инъецировали риботан, соответственно увеличение гамма-глобули-новой фракции во 2 и 4-6 опытных группах, при этом гематологические показатели крови находились в референтных пределах. Позитивным моментом при оценке иммунного ответа на одновременное введение вакцины и имму-номодуляторов, можно считать увеличение ви-руснейтрализующих антител к вирусу ПГ-3 от 30,4 % до 3,6 раз, РСИ КРС от 13,0 % до 3,3 раз в опытных группах по сравнению с контролем. К исходным значениям данный показатель в среднем составил, в контрольной группе к ПГ-3 в 4,2 раза, вирусу РСИ в 2,3 раза, соответственно у телят опытных групп к ПГ-3 от 5,5 до 15,6 раз, РСИ от 3,4 до 11,2 раз.
Список литературы
1. Басова Н. Ю. Влияние иммунокорректоров на иммуногенность вакцины «Комбовак - Р» / Басова Н. Ю., Староселов М. А., Скориков А. В., Схатум А. К. // Сборник научных трудов КНЦЗВ. Т. 8, № 2. Краснодар, 2019. С. 151-156.
2. Басова Н. Ю. Респираторные болезни молодняка крупного рогатого скота инфекционной этиологии в условиях Северного Кавказа: автореферат ... доктора ветеринарных наук. / Н. Ю. Басова. Краснодар, 2002. 42 с.
3. Гугушвили Н. Н. Иммунологические методы исследования в ветеринарии: методические рекомендации / Н. Н. Гугушвили. Краснодар, 2001. С. 50-53.
4. Даричева Н. Н. Тканевая терапия в ветеринарной медицине: монография. / Н. Н. Даричева, В. А. Ермолаев. Ульяновск. УГСХА. 2011. 168 с.
5. Зоткин Г. В. Проявление эпизоотического процесса при микст-инфекции ИРТ И ПГ-3 крупного рогатого скота. / Г. В. Зоткин, З. Я. Косорлукова, И. В. Яшин // Вопросы нормативно-правового регулирования в ветеринарии. 2014. № 2. С. 72-74.
6. Кондрахин И. П. Клиническая лабораторная диагностика в ветеринарии: справочное издание. / И. П. Кондрахин. М.: Агропромиздат. 1985. 287 с.
7. Красочко П. А. Морфологические показатели крови телят при применении живой ассоциированной вакцины против вирусных респираторных инфекций. / П. А. Красочко, А. В. Притыченко, И. А. Красочко, Д. И. Сайдалиев и др. // Сборник научных трудов КНЦЗВ. 2021. Т. 10. № 1. С. 35-39.
8. Патент РФ 2625022С2. 11.07.2017. Способ выращивания телят в хозяйствах неблагополучных по ОРВИ: №2015128690 заявлен 14.07.2015; опубликован 11.07.2017. Бюл. №20 / Петрова О. Г., Алексеев А. Д., Одегов Е. С.; заявитель УрГАУ.
9. Патент РФ 2698707 29.08.2019. Способ производства биогенных препаратов: №2019113424 заявлен 29.04.2019; опубликован 11.08.2019. / Евсеева Т. П., Шаньшин Н. В., заявитель ФГБНУ ФАНЦА.
10. Симонян Г. А. Ветеринарная гематология / Г. А. Симонян, Ф. Ф. Хисамутдинов. М.: Колос. 1995. 256 с.
11. Cusack P. M. V. The medicine and epidemiology of bovine respiratory disease in feedlots. / P. M. V. Cusack, N. McMeniman, I. J. Lean // Aust. Vet. J. 2003;81:480-487. doi: 10.1111/j.1751-0813.2003.tb13367.x.
12. Giangaspero M. Epidemiological survey on virus diseases of cattle in north west Syria. / M. Giangaspero, G. Vacirca, E. Vanopdenbosch, H. Blondeel // Tropicultura. 1992. 10(2):55-57.
+JF ЧОУДПО «ИНСТИТУТ ВЕТЕРИНАРНОЙ БИОЛОГИИ»
г. Санкт-Петербург
Курсы повышения квалификации
• Ветеринарная эхокардиография (теория и практика)
• Лабораторная диагностика в ветеринарии
• Ветеринарная офтальмология
• Ветеринарная рентгенология, в т.ч. персонал группы А и ответственный за рентгенобезопасность
• Ультразвуковая диагностика в ветеринарии
• Ветеринарная фармация (для лицензирования ветеринарных аптек)
Предварительная регистрация обязательна! Справки по тел. (812) 612-13-34 или (812) 232-55-92 доб. 208 График проведения и информация на сайте: www.invetbio.spb.ru/seminars.html
Лицензия Комитета по образованию Санкт-Петербурга на осуществление образовательной деятельности по образовательным программам дополнительного профессионального образования № 1093 от 04.08.2014 г.
