Научная статья на тему 'Иммунотропная активность мылкой амфифильной высокополимерной РНК из пекарских дрожжей'

Иммунотропная активность мылкой амфифильной высокополимерной РНК из пекарских дрожжей Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

CC BY
382
87
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.
Ключевые слова
YEAST / OLEIC ACID / HIGH-POLYMERIC RNA / IMMUNOTROPIC ACTIVITY OF RNA

Аннотация научной статьи по фундаментальной медицине, автор научной работы — Ямковая Татьяна Витальевна, Колесникова Ольга Петровна, Ямковой Виталий Иванович, Козлов Владимир Александрович, Панин Лев Евгеньевич

Исследована иммунотропная активность мылкой амфифильной высокополимерной РНК, выделенной из пекарских дрожжей с помощью олеиновой кислоты. Обнаружено, что данный препарат дозозависимо увеличивает массу лимфоидных органов (тимуса и селезенки) у мышей, возрастает также среднее количество клеток в данных органах. Препарат индуцирует лейкоцитарную реакцию, дозозависимо стимулирует первичный (IgM) и вторичный (IgG) гуморальный иммунный ответ. Вместе с тем он оказывает иммунодепрессивное воздействие на выраженность клеточного иммунного ответа (дозозависимое подавление эффекторной фазы реакции гиперчувствительности замедленного типа и выраженное подавление фазы сенсибилизации в высокой дозе).

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

Похожие темы научных работ по фундаментальной медицине , автор научной работы — Ямковая Татьяна Витальевна, Колесникова Ольга Петровна, Ямковой Виталий Иванович, Козлов Владимир Александрович, Панин Лев Евгеньевич

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

Текст научной работы на тему «Иммунотропная активность мылкой амфифильной высокополимерной РНК из пекарских дрожжей»

УДК 547.963.3

ИММУНОТРОПНАЯ АКТИВНОСТЬ МЫЛКОЙ АМФИФИЛЬНОЙ ВЫСОКОПОЛИМЕРНОЙ РНК ИЗ ПЕКАРСКИХ ДРОЖЖЕЙ

Татьяна Витальевна ЯМКОВАЯ1, Ольга Петровна КОЛЕСНИКОВА2, Виталий Иванович ЯМКОВОЙ3, Владимир Александрович КОЗЛОВ2, Лев Евгеньевич ПАНИН3

1 ООО «Виталанг»

630055, г. Новосибирск, ул. Рубиновая, 4-128

2 ФГБУ НИИ клинической иммунологии СО РАМН 630099, г. Новосибирск, ул. Ядринцевская, 14

3 ФГБУ НИИ биохимии СО РАМН 630117, г. Новосибирск, ул. Тимакова, 2

Исследована иммунотропная активность мылкой амфифильной высокополимерной РНК, выделенной из пекарских дрожжей с помощью олеиновой кислоты. Обнаружено, что данный препарат дозозависимо увеличивает массу лимфоидных органов (тимуса и селезенки) у мышей, возрастает также среднее количество клеток в данных органах. Препарат индуцирует лейкоцитарную реакцию, дозозависимо стимулирует первичный (IgM) и вторичный (IgG) гуморальный иммунный ответ. Вместе с тем он оказывает иммунодепрессивное воздействие на выраженность клеточного иммунного ответа (дозозависимое подавление эффекторной фазы реакции гиперчувствительности замедленного типа и выраженное подавление фазы сенсибилизации в высокой дозе).

Ключевые слова: дрожжи, олеиновая кислота, высокополимерная РНК, иммунотропная активность РНК.

Рибонуклеиновые кислоты представляют собой важнейшие компоненты живой клетки. Помимо мажорных - рибосомальной, матричной и транспортной РНК - в клетке присутствуют весьма многочисленные виды минорных РНК, которые, как выяснилось, играют регуляторную роль в самых разнообразных клеточных процессах. В связи с этим исследование компонентов суммарной РНК представляет собой значительный интерес, особенно если учесть, что разные компоненты пула клеточных РНК могут влиять на различные процессы в клетке, так что может наблюдаться некоторый сочетанный эффект.

