CC BY
53
А. Л. ЛОКТИОНОВ, В. А. РАГУЛИНА, А. И. КОНОПЛЯ, М. В. ПОКРОВСКИЙ
ИMMУHOKOРРИГИРУЮЩИE И 'H^OK^d'H^bfE }ttEKT{ ПРOИЗВOДHЫХ 3-ГИДРOKCИПИРИДИHA ПРИ OCTPOM ЭKCПEРИMEHTAЛЬHOM ПAHKРEATИTE
Кафедра хирургических болезней М 2 Государственного образовательного учреждения
высшего профессионального образования «Курский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»,
Россия, 305041, г. Курск, ул. К. Маркса, 3. E-mail: [email protected]
При экспериментальном остром панкреатите развивается супрессия гуморального и клеточного иммунного ответа, снижается функциональная активность нейтрофилов периферической крови, активность каталазы, повышаются процессы перекисного окисления липидов. Производные 3-гидроксипиридина - мексидол, этоксидол и соединение с лабораторным шифром ХС-9 обладают иммуномодулирующей, антиоксидантной активностью и по убыванию степени эффективности располагаются в следующем порядке: ХС-9 ^ этоксидол ^ мексидол.
Ключевые слова: производные 3-гидроксипиридина, экспериментальный острый панкреатит, мексидол, этоксидол.
A. L. LOKTIONOV, V. A. RAGULINA, A. I. KONOPLYA, M. V. POKROVSKY
IMMUNOCORRECTING AND ANTIOXIDATIC EFFECTS OF DERIVATIVES 3-GIDROKSIPIRIDINA AT THE ACUTE EKSPERIMENTAL PANCREATITIS
Chairs of 1 organic chemistry, 2 pharmacology, State educational institution of the higher professional formations «Kursk state medical university Federal agency on public health services and social to development»,
Russia, 305041, Kursk, street K. Marks, 3. E-mail: [email protected]
At an experimental acute pancreatitis develops supression of gumoral and the cellular immune answer, functional activity of neutrophils of a peripheric blood, activity of a catalase decreases, processes peroxidations of lipids raise. Derivatives 3-gidroksipiridina -meksidol, ethoksidol and bond with laboratory code number XC-9 possess immunomodulating, antioxidatic activity and on decrease of degree of efficiency settle down in a following order: XC-9 ^ ethoksidol ^ meksidol.
Key words: derivatives 3-gidroksipiridina, an experimental acute pancreatitis, meksidol, ethoksidol.
Введение
Проблема острого панкреатита (ОП) является одной из наиболее актуальных в хирургии, поскольку летальность при осложненных формах этого заболевания продолжает оставаться на высоком уровне, несмотря на разработку, внедрение новых и совершенствование уже имеющихся методов диагностики и лечения этого заболевания [9]. Известно, что основу патогенеза ОП составляет синдром системной воспалительной реакции, характеризуемый как трудно контролируемая гиперэргическая реакция организма на повреждение поджелудочной железы, сопровождаемая лавинообразным выделением медиаторов воспалительной реакции, активацией процессов перекисного окисления липидов и вовлечением в патологический процесс клеток иммунной системы [12].
Особую роль впоследствии приобретает развивающийся вторичный иммунодефицит, так как именно он является причиной развития поздних гнойных осложнений панкреонекроза. При этом недостаточно изученными остаются вопросы рациональной патогенетической фармакотерапии на всех этапах развития ОП [4]. Все это дает основания для экспериментального поиска новых фармакологических препаратов, сочетающих в себе антиоксидантные и иммуномодулирующие эффекты.
Необходимой оценкой эффективности препаратов является их доклиническое испытание на экспериментальных моделях патологических состояний. В настоящее время предложено множество способов моделирования ОП у крыс, однако не все они отражают сложность патогенеза этого заболевания у человека. В связи с этим авторы отдают предпочтение комбинированным моделям, учитывающим сразу несколько звеньев патогенеза: создание протоковой гипертензии и стимуляция секреции поджелудочной железы [2], что и было использовано в настоящей работе.
