CC BY
4
Реакция иммунной системы на введение ССЦ у всех животных однотипна, что свидетельствует о патогенетической роли этих нарушений в развитии хронического патологического процесса в печени.
Несмотря на то что в условиях современного производства ССЦ является фактором малой интенсивности, исключить возможность длительного контакта работающего с этим гепатотропным ядом нельзя. Влияя опосредованно на иммунологическую реактивность, угнетая функцию клеточного иммунитета, ССЦ, даже не вызывая профессиональных заболеваний, способен снижать защитные силы организма и тем самым влиять на повышение заболеваемости работающих.
Литература
1. Блюгер А. Ф., Векслер X. Рига, 1968.— Вып. 2. — С.
М. // Успехи 191—256.
гепатологии.
2. Гюллинг Э. В., Никольский И. С. // Успехи соврем, биол. — 1977. — «Nb 1. —С. 97—111.
3. Миллер Дж., Дукор П. Биология тимуса: Пер. с англ.— М„ 1977.
4. Петров Р. В. Иммунология.—М., 1982.
5. Покровская М. П., Краскина Н. А., Левинсон В. И. // Микробиология.— 1965.—№ 3. — С. 3—18.
6. Юсфина Э. 3. II Вопросы эндокринологии. — Харьков, 1958.— С. 143—145.
7. Юсфина Э. 3., Яковлева А. Н. // Пат. физиол.—1969.— № 2. — С. 23—26.
8. Till 1. Е., McCulloch Е. А.// Radiat. Res. — 196К — Vol. 14.— P. 213—321.
Поступила 20.10.87
УДК 616-056.43-02:628.84
С. В. Лебедев, В. П. Чехонин
ИММУНОХИМИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ АНТИГЕНОВ
В ВЕНТИЛЯЦИОННЫХ СИСТЕМАХ
В связи с ростом числа заболеваний аллергической природы актуальным является обнаружение новых антигенов в окружающей среде и изучение их специфических свойств. К таким антигенам относят вещества, имеющие, по-видимому, микроорганизменное происхождение и содержащиеся в субстратах загрязнения устройств водно-аэрозольного назначения (кондиционеры, градирни, увлажнители воздуха и др.)- Эти экзоантигены рассматриваются как этиопатогенетические факторы лихорадки увлажнителя и гиперчувствительных пневмонитов — заболеваний, вспышки которых наблюдали в последние десятилетия в индустриальных странах [5—7].
При гигиеническом обследовании систем вентиляции и кондиционирования воздуха (СВКВ) контактного («мокрого») типа с рециркуляцией воды, используемой для термовлажностной обработки воздуха, установлено, что в воде, шламе и пыли, взятых с внутренних поверхностей оросительных камер, воздуховодов и шумоглушителей, содержатся антигены, которые вызывают появление преци-питирующих антител в сыворотке крови у 50 % лиц, рабо-ающих в кондиционируемых помещениях, обслуживаемых данными СВКВ [2, 3].
Целью настоящей работы явились иммунохимическое изучение высокомолекулярных компонентов субстратов загрязнения СВКВ и попытка создания специфической им-муногетерогенной системы для определения во внешней среде антигенов, ассоциированных с СВКВ.
Иммунохимическому исследованию подвергали воду из камер орошения СВКВ контактно-рециркуляционного типа, сконцентрированную воздушным диализом не менее чем в 400 раз, а также пыль и шлам с внутренних поверхностей этих СВКВ, которые экстрагировали в течение 24 ч при температуре 4°С двумя объемами 0,2 М трис-глицинового буфера с рН 8,6 в присутствии твина-80 и тритона Х-100 в концентрациях 1 г/л. После этого водно-солевые экстракты тщательно перемешивали, трижды замораживали и размораживали, затем центрифугировали, надосадочный слой концентрировали воздушным диализом не менее чем в 200 раз. Концентраты воды, экстрактов пыли и шлама диализовали против 0,025 М натрийаце-татного буфера с рН 4,5, консервировали 0,02 % раствором азида натрия и использовали как исходные препараты при очистке антигенов, вызывающих образование преци-питирующих антител в организме людей, контактирующих с СВКВ. Очистку этих антигенов проводили по схеме: концентрат воды, экстракт пыли или шлама, стабилизированные против натрийацетатного буфера с рН 4,5 — ионообменная хроматография на целлюлозе СМ-52 ("Whatman",
Великобритания) — фракция, не связывающаяся с носителем,— ионообменная хроматография на целлюлозе ДЕАЕ-52 ("Whatman", Великобритания) — фракция элюи-рующаяся при концентрации хлорида натрия 0,25 М, — гель-хроматография на сефадексе G-150 ("Pharmacia", Швеция)—фракция с мол. м. 90±10 кД.
