CC BY
364
3. свертывание крови: протромбиновое время, АЧТВ, активированное время свертывания крови;
4. оценка функции почек;
5. наркотики и этанол.
Знание и использование принципов доказательной медицины в повседневной клинической практике лабораторной службы ЛПУ позволяет разработать оптимальную организационную концепцию лабораторной диагностики неотложных состояний.
ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНЫЙ ПОДХОД К ОПТИМИЗАЦИИ И АВТОМАТИЗАЦИИ ЛАБОРАТОРНЫХ ПРОЦЕССОВ
В. Б. Островский, М. Л. Свещинский, А. В. Мошкин, В. Панна. Последовательный подход к оптимизации и автоматизации лабораторных процессов. ООО «Сименс», Компания «Интерсистемс», Институт нейрохирургии РАМН, Москва
Рассматривается последовательный «идеальный» подход к оптимизации и автоматизации лабораторных процессов, начиная с внедрения ЛИС, которая позволяет информатизи-ровать многие лабораторные процессы. Наиболее эффективным считается применение ЛИС в лабораториях с потоком от 300 образцов в день. В лабораториях с 1000 образцами и более в день без ЛИС поддержание нормальной скорости и качества работы практически невозможно. К внедрению ЛИС следует относиться не как к привычной «установке» новой технологии (например, анализатора). Это кропотливый процесс, к которому изначально следует относиться как к проекту, который потребует времени и активного участия сотрудников лаборатории.
Уже на этапе внедрения ЛИС возникает необходимость описания существующих лабораторных процессов. Часто внедрение ЛИС приводит к их изменению. Само по себе описание лабораторных процессов дает полезную информацию для руководителя любой даже маленькой лабораторией, но в лабораториях с 1000 образцами и более в день, как правило, возникает острая необходимость анализа процессов, в част-
ности для поиска ресурсов: увеличения производительности, сокращения времени выполнения исследования, сохранения управляемости и качества процесса и т. д. В этой связи наряду с возможностями, которые дает построение Спагетти-диаграмм, будут обсуждены и некоторые другие подходы к описанию и оценке лабораторных процессов. После грамотно проведенного анализа (при наличии соответствующим образом настроенной ЛИС) можно приступать к оптимизации существующих процессов. Часто это приводит к необходимости реконструкции существующей лаборатории.
Необходимость в частичной или полной автоматизации лабораторного процесса обычно возникает в лабораториях с потоком 3000 пробирок и более в день. Так же, как и в случае с ЛИС, к автоматизации исходно следует относиться как к проекту, который требует тщательной подготовки и формулировки конкретной цели (например, сокращение времени выполнения исследования или увеличение эффективности производства лабораторных исследований). Ключевое правило для подобных проектов: анализ существующего лабораторного процесса (при наличии ЛИС), затем его оптимизация и только после этого автоматизация, если это необходимо для достижения поставленной цели.
Будут предложены решения компании «Сименс» для автоматизации и рассмотрены примеры реализации проектов автоматизации конкретных лабораторий.
ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ В ЛАБОРАТОРНОЙ ПРАКТИКЕ
А. А. Новиков, М. В. Черкасова, Е. Н. Александрова, Д. Е. Каратеев, Т. В. Попкова, Е. Л. Лучихина, Г. В. Лукина, Е. Л. Насонов. Диагностическое значение определения аутоан-тител к цитруллинированным белкам при ревматоидном артрите: новые данные. ФГБУ НИИ ревматологии РАМН, Москва
Цель - изучить клиническое значение антител к цитруллинированным белкам (АЦБ): циклическому цитруллиниро-ванному пептиду (АЦЦП) и модифицированному цитрулли-нированному виментину (АМЦВ) при ревматоидном артрите (РА).
Обследованы 993 больных РА (длительностью 121,0±109,2 мес; 754 женщины; средний возраст 49,5±12,1 года). Группу сравнения составили 27 пациентов с системной красной волчанкой: 15 - с синдромом Шегрена, 25 - с анкилозирующим спондилоартритом, 33 - с остеоартритом, 20 - с ОУБКЬАР-синдромом, 9 - с подагрой, 22 - с псориатическим артритом, 28 - с недифференцированным артритом и 30 здоровых доноров. Для определения АЦЦП и АМЦВ в сыворотке крови использовали иммуноферментный анализ, для 1§М ревматоидного фактора (РФ) - лазерную нефелометрию.
Диагностическая чувствительность определения АМЦВ (83%) была выше, чем у АЦЦП (70%) и РФ (67%). АЦЦП
продемонстрировали большую диагностическую специфичность (85%), чем АМЦВ (78%) и РФ (78%). Предсказательная ценность положительного результата для АЦЦП, АМЦВ и IgM РФ составила 90%; предсказательная ценность отрицательного результата - 50, 60 и 46% соответственно. АЦЦП продемонстрировали наилучшее отношение правдоподобия положительного результата (4,8) по сравнению с АМЦВ (3,8) и IgM РФ (3,1). Отношение правдоподобия отрицательного результата было лучшим при определении АМЦВ (0,2), нежели АЦЦП (0,3) или IgM РФ (0,4). АЦЦП и АМЦВ обладали одинаковой диагностической эффективностью (0,8), превышающей таковую IgM РФ (0,7).
Определение АЦБ обладает высокой клинической информативностью при диагностике РА.
Е. Н. Александрова, А. С. Авдеева, А. А. Новиков, М. В. Черкасова, Е. Л. Насонов. Роль антител к цитруллиниро-ванному модифицированному виментину (АМЦВ) в прогнозировании ответа на терапию генно-инженерным биологическим препаратом тоцилизумаб (ТЦЗ) у больных ревматоидным артритом (РА). ФГБУ НИИ ревматологии РАМН, Москва
Цель - изучить влияние базального уровня АМЦВ в сыворотке крови на активность заболевания по индексам DAS
ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ В ЛАБОРАТОРНОЙ ПРАКТИКЕ
28, CDAI, SDAI и прогрессирование деструктивного поражения суставов у больных РА через 24 и 48 нед терапии ТЦЗ.
Обследованы 42 больных РА, получавших по шесть ин-фузий ТЦЗ в дозе 8 мг/кг внутривенно с интервалом 4 нед. СОЭ измеряли по методу Вестергрена, С-реактивный белок (СРБ) и IgM ревматоидный фактор - иммунонефелометри-ческим методом, АМЦВ и матриксную металлопротеиназу (ММП-3) - методом ИФА.
При РА выявлена прямая корреляция базальных уровней АМЦВ с индексами активности DAS28 (r = 0,4, р = 0,02), SDAI (r = 0,35, р = 0,04) и CDAI (r = 0,4, р = 0,02). Среди пациентов с высоко позитивными титрами АМЦВ отмечалось большее количество эрозий и сужений суставных щелей, а также более высокое значение суммарного счета Sharp-Van der Heijde, чем у серонегативных/низкопозитивных по АМЦВ больных РА (р < 0,05). Больные с положительными результатами определения АМЦВ (n = 14) в сыворотке крови с большей вероятностью достигали ремиссии заболевания по индексу CDAI на 24-й неделе терапии ТЦЗ по сравнению с АМЦВ-негативными пациентами (n = 28) (ОШ: 25,3, р = 0,032). К 48-й неделе терапии ТЦЗ частота рентгенологического прогрессирования у больных РА с высокопозитивными титрами АМЦВ (n = 25) (I группа) была ниже таковой у больных, имевших негативные/низкопозитивные титры АМЦВ (n = 8) (II группа) (20 и 50%, р = 0,05), что подтверждено методом логистического регрессионного анализа (ОШ: 64,8, р = 0,03). B I группе пациентов выявлено снижение уровня ММП-3 на 61, 74 и 55% через 4, 24 и 48 нед терапии ТЦЗ (р < 0,05); во II группе изменение концентрации ММП-3 было статистически не достоверным (р > 0,05).
Высокий уровень серопозитивности по АМЦВ можно рассматривать в качестве предиктора развития ремиссии и замедления деструктивного поражения суставов у больных РА на фоне терапии ТЦЗ.
