CC BY
72
УДК 612.017
В.Б. Хобракова, С.Т. Кохан
ИММУНОМОДУЛИРУЮЩИЕ СВОЙСТВА МНОГОКОМПОНЕНТНОГО ФИТОСРЕДСТВА «АРУРА-ТАН № 7» ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ИММУНОДЕФИЦИТЕ
Институт общей и экспериментальной биологии СО РАН (Улан-Удэ) Читинский государственный университет (Чита)
В опытах на мышах линий СВА и F (СВАхС57В1/6) установлена иммуномодулирующая, активность многокомпонентного фитосредства «Арура-7» при экспериментальном, иммунодефиците, вызванном, цитостатиком азатиоприном. Показано, что испытуемое средство в объеме 10 мл/ кг способно ослаблять супрессивное действие цитостатика азатиоприна на антителогенез и клеточноопосредованную иммунную реакцию, что выражается, в повышении иммунологических показателей.
Ключевые слова: фитосредство «Арура-Тан № 7», гуморальный иммунный ответ, гиперчувствительность замедленного типа - ГЗТ, азатиоприн
IMMUNOMODULATING ACTIVITY OF THE MULTICOMPONENT PHYTOREMEDY «ARURA-TAN № 7» IN EXPERIMENTAL IMMUNODEPRESSION
V.B. Khobrakova, S.T. Kokhan Institute of General and Experimental Biology SB RAMS, Irkutsk
Chita State University, Chita
The immunomodulating activity of the multicomponent phytoremedy "Arura-Tan № 7" in experimental immu-nodepression induced, by azatioprin has ^ been established, in experiments on the СВА and F1 (CBAxC57B1/6) mice. The phytoremedy ‘Arura-Tan. № 7" in the volume of 10 ml/kg can relax supressive action of azatioprin. on antibody genesis, cellularindirect immune reaction, what is expressed, by the increasing of immune indices.
Key words: phytoremedy «Arurа-Tаn N 7», humoral immune response, delayed type hypersensitivity - DTH, azathioprine
Ухудшение экологической обстановки, широкое внедрение химии в быту и на производстве, возникновение антибиотикоустойчивых форм инфекционных возбудителей, стрессовые ситуации ведут к росту патологических состояний, сопровождающихся нарушениями в иммунном статусе человека, вплоть до развития вторичных иммунодефицитных состояний. В связи с создавшейся ситуацией актуален поиск новых иммуномодуляторов, обладающих мягким действием и способных воздействовать только на измененные звенья иммунной системы [14]. В этом плане перспективными являются лекарственные средства растительного происхождения, поскольку они имеют ряд преимуществ перед синтетическими: мягкое иммуномодулирующее действие, низкую токсичность, активацию функций не только иммунной, но и нервной и эндокринной систем благодаря наличию комплекса биологически активных веществ [1, 3, 12]. Особый интерес вызывают многокомпонентные средства тибетской медицины, высокая фармакотерапевтическая эффективность которых обусловлена гармоничным сочетанием содержащихся биологически активных веществ в исходных видах растительного сырья. В рецепты входят от трех до несколько десятков ингредиентов. Такая сложность рецептуры находит свое обоснование в принципах лечения, принятых в традиционной медицине Тибета и Монголии. Согласно этим принципам лекарство должно одновременно действовать
не только на разные симптомы болезни или на ее причину, но также регулировать обмен веществ и укреплять организм больного [6].
