Научная статья на тему 'Иммунотоксические свойства 5%-ной суспензии кокцидона'

Иммунотоксические свойства 5%-ной суспензии кокцидона Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

CC BY
206
91
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.
Ключевые слова
ИММУНОТОКСИЧНОСТЬ / ИММУНИТЕТ / МЫШИ / РЕАКЦИЯ / КОКЦИДОН / ГИПЕРЧУВСТ-ВИТЕЛЬНОСТЬ / ГЕМАГГЛЮТИНАЦИЯ / IMMUNOTOXICITY / KOKCIDON / IMMUNITY / HYPERSENSITIVITY / GEMAGGLYUTINATION / MICE / REACTION

Аннотация научной статьи по фундаментальной медицине, автор научной работы — Поселов Д. С., Арисов М. В.

Изучены иммунотоксические свойства 5%-ной суспензии кокцидона в двух тестах. По результатам реакции гиперчувствительности замедленного типа индекс реакции у животных, получавших препарат в терапевтической дозе 0,4 мл/кг, составил 11,46, у животных, получавших 10-кратную дозу, 11,31, а у животных контрольной группы 14,26, что позволяет сделать вывод об отсутствии угнетающего действия 5%-ной суспензии кокцидона на Т-клеточное звено иммунной системы. Накожное однократное применение препарата в терапевтической и десятикратно увеличенной дозах не вызывает изменения интенсивности антителопродукции против тимусзависимого антигена. Индекс действия препарата в обеих дозах составил 0,98. Реакция гемагглютинации не выявила отрицательного влияния препарата на гуморальный иммунный ответ.

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.
iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

Текст научной работы на тему «Иммунотоксические свойства 5%-ной суспензии кокцидона»

Фармакология, токсикология

УДК 619:615.015.4

ИММУНОТОКСИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА 5%-ной СУСПЕНЗИИ

КОКЦИДОНА

Д.С. ПОСЕЛОВ аспирант М.В. АРИСОВ

Научный руководитель - доктор ветеринарных наук

Всероссийский научно-исследовательский институт гельминтологии им. К.И. Скрябина, 117218, г. Москва, уд. Б. Черемушкинская, д.28, e-mail: [email protected]

Изучены иммунотоксические свойства 5%-ной суспензии кокцидона в двух тестах. По результатам реакции гиперчувствительности замедленного типа индекс реакции у животных, получавших препарат в терапевтической дозе 0,4 мл/кг, составил 11,46, у животных, получавших 10-кратную дозу, - 11,31, а у животных контрольной группы - 14,26, что позволяет сделать вывод об отсутствии угнетающего действия 5%-ной суспензии кокцидона на Т-клеточное звено иммунной системы. Накожное однократное применение препарата в терапевтической и десятикратно увеличенной дозах не вызывает изменения интенсивности антителопродукции против тимусзависимого антигена. Индекс действия препарата в обеих дозах составил 0,98. Реакция гемагглютинации не выявила отрицательного влияния препарата на гуморальный иммунный ответ.

Ключевые слова: иммунотоксичность, кокцидон, иммунитет, гиперчувст-вительность, гемагглютинация, мыши, реакция.

Иммунотоксические свойства препарата «Кокцидон суспензия 5 %» оценивали на основе способности организма экспериментальных животных к индукции реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) и выработки антител в ответ на введение тимусзависимого антигена.

Клеточный иммунитет у экспериментальных животных при введении испытуемого препарата оценивали при воспроизведении реакции гиперчувствительности замедленного типа по методу Kitamura (1980). Воспроизведение реакции ГЗТ дает представление о способности лекарственных препаратов влиять на продукцию сенсибилизированными лимфоцитами медиаторов разнонаправленного действия, вовлекающих клетки системы мононуклерных фагоцитов в иммунный ответ. Эффекты ГЗТ образуются при контакте сенсибилизированных лимфоцитов с соответствующим антигеном в присутствии макрофагов. Продукцию медиаторов клеточного иммунного ответа эф-фекторными клетками ГЗТ стимулировали эритроцитами барана.