В последние годы пристальное внимание фармакологов и клиницистов привлекают препараты - производные 3-гидроксипиридина (3-ГП). Некоторые авторы указывают на их иммунокорригирующую эффективность при патологии печени, основываясь на антиок-сидантных и мембраностабилизирующих свойствах некоторых производных 3-ГП [1]. Это дает основание предполагать иммуномодулирующие эффекты производных 3-ГП в условиях ОП, важным патогенетическим звеном в развитии и течении которого независимо от этиологии являются вторичный иммунодефицит и окислительный стресс.
В связи с изложенным целью работы стало изучение иммуномодулирующих и антиоксидантных эффектов некоторых производных 3-гидроксипиридина в условиях экспериментального острого панкреатита.
Кубанский научный медицинский вестник № 7 (121) 2010 УДК 615.272.4:616.37-002]:615.37
Кубанский научный медицинский вестник № 7 (121) 2010
Материалы и методы исследования
Эксперименты проводили на 118 здоровых половозрелых крысах линии Вистар массой 150-200 г. В опытах использовали животных, прошедших карантинный режим вивария Курского государственного медицинского университета и не имевших внешних признаков каких-либо заболеваний. Все исследования проводили в одно и то же время суток, с 8 до 12 ч., с соблюдением принципов, изложенных в Конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и других целей (г. Страсбург, Франция, 1986), и согласно правилам лабораторной практики РФ (приказ МЗ РФ № 267 от 19.06.2003 г.).
Производные 3-ГП вводили пятикратно, через 24 часа, внутрибрюшинно, в экспериментально подобранных дозах: ХС-9 - 35 мг/кг, этоксидол - 50 мг/кг. В качестве препарата сравнения использовали производное оксипиридина - мексидол, который вводили внутрибрюшинно, в дозе 50 мг/кг, по той же схеме, что и исследуемые соединения.
Экспериментальный острый панкреатит (ЭОП) моделировали путем перевязки протоков поджелудочной железы с последующим подкожным введением прозе-рина [2].
Крыс иммунизировали эритроцитами барана (ЭБ) однократно, внутрибрюшинно, в дозе 108 клеток на 1 кг массы тела. Через 5 суток после иммунизации определяли выраженность гуморального иммунного ответа (ГИО) по количеству иммунных антителообразующих клеток (АОК) в селезенке [6]. О выраженности гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) на ЭБ судили по разнице масс (РМ) регионарного и контрлатерального лимфатических узлов через 24 часа после введения разрешающей дозы ЭБ (на 6-е сутки после сенсибилизации ЭБ) [11]. Иммунизацию или сенсибилизацию животных ЭБ проводили соответственно за 5 и 6 суток до выведения животных из эксперимента. Фагоцитарная активность нейтрофилов периферической крови оценивалась по фагоцитарному показателю (ФП), фагоцитарному числу (ФЧ) и индексу активности фагоцитоза (ИАФ) [8]. Кислородзависимую активность оценивали фотометрически в реакции восстановления нитросинего тетразолия по показателям оптической плотности (mOD) в НСТ сп. (спонтанный НСТ-тест), НСТ ст. нз (стимулированный неопсонизированным
зимозаном НСТ-тест), НСТ ст. оз (стимулированный опсонизированным зимозаном НСТ-тест) и вычисляли коэффициенты функционального резерва: КАо (отношение опсонизированного НСТ-теста к спонтанной реакции), КАн (отношение неопсонизированного НСТ-теста к спонтанной реакции) и КО (соотношение опсонизированного и неопсонизированного НСТ-теста) [13]. Интенсивность процессов перекисного окисления липидов оценивали по содержанию в плазме крови ацилгидроперекисей (АГП) и малонового диальдегида (МДА) [10]. Кроме этого определяли активность ката-лазы [7].
Статистическую обработку результатов исследования проводили, используя параметрический коэффициент Стьюдента и непараметрические критерии Вил-коксона-Манна и Уитни [5]. Статистически значимыми считали различия с р<0,05.
Результаты
В предыдущих исследованиях было установлено, что максимальная иммуносупрессия при ЭОП наблюдается на 5-7-е сутки моделирования ОП как в отношении показателей, характеризующих формирование гуморальной и клеточной форм иммунитета, так и в отношении функциональной активности полиморфно-ядерных лейкоцитов [3]. В связи с этим животные выводились из опыта на 7-е сутки после моделирования ОП.