Ранее из дрожжей было выделено несколько различных препаратов РНК и исследована их биологическая активность. Натриевая соль низкополимерной дрожжевой РНК - Нуклеинат натрия -давно применяется в медицине при лечении пациентов с широким спектром заболеваний. Он обладает высокой биологической активностью, ускоряет процессы регенерации тканей, стиму-

лирует деятельность костного мозга и лейкопоэз; обладает активностью поликлонального иммуностимулятора, регулируя миграцию Т-лимфоцитов и процессы кооперации Т- и В-лимфоцитов. Ну-клеинат натрия относится к стимуляторам фагоцитарной активности макрофагов и продукции факторов неспецифической защиты [4]. На основе высокополимерной составляющей дрожжевой РНК разработан препарат - Полирибонат. Он также биологически активен, в частности, специфически стимулирует биосинтез белка в кроветворных и иммунокомпетентных органах [9]. Полирибонат обладает противовирусными свойствами, усиливает гемопоэз, является имму-номодулятором и адъювантом; в последнее время используется в ветеринарии [12]. В качестве индуктора интерферона используется двуспираль-ная РНК - Ридостин, выделяемая из киллерных штаммов дрожжей [5]. Полирибонат, Нуклеинат натрия и Ридостин состоят из гидрофильных молекул, хорошо растворимых в воде.

Ямковая Т.В. - к.б.н., директор, e-mail: yam_tv@mail.ru

Колесникова О.П. - д.м.н., зав. лабораторией экспериментальной иммунотерапии, e-mail: iscreen2001@mail.ru

Ямковой В.И. - д.б.н., проф. кафедры химии, e-mail: vitalang2@mail.ru

Козлов В.А. - д.м.н., проф., академик РАМН, директор, e-mail: iscreen2001@mail.ru

Панин Л.Е. - д.м.н., проф., академик РАМН, директор, e-mail: ibch@soramn.ru

Недавно нами было описано получение принципиально иной мылкой амфифильной высокополимерной РНК из сухих пекарских дрожжей [14]. Предложенная технология основана на де-тергентном лизисе клеток дрожжей при повышенной температуре с помощью олеиновой кислоты. Препарат был назван Виталангом-2.

Основные характеристики препарата:

- растворимость в воде - удовлетворительная (в отличие от гидрофильного Полирибоната, растворяющегося в воде в течение нескольких секунд, препарат Виталанг-2 растворяется в воде только через 30-60 мин при периодическом перемешивании), водный раствор мылкий, нераство-ренные крупинки скользкие;

- весовая экстинкция, D260, 10-18,5 ед./мг; содержание КРФ < 10 %; прирост КРФ за 1 сут при 25 оС < 0,5 %; спектральные отношения: D230/D260 -0,25-0,55; D25JD2№ - 0,86-0,94; D^/D^ - 0,400,65.

Примесь прочно связанной олеиновой кислоты в препарате Виталанг-2 приводит к ухудшению его растворимости в воде. Однако можно было ожидать, что по этой же причине препарат будет обладать повышенной способностью проникать через биологические мембраны и поэтому проявлять более высокую биологическую активность.

Цель исследования - изучить в эксперименте иммуноактивные свойства высокополимерной РНК, выделенной из пекарских дрожжей с помощью олеиновой кислоты.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ

Исследования проведены на здоровых половозрелых мышах-гибридах (CBA х C57BL/6) F1 (CBF1) обоего пола в возрасте 10-12 недель и массой тела 22-23 г. Животные были получены из экспериментально-биологической клиники лабораторных животных СО РАМН (Новосибирск). До эксперимента и во время его проведения животных содержали в виварии в стандартных пластиковых клетках с мелкой древесной стружкой (не более 10 особей) на стандартном рационе. Исследования проводили в соответствии с правилами, принятыми Европейской конвенцией по защите животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей [3] в одно и то же время суток (утром).