При оценке действия лекарственного препарата на иммунную систему информативным показателем является интенсивность продукции антител против тимусзависимого антигена, которая дает представление о функциональной активности трех клеточных систем - Т- и В-лимфоцитов, макрофагов и их совместном воздействии.

Цель нашей работы - изучить иммунотоксические свойства 5%-ной суспензии кокцидона.

107

Материалы и методы

Титр антител определяли в реакции гемагглютинации (РГА), основанной на специфическом склеивании антиген-несущих частиц эритроцитов барана (ЭБ) специфическими антителами, которые выработаны при сенсибилизации и содержащимися в сыворотке крови [1-5]. Кровь для получения ЭБ брали путём венопункции в стеклянную банку. Отбивали фибрин путем помешивания до образования пены в течение 15 мин, фильтровали через капроновый фильтр и затем добавляли консервант Олсфера, состоящий из глюкозы - 2,05 г, цитрата натрия - 0,8 г, хлорида натрия - 0,42 г и дистиллированной воды -100 мл в соотношении 1 : 1. Полученную кровь хранили в холодильнике.

Отмывание ЭБ проводили следующим образом. В две центрифужные пробирки добавляли по 3 мл крови и до 10 мл физиологического раствора (0,83 %), затем уравновешивали на весах. Центрифугировали при 1500 об. в течение 10-15 мин. Далее верхнюю часть супернатанта отсасывали пастеровской пипеткой и вновь добавляли физиологический раствор, взбалтывали и помещали в центрифугу. Процедуру повторяли 3-4 раза до образования прозрачного супернатанта, который также отсасывали.

Для получения 3%-ного раствора ЭБ в мерный стакан вместимостью 100 мл добавляли 40 мл 0,83%-ного физиологического раствора, затем добавляли 3 мл отмытых ЭБ и доводили общий объём до 100 мл.

Для постановки реакции ГЗТ и РГА было сформировано по три группы мышей-самцов линии CBA х C57 BL/6 по 10 голов массой тела 18 г. Животным первой группы вводили препарат в дозе 0,4 мл/кг перорально, однократно (терапевтическая доза). Животным второй группы вводили дозу 4 мл/кг перорально, однократно (десятикратная терапевтическая доза). Животные третьей группы препарат не получали и служили контролем.

В реакции ГЗТ всех животных подопытных групп иммунинизировали интраперитониально оптимальной дозой тест-антигена - тимусзависимый антиген - нативные ЭБ. Антиген вводили в объеме 0,5 мл 3%-ной суспензии ЭБ в стерильном физиологическом растворе. Для выявления сенсибилизации мышей на 5-е сутки в подушечку правой задней лапы вводили разрешающую дозу антигена в объеме 50 мкл 15%-ной суспензии ЭБ в физиологическом растворе (опыт) В контрлатеральную лапу вводили физиологический раствор в том же объеме. О степени выраженности воспалительной реакции на месте инъекции антигена судили по приросту массы лап через 24 ч.

О клеточной реакции формирования ГЗТ судили по величине сдвига индекса реакции (ИР), выраженного в процентах. Индекс реакции вычисляли для каждой мыши по формуле:

ИР = Мо - Мк / Мк х100,

где Мо - масса опытной лапы; Мк - масса контрольной лапы.

Контролем служили неиммунизированные мыши, получившие только разрешающую дозу антигена.