В соответствии с вышеизложенным в Институте общей и экспериментальной биологии Сибирского отделения РАН разработано новое многокомпонентное адаптогенное растительное средство «Арура-Тан № 7», представляющее собой биологически активную добавку к пище (комплекс сухого измельченного сырья 5 видов лекарственных растений: корни элеутерококка колючего — Eleutherococcus senticosus (Rupr. et Maxim.) Maxim (20 %), корни родиолы розовой — Rhodiola rosea L. (15 %), корни солодки уральской — Glycyrrhiza uralensa Fisch (20 %), побеги черники обыкновенной — Vaccinium myrtillus L. (20 %), трава тимьяна ползучего — Thymus serpyllum L. (25 %). Указанная композиция была разработана с учетом фармакологических свойств входящих в ее состав лекарственных растений. Так, элеутерококк и родиола розовая оказывают тонизирующее и общеукрепляющее действие, повышают физическую и умственную работоспособность; солодка обладает широким спектром фармакологической активности, в том числе кортикостероидоподобным действием; тимьян оказывает противовоспалительное и антибактериальное действие; черника — тонизирующее, а также является витаминоносным растением [11]. Широкий спектр фармакологической активности средств из лекарственных растений, содержащих-
ся в испытуемом средстве, предполагает наличие у него иммуномодулирующих свойств.
Целью настоящего исследования явилось определение иммуномодулирующих свойств многокомпонентного растительного средства «Арура-Тан № 7» в отношении клеточного и гуморального звеньев иммунного ответа при экспериментальном иммунодефиците, вызванном цитостатиком аза-тиоприном.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Эксперименты проведены на мышах-самцах линий СВА и Б1 (СВАхС57В1/6) массой 18 — 20 г. Действие исследуемого средства на показатели клеточного и гуморального звеньев иммунитета было изучено на животных, находящихся в состоянии иммунодепрессии, вызванной цитостатиком аза-тиоприном, который вводили контрольной группе животных в дозе 50 мг/кг перорально 1 раз в сутки в течение 5 дней [4].
Растительное средство «Арура-Тан № 7» вводили опытной группе на фоне азатиоприна в объеме 10 мл/кг внутрижелудочно 1 раз в сутки в течение 14 дней. Интактная и контрольная группы животных получали воду, очищенную по аналогичной схеме.
Действие испытуемого средства на состояние клеточного звена иммунного ответа оценивали в реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) согласно стандартной методике локальной гиперчувствительности замедленного типа [9]. Мышей сенсибилизировали внутрибрюшинным введением 0,1% взвеси эритроцитов барана (ЭБ) в физиологическом растворе. На 4-е сутки под подошвенный апоневроз задней лапки вводили разрешающую дозу антигена — 50 мкл 50% взвеси эритроцитов барана. В контралатеральную лапку инъецировали физиологический раствор в том же объеме. Оценку реакции гиперчувствительности замедленного типа проводили спустя 24 часа по разнице массы опытной (Ро) и контрольной (Рк) лапок.
Состояние гуморального иммунитета оценивали по количеству антителообразующих клеток (АОК), определяемых методом локального гемолиза по A.J.Cunшngham (1965) [15]. Мышей иммунизировали внутрибрюшинно 0,1% взвесью эритроцитов барана в дозе 2 х 108 клеток на мышь. Реакцию проводили на 5-е сутки после иммунизации.
Статистическую обработку результатов проводили стандартными методами вариационной статистики с использованием параметрического t-критерия Стьюдента и непараметрических методов с определением критериев Манна — Уитни и Вилкоксона. Для всех данных определяли среднее арифметическое значение (М), ошибку средней арифметической (± m) и достоверность различий (Р). Различие считали достоверным при вероятности 95 % (Р < 0,05) [5].
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Наиболее распространенный подход к изучению гуморального иммунитета заключается в инициации процесса антигензависимой диффе-ренцировки предшественников антителообразующих клеток до В-клеток, продуцирующих антитела. Информативным показателем такой инициации может служить уровень антителообразующих клеток.
Введение азатиоприна приводило к снижению как абсолютного числа антителообразующих клеток, так и числа антителообразующих клеток на 106 спленоцитов на 53 и 38 %, соответственно, по сравнению с теми же показателями в интактной группе (табл. 1).