В работе были использованы: среда RPMI-1640 и раствор Хенкса (НПО «Вектор», Россия); физиологический раствор, содержащий фосфатный буфер с pH 7,4; эмбриональная сыворотка телят («BioClot GmbH», Германия); Hepes, 2-меркаптоэтанол, L-глутамин и конканавалин

А (ConA) («Sigma-Aldrich», США); гентами-цин (АО «Самсон», Россия); 3Н-тимидин («Изотоп», Россия); комплемент морской свинки (НПО «Биомед», Россия); парафин и воск. Для культивирования клеток селезенки использовали 96-лу-ночные круглодонные планшеты для культивирования Linbro («Flow Laboratories», США).

Лиофилизованный препарат Виталанг-2 получали, как описано в работе [10], стерилизовали по методу [11], растворяли в воде для инъекций, встряхивая суспензию 30-60 мин до полного растворения РНК, и вводили животным опытных групп в разных дозах в объеме 0,5 мл внутрибрю-шинно ежедневно в течение 5 дней. Контрольным животным в таком же объеме и режиме вводили растворитель препарата (воду). Каждый эксперимент повторяли 2-3 раза, число наблюдений для группы контроля и опыта составляло не менее 10 животных.

Оценку иммуноактивных свойств Виталан-га-2 проводили в соответствии с методическими материалами [7] и методическими рекомендациями [8]. Органы, ткани и клетки выделяли по стандартным методикам [1].

Выделение клеток. Мышей забивали дислокацией позвоночника и помещали на стерильный анатомический столик. Селезенку и тимус извлекали, помещали во флакончики со средой, расстригали ножницами, многократно пропускали через шприц с иглой, фильтровали через металлическую сеточку и 2-3 раза отмывали центрифугированием при 1000 g в течение 10 мин со сменой среды.

Определение миелоактивных свойств было основано на определении количества ядросодер-жащих клеток в периферической крови через 24 ч после последнего введения препарата. Результаты выражали в абсолютных значениях (количество лейкоцитов в 1 мл крови).

Гуморальный иммунный ответ на тимус-зависимый антиген - эритроциты барана (ЭБ) (число IgM- и IgG-антителообразующих клеток (АОК)) в селезенке мышей оценивали на пике иммунного ответа, свойственного данному генотипу после внутривенного введения 2 х 108 ЭБ [6]. Все процедуры с клетками проводили на льду. Для определения числа IgM-АОК при первичном гуморальном иммунном ответе инкубационную смесь, состоящую из клеток селезенки, ЭБ и комплемента, помещали в стеклянные камеры и инкубировали 1,5 ч при 37 оС. Количество IgM-АОК в селезенке мышей оценивали на 4-е сутки после иммунизации по количеству зон локального гемолиза в полужидкой среде модифицированным методом [6]. Результаты выражали в абсолютном количестве IgM-АОК в селезенке.

Для определения числа IgG-АОК (при первичном и вторичном гуморальном иммунном ответе) в инкубационную смесь добавляли антисыворотку против IgG мыши и инкубировали в термостате 2 ч при 38 оС. Зоны гемолиза подсчитывали под бинокулярной лупой (увеличение х 42). Количество IgG-АОК в селезенке (первичный иммунный ответ) определяли на 9-е сутки после иммунизации. Через 30 дней проводили вторичную иммунизацию 2 % ЭБ внутривенно, на пике иммунного ответа (на 5-е сутки после вторичной иммунизации) методом локального гемолиза в селезенке определяли количество IgG-АОК (вторичный иммунный ответ) [6]. Клетки селезенки инкубировали 2 ч при 39 оС в камерах с ЭБ, комплементом морской свинки и кроличьей антисывороткой против мышиного IgG (разведение в 2000 раз). Зоны гемолиза подсчитывали под бинокулярной лупой (увеличение х 42). Результаты выражали в абсолютном количестве IgG-АОК в селезенке.