И. А. Гусева, Н. Е. Сорока, Е. Л. Лучихина, Н. В. Демидова, Е. Ю. Панасюк, А. А. Новиков, Е. Н. Александрова, Е. Ю. Са-маркина, Е. В. Федоренко, А. Ю. Девятайкина, Е. Е Губарь, Е. С. Цветкова, Т. Н. Гавва, А. С. Авдеева, Е. С. Позднякова, Г. В. Лукина, Д. Е. Каратеев, Д. Ю. Трофимов, Е. Л. Насонов. Генетика ревматоидного артрита: значимость генетических маркеров в предрасположенности к развитию заболевания, прогнозировании течения и эффективности терапии. ФГБУ НИИ ревматологии РАМН, ГНЦ Институт иммунологии ФМБА России, Москва
Цель - определить роль генетических маркеров в формировании предрасположенности, клинико-иммунологической гетерогенности, прогноза течения ревматоидного артрита (РА) и эффективности терапии базисными противовоспалительными препаратами (БПВП) и генно-инженерными биологическими препаратами (ГИБП).
В исследование включено 336 пациентов с РА (начало болезни - 48,3±13,2 года, длительность болезни - 6,7±5,1 года), из них 123 пациента с длительностью симптомов до включения в исследование менее 2 лет (ранний РА) проспективно обследованы в течение 4 лет. Контрольную группу составили 303 здоровых доноров крови. Детекция полиморфизмов генов PTPN22 +1858С/Т, IL-6-174G/C, IL-6R +358А/С, TNFa-308A/G, TNFAIP3 Т/С (rs675520), TNFAIP3 A/G (rs6920220), МСР-1 +258 A/G, Ш-10-592А/С, -819Т/С, -1082A/G, MTHFR +677C/T, +1298A/C проведена методом ПЦР в реальном времени с использованием флюоресцентно-меченных специфичных гибридизационных праймеров с последующей автоматической оценкой кривых температур плавления на ам-плификаторе ДТ-96 (ЗАО «НПФ ДНК-Технология», Россия). Высокоразрешающее генотипирование аллелей гена HLA-DRB1 осуществлено на автоматическом секвенаторе 3130I Genetic Analyzer (Applied Biosystems).
Установлено, что наиболее значимыми генетическими маркерами предрасположенности к развитию РА являются аллели гена HLA-DRB1, относящиеся к SE (Shared Epitope)
(*0101, *0102, *0401, *0404, *0405, *0408, *10) (хотя бы один SE: OR = 4,1,р < 1 х 10-8; двойной набор SE: OR = 6,2,р < 1 x 10-6) и аллель T гена PTPN22 (OR = 1,9, р < 4 x 10-5) особенно в гомозиготном состоянии (OR = 4,9, р < 0,005). Логистический регрессионный анализ показал, что среди изученных генетических маркеров аллели SE, особенно в сочетании с АЦЦП (антитела к циклическим цитруллинированным пептидам), являются наилучшими предикторами развития и прогрессирования эрозивного процесса в суставах в течение первых двух лет проспективного наблюдения больных с ранним РА. Через 4 года наблюдения прогрессирование деструкции суставов было ассоциировано с полиморфизмом гена MTHFR +677С/Т. Выявлена взаимосвязь полиморфизмов генов МСР - 1 +258 A/G и IL-6-174G/C с серологическими маркерами воспаления (СОЭ, СРБ). В проспективном исследовании клинический ответ на терапию тоцилизумабом был ассоциирован с полиморфизмами генов TNFa-308A/G и TNFAIP3 A/G (rs6920220), ответ на терапию ритуксимабом -с полиморфизмом гена TNFAIP3 Т/С (rs675520).
В результате проведенного исследования выявлен ряд полиморфизмов изученных генов, ассоциированных с предрасположенностью к развитию РА, клинико-лабораторными параметрами и эффективностью терапии ГИБП, которые могут быть использованы в практической медицине.
М. В. Черкасова, А. А. Новиков, Е. Н. Александрова, Д. Е. Каратеев, Т. В. Попкова, Е. Л. Лучихина, Г. В. Лукина, Е. Л. Насонов. Определение антител к цитруллинированным белкам (АЦБ) методом непрямой иммунофлюоресценции (НРИФ) при ревматоидном артрите (РА). ФГБУ НИИ ревматологии РАМН, Москва
Цель - изучить диагностическую точность определения АЦБ (антител к кератину) методом НРИФ при РА.
Было обследовано 144 пациента (106 женщин) в возрасте 47 (33-58) лет с достоверным диагнозом РА. Группу сравнения составили 54 пациента с различными ревматическими заболеваниями и 19 здоровых доноров, сопоставимых по полу и возрасту с обследованными больными. АЦБ определялись следующими методами: непрямой иммунофлюоресценции, иммуноферментным (ИФА), иммунохроматографическим (ИХА), и электрохемилюминесцентным (ЭХЛ).
Метод НРИФ продемонстрировал самые низкие значения диагностической чувствительности (ДЧ) - 31% и специфичности (ДС) - 72% по сравнению с другими методами. Наибольшей ДЧ (84%) обладал метод ИХА, а наибольшую ДС (94%) показал метод ЭХЛ. Отношение правдоподобия положительных результатов для НРИФ был крайне низким (1,1) при этом большинство методов, продемонстрировали высокие и умеренные значения данного показателя: ИФА - 12,1, ЭХЛ - 12, ИХА - 8,5. Отношение правдоподобия отрицательного результата теста для ИФА и ЭХЛ соответствовали «низкому, но в ряде случаев полезному» клиническому значению (0,3), ИХА - «умеренному» (0,2), НРИФ (0,1) - «очень низкому». При оценке площади под кривой (ROC-анализ) все методы, исключая НРИФ (0,5), имели достаточно высокую диагностическую эффективность, максимальное значение продемонстрировал метод ЭХЛ (0,97). НРИФ показала «слабую» согласованность результатов (коэффициент каппа Коэна) с другими методами определения АЦБ.
Определение АЦБ (антител к кератину) методом НРИФ обладает низкой диагностической точностью для диагностики РА.
С. Д. Зайко. Возможности современной КДЛ в диагностике актуальных аутоиммунных патологий. ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва
Внедрение в лабораторную практику современных имму-нохимических методов исследования привело к существенному улучшению качества диагностики аутоиммунных заболеваний (АИЗ), позволяя в ряде случаев диагностировать заболевание на раннем этапе. В настоящее время идентифицировано
большое число антигенов, аутоантитела к которым выявляются при различных АИЗ. Число таких аутоантигенов возрастает с каждым годом. Разработка новых и совершенствование используемых диагностических тестов приводит к выявлению новых маркеров, повышению чувствительности, специфичности и потребительских качеств тест-систем, а также направлено на реализацию оптимального алгоритма диагностики.
Для диагностики многих АИЗ этот алгоритм, как правило, является двухступенчатым. На первом этапе выявляются антитела к полиспецифическому субстрату (например, к антигенам клеточных ядер в непрямой реакции иммунофлюо-ресценции). Второй шаг - использование верифицирующих (и одновременно подтверждающих) тестов, основанных на выявлении антител к индивидуальным антигенам, для точной идентификации заболевания.
Возможности, которыми располагает современная КДЛ для диагностики различных АИЗ, обсуждаются в докладе на примере наборов (ИФА, иммуноблотинг, НРИФ) производства фирмы ЕиКО1ММЦК АО (Германия). Используя самые современные технологии в области иммунохимии и молекулярной биологии, специалисты фирмы сконструировали ряд уникальных антигенов, позволяющих существенно повысить качество тест-систем для выявления соответствующих аутоантител. Оригинальный подход, основанный на использовании как широкого спектра субстратов для реакции непрямой иммунофлуоресценции, так и очищенных рекомбинантных антигенов, привел к созданию диагностических продуктов, позволяющих сочетать скрининговую и верифицирующую составляющие анализа в одном комбинированном тесте.
ПУБЛИКАЦИИ ПО ПРОБЛЕМЕ
А. П. Алексанкин, Е. Н. Александрова, А. С. Авдеева, М. Э. Цанян, М. В. Черкасова. Деплеция В-клеток на фоне терапии ритуксимабом у больных ревматоидным артритом и системной красной волчанкой. ФГБУ НИИ ревматологии РАМН, Москва
Цель исследования - изучить деплецию В-клеток (СВ19+СЭ3-) у больных ревматоидным артритом (РА) и системной красной волчанкой (СКВ), получивших терапию ри-туксимабом (РТМ).
