CC BY
151
УДК 578.001.53:543.45
ИММУНОСЕНСОРНАЯ ТЕСТ-СИСТЕМА ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К ВИРУСУ ЭПШТЕЙНА-БАРР
1Институт микробиологии и вирусологии им. Д. К. Заболотного НАН Украины, Киев
2Институт эпидемиологии и инфекционных болезней им. Л.В. Громашевского АМН Украины, Киев
Е-mail: nesterova_imv@rambler.ru
Получено 30.08.2010
Современный уровень развития молекулярной биологии в сочетании с достижениями физики и химии определили новое направление в диагностике заболеваний — использование разработанных с помощью химических и оптических методов иммуносенсорных тест-систем. В частности, обращают на себя внимание биосенсоры на основе эффекта поверхностного плазмонного резонанса, которые принадлежат к классу оптических.
В работе представлены данные по экспрессному выявлению антител к вирусу Эпштейна-Барр в сыворотках крови больных с использованием оптоэлектронного прибора «Плазмон 6». Разработаны экспериментальные серии иммунодатчиков для экспрессной диагностики и отработаны базовые показатели их диагностического качества. Созданы отрицательная и положительная панели сывороток, которые использовали для определения диагностической специфичности и чувствительности разработанной им-муносенсорной тест-системы. Диагностическая специфичность разработанной тест-системы составила 100%, диагностическая чувствительность — 95%, воспроизводимость результатов — 99%. Исследованы условия и возможные сроки хранения иммунодатчиков. Определен срок их хранения, который составляет 6 месяцев, что свидетельствует о стабильности разработанных иммуносенсоров. Проведенные лабораторно-экспериментальные испытания образцов иммуносенсорной тест-системы показали, что она является достаточно эффективной и специфической для выявления антител к вирусу Эпштейна-Барр и может быть использована для диагностики заболеваний, обусловленных этим вирусом.
Ключевые слова: вирус Эпштейна-Барр, поверхностный плазмонный резонанс, иммуносенсорная тест-система.
Н. В. Нестерова1 С. Л. Рыбалко2 С. Д. Загородняя1 Г. В. Баранова1 А. В. Головань1
Биосенсоры на основе эффекта поверхностного плазмонного резонанса, которые принадлежат к классу оптических биосенсоров и построены на эффекте биоспецифического фишинга, позволяют регистрировать комплекс макромолекул с высокой концентрационной чувствительностью (до 10-12моль/л) [1]. Серийным производителем таких приборов является ВГАсоге (Швеция). В Украине ведущей организацией по разработке таких приборов является Институт физики полупроводников им. В. Е. Лашкарева НАН Украины.
Вирус Эпштейна-Барр (ВЭБ) относится к семейству Herpesviridae. Его роль в патологии человека весьма разнообразна как по клиническим признакам, так и по сложности протекания заболевания. Первичное инфицирование вирусом приводит к развитию у больного инфекционного мононуклеоза, далее вирус пожизненно сохраняется в В-лимфоцитах с возможностью его реактивации как под действием факторов внешней среды, так и
при снижении собственно иммунного статуса человека [2, 3]. Лабораторная диагностика этой вирусной инфекции ограничена применением импортных иммуноэнзимных тест-систем для выявления антител к ВЭБ и метода полимеразной цепной реакции — ПЦР [4].
Возможность применения биосенсоров для выявления специфических антител в сыворотках крови человека подтверждается многочисленными публикациями. Этот спектр исследований охватывает представителей разных семейств патогенных для человека вирусов [5-13].
Целью настоящей работы было создание биочипов на основе вирусных антигенов ВЭБ для диагностики специфических антител в сыворотках крови больных методом поверхностного плазмонного резонанса и проведение лабораторно-экспериментальных испытаний созданной иммуносенсорной тест-системы. Это позволит создать конкурентоспособную диагностическую тест-систему.
Материалы и методы
Вирус Эпштейна-Барр нарабатывали в культуре клеток В95-8, которая является его продуцентом. Вирус очищали по методу Уоллза-Крофорда [14]. Вирусный антиген получали по разработанной нами методике [15].
Культуру клеток В95-8 (В-лимфоциты обезьян мармазеток), культивировали в среде роста RPMI 1640 (Sigma, США), содержащей 10% эмбриональной сыворотки телят и антибиотики, при 37 °С в атмосфере 5% СО2.