При введении исследуемого средства на фоне иммуносупрессии наблюдали достоверное увеличение количества антителообразующих клеток как в абсолютных значениях, так и при расчете на 106 спленоцитов; при этом первый показатель превышал уровень азатиоприновой супрессии в 1,8 раза, а второй показатель — в 1,5 раза.
Влияние «Арура-Тан № 7» на состояние клеточного звена иммунного ответа оценивали в реакции гиперчувствительности замедленного типа, дающей представление о функциональной активности лимфоцитов Т-ряда.
Азатиоприновая иммунодепрессия проявилась в угнетении индекса реакции гиперчувствительности замедленного типа на 36 % по сравнению с таковым в интактной группе (табл. 2). После введения животным указанного средства на фоне азатиоприна отмечали увеличение индекса реакции гиперчувствительности замедленного типа в
1,6 раза по отношению к контролю.
Таким образом, исследование иммуномодулирующих свойств растительного средства «Арура-Тан № 7» выявило его эффективность по
Таблица 1
Влияние растительного средства «Арура-тан № 7» на антителообразование
Группы животных Абсолютное число антителообразующих клеток на селезенку Число антителообразующих клеток на106 спленоцитов
Интактная (n = 10) 70773 ± 3061 440 ± 33
Контрольная (азатиоприн) (n = 10) 33075 ± 2831 271 ± 18
Опытная (азатиоприн + «Арура-тан № 7») (n = 10) 59535 ± 3527* 398 ± 26*
Примечание: здесь и далее п - количество животных в группе, * - означает, что разница существенна (р < 0,05) по сравнению с контролем.
Таблица 2
Влияние растительного средства «Арура-тан № 7» на выраженность гиперчувствительности
замедленного типа (ГЗТ)
Группы животных Индекс реакции ГЗТ, %
Интактная (n = 10) 22,1 ± 1,80
Контрольная (азатиоприн) (n = 10) 14,2 ± 1,27
Опытная (азатиоприн + «Арура-Тан № 7») (n = 10) 23,3 ± 1,16*
отношению к реакциям клеточного и гуморального звеньев иммунного ответа при экспериментальной азатиоприновой иммуносупрессии. Исследуемое средство в объеме 10 мл/кг способно ослаблять супрессивное действие азатиоприна на клеточноопосредованную иммунную реакцию гиперчувствительности замедленного типа и антителогенез, что выражается в восстановлении иммунологических показателей.
Установленное иммунокорригирующее действие испытуемого средства обусловлено наличием широкого спектра биологически активных веществ. За иммуномодулирующий эффект, по-видимому, ответственны гликозиды, полисахариды, содержащиеся в корнях элеутерококка колючего; дубильные вещества, флавоноиды, гликозиды, содержащиеся в корнях родиолы розовой; тритерпеновые сапонины, содержащиеся в корнях солодки уральской; эфирные масла, содержащиеся в траве тимьяна ползучего; витамины, каротиноиды, содержащиеся в побегах черники обыкновенной. Как известно из данных литературы, все перечисленные биологически активные вещества обладают иммуномодулирующими свойствами [1, 3, 7, 8, 10, 13, 16, 17]. Кроме того, наши данные согласуются с данными Д.Н. Лазаревой и др. (2004), из которых известно, что экстракт элеутерококка оказывает выраженный иммуномодулирующий эффект в условиях иммуносупрессии, вызванной циклофосфаном, а препараты из родиолы розовой ститмулируют клеточный иммунитет [3]. В работе Л.А. Балтиной и др. (1990) установлено, что глицирризиновая и глицирре-товая кислоты и их производные, выделенные из корня солодки, усиливают выработку антител, стимулируют пролиферацию Т- и В-лимфоцитов, реакцию гиперчувствительности замедленного типа, фагоцитарную активность макрофагов, а также активность лизоцима [2].
В целом, очевидно, что иммуномодулирующая активность исследуемого средства обусловлена совокупным действием комплекса биологически активных веществ растений.