Обследовано 35 больных РА, получавших терапию РТМ внутривенно в дозе 500 мг (35%) и 1000 мг (65%), и 41 пациент с СКВ, получавших терапию РТМ в суммарной дозе 2000 мг (7,3%), 1000 мг (83%) и 500 мг (9,7%). Процентное количество В-клеток (СБ19+СБ3-) в периферической крови определяли методом проточной цитометрии.
К 24-й неделе терапии у 42,8% больных РА наблюдался хороший эффект по критериям ЕЦЬАЛ, у 54,2% - умеренный, у 3% эффект отсутствовал. У ответчиков на РТМ ба-зальный уровень (Ме; интерквартильный размах (ИР): 25-75 квартиль) В-клеток составлял - 7,85% (3,47-12,8%). Депле-ция В-клеток на фоне терапии РТМ достигнута к 4-й неделе у всех больных РА. К 24-й неделе отмечено нарастание уровня В-клеток, более выраженное у ответчиков с умеренным эффектом на РТМ по сравнению с ответчиками, у которых хороший эффект на препарат (0,19% и 0,08%). Достоверное снижение уровня ^О у больных РА, получавших РТМ, наблюдалось к 16-й неделе и составило 18% от исходного уровня. Снижение уровня ^М у больных РА выявлено на 8, 16 и 24-й неделе терапии РТМ и составляло 10, 19 и 20%. У 61% (группа 1) больных СКВ исходное количество В-клеток было снижено - 0,967% (0,17-2,45%). У 39% больных СКВ (группа 2) количество В-клеток было в пределах нормы - 14,61% (9,43-19,37%). Через 1 мес после терапии РТМ у больных из группы 2 полная деплеция достигнута не была СБ19+СБ3- -0,27% (0,05-0,66%), а в группе 1 развилась полная деплеция В-клеток 0% (0-0,1%).
Анализ эффективности терапии РТМ свидетельствует о его способности вызывать полную продолжительную депле-цию В-клеток у больных РА и частичную либо полную де-плецию В-клеток у больных СКВ.
Л. В. Ардатова, А. А. Кравец, В. С. Славогородский. Антитела к ДНК у больных ревматоидным артритом.
Дорожная клиническая больница на ст. Самара ОАО РЖД, Самара
Цель - показать, что антитела к ДНК, ЦИК, иммуногло-
булинам могут быть иммунными критериями патогенетической терапии больных с ревматоидным артритом (РА).
Обследовано 105 пациентов с РА. Возраст от 24 до 60 лет. Из них у 50 больных иммунологическое обследование проводилось в начале и конце стационарного лечения. Контрольную группу составили 60 здоровых лиц. Иммунологическое исследование при РА включало определение в сыворотке крови уровня антител к нативной ДНК, циркулирующим иммунным комплексам (ЦИК), иммуноглобулинам основных классов А, М, О. Антитела к ДНК выявлены у 41,5% обследованных больных. Течение заболевания у этих больных отличалось высокой активностью воспалительного процесса, развитием системных проявлений.
Гиперпродукция антител к ДНК сопровождалась достоверным повышением уровней ЦИК, иммуноглобулинов М, О. Обнаруженные изменения свидетельствуют о напряженности иммунопатологических процессов и тесно связаны с клиническими проявлениями заболеваниями. Применение глюкокортикоидов в сочетании с плазмаферезом 7 (3-5) сеансов привело к значительному снижению ЦИК, иммуноглобулинов М и антител к ДНК.
Положительные иммунные сдвиги сочетались с уменьшением количества СОЭ, повышением уровня гемоглобина.
И. А. Батанина, Е. Н. Воробьева, А. Г. Зальцман, И. А. Подъяпольская, Н. В. Кондакова, М. А. Сковородникова, В. А. Шарапов, Д. С. Фуголь. Диагностика целиакии. НУЗ Отделенческая клиническая больница на ст. Барнаул ОАО РЖД, ГБОУ ВПО Алтайский государственный медицинский университет, Барнаул
Цель работы - комплексная диагностика целиакии. Обследовано 28 детей в возрасте от 6 мес до 6 лет и 8 взрослых в возрасте от 30 до 40 лет. Определяли ^О и ^А к глиади-ну сыворотки крови, а также ^О- и IgA-антител к тканевой трансглютаминазе (АТ ТГлю) иммуноферментным методом наборами реагентов «Хема-Медика» на иммунофермент-ном анализаторе «Униплан-ПИКОН». Окончательное подтверждение диагноз осуществлялось морфометрическим исследованием биоптата тонкой кишки, полученного из постбульбарных отделов двенадцатиперстной кишки при эндоскопическом обследовании. По результатам исследований пациенты были разделены на 3 группы.
В 1-ю группу вошли пациенты с установленным клинически и морфологически диагнозом. Все обследованные соблюдали безглютеновую диету. У этой группы пациентов все иммунологические показатели оказались в норме. Вторую
Публикации по проблеме
группу составили впервые обследованные больные с типичной и атипичной клинической картиной целиакии. У 90% пациентов отмечалось изолированное повышение уровня к глиадину при низких уровнях ^А-АТ ТГлю. Пациенты с длительной диареей без признаков стеатореи составили 3-ю группу и характеризовались нормальными серологическими показателями.
Таким образом, исследование и ^А к глиадину сыворотки крови, а также ^О- и ^А-АТ ТГлю можно рекомендовать, как скрининговый метод формирования групп пациентов, подлежащих морфометрии биоптата слизистой тонкой кишки, а также для контроля за эффективностью безглюте-новой диеты.
Ж. П. Васнева, Н. Н. Бочкарева. Оценка сенсибилизации к йодсодержащим контрастным препаратам. ОАО
Самарский диагностический центр
Цель работы - изучение возможностей различных методов специфической диагностики оценки сенсибилизации к йодсодержащим рентгеноконтрастным препаратам у пациентов с лекарственной непереносимостью (ЛН) в анамнезе.
Обследовали 66 взрослых пациентов с ЛН Поволжского региона за период 2008-2011 гг. Определяли в периферической крови коэффициент сенсибилизации (КС) с помощью СБ45-теста (по динамике антигена СБ45), К+-теста (по выбросу ионов калия) и ЦИК-теста (по уровню преципитирующих иммунных комплексов) к йодсодержа-щим контрастным веществам (омнипак, ультравист, ксене-тикс, визипак, омнискан, сканлюкс и др. ). Результаты обследования показали, что при использовании СБ45-теста повышенные КС (> 0,2) к данным препаратам отмечались в 42,3% (к ультрависту в 44,4%, ксенетиксу в 38%, омнипа-ку в 34,5%, к другим препаратам менее 6%) случаев. При использовании ЦИК-теста повышенные показатели (КС > 0,2) регистрировались в 4% случаев; при использовании К+-теста повышенные значения КС (> 0,2) отмечались в 3,1% случаев. Совпадения положительных результатов, полученных с использованием комплекса из трех данных методов, не отмечалось. Резюмируя результаты проведенного исследования, можно заключить, что при обследовании пациентов с ЛН в плане оценки степени сенсибилизации к йодсодержащим рентгеноконтрастным препаратам наибольшей диагностической информативностью характеризуется СБ45-тест.
Ж. П. Васнева, Т. Л. Кузнецова. Уровни специфических антител к лекарственным препаратам. ОАО Самарский диагностический центр
Цель работы - оценка распределения уровней специфических суммарных (^Б и ^О) антител (АТспец.) к лекарственным препаратам в периферической крови пациентов с лекарственной непереносимостью (ЛН).
Обследовали 844 пациента 15-75 лет с ЛН за 20102011 гг Определяли уровни АТспец. к антибиотикам (АБ: левофлоксацин, цефотаксин, ципрофлоксацин, гентамицин, ампициллин, линкомицин, бисептол, доксициклин, амика-цин, цефазолин, азитромицин), местным анестетикам (МА: ультракаин, септанест, лидокаин, убистезин, брилокаин, новокаин, артикаин, скандонест), витаминам (В В6, никотиновая и аскорбиновая кислота), обезболивающим (анальгин, ке-тонал, диклофенак, кеторол) и гормонам (преднизолон, дек-саметазон, инсулин) с использованием иммуноферментных тест-систем (ИФТС) («Иммунотэкс», Россия). Повышенные (> 50,0 КЕ/л) АТспец. к АБ отмечались в 46,2% (50-100 КЕ/л - 27%; 100-200 КЕ/л - 9%; > 200 КЕ/л - 10%); к МА - в 71,1% (31,4, 20,6, 19,1%); к обезболивающим - в 39,3% (27,1, 9,3, 2,4%); к витаминам - в 36% (27,1, 6,2, 2,6%); к гормонам - в 55,6% (34, 11,7, 10%) случаев соответственно. Наиболее часто среди АБ повышенные АТспец. отмечались к ампициллину, цефотаксину, ципрофлоксацину (каждый по 60% случаев) среди витаминов - к В1 и В6 (по 57,6% случаев
каждый), среди обезболивающих - к кеторолу (33,3% случаев), среди гормонов - к инсулину (48,6% случаев), среди МА распределение повышенных уровней АТспец. носило равномерный характер.