Клеточный иммунный ответ на тимус-зависимый антиген оценивали по степени выраженности реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ): измеряли величину отека лапки после введения разрешающей дозы ЭБ сенсибилизированным животным; сенсибилизирующая доза - 2,5 х 107 ЭБ/мышь внутрибрюшинно, разрешающая доза - 5 х 108 ЭБ/мышь под подошвенный апоневроз задней лапки, контроль - контра-латеральная лапка, в которую вводили среду в том же объеме. Для оценки влияния препарата на фазу сенсибилизации ГЗТ в день последнего введения Виталанга-2 мышей иммунизировали внутрибрю-шинным введением 0,25 % ЭБ в объеме 0,5 мл, на 4-е сутки после сенсибилизации вводили разрешающую дозу антигена под подошвенный апоневроз правой задней лапы (50 % ЭБ в объеме 50 мкл). В контралатеральную лапу вводили растворитель в том же объеме. Для оценки влияния препарата на эффекторную фазу Виталанг-2 вводили в день проведения сенсибилизации и далее в течение четырех дней. Контрольным животным в таком же объеме и режиме вводили растворитель препарата (воду). Реакцию ГЗТ оценивали по методике локальной ГЗТ [15]. Учет реакции производили через 24 ч после введения разрешающей дозы ЭБ, величину отека оценивали штангенциркулем. Результаты выражали в процентах.

Спонтанная и митоген-стимулированная пролиферация клеток селезенки в культуре in vitro под влиянием Виталанга-2. Клетки селезенки мышей культивировали в круглодонных планшетах для иммунологических реакций при 37 оС в атмосфере 5 % СО2 и 95 % воздуха. Абсолютное количество клеток, вносимых в лунку,

составляло 200 000. Клетки стимулировали ми-тогеном ConA. Концентрацию митогена подбирали предварительным титрованием и использовали в оптимальной дозе, что составило 2 мкг/мл СопА. Виталанг-2 в трех дозах вносили в лунки одновременно с митогеном. Пролиферативную активность клеток оценивали по включению Н3-тимидина в ДНК делящихся клеток. Метку вносили за 16 ч до конца культивирования по 1 мкКи в каждую лунку планшета. Для этого основной раствор Н3-тимидина доводили средой RPMI-1640 до концентрации 100 мкКи/мл и вводили по 10 мкл в каждую лунку планшета. По окончании инкубации клетки собирали на стеклян-но-волокнистые фильтры («Flow Laboratories») с помощью аппарата Harvester («Titertek», «Flow Laboratories»). Фильтры высушивали и помещали во флаконы для сцинтилляционного счета с толу-ольным сцинтиллятором (4 г дифенилоксазола, 0,1 г дифенил-оксазолилбензола на 1 л толуола). Их радиоактивность подсчитывали в жидкостном сцинтилляционном счетчике «Delta» (США). Результаты выражали в количестве импульсов в минуту включенного тимидина на 2 х 105 клеток, представлены средние данные по триплету.

Статистическую обработку данных по числу АОК, имеющему распределение, отличное от нормального, проводили по непараметрическому критерию Манна - Уитни [2]; в таблицах представлены средние арифметические значения (M), а также минимальные и максимальные (MinMax).

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Изучение иммунотропной активности фармакологических веществ включает комплекс стандартных методик, с помощью которых можно оценить эффект изучаемого вещества на иммунитет и сделать вывод о возможности его отнесения к группе иммунотропных средств. При этом идентифицируется то звено иммунитета, на которое в наибольшей степени действует изучаемое вещество. Обязательно оценивается влияние препарата на гуморальный иммунный ответ (путем определения числа АОК), на клеточный иммунный ответ (реакция ГЗТ), на пролиферативную активность Т- и В-лимфоцитов [7]. Главная цель испытаний биологически активных соединений на первых этапах исследования, в том числе определение их иммуноактивных свойств, - это выявление наиболее активных соединений и отсев неперспективных для фармакологии веществ (соединений, обладающих малой активностью или нежелательными побочными эффектами), что представляет, однако, большие сложности. По