В работе были использованы сыворотки крови больных с лимфопролиферативными заболеваниями и инфекционным мононуклеозом ВЭБ-этиологии, которые были предоставлены ООО «ДНК-лаборатория» и рядом клиник г. Киева. Сыворотки крови от здоровых доноров предоставлены Станцией переливания крови г. Киева.
В качестве стандартных контрольных панелей сывороток использовали созданные нами положительную и отрицательную панели, которые содержали (или не содержали) антитела к ВЭБ. Для тестирования сывороток с целью их отбора для панелей сывороток использовали иммуноэнзимную тест-систему EBV VCA IgG ELISA, IMMUNOLAB GmbH (Германия).
Приготовление биочипов. Чипы с напыленным золотом промывали дистиллированной водой и очищали смесью, которая содержала дистиллированную воду, 35% -ю перекись водорода и 37%-ю соляную кислоту в соотношении 5:1:1. Далее чипы трижды промывали дистиллированной водой, наносили раствор Dextran 17 000 (Sigma, США) (2 мг/мл) в 0,05 М цитратном буфере, рН 5,0-5,2, и выдерживали 5 ч при комнатной температуре (20-25 °С). Стекла промывали три раза 0,05 М цитратным буфером и наносили вирусный антиген в объеме 1 мл (2,5 мкг) таким образом, чтобы была покрыта вся поверхность чипа. Сорбция происходила при 4-8 °С в течение 18-24 ч, после чего чипы трижды промывали 0,05 М цитратным буфером и блокировали свободные места 1%-м раствором бычьего сывороточного альбумина (БСА) (Sigma, США) в 0,05 М цит-ратном буфере в течение 1 ч при комнатной температуре. Раствор БСА удаляли и биочипы тщательно высушивали на воздухе. Готовые биочипы хранили при температуре 4-8 °С в стерильных емкостях без доступа воздуха.
ППР-анализ. Исследование сывороток проводили с использованием процедуры теста в протоке. При конструировании диагнос-
тикума для практического применения необходимо создание биочипа с полностью созданным покрытием, на которое будет наноситься только анализируемая сыворотка. При создании лабораторных образцов имму-носенсорной тест-системы на стеклянных чипах с золотым напылением проводили иммобилизацию протеинов ВЭБ по методике, представленной выше. В результате время анализа по сравнению с предыдущими исследованиями значительно сократилось. Общее время проведения анализа составляет около 20 мин, что свидетельствует об экспрес-сности данного метода. Для анализа созданного внепроточного биочипа на первой стадии через анализируемую ячейку пропускали 100 мкл разведенной (1:40) негативной контрольной сыворотки на протяжении 10 мин со скоростью протока 10 мкл/мин. Далее систему промывали 150 мкл 0,05 М цитратного буфера и вносили в ячейку исследуемый образец (сыворотка в разведении 1:40). Взаимодействие антигена с сывороткой равно 10 мин при скорости насоса 10 мкл/мин. Далее систему отмывали 0,05 М цитратным буфером.
В работе был использован ППР-спектро-метр «ПЛАЗМОН 6», который разработан в Институте полупроводников НАН Украины. Источник возбуждения — GaAs лазер, X = 670 нм.
«ПЛАЗМОН 6» (рис. 1) — это контролируемый компьютером оптоэлектронный спектрометр, в котором используется явление поверхностного плазмонного резонанса (ППР) в оптической конфигурации Кречма-на. Золотая пленка толщиной 45 нм, которая формирует сенсорную поверхность, нанесена на стеклянную пластинку. В этой пленке поляризованный луч от полупроводникового лазерного диода (X = 650 нм) возбуждает колебание электронной плазмы (поверхностный плазмон). Необходимые условия для возбуждения плазмона создаются специальной призмой, которая может вращаться на контролируемый компьютером угол. Возбуждение плазмонных резонансных колебаний регистрируется прибором как резкое падение интенсивности отраженного от пленки лазерного излучения. Угловая зависимость этой интенсивности (ППР-кривая) является главной исходящей характеристикой прибора. Ее форма и угловая позиция резонансного минимума позволяют делать оценку показателей преломления и поглощения, а также толщины слоя исследуемого объекта. Преимуществом данного прибора является наличие двух оптических каналов, которые позволяют дифференцированное
Рис. 1. ППР-спектрометр «ПЛАЗМОН 6»
измерение, запись полной ППР кинетической зависимости, а также минимальное время одного измерения: 0,2 с (режим slope).