Таким образом, наиболее часто повышенные уровни АТ -спец. наблюдались в тест-системе с МА и гормональными препаратами.
Ж. П. Васнева, И. Г. Ясько, Л. В. Беляева. Специфический иммунитет у пациентов с профессиональной аллергией. ОАО Самарский диагностический центр
Цель работы - оценка доминирующей сенсибилизации у пациентов с профессиональными аллергическими заболеваниями, работающих в медицине и других отраслях.
Обследовали 292 медицинских работника с профессиональной бронхиальной астмой (ПБА) (2004-2008 гг., группа 1) и 179 пациентов с профессиональными аллергическими заболеваниями (2009-2011 гг., группа 2). В периферической крови определяли уровни общего ^Б («Хе-ма», Россия), специфических ^Б-антител к латексу (Л), хлорамину Т (X) и формальдегиду (Ф) (спец. ^Б-АТ, «Др. Фуке», Германия), коэффициент сенсибилизации (КС) с помощью СБ45-теста к этим же веществам (по уровню экспрессии антигена СБ45 в опытной пробе относительно контрольной с физиологическим раствором).
В 1-й группе уровень общего ^Б составил 87,45±72,1 МЕ/мл, повышенные показатели отмечались в 20,3% случаев; во 2-й - 149,0±112,2 МЕ/мл, повышенные показатели - в 21,6% случаев. Повышенные уровни спец. ^Б - АТ (> 0,35 1и/мл) к Ф, X и Л 1-й группе отмечались в 28, 42 и 30% случаев, во 2-й - в 50, 26,5 и 23,5% случаев соответственно. Частота встречаемости повышенных значений КС к Ф, X и Л (> 0,2) в группе 1 составила 18,75, 62,5 и 18,75%; в группе 2 - 33, 2 и 4% случаев соответственно.
Резюмируя результаты проведенного исследования можно заключить, что у медицинских работников с ПБА доминирует сенсибилизация к хлорамину, в других отраслях у работников с профессиональной аллергией наиболее часто наблюдается повышенная сенсибилизация к формальдегиду и латексу.
И. А. Газиева. Прогностическая значимость регуляторов функционального состояния эндотелия для оценки риска развития плацентарной недостаточности. ФГБУ НИИ ОММ Минздравсоцразвития РФ, Екатеринбург
С целью определения прогностической значимости некоторых регуляторов и маркеров функционального состояния эндотелия для оценки риска развития плацентарной недостаточности (ПН) проведено клинико-иммунологиче-ское обследование 83 женщин в первом триместре беременности. Основную группу составили 38 женщин с диагностированной ПН, в группу сравнения вошли 45 женщин с неосложненным течением всего периода гестации. Оценку содержания цитокинов, белков острой фазы, эндотелина-1 осуществляли методом ИФА. Проверку статистических гипотез осуществляли с помощью непараметрического ^-критерия Манна-Уитни. Содержание эндотелина, обладающего мощной вазоконстрикторной активностью, в основной группе превышало аналогичный показатель группы сравнения практически в 2 раза (1,37±3,95 фмоль/мл против 0,16±0,44 фмоль/мл). Роль активаторов эндотелия могут выполнять различные субстанции, в том числе молекулы адгезии, цитокины, белки острой фазы. Содержание ТОТ-а и 1Ь-6 в основной группе было статистически значимо выше (9,72±2,01 и 4,48±1,44 пг/мл против 7,24±2,51 и 3,28±0,96 пг/мл соответственно), что свидетельствует об активации системы врожденного иммунитета и воспалительной направленности иммунного реагирования. В основной группе женщин выявлено также увеличение концентрации СРБ, одного из наиболее динамичных реактантов воспаления (4,55±2,61 мг/мл против 3,27±1,66 мг/л), на фоне снижения
уровня лактоферрина, который, как известно, является мощным антиоксидантом (1857±1010 нг/мл против 2400±1155 нг/мл). Оксидативный стресс является одним из главных триггерных механизмов активации эндотелия, возникающих вследствие снижения антиоксидантной защиты. Нарушение иммунологической регуляции процессов плацента-ции, опосредованное гиперпродукцией провоспалительных цитокинов и острофазным ответом, может приводить к дисфункции эндотелия, играющей важную роль в становлении гемодинамической системы фетоплацентарного комплекса. В целом регуляторы функционального состояния эндотелия обладают предикторной значимостью в оценке риска формирования перинатальной патологии.
З. Р. Гарипова, Р. Р. Шамилов, Р. М. Гарипов, А. Ж. Гиль-манов. Прогностическое значение иммунологических показателей у больных острым деструктивным панкреатитом. ГБОУ ВПО Башкирский государственный медицинский университет Минздравсоцразвития РФ, Уфа
Некроз ткани поджелудочной железы при остром деструктивном панкреатите (ОДП) и вторичное инфицирование очагов деструкции вызывают синдром системного воспалительного ответа (ССВО), определяющий тяжесть и прогноз заболевания. Существенную роль в развитии гнойно-септических осложнений и генерализации инфекции, по мнению ряда авторов, играет вторичный иммунодефицит. Среди причин иммуносупрессии при ОДП можно назвать действие продуктов распада тканей - панкреатоген-ных токсинов, нарушения механизмов гуморальной регуляции иммунитета и возникающую компенсаторную противовоспалительную реакцию.
Обследовали 108 больных ОДП в возрасте от 21 года до 72 лет, находившихся на стационарном лечении в больнице скорой медицинской помощи Уфы и клинике БГМУ. У пациентов определяли активность панкреатических ферментов в крови (амилиза, липаза), моче и перитонеальном экссудате (амилаза), гематологические и биохимические показатели (лейкоциты, ЛИИ, гематокрит, глюкоза, билирубин, мочевина, креатинин, общий белок, альбумин, АЛТ, ACT, ЛДГ, Na, Са, С1, рН крови). Иммунологические показатели (спонтанный и индуцированный НСТ-тест, общий IgA, IgG, IgM, количество лимфоцитов, CD3+- и СБ20+-клеток) оценивали по шкале отклонений, принятой в НИИ скорой медицинской помощи им. Н. И. Склифосовского.
Оценка состояния иммунной системы у 34 больных ОДП показала, что прогностически наиболее неблагоприятными признаками в отношении развития гнойно-септических осложнений, прогрессирования ССВО и полиорганной недостаточности являются снижение уровня иммуноглобулинов, недостаточная метаболическая активность нейтрофилов и дефицит лимфоцитов. Маркерами формирования вторичной иммунной недостаточности было не только снижение, но и чрезмерное повышение отдельных показателей у пациентов. Вместе с тем индивидуальный анализ минимальных и максимальных величин иммунных параметров у пациентов с осложнениями ОДП показал их значительную вариабельность; колебание значений отдельных параметров иммуно-граммы в пределах 2 SD и более наблюдалось у 70-80% пациентов этой группы.
Оценка состояния иммунитета по шкале отклонений показала, что при благоприятном течении основного заболевания сумма баллов у пациента варьировала от 0 до 6 (в среднем 2,4±0,3), при тяжелом течении ОДП - в среднем 3,6±0,6 балла. При развитии гнойно-септического процесса и/или полиорганной недостаточности сумма оценочных баллов варьировала от 8 до 21 (в среднем 12,2±0,6).
Таким образом, комплексная балльная оценка состояния иммунитета позволяет объективно оценивать тяжесть ОДП в ранние сроки, а также прогнозировать его течение, отвечая на важнейший для клинициста вопрос о вероятности развития сепсиса и полиорганной недостаточности.