мнению Б.С. Утешева и соавт. [13], наиболее целесообразно наряду с оценкой иммуноактивных свойств определять одновременно и миелоактив-ные свойства соединений, действие на иммунную систему в целом, а не на отдельные виды иммунологической реактивности. Такими показателями служат масса, число клеток и популяционный состав центральных и периферических органов иммунной системы. Однако, по данным О.П. Колесниковой [6], некоторые соединения, практически не влияя на массу тимуса и селезенки, максимально стимулируют ^М-антителообразование, а другие, существенно увеличивая массу тимуса и селезенки, практически не изменяют величину ^М-ответа.

На первом этапе исследования Виталанга-2 оценивали влияние курсового введения препарата на гемопоэз и иммунопоэз в целом: на количество ядросодержащих клеток в периферической крови, массу и количество клеток в периферических органах иммунитета. Курсовое введение препарата приводило к выраженному дозозависимому увеличению как массы тимуса, так и количества

клеток в органе (табл. 1). Максимальное увеличение массы, клеточности тимуса и селезенки выявлялось при дозе 100 мг/кг. Введение препарата приводило также к достоверному увеличению количества лейкоцитов в периферической крови. Обнаруженное достоверное и существенное увеличение количества лейкоцитов в крови и количества клеток в тимусе соответствует данным литературы о способности препаратов дрожжевой РНК стимулировать лейкопоэз и изменять миграцию Т-лимфоцитов, что приводит к повышению количества ядросодержащих клеток в периферической крови и клеток в тимусе [12].

Далее оценивали влияние курсового введения препарата Виталанг-2 на первичный (IgM и IgG) и вторичный (IgG) гуморальный иммунный ответ на тимус-зависимый антиген в селезенке in vivo. В табл. 2 представлены данные о влиянии препарата, введенного в индуктивную фазу первичного гуморального иммунного ответа, на количество IgM-АОК в селезенке мышей. Период гуморального иммунного ответа, в течение которого В-лимфоцит получает специфический анти-

Таблица 1

Влияние Виталанга-2 на массу и количество клеток в лимфоидных органах у мышей CBF1

Группа Масса тела, г Тимус Селезенка Количество лейкоцитов крови, 106/мл

Масса органа, мг Количество клеток, 106/мл Масса органа, мг Количество клеток, 106/мл

M Min-Max M Min-Max

Контроль 22,8 23,4 11-37 26,2 100,4 76-116 100 7,5

Виталанг-2:

10 мг/кг 23,2 32,0* 24-45 34,7* 126,0 79-203 109 8,1

50 мг/кг 23,2 38.8* 36-43 49,8* 128,6 109-140 149* 9,0

100 мг/кг 22,7 43,6* 36-54 57,4* 134,0 111-170 155* 11,2

200 мг/кг 21,9 40,6* 35-50 62,9* 109,2 99-125 133 15,1*

Число IgM АОК Число IgG АОК (первичный Число IgG АОК (вторичный

Группа на селезенку ответ) на селезенку ответ) на селезенку

M Min-Max M Min-Max M Min-Max

Контроль 13703 2191-26494 1924 1359-2520 863535 732298-1103097

Виталанг-2:

0,5 мг/кг 1471 668-3572 813651 446167-1187614

10 мг/кг 14134 9788-19023

50 мг/кг 35723* 21033-56810 1237 814-1768 903383 678497-1133922

100 мг/кг 28989* 14050-51585 1731 622-4661 1038565* 795253-1337136

200 мг/кг 29762* 23480-35898 1934 671-4312 927254 785841-1173393

Примечание. Здесь и в табл. 2-4 звездочкой обозначены статистически значимые отличия от величины соответствующего показателя в контроле (р < 0,05).