Таким образом, многокомпонентное фитосредство тибетской медицины — «Арура-тан № 7» является эффективным иммунокорригирующим средством, что позволяет рекомендовать его в качестве биологически активной добавки к пище для использования в комплексной терапии различных заболеваний, связанных с нарушениями иммунной системы организма.
ЛИТЕРАТУРА
1. Бакуридзе А.Д. и др. Иммуномодуляторы растительного происхождения // Хим.-фарм. журн. - 1993. - № 8. - С. 43-47.
2. Балтина Л.А., Сахаутдинова Г.М., Зару-дий Ф.С. Синтез гликопептидов глицирризиновой кислоты и их иммуномодулирующее действие // Хим.-фарм. журн. - 1990. - Т. 24, № 2. -С. 119-121.
3. Лазарева Д.Н. и др. Растения, стимулирующие иммунитет. - Уфа, 2005. - 96 с.
4. Лазарева Д.Н., Алехин Е.К. Стимуляторы иммунитета. - М., 1985. - 256 с.
5. Лакин Г.Ф. Биометрия. - М., 1990. - 352 с.
6. Николаев С.М. и др. О рациональном подходе к разработке многокомпонентных лекарственных препаратов. - Улан-Удэ, 1986. - 48 с.
7. Николаевский В.В., Еременко А.Е., Иванов И.К. Биологическая активность эфирных масел. - М., 1987. - 143 с.
8. Плецитый К.Д. Витамины и иммунитет. Биотин, пантотеновая кислота, рибофлавин // Вопр. питания. - 1990. - № 4. - С. 18-22.
9. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / под ред. Р.У. Хабриева. - М., 2005. - С. 80.
10. Сергеев А.В. и др. Разработка лекарственных средств на основе каротиноидов для коррекции иммунодефицитных состояний // Человек и лекарство: матер. 1-го Междунар. науч. конгр. -М., 1995. - С. 143-144.
11. Соколов С.Я., Замотаев И.П. Справочник по лекарственным растениям (фитотерапия). - М., 1990. - 428 с.
12. Токешова Л.Е. Лекарственные растения и их препараты, используемые в качестве иммуномодуляторов // Chemistry, Technology and Medicinal Perspectives : Materials of the II Int. Conf. Natural Products. - Алматы, 2007. - С. 161.
13. Толкачев О.Н., Шипулина Л.Д., Шейчен-ко О.П. Новые растительные полифенолы - активные противовирусные агенты и иммуномодуляторы // Int. J. Immunorehabil. - 1999. - № 14. - С. 9.
14. Хаитов Р.М., Пинегин Б.В. Современные иммуномодуляторы. Классификация, механизм действия // Рос. аллергол. журн. - 2005. - № 4. -
С. 30-43.
15. Cunningham A.J. A method of increased sensitivity for detecting single antibodyforming cells // Nature. - 1965. - Vol. 207, N 5001. - P. 1106-1107.
16. Plohmann В. et al. Immunomodulatory and 17. Kraus J., Franz G. Immunomodulating effects
antitumoral effects of triterpenoid saponins // Phar- of polysaccharides from medicinal plants // Chem.
mazie. - 1997. - Vol. 52, N 12. - P. 953-957. Pharm. Bull. - 1992. - Vol. 40, N 2. - P. 314-317.
Сведения об авторах
Хобракова Валентина Бимбаевна - к.б.н., ст.н.с. Института общей и экспериментальной биологии Сибирского отделения РАН (670047, г. Улан-Удэ, ул. Сахьяновой, д. 6; e-mail: [email protected])
Кохан Сергей Тихонович - к.б.н., зав. кафедрой основ медицины Читинского государственного университета (672039, г. Чита, ул. Александро-Заводская, д. 30; тел.: (302-2) 41-64-44, 41-66-00, факс: (302-2) 41-64-44; e-mail: [email protected])