Ф. Н. Гильмиярова, Е. А. Шахнович, Н. А. Колотьева, Н. С. Нефедова, И. Ф. Сидорова, А. А. Епифанова, Н. И. Гер-гель. Оценка иммуногенетических особенностей донорской крови. ГБОУ ВПО Самарский государственный медицинский университет Минздравсоцразвития РФ
Для обеспечения иммунологической безопасности гемо-трансфузий необходимо совершенствовать методы подбора донора и реципиента.
Цель - исследование антигенных систем эритроцитов (AB0, Rh, Kell), лейкоцитов (HLA I, II класса), тромбоцитов (НРА), содержания антиэритроцитарных антител (Rh, Kell, Lewis, Duffy, MNSs) в крови клинически здоровых лиц.
Обследовано 5673 донора. Исследования выполняли на автоматическом комплексе для иммуногематологических исследований «Хемос СП» «Bio-rad laboratories». Генотипирова-ние систем антигенов лейкоцитов (HLA) и тромбоцитов (НРА) проводили методом ПЦР на приборе Bee-Blot 48 (Invitrogen).
Определена частота встречаемости фенотипов системы резус, которая имеет региональную специфику. Наиболее часто встречались фенотипы C+c+Cw-D+E-e+; C+c-Cw-D+E-e+; C+c+Cw-D+E+e+; C-c+Cw-D+E+e+. С частотой менее 5% - C-c+Cw-D+E+e-, C-c+Cw-D+E-e+, C+c-Cw+D+E-e+, C+c+Cw+D+E-e+, C+c+Cw+D+E+e+, с частотой менее 1% - C+c-Cw-D+E+e+, C+c+Cw-D+E+e-, C-c+Cw+D+E+e+, C-c+Cw+D+E-e+, C+c-Cw+D+E+e+. Высокой иммуногенно-стью обладают наиболее редкий антиген Cw, антитела к нему определены у 6% доноров, и антигены системы Kell, антитела к ним выявлены у 12% доноров.
Рекомендуется в перечень лабораторных исследований для пациентов, нуждающихся в гемотрансфузиях, включить определение антигенов системы АВ0, антигена D, фенотипа С, с, Е, е, Cw, Du, антиэритроцитарных антител. При многократных гемотрансфузиях в перечень иммуногематологиче-ских обследований пациентов необходимо включить гено-типирование антигенов системы HLA 1 и 2 класса, системы антигенов тромбоцитов НРА.
Д. А. Дятлов, M.A. Вандышева, Б. Г. Яровинский, Е. Д. Пуш-карев, В. П. Пушкарев, Е. В. Леконцев, В. Ю. Вишнев, А. В. Дегтярев. Показатели гуморального иммунитета хоккеистов в условиях хронической холодовой адаптации. Уральский ГУФК, НИИОС, ГБОУ ВПО Челябинская ГМА
Цель - изучение особенностей гуморального звена иммунитета у хоккеистов в условиях хронической холодовой адаптации.
Обследовано 134 спортсмена-хоккеиста 9-18 лет в период общей физической подготовки. В венозной крови определяли концентрацию IgE, IgG, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, ИЛ-4, ИЛ-8, ИНФ-а, ФНО-а, ат-ТГ, ат-ТПО. Обследование проводили методом ИФА (Micro Reader 4, Hyperion, США) наборами реактивов ЗАО «Вектор-Бест». Обследованные были разделены на две группы. 1-я группа - 114 (85,1%) спортсменов, уровень IgE в норме, 2-я - 20 (14,9%) юношей с IgE, превышающим нормальные значения, 3-я (группа сравнения) - 20 больных атопическим дерматитом в фазе клинического обострения. Статистическую обработку результатов проводили по программе BIOSTAT, критерий Вилкоксона-Манна-Уитни.
Статистически значимых различий исследуемых компонентов между 1-й и 2-й группой не установлено. Статистические различия были выявлены при сравнении 2-й и 3-й группой обследованных (p < 0,020) по содержанию IgE, IgG1, IgG2, IgG3, ИЛ-4, ИНФ-а, ат-ТГ.
Статистическая зависимость между 2-й и 3-й группой обусловлена отсутствием на момент обследования клинических симптомов атопии у спортсменов. Отсутствие статистических отличий между 1-й и 2-й группой может быть связано с длительными процессами холодовой адаптации. Целесообразно дальнейшее изучение механизмов адаптации спортсменов зимних видов спорта.
Е. О. Кошель, И. И. Долгушин, С. В. Квятковская, О. В. Маркина. Дифференциальный подсчет лейкоцитов пупо-винной крови с использованием системы Cytodiff. Клиника ГБОУ ВПО Челябинская государственная медицинская академия Минздравсоцразвития РФ
Одним из современных методов в иммунологии является дифференциальный подсчет лейкоцитов с помощью проточной цитометрии на базе платформы Су1оВ1й'.
Цель исследования - изучение гематологических и иммунологических показателей пуповинной крови новорожденных детей и сравнение 2 групп пациентов: новорожденных от матерей с хроническими вирусными инфекциями и от здоровых беременных.
В работе была исследована пуповинная кровь 51 доношенного новорожденного. Определение гематологических показателей и состава лейкоцитов ПК производили на гематологическом анализаторе АсТ В11Г с определением 18 параметров, количество субпопуляций лейкоцитов определяли по экспрессии мембранных маркеров с использованием специально разработанной платформы на базе реактива Су1оБ1££ при помощи проточной цитометрии.
Установлено, что в сравниваемых группах есть статистически значимое отличие по величине гематокрита. Большинство иммунологических параметров у детей, рожденных от матерей с хронической вирусной инфекцией, находились в пределах значений, полученных от условно здоровых беременных.
Быстрота выполнения анализа, его легкость и малые объемы пробы позволяют с помощью системы Су1оБ1££ работать с очень ценным диагностическим материалом, в том числе и с пуповинной кровью, получаемый объем которой не превышает 80 мл.
И. В. Кудаева. Лабораторные исследования в аллерго-диагностике на примере обследования подростков. Ангарский филиал ФГБУ «ВСНЦ ЭЧ» СО РАМН
В диагностике аллергических заболеваний лабораторные методы исследования играют в большей степени вспомогательную функцию. Для диагностики аллергических реакций первого типа применяют количественное определение общего иммуноглобулина Е (1§р) и специфических ^Б, а при подозрении на аллергический ринит дополнительно микроскопическое исследование назального секрета. Цель исследования - установление корреляции между результатами аллергологических лабораторных методов исследования, используемых в практической деятельности врачей аллергологов-иммунологов. У 200 подростков в возрасте 14-16 лет было проведено исследование назальной слизи, концентрации общего ^Б при помощи классического «сэндвич» ИФА и аллерген-специфических ^Б методом твердофазного ИФА с жидкими биотинилированными аллергенами. Уровень корреляции между количественными показателями рассчитывали с помощью коэффициента Спирмена. Проведенные исследования назальной слизи позволили установить, что в обследуемой выборке 37,5% (71 из 189) подростков имели признаки увеличения активности аллергической реакции. В 48% (34 из 71) случаев повышение уровня эозинофилов в назальной слизи не сопровождалось увеличением концентрации общего ^Б в сыворотке крови выше референсного уровня. Повышенный уровень общего показателя имели 32% (54 из 169) всех обследуемых. У 48% (26 из 54) подростков было зарегистрировано наличие нескольких лабораторных признаков сенсибилизации. Следует отметить, что выявленная сенсибилизация к одному из аллергенов не сопровождалась нарушением соотношения клеточных элементов в назальной слизи. У обследуемых с повышенным уровнем общего ^Б 60% (43 из 72) проб имели нормальный уровень специфических ^Б. Не обнаружено ни одной статистически значимой корреляционной связи между концентрацией общего ^Б и уровнем сенсибилизации к какому-либо из вышеперечисленных аллергенов. Полученные результаты подтверждают не-
обходимость проведения комплексных лабораторных исследований в аллергодиагностике патологических состояний.
