CC BY
156УДК 612.017:614.253.8:578.834.1 DOI: 10.24412/1999-6780-2021-1-3-13
ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ПАЦИЕНТОВ С COVID-19 В ЗАВИСИМОСТИ ОТ СТЕПЕНИ ТЯЖЕСТИ ЗАБОЛЕВАНИЯ
Фролова Е.В. (зав. НИЛ)*, Филиппова Л.В. (ассистент кафедры, с.н.с.), Учеваткина A.B. (с.н.с.), Пономаренко В.А. (студент), Борзова Ю.В. (зав. клиникой, доцент кафедры), Шур-пицкая O.A. (зав. КДЛ), Тараскина А.Е. (зам. директора по науке, зав. НИЛ), Гайковая Л.Б. (зав. ЦКДЛ, зав. кафедрой), Федоренко A.C. (зам. главного врача), Гомонова В.В. (зам. главного врача), Латария Э.Л. (главный врач), Васильева Н.В. (директор института, зав. кафедрой)
Северо-Западный государственный медицинский университет им. И.И. Мечникова, Санкт-Петербург, Россия
COVID-19 (Coronavirus disease 2019) - это инфекционное заболевание, вызываемое новым ß-коронавирусом, который называется коронавирус 2 тяжелого острого респираторного синдрома (severe acute respiratory syn-drome-related Coronavirus 2 — SARS-CoV-2). Первый случай заражения SARS-CoV-2 был зарегистрирован в декабре 2019 г. в Ухане, Китай и быстро распространился по всему миру. В ответ на инфицирование SARS-CoV-2 развиваются загцитные реакции, обусловленные активацией врожденного и приобретенного иммунитета. Особенности иммунного ответа больных COVID-19 в зависимости от тяжести течения заболевания изучены недостаточно. Нами проведено исследование иммунологических показателей 30 пациентов с COVID-19 через 23,0 дня (22,0-28,0) после госпитализации. Установлено снижение способности клеток крови больных COVID-19 к продукции IFN-a и IFN-y и уменьшение числа NK-клеток по сравнению с показателями контрольной группы. Особенностью иммунного профиля пациентов с тяжелым течением COVID-19 было снижение абсолютного числа CD8+T-клеток, Т-регуляторных клеток (Трег), уровней общих IgG и IgM по сравнению с контрольными значениями; достоверно более низкое количество CD4+Т-клеток, CD8+T-клеток, Трег, уровней общих IgG и IgM по сравнению с показателями пациентов со среднетяжелой формой заболевания. Полученные данные свидетельствуют о состоянии иммуносупрессии на поздних сроках инфекционного npoifecca, обусловленного SARS-CoV-2, особенно у больных с тяжелым течением болезни.
Ключевые слова: новая коронавирусная инфекция, SARS-CoV-2, COVID-19, субпопуляции лимфоцитов, ин-терфероны, антитела
* Контактное лицо: Фролова Екатерина Васильевна, E-mail: [email protected]
IMMUNOLOGICAL FEATURES OF PATIENTS WITH COVID-19 DEPENDING ON THE SEVERITY OF THE DISEASE
Frolova E.V. (head of the laboratory), Filippova L.V. (assistant of the department, senior scientific researcher), Uchevatkina A.E. (senior scientific researcher), Ponomarenko V.A. (student), Borzova Y.V. (head of the clinic, associate professor of the department), Shurpitskaya O.A. (head of the laboratory), Taraskina A.E. (deputy director for science, head of the laboratory), Gaikovaya L.B. (head of the laboratory), Fedorenko A.S. (deputy chief physician), Go-monova V.V. (deputy chief physician), Latariia E.L. (chief physician), Vasilyeva N.V. (director of the institute, head of the department)
North-Western State Medical University named after I.I. Mech-nikov, St. Petersburg, Russia
COVID-19 (Coronavirus disease-2019) is an infectious disease caused by a new fi-coronavirus called severe acute respiratory syndrome coronavirus (SARS-CoV-2). The first case of SARS-CoV-2 infection was reported in December 2019 from Wuhan, China, and rapidly became a pandemic disease around the world. In response to infection with SARS-CoV-2 develop protective reactions caused by activation of innate and acquired immunity. Features of the immune response of patients COVID-19, depending on the severity of the disease have not been studied sufficiently. We conducted a study of the immunological parameters of 30 patients with COVID-19 in 23.0 days (22.0-28.0) after hospitalization. There was a decrease in the ability of blood cells of patients with COVID-19 to produce IFN-a and IFN-y and a decrease in the number of NK cells compared to the control group. A feature of the immune profile of patients with severe COVID-19 was a decrease in the absolute number of CD8+ T-cells, T-regulatory cells (Treg), levels of total IgG and IgM compared to control values; significantly lower number of CD4+ T-cells, CD8+ T-cells, Treg, levels of total IgG and IgM in comparison with the indicators ofpatients with a moderate form of the disease. The data obtained indicate the state of immunosuppression in the late stages of the infectious process caused by SARS-CoV-2, especially in patients with a severe course of the disease.
Key words: new coronavirus infection, SARS-CoV-2, COVID-19, lymphocyte subpopulations, interferons, antibod-
ВВЕДЕНИЕ
Вспышка новой коронавирусной инфекции началась в городе Ухань китайской провинции Ху-бэй в декабре 2019 г. [1]. Быстрое распространение инфекции по всему миру привело к резкому обострению эпидемиологической обстановки в различных странах. Международный комитет по таксономии вирусов 11 февраля 2020 г. присвоил офици-
альное название возбудителю инфекции — SARS-CoV-2. Всемирная Организация Здравоохранения ВОЗ определила официальное название инфекции, вызванной новым коронавирусом, — COVID-19 [2].
Коронавирусы (Coronaviridae) - это большое семейство РНК-содержащих вирусов, способных инфицировать человека и некоторых животных. Новый коронавирус SARS-CoV-2 представляет собой одноцепочечный, положительно заряженный РНК-содержащий вирус рода Betacoronavirus, отнесенный ко II группе патогенности, как и его предшественники вирусы SARS-CoV и MERS-CoV. Установлено до 79% гомологии нуклеотидной последовательности РНК нового коронавируса с его предшественником SARS-CoV [3].
Известно, что передача инфекции осуществляется преимущественно воздушно-капельным, реже — контактным путем. Инкубационный период длится от 2 до 14 дней, и вирус легко передается от инфицированного лица здоровому человеку. При аэрозольном попадании SARS-CoV-2 происходит инфицирование альвеолярных эпителиальных клеток I и II типа, экспрессирующих ангиотензин-превращающий фермент II типа (АПФ-2). Клеточная трансмембранная сериновая протеаза типа 2 (ТСП2) способствует связыванию вируса с АПФ-2, активируя его S-протеин, необходимый для проникновения SARS-CoV-2 в клетку. В соответствии с современными представлениями, АПФ2 и ТСП2 представлены на поверхности различных клеток органов дыхания, пищевода, кишечника, сердца, надпочечников, мочевого пузыря, головного мозга (гипоталамуса) и гипофиза, а также эндотелия и макрофагов [4-6]. В настоящее время ясно, что существует тесное взаимодействие между вирусом SARS-CoV-2 и иммунной системой человека, приводящее к разнообразным клиническим проявлениям заболевания [7, 8]. При этом в 80% случаев инфекция может протекать бессимптомно или в виде легких форм. Примерно у 15% больных развивается тяжелая пневмония, а у около 5% - острый респираторный дистресс-синдром (ОРДС) и полиорганная недостаточность [9, 10].