Изменение углового положения минимума в процессе эксперимента фиксировали с помощью программы Plasmon Serial. Полученные данные в дальнейшем обрабатывали в компьютерной программе Origin Pro 7.5 с построением графика, отображающего динамику изменения отклика во временном интервале.
Статистическую обработку проводили согласно стандартным подходам к вычислениям стандартной ошибки с использованием компьютерной программы Origin Pro 7.5.
Результаты и обсуждение
В предыдущих исследованиях нами был разработан лабораторный образец биосенсора для детекции антител в сыворотке крови человека на основе протеинов вируса Эпштейна-Барр, подобраны условия и последовательность проведения анализа [16]. На рис. 2 представлен типичный график исследования образца сыворотки крови в разработанной иммуносенсорной тест-системе.
Качество диагностических систем определяется с помощью научных, медицинских и экономических критериев. К научным критериям принадлежат диагностическая чувствительность, диагностическая специфичность и воспроизводимость результатов анализа. Диагностическая чувствительность — это соотношение количества сывороток панели, которые имели положительный результат в анализе, к их сумме с количеством ложноотрицательных результатов. Диагностическая специфичность диагности-кума — это соотношение количества сыворо-
ток панели, которые были негативными, к их сумме с ложноположительными результатами. Эти показатели выражают в процентах.
Диагностическую специфичность и чувствительность определяют путем исследования способности разрабатываемого диагностикума выявлять положительные и отрицательные сыворотки стандартных контрольных панелей [17, 18].
Методом иммуноэнзимного анализа (ИЭА) были проанализированы около 200 образцов сывороток крови. Созданные на их основе панели сывороток были использованы для определения диагностической специфичности и чувствительности разработанной имму-носенсорной тест-системы. Каждый образец сыворотки крови тестировали в трех повторностях. В табл. 1 представлены результаты анализа пяти положительных сывороток.
1—1—I—1—I—1—I—1—I—1—I—1—I—1—г
200 400 600 800 1000 1200 1400 1600
Время, с
Рис. 2. Результаты анализа образца сыворотки на наличие специфических антител к ВЭБ
Таблица 1. Выявление антител к ВЭБ методом ППР
№ п/п Отклик на сыворотку (У- с.) М±т
1 550 500 500 517 ± 28,86*
2 425 500 475 467 ± 38,1*
3 950 1 000 980 978 ± 25,1*
4 700 800 750 750 ± 50*
5 450 450 500 467 ± 28,9*
Примечание: * — стандартное отклонение; P < 0,05.
В результате были определены высокие показатели диагностической специфичности и диагностической чувстивительности разработанной иммуносенсорной тест-системы, которые составляли 100% и 95%, соответственно.
Анализируя полученные результаты по разработке иммуносенсорной тест-системы для выявления антител против ВЭБ в сыворотках крови больных, можно сделать вывод
о возможности применения метода ППР наряду с иммунохимическими методами, в том числе ИЭА. В то же время метод ППР имеет ряд преимуществ, в том числе он не требует меченых макромолекул, позволяет получать информацию о ходе проведения анализа.
Работа по созданию тест-систем требует определения сроков и условий оптимального хранения наборов. В наших предыдущих исследованиях было выявлено, что основной компонент тест-системы, биочип с нанесенным антигеном, сохраняется и почти не теряет активности при 4-8 °С в условиях отсутствия контакта с воздухом. В связи с этим изготовленные образцы тест-системы хранили в герметически упакованном состоянии при этом температурном режиме. В состав цитратного буфера и негативной сыворотки, которые входят в набор тест-системы, в качестве консерванта добавляли 0,02% азида натрия. Исследование образцов сывороток крови в тест-системе сразу после изготовления и через 6 месяцев хранения показали ее хорошую сохранность. Потеря активности не превышала 10% (табл. 2).
С целью проведения лабораторно-экспериментальных испытаний созданные лабораторные образцы иммуносенсорных тест-систем для выявления специфических антител к вирусу Эпштейна-Барр были переданы в лабораторию экспериментальной химиотерапии Института эпидемиологии и инфекционных болезней им. Л. В. Громашевского
Таблица 2. Выявление антител к ВЭБ методом ППР сразу после изготовления и через 6 мес хранения (п = 3)
Срок хранения (мес) Отклик на сыворотку больного (у.с.) М±т
0 700 650 650 667 ± 28,9*
6 600 550 600 583 ± 28,9*
P < 0,05.