М. А. Леонова, Н. Б. Захарова, Н. А. Слесаренко, О. В. Зан-кина. Биомаркеры в стандартах лабораторного обследования больных розацеа. ГБОУ ВПО Саратовский ГМУ им. В. И. Разумовского Минздравсоцразвития РФ
Современные представления о молекулярных механизмах развития розацеа позволяют отнести данное заболевание в группу ангиопролиферативных болезней, в основе которых лежит активация воспаления и ангиогенеза. Это делает необходимым внесение в стандарты лабораторного обследования пациентов с розацеа показателей нарушения иммунорегуляторных процессов и ангиогенеза. С целью изучения особенностей формирования иммунопатологических сдвигов и нарушения процессов ангиогенеза у больных розацеа проведена сравнительная оценка цитокинового статуса и факторов роста в сыворотке крови у 140 лиц, из которых в группу сравнения вошло 55 больных больных с хроническим Helicobacter ру1оп (НР)-ассоциированным гастритом (группа сравнения) и 55 пациентов с розацеа, развитие которой связано с предшествующим хроническим HP-ассоциированным гастритом (основная группа). Контрольную группу составили 30 практически здоровых лиц. Всем обследованным, помимо общелабораторных исследований, проводили эзофагогастродуоденоскопию с прицельной биопсией слизистой оболочки антрального отдела и тела желудка (не менее трех биоптатов), определение в сыворотке крови пепсиногена I, пепсиногена II, гастрина-17 и антител к НР-инфекции.
Для оценки состояния иммунорегуляторных систем и активности процессов ангиогенеза проведено определение содержания цитокинов и факторов роста в сыворотке крови: ИЛ-8, ИЛ-10, ИЛ-6, ИЛ-10, ИЛ-17 и ФРЭС (фактор роста эндотелия сосудов) с помощью метода твердофазного имму-ноферментного анализа с использованием диагностических наборов (производства ЗАО «Вектор-Бест», Новосибирск). Результаты исследования показали, что одним из наиболее значимых факторов развития розацеа является хронический НР-ассоциированный гастрит, способствующий изменению состояния основных механизмов иммунной защиты. У больных с хроническим HP-ассоциированным гастритом клинические проявления заболевания развиваются на фоне нарастания выхода в кровоток как про-, так и противовоспалительных цитокинов. У больных с розацеа в кровотоке нарастает содержания таких хемокинов, как ИЛ-8, ИЛ-17 и ИЛ-10. У пациентов с хроническим НР-ассоциированным гастритом без и с розацеа нарушение иммунорегуляторных процессов сопровождается активацией ангиогенеза, связанным с подъемом в сыворотке крови ФРЭС. Наибольшую чувствительность и специфичность из расчетных показателей соотношения степени нарушения процессов иммунорегуля-ции и ангиогенеза имеет расчет соотношения ИЛ-17/ФРЭС для оценки клинических проявлений нарастания микроцир-куляторных расстройств у больных розацеа. Предложено для оценки тяжести у больных розацеа оценивать степень нарушений микроциркуляции кожи количественным определением содержания в сыворотке крови ИЛ-17, ФРЭС и расчета соотношения ИЛ-17/ФРЭС.
Л. Ю. Островская, Н. Б. Захарова, Д. В. Воробьев. Место молекулярных маркеров в стандартах лабораторного обследования пациентов с хроническим пародонтитом на фоне остеопороза. ГБОУ ВПО Саратовский ГМУ им. В. И. Разумовского Минздравсоцразвития РФ
В настоящее время установлено, что при распространении воспалительного процесса у больных хроническим па-родонтитом (ХП) вокруг верхушки зуба апикальные пучки волокон связки разрушаются, замещаясь компактным скоплением клеток хронического воспалительного инфильтрата. Рядом исследований показано, что определение молекуляр-
ных маркеров остеогенеза и ангиогенеза может быть одной из значимых характеристик степени повреждения не только тканей пародонта, но альвеолярной кости.
Цель исследования - установить значение молекулярных маркеров, определяемых в десневой жидкости, для оценки процессов воспаления и деструкции в тканях па-родонта.
Обследованы 50 больных ХП (I группа - без остеопоро-за, II - с остеопорозом). Контрольную группу составили 10 лиц без заболеваний пародонта. Изучено содержание IL-17, IL-18, МСР (моноцитарный хемоаттрактантный протеин), VEGF (фактор роста эндотелия сосудов) методом твердофазного иммуноферментного анализа с использованием наборов реактивов ЗАО «Вектор Бест».
У больных ХП уровень IL-17, МСР, VEGF был выше в обеих группах по сравнению со здоровыми лицами, причем у больных II группы достоверно выше, чем у больных без остеопороза. Выявлено, что увеличение содержания в дес-невой жидкости изучаемых цитокинов коррелировало с тяжестью клинических проявлений пародонтита (гИЛ = 0,622; гил 18 = 0,574). То есть при ХП на фоне активности выработки ИЛ-17 провоспалительных цитокинов усиливается активность остеокластов и перестройка альвеолярной кости развивается одновременно с обострением воспалительного процесса в пародонте. У пациентов с ХП на фоне остеопороза наиболее выражена активность процессов ремоделирования костной ткани.
Таким образом, количественное определение молекулярных маркеров ремоделирования костной ткани в десневой жидкости является информативным неинвазивным методом, позволяющим мониторировать активность воспалительного процесса в тканях пародонта, оценивать прогноз ХП.
А. И. Пиянзин, О. В. Назаровская, Е. Н. Жукова, И. Ф. Зайцев, В. А. Белоусов, Е. В., Иванов, М. Р. Сапкина. Клини-ко-лабораторная диагностика гельминтозов в многопрофильной детской больнице. КГБУЗ Алтайская краевая клиническая больница, Алтайский государственный медицинский университет, Барнаул
В настоящее время вследствие ряда социально-экономических причин заболеваемость населения глистными инвазиями в Российской Федерации возрастает. Наиболее часто подвержены заражению гельминтами дети, и педиатру нередко приходится дифференцировать глистные инвазии с целым рядом других заболеваний.
Цель исследования - оценить в многопрофильной детской больнице соответствие диагностики глистной инвазии стандартам лабораторной медицины и определить процент выявления наиболее часто встречающихся гель-минтозов.
Работа выполнена в клинико-диагностической лаборатории Алтайской краевой клинической детской больницы. Диагностику гельминтозов проводили следующими методами: определением в сыворотке крови иммуноглобулинов различных классов к антигенам паразитов (наборы реагентов для иммуноферментного анализа ЗАО «Вектор-Бест»), микроскопии кала и соскоба.
Частота выявления маркеров глистных инвазий составляла: иммуноглобулины А, М, G к антигенам лямблий - 18,4%, иммуноглобулины G к антигенам токсокар - 10,7%, иммуноглобулины G и M к антигенам описторхисов - 3,5%, специфические циркулирующие иммунокомплексы, содержащие антигены описторхисов - 16,7%, иммуноглобулиноы G к антигенам Ascaris lumbricoides - 9,1%. Методом микроскопии выявлены острицы -1,8%, яйца описторхисов - 0,04%, цисты - 0,3%.
Высокий процент диагностики гельминтозов в многопрофильной детской больнице свидетельствует о необходимости улучшения организации проведения лабораторных исследований при диспансеризации и профилактических осмотрах детей с целью выявления глистных инвазий.
А. И. Пиянзин, Е. А Назарчук, Е. В. Иванов, П. И. Антропова, О. Г. Симонова, И. А. Карбышев, В. А. Лещенко. Возрастные особенности выявления у детей аллерген-специфических антител класса Е. Алтайский государственный медицинский университет, КГБУЗ Диагностический центр Алтайского края, Барнаул
Аллергия является наиболее распространенной формой нарушения иммунного реагирования детского организма. Для успешного лечения и профилактики педиатру очень важно выявить этиологию аллергического заболевания.
Цель исследования - определить в каком возрасте в расчете на одного ребенка выявляется наибольшее количество специфических антител IgE и к каким аллергенам наиболее часто они вырабатываются.
Было обследовано 103 ребенка с различными аллергическими заболеваниями в возрасте от рождения до 9 лет. В сыворотке крови определяли аллерген-специфические Ig Е (набор реагентов для иммуноферментного анализа «ИммуноФА-Аллерген», ЗАО «НВО Иммунотех»).
Из 13 ингаляционных аллергенов антитела IgE выявлены к десяти - клещам домашней пыли D. pteronyssinus и D. farinae, эпидермису и шерсти собак и кошек, тараканам, кандида, березе, полыни, амброзии, одуванчику. Из 13 пищевых аллергенов антитела IgE выявлены к пяти - белку куриного яйца, молоку коровьему, арахису, пшеничной муке, апельсинам. Наиболее часто определяли антитела IgE к следующим аллергенам: клещам домашней пыли D. pteronyssinus и D. Farinae -23,5%, эпидермису и шерсти собак - 34,3% и кошек - 17,7%, тараканам - 25,5%, белку куриного яйца - 20,6%, молоку коровьему - 15,6%, арахису - 20,6%, пшеничной муке - 23,5%. К другим аллергенам процент обнаружения антител IgE был менее 10. По количеству выявленных на одного ребенка аллерген-специфических IgE выделяют 2 возрастные группы: 1-3 года (2 аллергена) и 6-7 лет (3 аллергена).