В настоящее время продолжается интенсивное изучение клинических и эпидемиологических особенностей заболевания, разработка новых средств по профилактике и лечению [11]. Однако иммунопато-генез различных форм COVID-19 изучен недостаточно. В ответ на инфицирование SARS-CoV-2 развиваются защитные реакции, обусловленные механизмами врожденного и приобретенного иммунного ответа. Особенностью реакции системы врожденной защиты при SARS-CoV-2 является формирование чрезмерного воспалительного ответа на фоне низкого уровня интерферонов (IFN) I и III типов [6, 12]. По современным представлениям, вирус блокирует
или снижает продукцию интерферонов на этапе неконтролируемой вирусной репликации. В ответ на проникновение вируса эпителиоциты легких и альвеолярные макрофаги запускают синтез провоспали-тельных цитокинов и хемокинов, которые привлекают в очаг воспаления нейтрофилы и Т-лимфоциты, что приводит к высвобождению значительного количества иммунологических медиаторов. Таким образом, механизмы врожденного иммунного ответа направлены на формирование воспалительной среды для уничтожения SARS-CoV-2, но чрезмерный характер ответной реакции обусловливает необратимое поражение тканей [7, 13]. По мере развития иммунного ответа происходит презентация антигена Т-клеткам, и включаются механизмы адаптивного иммунитета примерно к 7-14 суткам болезни [7, 10]. Данные об адаптивных иммунных реакциях при COVID-19 ограничены. Считают, что ведущая роль в защите от новой коронавирусной инфекции принадлежит ТЫ/ТЫ7 клеткам, а специфические антитела к SARS-CoV-2 способствуют нейтрализации вируса [8, 14]. Наличие вторичной иммунологической недостаточности у лиц с хронической сопутствующей патологией обусловливает устойчивую репликацию вируса и более тяжелое течениеСОУШ-19 [12].
Установлено, что при тяжелых формах COVID-19 у больных повышено число нейтрофилов, при этом увеличение отношения нейтрофилов к лимфоцитам связано с плохим прогнозом заболевания [11, 15]. В большинстве случаев у пациентов с тяжелым течением COVID-19 отмечали лимфоцитопению со снижением числа CD4 Т-хелперов, цитотоксических CD8+ Т-клеток, В-лимфоцитов и естественных киллеров [16-18]. Подавление системы IFN при коронавирусной инфекции связывают с тяжестью клинических проявлений заболевания. Обнаружено снижение числа I FN -у С D4 Т-хелперов и гранзим В+перфорин+С08+ Т-клеток у пациентов с COVID-19 по сравнению со здоровыми донорами [19]. Напротив, экспрессия маркеров функционального истощения PD-1 («Programmed cell death-1» - лиганд рецептора программируемой клеточной гибели-1) на Т-клетках больных с тяжелой формой COVID-19 была значительно выше по сравнению с Т-клетками, выделенными от пациентов с легкой формой заболевания или от здоровых доноров [19, 20]. Взятые вместе, эти данные указывает на сложные механизмы взаимодействия SARS-CoV-2 с клетками иммунной системы. Недостаток проведенных исследований заключается в отсутствии оценки способности клеток крови к продукции интерферонов, а также в том, что не установлена взаимосвязь уровней интерферонов с другими иммунологическими показателями.
Цель работы — изучение субпопуляционного состава лимфоцитов, уровней иммуноглобулинов и способности клеток крови больных COVID-19 к
продукции иитерфероиов в зависимости от тяжести течения заболевания.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
В проспективное исследование включили 30 больных COVID-19. Среди обследованных было 43% мужчин и 57% женщин в возрасте от 32 до 88 лет (медиана - 62 года). Группу сравнения составили 25 условно здоровых людей в возрасте от 21 до 68 лет (медиана — 43 года): 47% мужчин и 53% женщин.
Все пациенты находились в стационаре в Центре по лечению больных новой коронавирусной инфекцией на базе клиники Петра Великого Северо-Западного государственного медицинского университета им. И.И. Мечникова. Больные COVID-19 были разделены на две группы в зависимости от тяжести течения заболевания [21]. В первую группу включили 12 пациентов с COVID-I9, у которых было диагностировано среднетяжелое течение болезни, во вторую группу — 18 человек с тяжелым течением. Диагноз COVID-19 был установлен на основании положительного результата лабораторного исследования на наличие РНК SARS-CoV-2 с применением методов амплификации нуклеиновых кислот (МАНК).
Клинический анализ крови выполняли на гематологическом анализаторе DxH-800 (Beckman Coulter, США). Ферритин определяли с помощью биохимического автоматического анализатора AU-480 (Beckman Coulter, США), С-реактивный белок -на биохимическом автоматическом анализаторе Cobas Integra 400+ (Roche, Швейцария), фибриноген и D-димер - на анализаторе гемостаза STA-Compact (Stago, Франция). При подозрении на развитие цито-кинового шторма выявляли содержание интерлейки-на-6 (IL-6) на иммунохимическом электрохемилю-минесцентном анализаторе Cobas е411 (Roche, Швейцария).
Иммунологическое обследование проводили через 23,0 дня (22,0-28,0) после госпитализации. Им-мунофенотипирование лимфоцитов периферической крови было выполнено методом 6-цветного цито-флуориметрического анализа с использованием проточного цитометра Navios™ (Beckman Coulter, США). Подготовку образцов периферической крови и настройку цитофлуориметра проводили в соответствии с национальными рекомендациями [22]. Лимфоциты окрашивали меченными флуорохромами моноклональными антителами (Beckman Coulter, США) в соответствии с рекомендациями производителя: CD45-PC5/5, CD4-FITC, CD8-ECD, CD3-APC, CD19-FITC, CD56-PC7 и CD25-PE (Beckman Coulter, США). После внесения антител образцы тщательно перемешивали, затем инкубировали при комнатной температуре 15 минут в защищенном от света месте. По завершении инкубации при постоянном переме-
шивании добавляли 500 мкл лизирующего раствора VersaLyse Lysing Solution (Beckman Coulter, США), инкубировали еще 10 минут при комнатной температуре в защищенном от света месте. При цитомет-рическом анализе для каждого из образцов набирали не менее 5000 лимфоцитов. Полученные результаты были проанализированы при помощи программного обеспечения Navios™ Software vi.2 (Beckman Coulter, США). Для дополнительной характеристики Т-клеточного звена иммунной системы вычисляли иммунорегуляторный индекс (ИРИ) — соотношение CD3 CD4 / CD3 CD8+.
Оценку Т-регуляторных лимфоцитов (Трег) проводили также методом проточной цитометрии при окрашивании лимфоцитов периферической крови моноклональными антителами CD4-FITC, CD127-РС7 и CD25-PE (Beckman Coulter, США). Инкубацию осуществляли в тех же условиях, что и при 6-цветном анализе. После инкубации добавляли 500 мкл лизирующего раствора VersaLyse Lysing Solution и 12,5 мкл фиксирующего раствора Fixative Solution IOTest 3 (Beckman Coulter, США). Через 10 минут инкубации при комнатной температуре в темноте образцы отмывали в 4 мл фосфатно-солевого буфера (ФСБ) 5 минут при 1500 оборотах в минуту, удаляли надосадок и восстанавливали лейкоцитарную взвесь в 400 мкл ФСБ. При цитометрическом анализе популяцию CD4 Т-хелперов на основании позитивного/ негативного гейтирования разделяли на CD4 CD25 CD127 Трег и CD4+CD25+CD127+ Т-хелперы активированные, получая их относительное (%) количество.