АМН Украины. Кроме того, были переданы образцы сывороток крови больных с разными диагнозами, ИЭА тест-система для выявления специфических IgG к ВЭБ и оптоэлектронный прибор «Плазмон 6».
Оценку разрабатываемой диагностической иммуносенорной тест-системы проводили, сравнивая результаты с данными имму-ноэнзимного анализа.
Результаты сравнительного анализа по выявлению антител в сыворотках крови больных представлены в табл. 3.
Проведенные лабораторно-экспериментальные испытания образцов иммуносенсор-ной тест-системы показали, что она является достаточно эффективной и специфической для выявления антител к вирусу Эпштейна-Барр в сыворотках крови человека, и ее применение в лабораторной диагностике вирусных инфекций представляется достаточно перспективным.
В результате проведенных исследований разработаны экспериментальные серии иммунодатчиков для экспрессного выявления антител к вирусу Эпштейна-Барр в сыворотках крови с использованием прибора «ПЛАЗМОН 6». Исследованы базовые показатели их диагностического качества. Разработаны отрицательная и положительная панели сывороток с использованием коммерческих ИЭА тест-систем, поскольку стандартизированных ППР-систем на выявление антител к ВЭБ в сыворотках крови человека нет. Согласно данным литературы, результаты, полученные методами ИЭА и ППР, достаточно четко сопоставимы. Такие сравнительные исследования проводили на моделях других вирусов, микроорганизмов и отдельных протеинов [5, 7, 9]. Созданные нами панели сывороток использовали для определения диагностической специфичности и чувствительности разработанной иммуносенсорной тест-системы, которые составили 100% и 95%, соответственно, а воспроизводимость результатов — 99% . Таким образом, была создана ППР-тест-система для выявления
Таблица 3. Сравнительный анализ результатов выявления специфических антител к ВЭБ в иммуносенсорной и иммуноэнзимной тест-системах
№ сыворотки Результаты тестирования образцов сывороток (среднее трех значений) Результат совпадения ППР/ИЭА
Иммуносенсорная тест-система (у. с.)** Иммуноэнзимная тест-система (ОЕ)***
1 142 ± 10,0* 0,170 ± 0,01б* Негативная/негативная
2 б20 ± 24,8* 0,970 ± 0,01* Позитивная/позитивная
З 11б0 ±42,7* 0,б90 ± 0,0З* — // —
4 бЗ0 ± 27,8* 0,бб0 ± 0,048* — // —
б б80 ± 28,З* 0,7б0 ± 0,0З* — // —
б 480 ± 17,б* 0,бЗ0 ± 0,02З* — // —
7 1З2 ±17,б* 0,1ЗЗ ± 0,01* Негативная/негативная
8 2б0 ± 1З,2* 0,211 ± 0,018* Слабопозит./негативная
9 107 ± 7,9* 0,1бб ± 0,021* Негативная/негативная
10 Зб0 ± 22,9* 0,290 ± 0,017* Позитивная/позитивная
11 1З0 ±1З,2* 0,1З2 ± 0,00б* Негативная/негативная
12 З00 ± З1,2* 0,З90 ± 0,01б* Позитивная/позитивная
1З 14З ± 2б,б* 0,202 ± 0,0З4* Негативная/негативная
14 З20 ± 40,9* 0,З1б ± 0,02* Позитивная/позитивная
1б 1 З00 ± б7,7* 0,92б ± 0,047* — // —
Позитивные сыворотки > 220 у.с. > 0,2б4
Негативные сыворотки < 180 у.с. < 0,240
Примечания: у. с. ** — угловые секунды; ОЕ*** — оптические единицы; P < 0,0б.
антител к вирусу Эпштейна-Барр в сыворотках крови человека.
Исследованы условия и возможные сроки хранения иммунодатчиков с нанесенными антигенами ВЭБ для детекции антител на приборе «ПЛАЗМОН 6». Показано, что срок их хранения составляет 6 месяцев, что свидетельствует об их стабильности.
Необходимо также отметить, что нанотехнологическая иммуносенсорная тест-система имеет ряд преимуществ перед другими методами, а именно: одноступенчатость проведения анализа, не требует использования меченых реагентов, позволяет видеть динамику процесса и получать информацию о ходе проведения анализа, что может быть до-
статочно перспективным для использования в лабораторной диагностике ВЭБ-инфекций.