Использование с учетом возраста ребенка лабораторных тестов определения аллерген-специфических IgE позволяет на ранних сроках заболевания проводить современную специфическую иммунотерапию.
И. В. Решетников, В. Э. Цейликман, С. В. Квятковская. Определение посредством проточной цитометрии и системы CytoDiff уровней субпопуляций лейкоцитов у больных ВИЧ-инфекцией. ГБУ ВПО Челябинская государственная медицинская академия Минздравсоцразвития РФ
В данной работе мы изучали соотношение между субпопуляциями лейкоцитов у ВИЧ-инфицированных лиц с использованием современной системы CytoDiff (Beckman Coulter). Система CytoDiff основана на использовании проточного цитометра, гематологического анализатора и соответствующего программного обеспечения.
Цель - выявить особенности распределения нейтрофи-лов, эозинофилов, базофилов, моноцитов, Т-, В-, NK-клеток (зрелых и предшественников) у больных ВИЧ-инфекцией.
Контрольную группу составили 32 условно здоровых донора, опытную - 185 человек с ВИЧ-инфекцией, Подсчет клеток проводили на проточном цитометре Beckman Coulter FC 500 с использованием панели реагентов CytoDiff (CD36-FITC/ CD2-PE/ CD294 (CRHT2)-PE/ CD19-ECD/ CD16-PC5/ CD45-PC7). Количество Т-хелперов определялось с помощью панели моноклональных антител CD45-FITC/CD4-RD1/ CD3-PC5.
В крови ВИЧ-инфицированных выявлено снижение количества В-лимфоцитов и Т-хелперов, повышение количества моноцитов CD16+, незрелых гранулоцитов, В-бластов и Т-лимфоцитов относительно показателей крови условно здоровых доноров.
Использование системы CytoDiff совместно с традиционным СЭ4-типированием позволило осуществить эффективный мониторинг иммунного статуса у пациентов с ВИЧ-инфекцией.
Л. А. Сайгушева, С. Н. Нохрина, А. В. Куяров, Е. В. Чегрин-цева. Информативность показателей иммунного статуса при вторичных иммунодефицитных состояниях у детей в условиях Севера. ГБОУ ВПО Сургутский государственный университет ХМАО-Югры, БУ ХМАО-Югры Окружной кардиологический диспансер «Центр диагностики и сердечнососудистой хирургии», Сургут
С целью оценки информативности показателей иммунного статуса при вторичных иммунодефицитных состояниях у детей в условиях Севера проведено исследование общего анализа крови и иммунограмм у 181 ребенка в возрасте от 3 до 8 лет, родившихся и проживающих в Сургуте с клиническими проявлениями вторичных иммунодефицитных состояний. Исследования проведены методом проточной ци-тофлюометрии («Факскалибур») и лазерной нефелометрии с определением Т- и В- лимфоцитов и их субпопуляций, иммуноглобулинов А, М, G и подклассов IgG. При статистической обработке результатов использованы методы последовательной диагностической процедуры А. Вальда и математической теории связи К. Шеннона.
Данные общего анализа крови и иммунограммы взяты в отделении клинической иммунологии и аллергологии ХМАО Югры Окружного кардиологического диспансера «Центр диагностики и сердечно-сосудистой хирургии».
Установлено, что у детей Севера содержание эозинофи-лов и сегментоядерных клеток находится в пределах верхней границы нормы. Содержание моноцитов значительно меньше показателей нормы.
У детей Севера отмечено иммунодефицитное состояние, которое проявляется снижением как предшественников Т-лимфоцитов (CD3), так и последующим низким содержанием Т-хелперов и Т-супрессоров относительно показателей группы сравнения.
Отмечен существенный супрессорный эффект, который проявляется нарушением соотношения супрессоров и хелпе-ров (повышенное содержание Т-супрессоров CD8, относительно снижения содержания Т-хелперов).
Увеличенное содержание В-лимфоцитов (CD19) сопровождается низкой плазматической активностью, что наблюдается в значительном снижении содержания IgG.
Исследования иммунного статуса проведены методом проточной цитофлюометрии (цитофлюориметр «Факскали-бур») фирмы Бектон Дикинсон (США) и лазерной нефелометрии с определением Т- и В-лимфоцитов и их субпопуляций, иммуноглобулинов A, M,G и подклассов IgG.
Ю. Г. Сысоева, Е. К. Псарева. Встречаемость антигена К системы Келл у доноров-мужчин, проходящих службу на флоте; связь данного антигена с группами крови системы АВ0. ФБУ «1477 ВМКГ флота», станция переливания крови, Владивосток
Система антигенов Келл - сложная полиаллельная система антигенов эритроцитов. Она состоит из 25 антигенов, наиболее изученным и иммуногенным из которых является антиген К. Сенсибилизация к антигену К является причиной гемолитического трансфузионного осложнения. В настоящее время скрининг на антиген К проводится у всех доноров крови (приказ Минздрава РФ № 2 от 09.04.98).
Цель - определить частоту встречаемости антигена К у молодых мужчин, выявить его связь с группами крови системы AB0.
Использовали данные отчетной документации, включая ф. 22 «Карта донора» за период с 2009 по 2011 г. антиген К определяли методом агглютинации на плоскости в нативной крови без консерванта с использованием моноклональных человеческих анти-К-антител («Эритротест™ Цоликлон анти-Ке11-супер ООО Гематолог»). Типирование крови было проведено у 2983 доноров-мужчин из разных регионов страны за период 2009-2011 гг.
Антиген К обнаружен у 173 человек. 0(1) группа крови выявлена у 931 человека, A(II) группа крови - у 1034, B(III)
группа крови - у 695, AB(IV) группа крови - у 323. Антиген К найден в 0(1) группе крови у 55 (5,9%) человек, в A(II) группе крови у 58 (6,6%), в B(III) группе крови у 39 (5,6%), в AB(IV) группе крови у 21 (6,5%). По данным отечественных авторов (Полянов В. С. и др.), популяционная частота встречаемости антигена К составляет 3-12%, зарубежных (Makarovska-Bojadzieva T. et al.) - 6,4%. Таким образом, учитывая высокую иммунизационную активность антигена К, тестирование доноров крови на систему антигенов Келл должны быть обязательным стандартом.
Антиген К встречается с одинаковой частотой у доноров-мужчин с разными группами крови (5,6-6,5%). Наличие антигена К не связано с группами крови системы АВ0.
Г. Н. Чистякова. Возможности использования определения спонтанной и митоген-индуцированной продукции цитокинов в клинической практике. ФГБУ «НИИ ОММ» Минздравсоцразвития РФ, Екатеринбург
Одну из ключевых ролей в развитии иммунопатологических состояний играет нарушение синтеза продуктов активации иммунокомпетентных клеток. Уровень цитокинов в кровеносном русле отражает текущее функциональное состояние иммунной системы, тогда как тестирование клеток-эффекторов иммунного ответа на способность к выработке ре-гуляторных пептидов характеризует функциональный резерв иммунной системы, что важно для оценки иммунологической реактивности. С целью определения продукции цитокинов при патологических состояниях проведено обследование женщин на ранних сроках гестации, беременность которых впоследствии осложнилась плацентарной недостаточностью (n = 20), задержкой внутриутробного роста плода (n = 15), самопроизвольным выкидышем в сроке 10-20 нед (n = 11). Группу сравнения составили 18 женщин. Для оценки продукции цитокинов клетками цельной крови использовали набор реагентов «Цитокин-Стимул-Бест». Результаты выражали в медианах (Me). Установлено, что ранние сроки беременности независимо от изученных исходов характеризуются повышенным в 1,3-1,5 раза синтезом IFN-y. С увеличением степени тяжести осложнений гестации в патологический процесс вовлекается все большее количество нарушений на уровне продукции отдельных цитокинов, наиболее значимые выявлены в ранние сроки беременности, закончившейся самопроизвольным выкидышем: снижение спонтанной продукции IL-2 (11,9 пг/мл против 16,3 пг/мл) и TNF-a (2,5 пг/мл против 26,5 пг/мл), обладающих наряду с провоспалительным анги-огенным действием, регуляторного IL-10 (2,24 против 5,9 пг/ мл) и усиление индуцированного синтеза провоспалитель-ных IL-2 (150,7 пг/мл против 39,8 пг/мл) и IL-8 (34855 пг/мл против 16195 пг/мл). Нарушенная цитокинпродуцирующая активность иммунокомпетентных клеток может играть ключевую роль в гиперактивации эндотелия, обусловливающей тромботические осложнения, реализующиеся в прерывании беременности. В связи с этим изучение иммунологической реактивности ex vivo при беременности для выявления ранних предикторов возможных осложнений является перспективным направлением дальнейших исследований.