Для исследования спонтанной и индуцированной продукции IFN-y и IFN-a использовали гепари-низированную кровь, разведенную в 5 раз полной питательной средой (ППС): среда RPMI 1640 с добавлением L-глутамина (Биолот, Россия), 200 мкг/мл гентамицина и 10% эмбриональной телячьей сыворотки (Биолот, Россия). Для индуцированной продукции интерферонов в лунки планшета вносили по 100 мкл разведенной крови и, соответственно, добавляли 100 мкл рабочего раствора фитогемагглю-тинина-П (ФГА-П) (ПанЭко, Россия) в конечной дозе 25 мкг/мл или 5 мкл вируса болезни Ньюкасла (цитолитический титр — 1/256, ФГУ НИИ гриппа им. A.A. Смородинцева, Россия). Планшеты с исследуемыми образцами культивировали при 37 °С в атмосфере 5% С02 в С02-инкубаторе (Sanyo МСО-5 АС, Япония). Через 24 часа супернатанты отбирали и хранили при -20 °С. Концентрацию интерферонов в супернатантах определяли с помощью коммерческих иммуноферментных тест-систем в соответствии с рекомендациями фирмы-производителя (Вектор-Бест, Россия). Измерения оптической плотности проводили с использованием планшетного фотометра (HumaReader HS, Германия).
Уровень общих иммуноглобулинов А, М, G в сыворотке крови исследовали иммунотурбодимет-рическим методом с применением коммерческих наборов (Vital, Россия). Иммуноглобулины класса G к коронавирусу SARS-CoV-2 в сыворотке крови определяли методом иммуноферментного анализа с использованием набора реагентов «SARS-CoV-2 IgG» (Научно-производственная фирма ЛИТЕХ, Россия), предназначенного для качественного выявления иммуноглобулинов. Иммуноглобулины класса М к коронавирусу SARS-CoV-2 в сыворотке крови определяли с помощью набора реагентов «SARS-CoV-2-IgM-HcDA БЕСТ» (Вектор-Бест, Россия), предназначенного для качественного выявления методом иммуноферментного анализа. Содержание иммуноглобулинов класса М и G к коронавирусу SARS-CoV-2 расценивали как положительное при КП (индексе антител) >1,1.
Полученные результаты обрабатывали с помощью программной системы STATISTICA for Windows (версия 10). Данные представляли в виде медианы (Me) нижнего и верхнего квартилей (25-го и 75-го процентилей, Lq и Hq). Для оценки различий между независимыми выборками применяли непараметрический критерий Манна-Уитни, зависимыми выборками — критерий Вилкоксона. Корреляционный анализ показателей проводили методом Спир-мана. Достоверными различиями сравниваемых параметров считали значения р<0,05.
РЕЗУЛЬТАТЫ
В исследование были включены 12 человек со среднетяжелым и 18 — с тяжелым течением С OVID-19. Наиболее частыми сопутствующими заболеваниями в обеих группах больных были: патология сер-дечно-сосудистой системы (40% и 64%), ожирение (40% и 21%), сахарный диабет (20% и 21%) и хронические заболевания желудочно-кишечного тракта (30% и 29%) соответственно. По данным КТ, у всех пациентов выявлена двусторонняя пневмония.
Клинико-лабораторное обследование больных выполнено в течение первых дней после госпитализации. Не установлено статистически значимых различий в абсолютном количестве лейкоцитов в обеих группах пациентов по сравнению с контрольными показателями (5,05x107л (4,20-6,35) и 5,9x10% (4,40-11,00) vs 5,70x109/л (5,30-6,30), р=0Д 141 и р=0,6647 соответственно). Определено снижение абсолютного числа лимфоцитов у лиц с COVID-19 по отношению к контрольным значениям (1,00х109/л (0,85-1,15) и 0,90х109/л (0,65-1,20) vs 1,98х109/л (1,89-2,28), р=0,0001 и р=0,0000 соответственно). У пациентов с тяжелым течением COVID-19 обнаружено достоверно более высокое число нейтрофилов по сравнению с показателями условно здоровых лю-
дей (5,01х109/л (3,03-9,26) ув 3,07x10% (2,75-3,78), р=0,0183).
У всех больных, включенных в исследование, установлено повышенное содержание С-реактивного белка (СРБ) в сыворотке крови по сравнению с ре-ференсными значениями (табл. 1).
Таблица 1
Лабораторные показатели пациентов с С0УЮ19 в зависи-
мости от тяжести течения заболевания
Показатели Рефе-ренсные значения Среднетяжелое течение п=12 Тяжелое течение п=18
СРБ (мг/л) 0-5 44,76 (15,8 - 73,22) р=0,0043 115,01 (61 -151,11)
Фибриноген (г/л) 2-4 4,53 (3,86-5,18) р=0,0189 6,46 (5,78 -6,80)
Ферритин (мкг/л) 10-120 484,85 (271,3 - 598,8) 889,6 (412-1117)
D-димер (м кг/мл) 0-0,44 0,31 (0,24-0,85) 1,16 (0,51-2,35)
IL-6 (пг/мл) 0-7 19,37 (17,83 -45,46) 40,82 (14,67 -68,07)
Примечания. Представлены медианные значения с интерквар-тильным размахом Ме (025-075). Статистически значимые различия р между группами выявлены с использованием критерия Манн-Уитни.
Другие показатели активности воспалительного процесса и свертывания крови: ферритин, фибриноген и Б-димер были выше нормативных значений в 88%, 76% и 58% случаев соответственно. Установлены достоверные различия в содержании СРБ (р=0,0024) и фибриногена (р=0,0189) в сыворотке крови между двумя группами пациентов COVID-19. 1Ь-6 был определен у 9 человек, и только у одного больного показатель был ниже порогового значения. Установлена положительная корреляционная связь СРБ с абсолютным числом нейтрофилов (г=0,55, р<0,05) и содержанием ферритина (г=0,46, р<0,05), что подтверждает важное значение этого острофазного белка в поддержании воспаления и развитии нейтрофилеза у пациентов с COVID-19.
Сравнительная характеристика иммунологических показателей больных COVID-19 и лиц контрольной группы представлена в таблице 2. Иммунологическое обследование пациентов выполнено в течение 3-4 недель от момента госпитализации. Установлено, что к этому времени у больных тяжелой формой COVID-19 снизилось абсолютное число нейтрофилов, по сравнению с исходными показателями, и не отличалось от контрольных значений. У пациентов обеих групп достоверно повысилось абсолютное число лимфоцитов по сравнению с показателями, установленными на раннем сроке инфекционного процесса (р=0,0000 в каждой группе). Однако у лиц с тяжелым течением COVID-19 абсолютное
число лимфоцитов было достоверно ниже, чем у больных со среднетяжелой формой заболевания (р=0,0072).
Таблица 2
Субпопуляционный состав лимфоцитов крови больных С0\/Ю19 в зависимости от тяжести течения заболевания
*р=0,0339 **р=0,0010 *р=0,0366
Т-хелперы акт CD4+ CD25+ CD127* % 19,55 (15,15-21,25) 18,8 (15,65-27,05) 21,85 (15,60-27,00)
х109/л 0,17 (0,15-0,21) 0,25 (0,20-0,33) *р=0,0029 0,18 (0,12-0,23)
ИРИ 1,70 (1,60-1,90) 2,45 (1,65-3,55) 2,05 (1,60-2,50)
Примечания. Представлены медианные значения с интерквар-тильным размахом Me (Q25-Q75). Статистически значимые различия р между группами выявлены с использованием критерия Манн-Уитни (*р - с контролем (группой условно здоровых лиц); **р - между группами со среднетяжелым и тяжелым течением).