Таблица 2

Влияние Виталанга-2 на первичный (IgMАОК) гуморальный иммунный ответ на Т-зависимый антиген, на количество IgG-АОК при первичном и вторичном гуморальном иммунном ответе у мышей CBFl

генный сигнал и ряд дополнительных сигналов от клеток-помощников, называют индуктивной фазой иммунного ответа. Ее продолжительность составляет 2-3 дня. Введение препарата мышам в индуктивную фазу первичного гуморального иммунного ответа (введение антигена после курсового внутрижелудочного введения препарата) достоверно увеличивало в селезенке количество АОК, синтезирующих ^М-антитела (см. табл. 2), и, в то же время, не влияло на количество IgG-АОК в селезенке мышей при первичном иммунном ответе (см. табл. 2). Препарат, введенный в индуктивную фазу иммунного ответа (перед первичной иммунизацией) стимулировал вторичный (анамнестический) гуморальный иммунный ответ только в дозе 100 мг/кг.

Известно, что препараты дрожжевой РНК обладают активностью поликлональных стимуляторов, регулируя процессы как миграции Т-лимфоцитов, так и их кооперации с В-лимфоцитами, а также увеличивают функциональную активность макрофагов [12]. Возможно, стимуляция гуморального иммунного ответа (первичного и вторичного) на Т-зависимый антиген под действием препарата Виталанг-2 связана с усилением и миграции, и кооперации Т- и В-лимфоцитов. Различные эффекты препарата на первичный ^М- и IgG- и вторичный IgG-гуморальный иммунный ответ могут быть связаны с тем, что он изменяет генерирование эффективного гуморального иммунного ответа, основное содержание которого составляют процессы продвижения В-клеток по циклу, вступления в митоз, переключения классов иммуноглобулинов, последующей дифференцировки в плазматические клетки и формирование В-клеток памяти, требующего множества сигналов, в частности, наличия молекул цитокинов для инициации и переключения классов иммуноглобулинов. Различные этапы активации и последующего развития В-лимфоцитов находятся под контролем целого комплекса цитокинов. Известно, что развитие

Таблица 3

Влияние Виталанга-2 на клеточный иммунный ответ (ГЗТ) у мышей CBF1

Группа Фаза сенсибилизации, % Эффектор-ная фаза, % Min-Max

Контроль 34,4 44,3 39,4-50,0

Виталанг-2:

10 мг/кг 31,8 37,8* 36,4-39,4

50 мг/кг 37,7 38,2* 36,6-40,6

100 мг/кг 25,2* 29,8* 26,9-32,3

200 мг/кг 23,1 26,7* 26,0-27,6

Примечание. Величину отека лапки оценивали штангенциркулем (мм), результаты представлены в % относительно контрольной - контралатеральной лапки, в которую вводили воду в том же объеме.

иммунного ответа не заканчивается синтезом антител, а вызывает и формирование иммунной памяти. Но вопросы роли клеток памяти и закономерностей их регуляции, а также взаимоотношений первичного и вторичного гуморального иммунного ответа на уровне целостного организма еще далеки от разрешения.

Оценку влияния курсового введения препарата Виталанг-2 на клеточные реакции иммунной системы in vivo оценивали по выраженности индуктивной/продуктивной фазы реакции ГЗТ, отражающей функциональную активность Т-хелперных клеток типа 1 и макрофагального звена при ответе на Т-зависимый антиген. Препарат оказывает иммунодепрессивное действие на выраженность клеточного иммунного ответа (дозозависимое подавление эффекторной фазы реакции ГЗТ и выраженное подавление фазы сенсибилизации в дозе 100 и 200 мг/кг) (табл. 3).