В РГА интенсивность продукции антител против тест-антигена после введения испытуемого препарата изучали в опытах на мышах, иммунизированных интраперитонеально оптимальной дозой антигена. В качестве антигена использовали нативные ЭБ. Антиген вводили однократно внутрибрюшинно в объеме 0,5 мл 3%-ной суспензии ЭБ на стерильном физиологическом растворе. Испытуемый препарат вводили после иммунизации, т. е. в индуктивную фазу иммунного ответа. Титр антител определяли на пике первичного иммунного ответа (7-е сутки после иммунизации) в микроварианте прямой РГА (Sever, 1962). Титр антител выражали в виде log V числа. Для сравнения выраженности иммунного ответа в опыте и контроле определяли индекс действия препарата (ИД), который представляет собой отношение титра антител в опыте к величине титра антител в контроле. Статистическую обработку проводили с помощью программы «STUDENT 200». Достоверность различий определяли по критерию Стьюдента.

108

Результаты и обсуждение

Результаты тестирования способности организма экспериментальных животных к индукции реакции ГЗТ приведены в таблицах 1-3.

1. Реакция ГЗТ ( терапевтическая доза 0,4 мл/кг перорально, однократно)

№ животного Реакция ГЗТ

масса правой ла- масса левой ла- ИР, %

пы, мг (опыт) пы, мг(контроль)

1 143,0 131,0 9,16

2 145,0 131,0 10,68

3 149,0 131,0 13,74

4 150,0 128,0 17,18

5 132,0 127,0 3,93*

6 148,0 137,0 8,03

7 159,0 141,0 12,74

8 143,0 129,0 10,85

9 140,0 128,0 9,37

10 162,0 136,0 19,11*

В среднем 11,46

Примечание. * - показатель выведен из вариационного ряда при статистической

обработке.

2. Реакция ГЗТ (десятикратная терапевтическая доза 4 мл/кг перорально, од_______________________________нократно)_______________________________

№ животного Реакция ГЗТ

масса правой лапы, мг (опыт) масса левой лапы, мг(контроль) ИР, %

1 169,0 140,0 20,71*

2 147,0 137,0 7,29

3 141,0 124,0 13,71

4 152,0 138,0 10,14

5 162,0 142,0 14,08

6 155,0 125,0 24,0*

7 153,0 138,0 10,86

8 148,0 132,0 12,12

9 146,0 132,0 10,60

10 153,0 137,0 11,68

В среднем 11,31

3. Реакция ГЗТ у контрольных животных

№ животного Реакция ГЗТ

масса правой лапы, мг (опыт) масса левой лапы, мг(контроль) ИР, %

1 149,0 132,0 12,87

2 154,0 135,0 14,07

3 158,0 147,0 7,48

4 144,0 125,0 15,2

5 165,0 144,0 14,58

6 160,0 132,0 21,21*

7 152,0 130,0 16,92

8 164,0 145,0 13,10

9 160,0 137,0 16,78

10 155,0 132,0 17,42

В среднем 14,26

Пероральное однократное введение испытуемого препарата в терапевтической и десятикратно увеличенной терапевтической дозе не вызывало ста-

109

тистически достоверного сдвига ИР ГЗТ. Значения ИР не отличались от показателя контроля. Полученный результат указывает на индифферентность клеточного иммунитета к действию испытуемого препарата.

Результаты тестирования способности организма экспериментальных животных к антителопродукции против тимусзависимого антигена при введении испытуемого препарата приведены в таблицах 4-6.

4. РГА у белых мышей при введении кокцидона в терапевтической дозе 0,4

мл/кг перорально, однократно

№ животного Результаты РГА

титр антител log / титра антител

1 1/32 5,00

2 1/32 5,00

3 1/32 5,00

4 1/32 5,00

5 1/32 5,00

6 1/32 5,00

7 1/64 6,00

8 1/32 5,00

9 1/32 5,00

10 1/32 5,00

В среднем 5,11

5. РГА у белых мышей при введении кокцидона в десятикратной терапевти-______________ческой дозе 4 мл/кг перорально, однократно____________