При анализе субпопуляционного состава лимфоцитов выявили достоверно более низкое число цитотоксических CD8 Т-лимфоцитов у пациентов с тяжелым течением COVID-19 по сравнению как с контрольной группой (р=0,0038), так и группой среднетяжелого течения (р=0,0188). Отметим, что снижение абсолютного числа С 04+Т-хслпсров и цитотоксических CD8+ Т-лимфоцитов обнаружено в 33% и 61% случаев соответственно. Таким образом, у больных с тяжелым течением COVID-19 отмечали более заметное влияние инфекционного процесса на снижение абсолютного числа цитотоксических CD8+ Т-лимфоцитов, чем CD4+ Т-хелперов, что согласуется с результатами других авторов [20]. Не наблюдали значительных различий в соотношении CD3+CD4+/CD3+CD8+ в обеих группах пациентов. По сравнению с больными, перенесшими заболевание в среднетяжелой форме, в тяжелых случаях у пациентов установлено достоверно более низкое абсолютное количество лимфоцитов (р=0,0072) и СБ4+Т-хелперов (р=0,0092).
Разнонаправленные изменения были обнаружены при оценке Т-регуляторных клеток (Трег) и активированных Т-хелперов (Тх акт). У больных тяжелой формой COVID-19 выявлены признаки истощения резервных возможностей иммунной системы. Установлено снижение абсолютного числа Трег по сравнению с контрольными показателями (р=0,0366) и значениями группы больных со среднетяжелой формой заболевания (р=0,0010). Напротив, у пациентов со среднетяжелой формой заболевания наблюдали повышение абсолютного числа Трег и активированных Т-хелперов по сравнению с контрольным значениям (р=0,0339 и р=0,0029, соответственно).
Абсолютное число NK-клеток (естественных киллеров, Natural Killer cell) было достоверно снижено по сравнению с контрольными показателями в обеих группах больных COVID-19 (р=0,0401 и р=0,0011 соответственно) на фоне повышения относительного и абсолютного числа NKT-клеток (Natural Killer T-cell) в обеих группах пациентов по
Показатели Группы наблюдения
Условно здоровые (п=25) Среднетяже-лое течение (п=12) Тяжелое течение (п=18)
Лейкоциты х109/л 5,70 (5,30-6,30) 9,15 (6,05-1,50) *р=0,0168 5,25 (4,40-6,10) **р=0,0098
Лимфоциты % 36,00 34,00-37,00) 29,75 (21,75-40,50) 34,75 (16,50-40,50)
х109/л 1,98 (1,89-2,28) 2,44 (1,99-3,41) *р=0,0443 1,86 (0,88-2,08) **р=0,0072
Нейтрофилы % 56,00 53,00-59,00) 57,50 (52,00-66,00) 53,25 (45,50-80,00)
х109/л 3,07 (2,75-3,78) 5,13 (2,99-8,01) 2,77 (2,23-3,92)
Т-лимфоциты CD3+CD19- % 76,00 70,00-77,00) 73,50 (69,50-81,50) 73,50 (67,00-78,00)
х109/л 1,48 (1,32-1,65) 1,80 (1,46-2,36) 1,23 (0,71-1,50) **р=0,0081 *р=0,0398
Т-хелперы CD3+ CD4+ % 45,00 42,00-49,00) 50,00 (43,50-59,50) 48,00 (38,00-53,00)
х109/л 0,88 (0,83-1,01) 1,32 (0,97-1,78) *р=0,0490 0,81 (0,49-0,94) **р=0,0092
Т-цит CD3+CD8+ % 26,00 24,00-29,00) 21,50 (17,50-24,00) *р=0,0235 24,50 (18,00-27,00)
х109/л 0,54 (0,45-0,63) 0,48 (0,43-0,77) 0,35 (0,23-0,46) *р=0,0038 **р=0,0188
В-лимфоциты CD3CD19* % 11,00 10,00-13,00) 11,50 (8,50-21,00) 13,50 (7,00-19,00)
х109/л 0,23 (0,19-0,29) 0,31 (0,17-0,61) 0,19 (0,11-0,39)
NK-клетки CD3CD56* % 12,00 10,00-14,00) 4,90 (2,40-12,70) 9,00 (4,90-16,00)
х109/л 0,25 (0,20-0,29) 0,14 (0,07-0,32) *р = 0,0401 0,14 (0,06-0,21) *р=0,0011
NKT-клетки CD3+ CD56+ % 2,30 (1,30-3,00) 3,60 (1,80-5,75) *р=0,0168 5,20 (2,30-8,10) *р=0,0019
х109/л 0,05 (0,03-0,06) 0,07 (0,04-0,17) *р=0,0049 0,08 (0,04-0,11) *р=0,0267
Т per CD4+ CD25+ CD127" % 7,60 (6,75-9,30) 6,8 (6,15-8,80) 7,3 (6,12-9,10)
х109/л 0,07 (0,06-0,10) 0,09 (0,07-0,13) 0,05 (0,04-0,06)
отношению к показателями здоровых доноров (табл. 2).
Особенностью иммунного статуса обеих групп пациентов COVID-19 было ослабление способности клеток крови к продукции IFN-a и IFN-y. Индуцированная продукция IFN-a была ниже нормативных значений в 75% и 78% случаев больных первой и второй групп. Показатели выработки IFN-a не различались между группами пациентов, но были достоверно ниже контрольных цифр (71,5 пг/мл (28,5-91,0) и 38,0 пг/мл (18,0-95,0) vs 207,0 пг/мл (185,0-278,0), р=0,0001 и р=0,00001 соответственно). Способность к синтезу IFN-y была ниже нормативных значений у 8 человек (67%) со среднетяжелой формой заболевания и у 17 (94%) — с тяжелой формой COVID-19. Показатели продукции IFN-y были достоверно ниже по сравнению с контрольными значениями (467 пг/мл (334-1044) и 238 пг/мл (152-545) vs 1512 пг/мл (1244-1590), р=0,0001 и р=0,00001 соответственно) (Рис. 1, 2).
р<0.00001
| 400.0 -
а зоо.о -
tu
J3
X о ffl
о &
200.0 -
100.0
00.0
р=0.0001
1
т
т
контрольная группа
среднетяжелое течение COVID-19
тяжелое течение COVID-19
Рис. 1. Показатели продукции IFN-a больных COVID-19.
р<0.00001
2000.0 -
п
I
U-
Z
-а Я U ш о
1500.0 -
1000.0 -
500.0 -
0.00 .
р=0.0001
X
т
контрольная группа
среднетяжелое течение COVID-19
тяжелое течение COV1D-19
Рис. 1. Показатели продукции 1РЫ-у больных СО\/Ю-19.
Полученные данные свидетельствуют о существенном угнетении интерфероногенеза в обеих группах пациентов с СОУШ-19.
При оценке гуморального иммунного ответа не обнаружено достоверных различий в содержании В-лимфоцитов в обеих группах больных СОУШ-19 по сравнению с контрольными показателями (табл. 2). Однако у лиц с тяжелым течением заболевания установлены достоверно более низкие уровни общих 1«С и как по сравнению с контрольными значениями, так и с показателями больных со среднетяжелой формой СОУШ-19. Напротив, уровень у пациентов со среднетяжелым течением заболевания был достоверно выше контрольных значений (р = 0,0092) (табл. 3).