По традиционным представлениям иммуно-активные соединения разделяются на иммуностимуляторы и иммуносупрессоры. Однако современные знания о патогенезе многих заболеваний, связанных с нарушением межклональ-

Таблица 4

Влияние Виталанга-2 на спонтанную и митоген-стимулированную пролиферацию клеток селезенки мышей CBF1 в культуре in vitro 5

Пролиферация, имп./мин Доза препарата, мкг/мл

Опыт 1 Опыт 2

0 2 20 200 0 2 20 200

Спонтанная 935 850 889 1435* 751 766 687 1754*

ConA 49866 58475 46892 40016 58611 64931 57024 42063

Примечание. Пролиферативную активность клеток оценивали по включению Н3-тимидина в ДНК делящихся клеток; результаты выражали в импульсах в минуту включенного Н3-тимидина на 2 х 105 клеток, представлены средние данные по триплету.

ных взаимоотношений за счет расстройства ТЫ/г1Ъ2-регуляторных влияний и баланса соответствующих цитокинов, выдвигают требования к поиску новых иммуноактивных препаратов. В связи с этим представляют интерес препараты, проявляющие при первичном скрининге in vivo на интактных животных разнонаправленное действие на интегральные показатели - антитело-образование и реакцию ГЗТ, оказывающие влияние либо только на гуморальный, либо только на клеточный иммунный ответ. Оценивая полученные данные, можно отметить, что Виталанг-2 оказывает разнонаправленный эффект на гуморальный и клеточный иммунный ответ: стимулирует антителообразование (ТЪ2-ответ) и подавляет клеточные реакции иммунитета (Thl-ответ).

Оценку ростостимулирующей активности препарата Виталанг-2 проводили в культуре in vitro спонтанно пролиферирующих и стимулированных Т-клеточным митогеном спленоцитов ин-тактных мышей, данные двух опытов представлены в табл. 4. Как видно из таблицы, начиная с дозы 200 мг/кг Виталанг-2 стимулирует спонтанную пролиферацию клеток селезенки, что согласуется с литературными данными о свойствах препаратов дрожжевой РНК как поликлональных стимуляторов.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Оценивая полученные результаты, следует отметить, что способность препарата Виталанг-2 стимулировать спонтанную активность клеток селезенки в культуре in vitro, стимулировать лейкопоэз и гуморальный иммунный ответ на Т-зависимый антиген в целом согласуется с литературными данными об иммунологических свойствах препаратов дрожжевой РНК. Выраженные иммуноактивные свойства Виталанга-2 могут быть использованы для повышения неспецифической резистентности человека и животных к инфекционным заболеваниям.

Уникальной представляется способность Ви-таланга-2 оказывать оппозитное влияние на интегральные параметры иммунного ответа: стимулировать антителообразование и ингибировать клеточный иммунитет. В связи с этим перспективно проведение испытаний данного препарата для лечения заболеваний с реакциями ГЗТ в патогенетическом процессе (туберкулез, проказа, шистосомоз, саркоидоз и болезнь Крона). Особенно актуально лечение туберкулеза, который в последние годы в России приобрел масштабы эпидемии. Положительный результат предсказать нетрудно, поскольку туберкулез успешно лечится препаратами с добавлением Полирибоната.

Работа выполнена при финансовой поддержке Министерства образования и науки Российской Федерации (Государственный контракт от 11.02.2011 № 16.512.11.2018).

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Гольдберг Е.Д., Дыгай А.М., Шахов В.П. Методы культуры ткани в гематологии. Томск: Изд-во Томского ун-та, 1992. 272 с.

2. Гублер Е.В. Вычислительные методы анализа и распознавания патологических процессов. Л., 1978. 68-91.

3. Европейская конвенция по защите позвоночных животных, используемых в экспериментальных и других научных целях. Страсбург, 1986.

4. Земское В.М., Лидак М.Ю., Земское A.M., Микстайс У.Я. Низкомолекулярная РНК: получение, гидролиз и применение в медицине. Рига: Зи-натне, 1985. 191 с.

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

5. Кнорроз М.Ю., Попова О.М., Давыдова А.А. и др. Сравнительное изучение противовирусной активности природных двуспиральных РНК при экспериментальном клещевом энцефалите // Вопр. вирусол. 1985. 30. (6). 697-700.