При изучении показателей, характеризующих формирование гуморальной и клеточной форм иммунного ответа, фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови у крыс через 7 суток после изолированной лапаротомии, установлено, что ни один из показателей статистически не отличался от данных группы контрольных животных (табл. 1).
Через 7 суток после развития ЭОП у животных наблюдалось снижение количества иммунных АОК в селезенке, РМ регионарного и контралатерального лимфатических узлов и фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови (снижение ФП, ФЧ и ИАФ). Введение мексидола, этоксидола и соединения ХС-9 нормализовало формирование ГИО и ГЗТ на ЭБ. Этоксидол и мексидол корригировали, а соединение ХС-9 нормализовало фагоцитарную активность нейтрофилов периферической крови (табл. 1).
Таблица 1
Влияние производных 3-ГП на показатели гуморального, клеточного иммунитета и фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови у крыс с ЭОП (M±m)
№ п/п Условия опыта АОК, тыс./орг. РМ, мг ФП, % ФЧ, абс. ИАФ
1 Контроль (здоровые животные) 26,3±2,4 5,6±0,3 73,6±2,1 2,2±0,12 1,6±0,10
2 Изолированная лапаротомия 27,1±3,3 5,5±0,2 72,4±3,7 2,1±0,1 1,5±0,09
3 ЭОП 7,0±2,0*12 2,5±0,1*12 50,3±2,8*12 1,2±0,08*12 0,6±0,04*12
4 ЭОП + мексидол 14,3±1,8*1-3 5,8±0,6*3 65,1±2,9*1-3 1,9±0,07*1-3 1,2±0,09*1-3
5 ЭОП + этоксидол 24,9±2,0*4 5,5±0,35*3 63,4±3,1*1-3 1,8±0,06*1-3 1,1±0,04*1-3
6 ЭОП + ХС-9 26,1±5,2*3-5 5,7±0,2*3 75,3±4,1*3-5 2,3±0,11*3-5 1,7±0,1*3-5
Примечание: здесь и в последующих таблицах * - р<0,05; цифра рядом со звездочкой означает, по отношению к какой группе значение достоверно отличается.
Таблица 2
Влияние производных 3-ГП на показатели кислородзависимой активности нейтрофилов периферической крови при ЭОП (M±m)
№ п/п Условия опыта сНСТ НСТ н/з НСТ о/з КАн КАо КО
1 Контроль 1037,5±62,6 1111,0±70,7 1310,63±112,9 1,08±0,07 1,30±0,05 1,24±0,03
2 Изолированная лапаротомия 1122,4±52,6 1193,1±80,8 1294,5±86,7 1,07±0,06 1,15±0,06 1,09±0,06*1
3 ОП 554,3±28,9*12 743,3±60,5*12 856,3±70,6*12 1,38±0,10*12 1,54±0,08*12 1,24±0,04*2
4 ОП + мексидол 701,8±33,2*1-3 921,6±45,1*1-3 992,3±36,6*1-3 1,33±0,09*12 1,44±0,09*1-3 1,09±0,06*13
5 ОП + этоксидол 797,8±32,2*1-4 912,8±43,9*1-3 987,5±35,0*1-3 1,15±0,04*1-4 1,25±0,05*34 1,09±0,04*13
6 ОП + ХС-9 1137±51,9*3-5 1188,0±34,9*3-5 1336,1±81,7*3-5 1,06±0,05*3-5 1,21±0,05*3-5 1,14±0,03*13
Таблица 3
Влияние производных 3-ГП на содержание продуктов ПОЛ и активность каталазы при ЭОП (M±m)
№ п/п Условия опыта МДА, мкмоль/л АГП, мкмоль/л Каталаза, мкат/л
1 Контроль 7,28±0,01 0,27±0,08 12,4±1,7
2 Изолированная лапаротомия 9,45±1,2 0,35±0,08 10,8±1,5
3 ОП 19,11±1,93*12 7,20±0,07*12 4,0±1,8*12
4 ОП + мексидол 14,4±0,43*1-3 2,3±0,12*1-3 15,5±1,1*23
5 ОП + этоксидол 8,42±1,62*34 1,4±0,14*1-4 17,2±1,3*1-3
6 ОП + ХС-9 6,14±1,99*34 1,32±0,08*1-4 18,5±1,2*1-3
Исследование кислородзависимых механизмов активности нейтрофилов периферической крови крыс, подвергнутых изолированной лапаротомии, не выявило изменений по сравнению с контролем. В группе животных с ЭОП установлено снижение метаболической активности гранулоцитов. Возможно, это связано с массивным перераспределением в пораженный орган активных клеток в ответ на выделение большого количества медиаторов воспаления, в результате чего периферическое кровеносное русло обедняется полиморфно-ядерными лейкоцитами и в связи с персистированием воспаления не успевает пополняться. Введение мексидола и этоксидола корригирует, а соединения ХС-9 - нормализует показатели кислородзависимой активности нейтрофилов периферической крови (табл. 2).
Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о высокой эффективности препаратов -производных 3-ГП в коррекции формирования гуморальной и клеточной форм иммунитета и функциональной активности нейтрофилов периферической крови, причем мексидол и этоксидол оказались примерно одинаковыми по эффективности, а максимальные фармакологические эффекты наблюдались у соединения ХС-9.
Учитывая то, что процессы перекисного окисления липидов (ПОЛ) играют существенную роль в развитии повреждения в ткани поджелудочной железы, было изучено влияние этих фармакологических средств на содержание в плазме крови продуктов ПОЛ и активность основного фермента антиоксидантной системы -каталазы в условиях ЭОП.
Установлено, что на 7-е сутки после моделирования ОП в плазме крови повышается концентрация
продуктов ПОЛ (АГП и МДА) по сравнению с контрольной группой животных при снижении активности каталазы. Введение мексидола снижает концентрацию МДА и АГП (но не до уровня здоровых крыс) и нормализует активность каталазы. Этоксидол и соединение ХС-9 нормализуют содержание МДА, снижают более существенно уровень АГП по сравнению с мексидолом, но не до значений контроля и повышают активность каталазы по сравнению с здоровыми животными (табл. 3).
Резюмируя полученные результаты, можно констатировать, что большей эффективностью на изученные параметры адаптивного и врожденного иммунитета, оксидантные показатели обладает соединение под лабораторным шифром ХС-9, а по степени убывания эффективности за ним соответственно следуют эток-сидол и мексидол.
Таким образом, применение мексидола и этоксидо-ла, а после до- и клинических испытаний соединения ХС-9 позволит скорригировать иммунные и оксидант-ные нарушения у больных острым панкреатитом и, как следствие, снизить число гнойных осложнений острого панкреатита.
ЛИТЕРАТУРА
1. Авдеева Е. В., Конопля А. И., Серное Л. Н. Влияние производных оксиникотиновой кислоты и 3-оксипириди-на на функциональную активность полинуклеаров крыс // Вестн. Уральской мед. академ. науки. - 2006. - № 3-1 (14). -С. 102-104.
2. Алехин С. А, Назаренко Д. П., Емельянов Р. А. Моделирование острого панкреатита у крыс. - Курск, 2006. - 78 с.
3. Анишееа Т. Н., Конопля Н. А. и др. Иммунокорригирующие эффекты препаратов нуклеиновых кислот при экспериментальном
Кубанский научный медицинский вестник № 7 (121) 2010
УДК 611-01S.21+611.42S Кубанский научный медицинский вестник № 7 (121) 2010
остром панкреатите // Курский науч.-практ. вестн. «Человек и его здоровье». - 2005. - № 2. - С. 55-64.
4. Багненко С. Ф. Острый панкреатит (протоколы диагностики и лечения). - СПб: Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт скорой помощи им. И. И. Джанелидзе, 2004. - 35 с.
5. Гублер Е. В., Генкин А. А. Применение непараметрических критериев статистики в медико-биологических исследованиях. -Л.: Медицина, 1973. - 141 с.
6. Зауэр Х. Метод иммунных розеток // Иммунологические методы: Пер. с нем. / Под ред. Г. Фримеля. - М.: Мир, 1987. - С. 273-282.
7. Королюк М. А, Иванова Л. И, Майорова И. Г. и др. Метод определения активности каталазы // Лаб. дело. - 1988. - № 1. - С. 16-19.
8. Медведев А. Н., Чаленко В. В. Способ исследования поглотительной фазы фагоцитоза // Лаб. дело. - 1991. - № 2. - С. 19-20.
9. Савельев В. С. Руководство по неотложной хирургии органов брюшной полости. - Триада Х, 2006. - 640 с.