Таблица 3
Уровни иммуноглобулинов в сыворотке крови больных СОУЮ19 в зависимости от тяжести течения заболевания
Показатели Г эуппы наблюдения
Условно здоровые (п=25) Среднетяжелое течение (п=12) Тяжелое течение (п=18)
IgA г/л 1,72 (1,49-2,31) 3,13 (1,99-3,84) *р=0,0092 2,18 (1,45-3,20)
igM г/л 1,40 (1,10-1,74) 1,49 (0,80-2,49) 0,77 (0,57-1,64) **р=0,0380 *р=0,0206
igG г/л 11,00 (10,32-11,55) 10,00 (7,05-12,68) 6,19 (5,08-7,23) **р=0,0235 *р=0,0002
Примечания. Представлены медианные значения с интерквар-тильным размахом Ме (025-075). Статистически значимые различия р между группами выявлены с использованием критерия Манн-Уитни (*р - с контролем (группой условно-здоровых лиц); **р - между группами со среднетяжелым и тяжелым течением).
Содержание иммуноглобулинов класса М и О к коронавирусу 8АЯ8-СоУ-2 в сыворотке крови определили у 11 пациентов с тяжелой формой СОУШ-19. Показатели 1цМ выше порогового значения (КП > 1,1) обнаружены у 6 из 11 (55%) в диапазоне от 1,2 до 1,9. Значения выше порогового значения (КП >1,1 выявлены у 10 (91%) больных тяжелой формой СОУШ-19 в диапазоне от 1,8 до 6,1.
Наибольшее число корреляционных связей установлено между числом цитотоксических СЭ8+Т-лимфоцитов и другими иммунологическими показателями. Это подтверждает важное значение данной субпопуляции Т-лимфоцитов в патогенезе новой ко-ронавирусной инфекции. Абсолютное число С 08 Т-клеток положительно коррелировало с абсолютным числом СБ4+ Т-хелперов (г=0,55, р<0,05), №С-клеток (1=0,49, р<0,05), уровнями ШЧ-а (г=0,51, р<0,05) и ШЧ-у (г=0,60, р<0,05), содержанием в сыворотке крови (1=0,39, р<0,05) и ^М (1=0,39, р<0,05). Полученные данные свидетельствуют о состоянии иммуносупрессии на поздних сроках инфекционного
процесса, обусловленного SARS-CoV-2, особенно у больных с тяжелым течением заболевания.
ОБСУЖДЕНИЕ
SARS-CoV-2 является членом семейства коро-навирусов и относится к ß-коронавирусам, также как и MERS-Cov и SARS-Cov. Инфицирование новым коронавирусом SARS-CoV-2 может протекать бессимптомно, приводить к развитию острого инфекционного заболевания респираторного тракта, возникновению тяжелой пневмонии и примерно в 5% случаев к ОРДС и полиорганной недостаточности [9, 10]. В ответ на инфицирование SARS-CoV-2 развиваются защитные реакции, обусловленные активацией врожденного и приобретенного иммунитета, однако особенности иммунопатогенеза COVID-19 в зависимости от тяжести течения инфекционного процесса изучены недостаточно.
Вирусная инфекция может вызывать различные гематологические изменения. По нашим данным, у пациентов с COVID-19 на ранней стадии заболевания установлено снижение абсолютного числа лимфоцитов по сравнению с показателями здоровых людей. Ранее проведенные исследования показали, что снижение количества лимфоцитов и повышение числа нейтрофилов часто встречается у лиц с COVID-19. У больных тяжелой формой в 80% случаев установлено уменьшение абсолютного числа лимфоцитов [15-17, 23]. Считают, что лимфоцитопе-ния у пациентов с COVID-19 может быть обусловлена несколькими механизмами, такими как: хемотаксис лимфоцитов и моноцитов из периферической крови в очаги инфекции [24]; активационно-индуцированная гибель лимфоцитов (AICD) из-за повышенной экспрессии Fas-рецептора на лимфоцитах под влиянием IL-6 [25]; атрофия лимфоидных органов и нарушение рециркуляции лимфоцитов, что может быть связано с чрезмерной активацией и истощением лимфоцитов [26, 27]. В работе L. Tan с соавторами показано, что снижение относительного количества лимфоцитов менее 20% на 10-12-й день и менее 5% - на 17-19-й день от начала COVID-19 связано с плохим прогнозом заболевания [28]. Следовательно, мониторинг колебаний количества лимфоцитов может быть прогностическим индикатором исхода заболевания.
При дальнейшем анализе содержания клеток крови выявили, что наиболее высокое число нейтрофилов было у пациентов с тяжелым течением COVID-19 по сравнению с контрольными показателями на раннем сроке после госпитализации, что согласуется с результатами других исследований [14, 15, 23, 29, 30]. В работе Z. Zhou и соавторы сообщили, что увеличение числа нейтрофилов с воспалительным фенотипом в очаге инфекции связано с неблагоприятными исходами COVID-19. Установлено,
что нейтрофилы мигрируют к месту воспаления в ответ на высокую продукцию хемокинов CXCL1, CXCL2, CXCL8, СХС10, МСР-1 и CCL7, и дифференцируются в воспалительные нейтрофилы под действием IL-17F, IL-lß, TNF-a и IL-6 [31]. Нейтро-филез был определен как фактор риска прогрессиро-вания ОРДС вплоть до летального исхода у пациентов с COVID-19 [11, 30]. Нейтрофилы секретируют IFN-y, IL-6 и МСР-1, привлекающие и активирующие Т-лимфоциты и моноциты, которые могут способствовать усилению иммунных ответов при COVID-19 [13]. В свою очередь, IL-6 инициирует синтез и высвобождение С-реактивного белка. СРВ — это ключевой белок острой фазы воспалительного ответа, который появляется в крови в течение 6-10 часов после возникновения повреждения тканей, имеет период полувыведения из плазмы 19 часов. У всех больных COVID-19, включенных в исследование, обнаружено повышение содержания СРВ на раннем сроке после госпитализации, что согласуется с данными других исследователей [11, 15, 16, 23]. Показано, что повышение уровня СРВ коррелирует с тяжестью течения COVID-19 [32].
Устойчивая репликация вируса может влиять на состояние иммунной системы у больных COVID-19. Считают, что анализ отдельных субпопуляций лимфоцитов представляет большой интерес как для прогнозирования осложнений COVID-19, так и для оценки динамики восстановления иммунной реактивности [16, 17, 20]. Т-лимфоциты являются важными клетками приобретенного противовирусного иммунитета. Различные подтипы CD4 Т-хелперов определяют активацию иммунных клеток, способствуют выживанию и поддержанию эффекторных функций цитотоксических CD8 Т-клеток, помогают в выработке антител B-лимфоцитам, а также в формировании иммунной памяти. Цитотоксические CD8+ Т-лимфоциты являются основными эффектор-ными клетками, непосредственно уничтожающими зараженные вирусом клетки. Установлено, что у инфицированных SARS-CoV-2 пациентов в интерсти-циальной ткани легких до 80% инфильтрирующих клеток составляли CD8 Т-лимфоциты, что подтверждает их роль в уничтожении вирус-инфицированных клеток [18].