6. Колесникова О.П. РТПХ-индуцированные расстройства иммунитета как экспериментальные модели для поиска новых биологически активных соединений: автореф. дис. ... докт. мед. наук. Новосибирск, 2000.

7. Методические материалы по экспериментальному (фармакологическому) и клиническому испытанию иммуномодулирующего действия фармакологических средств. М., 1984.

8. Методические рекомендации по оценке им-мунотоксических свойств фармакологических средств. М., 1992.

9. Пат. 2045270 РФ. Специфический стимулятор биосинтеза белка в кроветворных и иммунокомпе-тентных органах / Л.Е. Панин, А.В. Харьковский; опубл. 10.10.95.

10. Пат. 2392329 РФ. Способ получения высокополимерной РНК из дрожжей / Т.В. Ямковая, Е.В. Кузовкова, Ю.П. Железнова и др.; опубл. 20.06.2010.

11. Пат. 2397988 РФ. Способ терминальной стерилизации высокополимерной дрожжевой РНК / Т.В. Ямковая, Е.В. Кузовкова, Ю.П. Железнова и др.; опубл. 27.08.2010.

12. Соколов В.Д., Андреева Н.Л., Соколов А.В. Иммуностимуляторы в ветеринарии // Ветеринария. 1992. (7-8). 49-50.

13. Утешев Б.С., Арзамасцев Е.В. Об оценке иммунотоксичности при доклиническом изучении биологически активных соединений // Эксперим. клинич. фармакол. 1996. 59. (3). 3-8.

14. Ямковая Т.В., Ямковой В.И., Панин Л.Е. Выделение и анализ биологической активности высокополимерной РНК из пекарских дрожжей // Бюл. СО РАМН. 2012. (6). 60-68.

15. Yoshikai Y., Miake S., Matsumoto T. et al. Effect of stimulation and blockade of mononuclear phagocyte system on the delayed footpad reaction to SRBC in mice // Immunology. 1979. 8. 577-583.

IMMUNOTROPIC ACTIVITY OF SOAPY AMPHIPHILIC HIGH-POLYMER RNA FROM BAKER'S YEAST

Tatyana Vitalievna YAMKOVAYA1, Olga Petrovna KOLESNIKOVA2, Vitaliy Ivanovich YAMKOVOY3, Vladimir Aleksandrovich KOZLOV2, Lev Evgen'yevich PANIN3

1 LLC «Vitalang»

630055, Novosibirsk, Rubinovaya str., 4-128

2 Institute for Clinical Immunology of SB RAMS 630099, Novosibirsk, Yadrintsevskaya str.,14

3 Institute for Biochemistry of SB RAMS 630117, Novosibirsk, Timakov str., 2

The immunotropic activity of the amphiphilic high-polymer RNA isolated from baker's yeast with oleic acid has been studied. It was discovered that the drug dose-dependently increases the mass of lymphoid organs (thymus and spleen) in mice, as well increases the average number of cells in these organs. The drug induces leukocyte reaction, dose-dependently stimulates the primary (IgM) and secondary (IgG) antibody response. However, it has an immunosuppressive effect on the expression of cell-mediated immune response (dose-dependent suppression of the effector phase of delayed-type hypersensitivity reactions and pronounced suppression phase of sensitization in the high dose).

Key words: yeast, oleic acid, high-polymeric RNA, immunotropic activity of RNA.

Yamkovaya T.V. - candidate of biological sciences, director, e-mail: yam_tv@mail.ru

Kolesnikova O.P. - doctor of medical sciences, head of the laboratory of experimental immunotherapy,

e-mail: iscreen2001@mail.ru

Yamkovoy V.I. - doctor of biological sciences, professor of the chair for chemistry, e-mail: vitalang2@mail.ru Kozlov V.A. - academician of the RAMS, doctor of medical sciences, professor, director, e-mail: iscreen2001@mail.ru Panin L.E. - doctor of medical sciences, professor, academician of the RAMS, director, e-mail: ibch@soramn.ru

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.