№ животного Результаты РГА

титр антител log / титра антител

1 1/32 5,00

2 1/64 6,00

3 1/32 5,00

4 1/64 6,00

5 1/16 4,00

6 1/64 6,00

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

7 1/16 4,00

8 1/32 5,00

9 1/32 5,00

10 1/32 5,00

В среднем 5,10

6. РГА у белых мышей при введении кокцидона в десятикратной терапевти-

ческой дозе 4 мл/кг перорально, однократно

№ животного Результаты РГА

титр антител log / титра антител

1 1/32 5,00

2 1/64 6,00

3 1/32 5,00

4 1/32 5,00

5 1/32 5,00

6 1/32 5,00

7 1/64 6,00

8 1/32 5,00

9 1/32 5,00

10 1/32 5,00

В среднем 5,20

Полученные результаты свидетельствуют о том, что пероральное одно-

кратное применение испытуемого препарата в терапевтической и десяти-110

кратно увеличенной дозе не вызывает изменений интенсивности антителопродукции против тимусзависимого антигена. Титр гемагглютининов в сыворотке крови животных, получивших различные дозы кокцидона, не отличался от такового в контроле. На толерантность гуморального иммунного ответа к действию кокцидона в испытанных дозах указывают также индексы действия препарата, равные 0,98 (табл. 7).

7. Интенсивность антителопродукции против тимусзависимого антигена у мышей при пероральном введении 5%-ной суспензии кокцидона____

Группа животных Доза препарата, мл/кг Кратность введения log V титра антител ИД

I 0,4 Однократно 5,11±0,30 0,98

II 4 Однократно 5,10±0,52 0,98

Контроль - 5,20±0,30 -

Таким образом, по данным реакции ГЗТ пероральное однократное введение 5%-ной суспензии кокцидона в терапевтической и десятикратно увеличенной дозах не оказывает негативного действия на клеточный иммунитет. По данным РГА пероральное однократное введение препарата в терапевтической и десятикратно увеличенной дозах не оказывает негативного действия на гуморальный иммунный ответ. Препарат в испытанных дозах не обладает иммунотоксическими свойствами.

Литература

1. Daugalieva E.H. и dr. Metodicheskie rekomendacii po izucheniju vlijanija antgel’mintikov na immunnii status zhivotnih pri gel’mintozah. - М., 1989. - 12 s.

2. Petrov R. V. Immunologija. - М.: Medicina, 1987. - 387 s.

3. Haitov R.M. и dr. Metodicheskie ukazanija po izucheniju immunotropnoi aktivnosti farmakologicheskih veschestv. - М., 1998. - 10 s.

4. Kitamura K. A footpad weight assay method to evaluate delayed-type hypersensitivity in the mouse // Immunol. Methods. - 1980. - V. 39, № 3. - P. 277283.

5. Sever J.L. Application of a micro-technique to viral serological investigations // J. Immunol. - 1962. - V. 88, № 1. - P. 398-413.

Immunotoxic properties of 5 % suspension of Kokcidon

D.S. Poselov postgraduate M.V. Arisov

doctor of veterinary sciences

All-Russian Scientific Research Institute of Helmintology named after K.I. Skrya-bin, 117218, Moscow, B. Cheremushkinskaya st., 28, e-mail: [email protected]

Immunotoxic properties of 5 % suspension of kokcidon in two tests are studied. By results of reaction of hypersensitivity of the slowed-down type the reaction index at the animals receiving a preparation in a therapeutic dose of 0,4 ml/kg, has made 11,46, at the animals receiving a 10 times increased dose - 11,31, and at animals of control group - 14,26 that allows to draw a conclusion on lack of oppressing effect of 5 % suspension kokcidon on the T-cellular link of immune system. A single skin application of tested drug in a therapeutic and tenfold increased therapeutic doses doesn't cause changes of intensity of antibody production against a thymus-dependent antigen. The index of action of a preparation in both doses made 0,98. Reaction of gemagglyutination didn't reveal negative influence of a preparation on the humoral immune answer.

Keywords: immunotoxicity, kokcidon, immunity, hypersensitivity, gemag-glyutination, mice, reaction.

111

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.