Исследование субпопуляционного состава лимфоцитов больных COVID-19 проведено в течение 3-4 недель после госпитализации. Результаты представлены в таблице 2. Установлено, что у пациентов с тяжелым течением COVID-19 абсолютное число цитотоксических CD8 Т-лимфоцитов было достоверно ниже по сравнению с контрольными значениями. По данным других авторов, в острой фазе COVID-19 у пациентов с тяжелым течением заболевания выявлено существенное снижение количества CD4 и CD8 Т-лимфоцитов, так же как и при SARS
и MERS [16, 17, 33]. При этом у пациентов с более легким течением инфекционного процесса количество Т-лимфоцитов не отличалось от нормальных значений или даже несколько превышало их [34]. В нашем исследовании у больных тяжелой формой COVID-19 обнаружено более выраженное снижение абсолютного числа цитотоксических CD8+ Т-лимфоцитов по сравнению с показателями пациентов со среднетяжелым течением заболевания, что могло являться результатом активацией апоптоза или миграцией клеток из периферической крови в легкие. Из научной литературы известно, что IL-6 способен инициировать гибель Т-клеток посредством активации Fas/FasL [25], тогда как TNF-a и IFN-a/|3 замедляют циркуляцию Т-клеток между периферической кровью и лимфоидными органами [35]. В других работах показано, что у пациентов с тяжелым течением COVID-19, несмотря на снижение абсолютного количества CD8 Т-клеток в циркуляции, на их поверхности повышалась экспрессия активационных маркеров, в частности, отражающих активность цитотоксических гранул (HLA-DR, CD25, CD69, CD38, Ki-67) [18-20]. Как правило, у пациентов с COVID-19 степень активации CD8 T-клеток выше, чем CD4 Т-клеток, и повышенное число CD8 CD38HLA-DR Т-лимфоцитов сохранялось в течение длительного срока наблюдения [27]. Такие же изменения наблюдали при других инфекционных заболеваниях, таких как малярия, Q-лихорадка и сепсис [8]. Эти данные свидетельствуют, что COVID-19, как и некоторые хронические инфекции, способствует чрезмерной активации и, возможно, последующему истощению цитотоксических CD8 Т-лимфоцитов.
NK-клетки являются важной частью врожденного иммунитета. Отличительной характеристикой NK-лимфоцитов является их способность к активации без предварительной стимуляции антигеном. NK-клетки совместно с цитотоксическими Т-лимфоцитами играют ключевую роль в уничтожении вирусов при респираторных инфекциях за счет прямой цитотоксичности и секреции цитокинов [36]. В нашем исследовании установлено снижение числа NK-клеток в обеих группах пациентов по сравнению с контрольными показателями. Полученные данные совпадают с результатами других авторов, которые выявили как снижение числа NK-клеток, так и признаки снижения их цитотоксической активности на фоне повышенной продукции цитокинов у пациентов с COVID-19 [16, 17]. Предположение, что IL-6 нарушает продукцию NK-клетками перфорина и гранзима В (GzmB), подтверждено тем, что тоцили-зумаб (антагонист рецепторов интерлейкина-6) и анти-TNF-a моноклональные антитела способны восстанавливать функции клеток NK-клеток у пациентов с COVID-19 [37]. Напротив, число NKT-
клеток, которые являются важным элементом врожденного иммунитета человека и имеют признаки как Т-лимфоцитов, так и NK-клеток, увеличено в обеих группах больных COVID-19 по сравнению с контрольными показателями. Известно, что NKT-клетки способны продуцировать широкий спектр цитокинов и играют регуляторную роль при различных иммунопатологических процессах [38]. Возможно, повышение числа NKT-клеток в циркуляции отражает степень активности воспалительного процесса в слизистых оболочках дыхательных путей.
Регуляторные Т-клетки (Трег) играют важную роль в поддержании иммунной толерантности, особенно в тканях слизистых оболочек различных органов. Уменьшение количества Трег-клеток может способствовать развитию легочных осложнений у пациентов с COVID-19 [14, 33]. Нами установлено, что абсолютное число CD4+CD127"CD25+Tper достоверно ниже у больных тяжелой формой COVID-19 по сравнению с показателями условно здоровых людей. Это может являться признаком ослабления контроля над воспалительным процессом и возможностью перехода инфекционного процесса в хроническую стадию.
IFN I типа (IFN-a/|3) и IFN III типа (IFN-Á) находятся на переднем крае защиты от вирусных инфекций и играют важную роль в индукции врожденных и адаптивных иммунных ответов [6-8]. Противовирусная функция IFN I и III типа опосредована несколькими механизмами, включая синтез противовирусных белков, подавляющих прохождение вирусами жизненного цикла на всех стадиях, включая проникновение в клетку, трансляцию вирусных белков, репликацию вируса, его сборку и выход в окружающую среду, а также повышение активности NK-клеток, усиление экспрессии молекул главного комплекса гистосовместимости I класса (МНС-I) на разных типах клеток и подавление активности Трег [7, 8, 40]. Функции IFN-X в основном связаны с защитой эпителиальных клеток слизистых оболочек дыхательных путей. INF-y является важным цитокином клеточного иммунного ответа, активирующего мик-робицидную активность фагоцитирующих клеток, усиливающего адаптивный специфический иммунный ответ и противовирусные механизмы защиты различных клеток. К основными продуцентами INF-у относятся CD4 Т-хелперы, цитотоксические CD8 Т-лимфоциты и NK-клетки [8]. У пациентов с критически тяжелым течением COVID-19 выявлено снижение числа IFN-y CD4 Т-хелперов и GzmB перфорин CD8 Т-клеток на фоне повышенного количества поликлональных GM-CSF+CD4 T-клеток, которые могут продуцировать высокие уровни IL-6 и GM-CSF [20, 26, 40]. В нашем исследовании у больных обеих групп обнаружено снижение способности клеток крови к продукции IFN-a и IFN-
у (Рис.). В ходе эволюции большинство вирусов, в том числе и коронавирусы, приобрели способность блокировать синтез и подавлять противовирусную активность интерферонов [7, 8]. Возможно, супрессия продукции IFN-a и IFN-y сохраняется длительное время после инфицирования SARS-CoV-2. Полученные данные свидетельствуют о том, что подавление интерфероногенеза может быть следствием негативного влияния нового коронавируса на состояние иммунной защиты и создает возможность перехода инфекционного процесса в хроническую стадию. Следовательно, необходима оценка кинетики продукции IFN-a и IFN-y на разных стадиях заболевания для определения возможности использования интерферонов в терапевтических целях.
При анализе показателей гуморального иммунного ответа установлено, что число В-лимфоцитов пациентов с COVID-19 не отличалось от контрольных значений. Однако уровни общих IgG и IgM у больных с тяжелой формой были достоверно ниже как по сравнению с контрольными значениями, так и с показателями лиц со среднетяжелым течением COVID-19. Известно, что одной из важнейших биологических функций иммуноглобулинов является связывание антигена и образование ЦИК. По-видимому, снижение уровней общих иммуноглобулинов класса G и М обусловлено их способностью образовывать ЦИК с вирусными антигенами, что косвенно отражает напряженность противовирусного иммунного ответа.