Проведенные лабораторно-экспериментальные испытания образцов иммуносенсор-ной тест-системы показали, что она является достаточно эффективной, специфической для выявления антител к вирусу Эпштейна-Барр и может быть использована для диагностики заболеваний, обусловленных ВЭБ.
Работа выполнена в рамках комплексной научно-технической программы НАН Украины «Сенсорные системы для медикоэкологических и промышленно-технологических потребностей».
ЛИТЕРАТУРА
1. Головенко М. Я. Наномедицина: досягнення та перспективи розвитку новітніх технологій у діагностиці та лікуванні (огляд літератури) //Журн. АМН України. — 2007. — Т. 13, №4. — С.617-636.
2. Crawford D. Biology and disease associations of Epstein-Barr virus// Philos. Trans. R. Soc. Lond. B Biol. Sci. — 2001. — V. 356. — Р. 461-473.
3. Kawa K. Epstein-Barr virus-associated diseases in humans // Int. J. Hematol. — 2000. — V. 71, N 2. — Р. 108-117.
4. Малашенкова И. К., Дидковский Н. А., Сар-сания Ж. Ш. и др. Клинические формы хронической Эпштейна-Барр-вирусной инфекции: вопросы диагностики и лечения // Леч. врач. — 2003. — № 9. — С. 32-38.
5. Byrne B., Stack E., Gilmartin N. O’Kennedy R. Antibody-Based Sensors: Principles, Problems and Potential for Detection of Pathogens and Associated Toxins // Sensors. — 2009. — N9. — P. 4407-4445.
6. Vaisocherova H., Mrkvova K., Piliarik M. et al. Surface plasmon resonance biosensor for direct detection of antibody against Epstein-Barr virus//Biosens. Bioelectr. — 2007. — V. 22, N6. — P. 1020-1026
7. Kumbhat S., Sharma K., Gehlot R. et al. Surface plasmon resonance based immunosensor for serological diagnosis of dengue virus in-fection//J. Pharm. Biomed. Anal. — 2010. — V. 52, N2. — P. 255-259.
8. Tang D., Tang J., Su B. et al. Simultaneous determination of five-type hepatitis virus antigens in 5 min using an integrated automatic electrochemical immunosensor array // Biosens. Bioelectr. — 2010. — V. 25, N 7. — P. 1658-1662.
9. Болтовець П. М., Нестерова Н. В. Застосування методу поверхневого плазмонного резонансу у вірусологічних дослідженнях// Мікробіол. журн. — 2006. — 68, №3. — С. 86-99.
10. Иванов Ю. Д., Гнеденко О. В., Конев В. А. и др. Детекция поверхностного антигена ви-
руса гепатита В с помощью оптического биосенсора // Вопр. мед. химии. — 2001. — №4. — С. 1-7.
11. Пирогова Л. В., Стародуб М. Ф., Артюх В. П. та ін. Експресна діагностика лейкозу великої рогатої худоби за допомогою імунного сенсора на основі поверхневого плазмон-ного резонансу// Укр. біохім. журн. — 2002. — Т. 74, №3. — С. 88-92.
12. B.G. Jongerius-Gortemaker, R.L. Goverde, A.A. Bergwerff et al. Surface plasmon resonance (BIACORE) detection of serum antibodies against Salmonella enteritidis and Salmonella typhimurium // J. Immun. Meth. — 2002. — 266. — Р. 33-44.
13. Gomara M. J., Ercill G., Alsina MA., Haro I. Assessment of synthetic peptides for hepatitis A diagnosis using biosensor technology// Ibid. — 2000. — 246. — Р. 13-24.
14. Уоллз Э., Крофорд Д. Культивирование клеток В95-8 // Лимфоциты. Методы. — М: Мир, 1990. — С. 230-249.
15. Нестерова Н. В., Дяченко Н. С., Загородняя С. Д. и др. Технология получения специфического антигена для иммуноферментной тест-системы на антитела к вирусу Эпштейна-Барр и критерии ее качества. //Тез. докл. межд. науч.-практ. конф. «Новые технологии получения и применения биологически активных веществ». — Симферополь: Изд-во КНЦ. — 2002. — С. 118.
16. Nesterova N. V., Nosach L. N., Zagorodnya S. D. et al. Elaboration of optical immunosensors based on the surface plasmon resonance for detecting specific antibodies and antigens of Epstein-Barr virus and human adenovirus // Мікробіол. журн. — 2008. — 70, №6. — С. 67-73.