А. В. Чоляхян, Г. В. Коршунов, Н. Н. Павленко, Е. В. Гладкова, Д. М. Пучиньян, Г. А. Блувштейн, А. М. Клочков. Исследование некоторых неспецифических факторов иммунной защиты при остеомиелите. ФГБУ Саратовский НИИТО Минздравсоцразвития РФ, ГОУ ВПО Саратовский ГМУ им. В. И. Разумовского Минздравсоцразвития РФ
Цель исследования - изменение неспецифических факторов иммунной системы при хроническом остеомиелите в до- и послеоперационном периодах.
Изучали содержание растворимых молекул адгезии (sICAM, sVCAM), С-реактивного белка, неоптерина, амилоида А, интерлейкинов 4 и 65 (ИЛ-4 и ИЛ-6), фактора некроза опухолей-a (ФНО) у 75 больных, страдающих хроническим остеомиелитом, в возрасте 36-63 лет в сыворот-
ке крови методами ИФА с использованием наборов DiaSys (Германия), Biolaboj (Франция), Human (Германия), «Bender MedSystems» (Австрия) на приборах Alpha Prime фирмы Meredith Diagnostics (Англия) и «Anthos 2020» (Австрия). Исследование маркеров производили при поступлении больных в стационар и на 7-е и 14-е сутки после радикального оперативного вмешательства. Группу сравнения составили 15 практически здоровых лиц мужского пола в возрасте от 20 до 55 лет. Полученные данные обработаны статистически с использованием t-критерия Стьюдента.
Величины изучаемых параметров в группе сравнения соответствовали референтным величинам. Анализ содержания растворимых молекул адгезии у больных хроническим остеомиелитом выявил достоверное увеличение уровня slCAM (до 1,94±0,55 нг/мл,р < 0,01) и sVCAM (до 1,94±0,58 нг/мл, р < 0,01), амилоида А до1,64±0,36 нг/мл (р > 0,05), С-реактивного белка до 1180,4±22,6 мг/л (р < 0,001), нео-птерина до 53,7±5,6 нмоль/л (р < 0,001), ИЛ-4 до 15,6±0,9 пг/мл (р < 0,05), ИЛ-6 до 25,4±1,2 пг/мл (р < 0,05), ФНО-а до 32,7±1,2 пг/мл (р < 0,05). После оперативного вмешательства на 7-е сутки уровни изучаемых параметров были
- sICAM -0,59±0,26 нг/мл; sVCAM -0,58±0,37 нг/мл; сывороточный амилоид А - 1,29±0,14 нг/мл; С-реактивный белок
- 195,5±62,9 мг/л. Через 14 сут все показатели приближались к референтным величинам.
У пациентов имело место обострение хронического остеомиелита, при котором существует тесная взаимосвязь между повреждением эндотелиальных клеток, нарушением Т-клеточной иммунорегуляции и хроническим воспалением сосудистой стенки.
Б. Г. Яровинский, М. А. Вандышева. Продукция цитоки-нов в культуре клеток при почесухе взрослых. ГБОУ ВПО Челябинская ГМА Минздравсоцразвития РФ
Почесуха взрослых (ПВ) - аллергодерматоз, характеризующийся приступообразно появляющимися на любом участке кожного покрова зудящими отечными папулами, волдырями, папуловезикулами. Иммунологическим нарушением при ПВ является дисбаланс Th1- и 1Ъ2-субклассов Т-лимфоцитов в пользу последних.
Цель исследования - исследовать продукцию некоторых цитокинов in vitro при почесухе взрослых.
В исследовании использована методика культивирования клеток-предшественников грануломоноцитопоэза периферической крови у 8 больных ПВ в фазе обострения, а также у 8 доноров in vitro. Содержание некоторых цитокинов (ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-10, ИЛ-17, ИЛ-Щ ИНФ-а, ИНФ-у) исследовали в супернатантах клеточной культуры через 7 и 12 сут культивирования, методом им-муноферментного анализа на ИФА-анализаторе Micro Reader 4 (Hyperion, США). Использовались наборы реактивов ЗАО «Вектор Бест». Статистическую обработку результатов проводили с помощью программы BIOSTAT, критерий Вилкоксона.
При сравнении с контролем концентрации цитокинов в супернатантах 7-дневной культуры достоверные изменения получены в содержании ИНФ-у в 12-дневной культуре - ИЛ-4, ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-ф. Существенной разницы в содержании остальных цитокинов нами обнаружено не было.
Полученные результаты делают необходимым дальнейшее изучение иммунологических особенностей ПВ.
СТАНДАРТИЗОВАННАЯ ТЕХНОЛОГИЯ БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОГО АНАЛИЗА МОЧИ
В. В. Меньшиков. Стандартизация технологий для клинических микробиологических исследований. Первый МГМУ им. И. М. Сеченова Минздравсоцразвития РФ
Лабораторные диагностические исследования осуществляются в чрезвычайно изменчивой среде биологических материалов организма человека, пораженного патологическим процессом, и преследуют цели объективной оценки не менее изменчивых биологических объектов эндогенного и экзогенного происхождения: химических соединений и клеточных элементов разнообразной структуры и свойств, микроорганизмов различного вида и рода. Поэтому выбор и обеспечение постоянных, проверенных условий лабораторного исследования для получения аналитически, биологически и клинически достоверной информации являются настоятельной необходимостью современной лабораторной медицины во всех ее разделах.
В микробиологии ситуация осложняется особенно высокой изменчивостью объектов исследования - микроорганизмов и их чувствительностью к малейшим изменениям в условиях проведения исследования: состава питательной среды, температуры, реакции среды, наличия влияющих веществ и т. п. Данные внешней оценки качества лабораторных исследований постоянно доказывают наличие реальных трудностей в достижении адекватных результатов микробиологических исследований во многих российских клинико-диагностических лабораториях. Поэтому разработка стандартизованных аналитических технологий для микробиологических исследований является важным делом сообщества специалистов клинической микробиологии. В отечественной практике применяется ряд нормативных документов статуса методических рекомендаций. Международный опыт также свидетельствует об
усилиях на этом пути. В ряде стран изданы стандарты выполнения ряда микробиологических исследований. Росстандарт утвердил и ввел в действие ГОСТ Р ИСО 20776-2010, часть 1 «Референтный метод лабораторного исследования активности антимикробных агентов против быстрорастущих аэробных бактерий, вызывающих инфекционные болезни», и часть 2 «Оценка эксплуатационных характеристик устройств для испытания антимикробной чувствительности», ГОСТ Р ЕН 12 322-2010 «Изделия медицинские для диагностики in vitro. Питательные среды для микробиологии. Критерии эксплуатационных характеристик питательных сред». Стандартизации условий преаналитического этапа микробиологических исследований способствует выполнение положений ГОСТ Р 53079.4-2008 «Технологии медицинские лабораторные. Обеспечение качества клинических лабораторных исследований. Часть 4. Правила ведения преаналитического этапа».
Задача заключается в том, чтобы на основе имеющихся данных разработать четкие и реальные установки стандартизованных аналитических технологий для клинико-диагностических лабораторий, выполняющих микробиологические исследования патогенов в различных биологических материалах, неукоснительное следование которым способно обеспечить получение надежных результатов, позволяющих клиницистам принимать правильные и своевременные лечебные решения.
Б. Ф. Шуляк. Оптимизация бактериологического анализа мочи в соответствии с международными стандартами. ООО «ГЕМ», Москва
Бактериологический анализ мочи в отечественных лабораториях проводят в соответствии с нормами, изложенными в Приказе № 535 Минздрава СССР от 22.04.85 г. В нем точно