Согласно результатам нашего исследования, содержание IgG и IgM к коронавирусу SARS-CoV-2 в сыворотке крови было выше порогового значения у 6 из 11 больных (55%) и у 10 человек (91%) с тяжелой формой COVID-19 соответственно. По данным литературы, специфические для SARS-CoV-2 N/S-IgM появляются в первую неделю, достигают пика на второй неделе и уменьшаются на третьей неделе после появления симптомов у пациентов с легкой формой заболевания, тогда как N/S-IgG-антитсла увеличиваются на второй неделе, достигают пика на третьей неделе, начинают снижаться к 8 неделе и обнаруживаются в течение 60 дней после появления симптомов [41]. В то время как N-IgM и N-IgG указывают на наличие и прогрессирование инфекции до
стадии упаковки вируса, соответственно, S-IgM способствует провоспалительным процессам за счет активации комплемента и антитело-зависимого усиления инфицирования SARS-CoV-2. Напротив, после нейтрализации вируса S-IgG происходит снижение воспаления за счет фагоцитоза иммунных комплексов, опосредованного Fc-рецептором (FcyR), на поздней стадии инфекции. Следовательно, идентификация и измерение N/S-специфических антител IgM/IgG может быть эффективным в диагностике, прогнозе и мониторинге COVID-19.
Полученные результаты подчеркивают важную роль цитотоксических CD8 Т-клеток, NK-клеток и способности клеток крови к продукции IFN-a и IFN-у в иммунопатогенезе тяжелой формы COVID-19. Выявленные нарушения свидетельствуют о снижение напряженности противовирусного иммунного ответа, что указывает на необходимость длительного наблюдения больных COVID-19 для поиска информативных маркеров восстановления иммунной реактивности.
ВЫВОДЫ
1. Установлено существенное снижение способности клеток крови к продукции INF-a и INF-y, снижение числа NK-клеток на фоне увеличения количества NKT-клеток в обеих группах больных COVID-19 по сравнению с показателями контрольной группы.
2. Особенностью иммунного профиля пациентов с тяжелым течением COVID-19 было снижение абсолютного числа CD8 Т-клеток, Трег, уровней IgG и IgM по сравнению с контрольными значениями; достоверно более низкое количество лимфоцитов, С04+Т-хелперов, С08+Т-клеток, Трег, уровней IgG и IgM по сравнению с показателями пациентов со среднетяжелой формой заболевания.
Установлена прямая корреляционная связь между абсолютным числом цитотоксических CD8 Т-лимфоцитови абсолютным числом CD4 Т-хслпсров (г=0,55, р<0,05), NK-клетками (г=0,49, р<0,05), уровнями IFN-a (г=0,51, р<0,05) и IFN-y (г=0,60, р<0,05), содержанием в сыворотке крови IgG (г=0,39, р<0,05) и IgM (г=0,39, р<0,05).
ЛИТЕРАТУРА
1. Huang С., Wang Y., Li X., et al. Clinical features of patients infected with 2019 novel coronavirus in Wuhan, China. The Lancet 2020: www.thelancet.com. Published online January 24, 2020. doi.org/10.1016/S0140-6736 (20): 30183 -30185
2. A public health emergency of international concern over the global outbreak of novel coronavirus declared by WHO. Available at: https://www.who.int/dg/speeches/detail/whodirector-general-s-statement-on-ihr-emergency-committee-on-novel-coronavirus-(2019-ncov)
3. Wu /■'., Zhao S., Yu В., et al. A new coronavirus associated with human respiratory disease in China. Nature. 2020; 579 (7798): 265-269. doi: 10.1038/s41586-020-2008-3
4. Ou X., LiuY., Lei X., et al. Characterization of spike glycoprotein of SARS-CoV-2on virus entry and its immunecross-
reactivity with SARS-CoV.Version 2. Nat Commun. 2020; 11 (1): 1620. doi:10.1038/s41467-020-15562-9
5. Hoffmann M. Kleine-Weber H., Schroeder S., et al. SARS-CoV-2 cell entry depends on ACE2 and TMPRSS 2 and is blocked by a clinically proven protease inhibitor. Cell. 2020; 181 (2): 271-280. e8. doi:10.1016/j.cell.2020.02.052
6. Смирнов B.C., Тотолян A.A. Врожденный иммунитет при коронавирусной инфекции. Инфекция и иммунитет. 2020; 10 (2): 259-268. [Smirnov V.S., Totolyan A.A. Innate immunity in Coronavirus infection. Infection and immunity. 2020; 10 (2): 259-268 (In Russ)]. doi.org/10.15789/2220-7619-III-1440
7. Климов H.A., Симбирцев A.C. COVID-19: особенности патогенеза заболевания и мишени для иммунотерапев-тического воздействия. Медицинский академический журнал. 2020; 20 (3): 75-88. [Klimov N.A., Simbirtsev A.S. COVID-19: features of the disease pathogenesis and targets for immunotherapy. Medical Academic Journal. 2020; 20 (3): 75-88 (In Russ)]. doi:10.17816/MAJ48959
8. Fouladseresht H., Doroudchi M., Rokhtabnak N., et al. Predictive monitoring and therapeutic immune biomarkers in the management of clinical complications of COVID-19. Cytokine Growth Factor Rev. 2020: S1359-6101 (20): 30216-30221. doi: 10.1016/j.cytogfr.2020.10.002
9. Chen N., Zhou M., Dong X., et al. Epidemiological and clinical characteristics of 99 cases of 2019 novel Coronavirus pneumonia in Wuhan, China: a descriptive study. Lancet. 2020; 395 (10223): 507-513. doi: 10.1016/S0140-6736(20)30211-7
10. Yazdanpanah F., Hamblin M.R., Rezaei N. The immune system and COVID-19: Friend or foe? Life Sciences. 2020; 256(1): 117900. doi.org/10.1016/j.lfe.2020.117900
11. Сайганов С.А., Мазуров В.И., Бакулпн И.Г. и др. Клиническое течение, эффективность терапии и исходы новой коронавирусной инфекции: предварительный анализ. Вестник Северо-Западного Государственного медицинского университета им. И.И. Мечникова. 2020; 12 (2): 27-38. [Saiganov S.A., Mazurov V.l., Bakulin I.G., et al. Clinical course, efficacy of therapy, and outcomes of new Coronavirus infection: a preliminary analysis. Bulletin of the Northwestern State Medical University named after I.I. Mechnikov. 2020; 12 (2): 27-38 (In Russ)]. doi: 10.17816/mechnikov202012227-3 8
12. Blanco-Melo I)., Nilsson-Payant B.E., Liu W.-C., et al. Imbalanced host response to SARS-CoV-2 drives development of COVID-19. Journal pre-pro of Cell. Press 2020.04.026. doi: 10.1016/j.cell.2020.04.026
13. Coperchini F., Chiovato /.., Croce /.., et al. The cytokine storm in COVID-19: An overview of the involvement of the chemokine/chemokine-receptor system. Cytokine Growth Factor Rev. 2020; 53: 25-32. doi:10.1016/j.cytogfr.2020.05.003
14. (Jin ('., Zhou /.., Hu Z., et al. Dysregulation of immune response in patients with COVID-19 in Wuhan, China. Clin. Infect. Dis. 2020; pii: ciaa248. doi:10.1093/cid/ciaa248
15. Yufei К, Mingli /.., Xuejiao /.., et al. Utility of the neutrophil-to-lymphocyte ratio and C-reactive protein level for Coronavirus disease 2019 (COVID-19) Scand. J. Clin. Lab. Invest. 2020; 80 (7): 536-540. doi: 10.1080/00365513.2020.1803587
16. Akbari H., Tabrizi R., Lankarani K.B., et al. The role of cytokine profile and lymphocyte subsets in the severity of Coronavirus disease 2019 (COVID-19): A systematic review and meta-analysis. Life Sei. 2020; 258:118167. doi: 10.1016/j .lfs.2020.118167
17. Wang F., Nie J., Wang H., et al. Characteristics of peripheral lymphocyte subset alteration in COVID-19 Pneumonia. J Infect Dis. 2020; 221 (11): 1762-1769. doi: 10.1093/infdis/jiaal50
18. Song J. W., Zhang ('. , Fan X., et al. Immunological and inflammatory profiles in mild and severe cases of COVID-19. Nat Commun. 2020; 11 (1): 3410. doi: 10.1038/s41467-020-17240-2.