10. Стальная И. Д., Гаришвили Т. Г. Метод определения малонового диальдегида с помощью тиобарбитуровой кислоты // Современные методы в биохимии / Под ред. В. Н. Оре-ховича. - М.: Медицина, 1977. - С. 66-68.
11. Федосеева Т. В., Порядин Л. В., Ковальчук Л. В. и др. Руководство по иммунологическим и аллергологическим методам в гигиенических исследованиях. - М., 1993. -319 с.
12. Шабанов В. В. Роль цитокинов и других молекул в патогенезе острого панкреатита // Вестн. Рос. акад. мед. наук. -2003. - № 9. - С. 44-47.
13. Щербаков В. И. Применение НСТ-теста для оценки чувствительности нейтрофилов к стимуляторам // Лаб. дело. - 1989. -№ 1. - С. 30-33.
Поступила 05.09.2010
Ж. К. ЛОПУНОВА
СРАВНИТЕЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ТКАНЕВЫХ БАЗОФИЛОВ, РАСПОЛОЖЕННЫХ В ЛИМФОУЗЛАХ ЧЕЛОВЕКА И ГРЫЗУНОВ, В ПЕРИОД РАЗВЕРТЫВАНИЯ 22-го (ОДИННАДЦАТИЛЕТНЕГО) СОЛНЕЧНОГО ЦИКЛА
Кафедра нормальной анатомии ГОУ ВПО «Кубанский государственный медицинский университет», Россия, 350063, г. Краснодар, ул. Седина, 4, тел. (861) 268-00-25
Цель работы - определить в 4 фазах одиннадцатилетнего (22-го) солнечного цикла с помощью комплекса методов цитохимического окрашивания пространственно-временную сезонную организацию тканевых базофилов (ТБ), расположенных в лимфоузлах человека и грызунов.
ТБ, населяющие паренхиму поднижнечелюстных, подмышечных, трахеобронхиальных, средостенных, желудочных, брыжеечных, поясничных, общих подвздошных и паховых лимфоузлов, во всех фазах солнечного цикла у всех грызунов имели однотипную сезонную характеристику. У человека характеристика цитоплазматических биополимеров ТБ, расположенных в лимфоузлах, обнаруживала значительный разброс по индивидам. У всех грызунов зимой и у ряда индивидов осенью и зимой в характеристике ТБ, расположенных в лимфоузлах, выявлен хронобиологический компонент, обусловленный влиянием цирканнуального ритма и не связанный с солнечным циклом. И только в ТБ, расположенных в брыжеечных лимфоузлах, выявлен хронобиологический компонент, причинным фактором возникновения которого является одиннадцатилетний солнечный цикл.
Ключевые слова: тканевые базофилы, лимфоузлы, цирканнуальный ритм, солнечный цикл.
Zh. К. LOPUNOVA
COMPARATIVE DESCRIPTION OF TIDSUE BASOPHILES, LOCATED IN HUMAN’S AND RODENT’S LYMPH NODES IN THE DEVELOPMENTAL PERIOD OF THE 22nd (ELEVEN-YEAR) SOLAR CYCLE
Normal anatomy department, GOU VPO «Kuban state medical university»,
Russia, 350063, Krasnodar, Sedin st., 4, tel. (861) 268-00-25
Aim of study - to determine a space-time season organization of the tissue basophiles (ТВ), located in the lymph nodes of humans and rodents, in 4 phases of the eleven-year (22nd) solar cycle with the help of the complex of cytochemical staining methods.
ТВ, settled in parenchyma of submandibular, axillary, tracheobronchial, mediastinal, gastric, mesenteric, lumbar, common iliac and inguinal lymph nodes, in all phases of the solar cycle in all rodents had a season characteristics of the same type. In human the characteristics of ТВ cytoplasmic biopolymers, located in lymph nodes, revealed a significant dispersion on individuals. A chronobiological component, conditioned by influence of circannual rhythm and unconnected with the solar cycle was revealed in all rodents in winter and in a number of individuals in autumn and winter in characteristics of ТВ, located in lymph nodes. And only in ТВ, located in mesenteric lymph nodes, a chronobiological component was revealed, which causative factor of origin is the eleven-year solar cycle.
Key words: tissue basophiles, lymph nodes, circannual rhythm, solar cycle.