17. Crowther J. R. The ELISA guidebook: Methods in Molecular Biology / V. 149. — Humana Press, 2001. — 421 p.
18. Іванська Н.В., Кислих О. М., Максиме-нокО.В., та ін. Практичний посібник з імуноферментного аналізу / За ред. А. Л. Гураля та М. Я. Співака. — К., 2005. — 63 с.
ІМУНОСЕНСОРНА ТЕСТ-СИСТЕМА ДЛЯ ВИЯВЛЕННЯ АНТИТІЛ ДО ВІРУСУ ЕПШТЕЙНА-БАРР
Н. В. Нестерова1 С. Л. Рибалко2 С. Д. Загородня1 Г. В. Баранова1 А. В. Головань1
1Інститут мікробіології і вірусології ім. Д.К. Заболотного НАН України,
Київ
2Інститут епідеміології та інфекційних хвороб ім. Л.В. Громашевського АМН України, Київ
E-mail: nesterova_imv@rambler.ru
Сучасний рівень розвитку молекулярної біології у поєднанні з досягненнями фізики і хімії визначили новий напрям у діагностиці захворювань — використання розроблених за допомогою хімічних та оптичних методів іму-носенсорних тест-систем. Зокрема, звертають на себе увагу біосенсори на основі ефекту поверхневого плазмонного резонансу, які належать до класу оптичних.
У роботі наведено дані експресного виявлення антитіл до вірусу Епштейна-Барр у сироватках крові хворих з використанням опто-електронного приладу «Плазмон б». Pозроблено експериментальні серії імунодатчиків для експресної діагностики і відпрацьовано базові показники їхньої діагностичної якості. Створено негативну та позитивну панелі сироваток, які використовували для визначення діагностичної специфічності й чутливості розробленої імуносенсорної тест-системи. Діагностична специфічність розробленої тест-системи становила 100%, діагностична чутливість — 9б%, відтворюваність результатів — 99%. Досліджено умови і можливий термін зберігання імунодатчиків. Визначено термін їх зберігання, який становить б місяців, що свідчить про стабільність розроблених імуносенсорів. Проведені лабораторно-експериментальні дослідження зразків імуносенсорної тест-систе-ми показали, що вона є достатньо ефективною
і специфічною для виявлення антитіл до вірусу Епштейна-Барр і може використовуватися для діагностики захворювань, спричинених цим вірусом.
Ключові слова: вірус Епштейна-Барр, поверхневий плазмонний резонанс, імуносенсорна тест-система.
IMMUNOSENSORY TEST-SYSTEM FOR DETECTION OF ANTIBODIES TO THE EPSTEIN-BARR VIRUS
N. V. Nesterova1 S.L. Rybalko2
S. D. Zagorodnya1 G. V. Baranova1 A. V. Golovan1
1Zabolotny Institute of Microbiology and Virology of National Academy of Sciences of Ukraine, Kyiv
2Gromashevsky Institute of Epidemiology and Infectious Diseases of National Academy of Medical Sciences of Ukraine, Kyiv
E-mail: nesterova_imv@rambler.ru
Contemporary level of molecular biology development in combination with the achievements of physics and chemistry have defined a new trend in diagnostics of diseases which used immunosensory test-systems elaborated on the chemical and optical basis. In particular, attention was drawn to biosensors based on surface plasmon resonance effect, which belong to a class of optical ones. Data on the express identification of antibodies to Epstein-Barr virus in sera of patients obtained with an optoelectronic device, «Plasmon 6», are given in the article. The series of experimental immunosensors for express diagnostics developed and basic indices of their diagnostic quality were worked through. The negative and positive panels of sera were created, which were used to evaluate the diagnostic specificity and sensitivity of the elaborated immunosensory test-system. Diagnostic specificity of the elaborated test-system was 100%, diagnostic sensitivity — 95%, the reproducibility of the results — 99%. The conditions and possible storage life of the immunosensors were investigated. The period of their storage was 6 months that indicated on stability of the elaborated immunosensors. The experimental testing of the samples of the worked out immunosensory test system shown their sufficiently effectiveness and specificity for detection of antibodies to Epstein-Barr virus and it could be used to diagnostics of the diseases caused by the virus.
Key words: Epstein-Barr virus, surface plasmon resonance, immunosensory test-system.