19. Zhao В., Zhong M, Yang Q., et al. Alterations in phenotypes and responses of T cells within 6 months of recovery from COVID-19: A Cohort Study. Virol Sin. 2021; 1-10. doi: 10.1007/sl2250-021-00348-0.
20. Mathew D., Giles J.R., Baxter A.E., et al. Deep immune profiling of COVID-19 patients reveals distinct immunotypes with therapeutic implications. Science. 2020; 369 (6508): eabc8511. doi: 10.1126/science.abc851
21. Временные методические рекомендации «Профилактика, диагностика и лечение новой коронавирусной инфекции (COVID-19)». Версия 10 (08.02.2021). [Temporary guidelines "Prevention, diagnosis and treatment of new Coronavirus infection (COVID-19)". Version 10 (08.02.2021) (In Russ)].
22. Хайдуков С.В., Байдун Л.А., Зурочка A.B., Тотолян Арег А. Стандартизованная технология «Исследование субпопуляционного состава лимфоцитов периферической крови с применением проточных цитофлюориметров-анализаторов» (Проект). Медицинская иммунология. 2012; 14 (3): 255-268. [Khaydukov S.V., Baidun L.A., Zuroch-ka A.V., Totolyan Areg A. Standardized technology "Study of the subpopulation composition of peripheral blood lymphocytes with the use of flow cytofluorimctcrs-analyzers" (Project). Medical immunology. 2012; 14 (3): 255-268 (In Russ)]. doi: 10.15789/1563-0625-2012-3-255-268
23. Shi S., Nie В., Chen X., et al. Clinical and laboratory characteristics of severe and non-severe patients with COVID-19: A retrospective cohort study in China. Clin. Lab. Anal. 2021; 35 (1): e23692. doi: 10.1002/jcla.23692
24. Tian S., Ни W., Niu /.. , et al. Pulmonary pathology of early phase 2019 novel Coronavirus (COVID-19) pneumonia in two patients with lung cancer. J. Thorac. Oncol. 2020; 15 (5): 700-704. doi: 10.1016/j.jtho.2020.02.010
25. Chen К, Feng Z, Diao В., et al. The novel severe acute respiratory syndrome Coronavirus 2 (SARSCoV-2) directly decimates human spleens and lymph nodes. MedRxiv. 2020. doi.org/10.1101/2020.03.27.20045427
26. Zheng M., Gao Y., Wang G., et al. Functional exhaustion of antiviral lymphocytes in COVID-19 patients. Cell Mol. Immunol. 2020; 17 (5): 533-535. doi.org/10.1038/s41423-020-0402-2
27. Zheng H.-Y., Zhang M., Yang С.-Х., et al. Elevated exhaustion levels and reduced functional diversity of T cells in peripheral blood may predict severe progression in COVID-19 patients. Cell Mol. Immunol. 2020; 17 (5): 541-543. doi.org/10.103 8/s41423-020-0401 -3.
28. Tan L., Wang Q., Zhang D., et al. Lymphopenia predicts disease severity of COVID-19: a descriptive and predictive study. Signal Transduct. Target Ther. 2020; 5 (1): 33-35. doi.org/10.1038/s41392-020-0148-4
29. Yang X., Yu Y., Xu J., et al. Clinical course and outcomes of critically ill patients with SARS-CoV-2 pneumonia in Wuhan, China: a single-centered, retrospective, observational study. Lancet Respir. Med. 2020; 8 (5): 475-481. doi: 10.1016/S2213-2600(20)30079-5
30. Wang I)., Ни В., Ни С., et al. Clinical characteristics of 138 hospitalized patients with 2019 novel coronavirus-infected pneumonia in Wuhan, China. JAMA. 2020; 323 (11): 1061-1069. doi.org/10.1001/jama.2020.1585.
31. Zhou Z., Ren /.. , Zhang L., et al. Heightened innate immune responses in the respiratory tract of COVID-19 patients. Cell Host Microbe. 2020; 27 (6): 883-890. doi.org/10.1016/j.chom.2020.04.017
32. Potempa L.A., Rajah I.M., Hart P.C., et al. Insights into the use of С - reactive protein as a diagnostic index of disease severity in COVID-19 infections. Am. J. Trap. Med. Hyg. 2020; 103 (2): 561-563. doi: 10.4269/ajtmh.20-0473
33. Chen G., Wu D., Guo W., et al. Clinical and immunological features of severe and moderate Coronavirus disease 2019. J. Clin. Invest. 2020; 130 (5): 2620-2629. doi.org/10.1172/JCI137244
34. Liu В., Han J., Cheng X., et al. Persistent SARS-CoV-2 presence is companied with defects in adaptive immune system in non-severe COVID-19 patients. MedRxiv. 2020. doi. org/10.1101/2020.03.26.20044768
35. Shiow L.R., Rosen D.B., Brdickova N., et al. CD69 acts downstream of interferon-a/ß to inhibit SIP 1 and lymphocyte egress from lymphoid organs. Nature. 2006; 440 (7083): 540-544. doi.org/10.1038/nature04606
36. Fox A., Le N.M.H., Horby P., et al. Severe pandemic H1N1 2009 infection is associated with transient NK and T deficiency and aberrant CD 8responses PLoS One. 2012; 7 (2): e31535. doi: 10.1371/journal.pone.0031535
37. Cifaldi /.., Prencipe G., Caiello I. Inhibition of natural killer cell cytotoxicity by interleukin-6: implications for the pathogenesis of macrophage activation syndrome. 2015; 67 (11): 3037-3046. doi.org/10.1002
38. Табаков Д.В., 'Заботима Т.Н., Борунова A.A. и др. Гетерогенность популяций NK- и NKT-лимфоцитов у здоровых доноров. Медицинская иммунология. 2017; 19 (4): 401-408. [Tabakov D.V., Zabotina T.N., Borunova A.A., et al. Heterogeneity ofNK - and NKT-lymphocyte populations in healthy donors. Medical immunology. 2017; 19 (4): 401-408 (In Russ)]. doi.org/10.15789/1563-0625-2017-4-401 -408
39. Xia S., Tao Y., Cui /.., et al. MHC class I molecules exacerbate viral infection by disrupting type I interferon signaling. J. Immunol. Res. 2019; 2019: 5370706. doi.org/10.1155/2019/5370706.
40. Zhou Y., Fu В., Zheng X., et al. Pathogenic T cells and inflammatory monocytes incite inflammatory storm in severe COVID-19 patients. National Science Review. 2020; 7: 998-1002. doi.org/10.1093/nsr/nwaa041
41. Adams E.R., Ainsworth M., Anand R., et al. Antibody testing for COVID-19: a report from the National COVID Scientific Advisory Panel. Wcllcomc Open Res. 2020, 5:139. doi.org/10.12688/wcllcomcopcnrcs. 15927.1
Поступила в редакцию журнала 15.03.2021 Рецензент: O.B. Шадривова