Иммунопроявление фракций при выделении очищенного антигенного препарата осуществляли по методу [4]. Для этого использовали сыворотки крови людей, у которых были обнаружены преципитирующие антитела при проведении реакции иммунодиффузии в агаре с неочищенными концентратами воды, экстрактами пыли и шлама из СВКВ.
Электрофоретическую подвижность полученных препаратов определяли методом перекрестного электроиммуно-фореза [8], молекулярную массу антигена методом Де-термана [1]. Проводили также определение термостабильности и устойчивости антигена при водном диализе через мембрану ХМ-100 ("Amicol", США).
Очищенные антигенные препараты, полученные по приведенной выше схеме, использовали при иммунизации кроликов с целью получения гетерологичных антисывороток. 9 кроликам породы шиншилла массой по 2,5—3,5 кг антигенный препарат, приготовленный из пыли, взятой из шумоглушителя СВКВ, вместе с равным объемом адъю-ванта Фрейнда вводили под конъюнктиву в оба глаза, в области лимфатических узлов лопаток, паховых и подколенных лимфатических узлов по 0,2 мл смеси и в подушечки задних лап по 0,6 мл смеси. Через 30 сут этот комплекс инъекций повторяли с одновременным введением внутривенно 2 мл антигенного препарата. Последующие реиммунизации проводили только внутривенными инъекциями через каждые 9—11 сут до получения иммунного ответа. При этом количество вводимого антигенного препарата увеличивали с 9,5 до 17 мл на реиммунизацию. Выход антител контролировали с помощью реакции иммунодиффузии в модификации Н. И. Храмковой и Г. И. Абе-лева [4], используя критерий «последнего подгиба» в тест-системе, соответствующего пределу чувствительности метода. Порции антисыворотки получали в течение месяца после эффективной реиммунизации. Иммунохимическую идентичность гетерогенных антител с антителами в сыворотках крови людей, контактировавших с загрязненными
СВКВ, устанавливали путем иммунодиффузионного анализа системы: преципитинположительная сыворотка крови человека — кроличья антисыворотка — антигенный препарат, приготовленный из пыли, взятой в упомянутой СВКВ.
Все неочищенные концентраты воды, экстрактов пыли и шлама, приготовленные из проб, взятых в различных участках двух обследованных СВКВ (всего 11 проб), давали положительные реакции преципитации с сыворотками крови лиц (78 человек), контактировавших с этими СВКВ. Вместе с тем в сыворотках крови лиц контрольной группы (191 человек), не имевших контакта с какими-либо СВКВ, преципитины к антигенам, ассоциированным с СВКВ, не обнаружены. Проведенная под контролем пре-цнпитинположительных сывороток крови людей ионообменная хрохматография показала, что идентифицируемые антигены не связываются с катионообменником (целлюлозой СМ-52) и обладают выраженной способностью к адсорбции на анионообменнике (целлюлозе ДЕАЕ-52). При этом положительные реакции преципитации получены только с фракцией, элюнровавшейся с ДЕАЕ-целлюлозы при концентрации хлорида натрия 0,25 М. Идентифицируемый белок этой фракции имел мол. м. 904=10 кД и обладал электрофоретической подвижностью ос2-глобули-нов, был термостабилен (сохранял иммунохимическую активность после инкубации в течение 1 ч при 100°С) и не денатурировал при водном и воздушном диализах.
Для определения иммуногенных свойств выделенного антигена и разработки иммунохимической системы, позволяющей выявлять его во внешней среде, нами проведены эксперименты по получению гетерогенных типов антител у кроликов. Выход этих антител отмечен после 3—6 реим-мунизаций животных. Иммунный ответ был максимальным (титры антигена, выявляемого антисывороткой, от 1 : 32 до 1:256) на 7—11-е сутки и существенно снижался через 4—5 нед после эффективной реиммунизации. Кроличьи антисыворотки давали положительные реакции преципитации не только с препаратами, которыми иммунизировали животных, но и с исходными антигенными препаратами, не подвергавшимися очистке. Иммунодиффузион-ный анализ выявил полную иммунохимическую идентич-
ность гетерогенных кроличьих антител и антител в сыворотках крови людей, индуцированных антигенами, ассоциированными с СВКВ. Эти данные позволяют рекомендовать применение специфических кроличьих антисывороток для качественного и полуколичественного определения в различных средах антигенов, ассоциированных в СВКВ, с помощью реакции иммунодиффузии в агаре. Изложенный подход был использован нами при определении загрязнения кондиционируемых помещений антигенами, ассоциированными с СВКВ, в процессе их гигиенической оценки.
Полученные результаты свидетельствуют об обоснованности и целесообразности применения иммунохимических методов при совершенствовании способов гигиенической характеристики окружающей среды.
Литература
М.,
1. Детерман Г. Гель-хроматография: Пер. с нем.— 1970.
2. Лебедев С. В., Чехонин В. П., Александровский В. Г Алексеев С. А. // Актуальные проблемы биосферы в Узбекистане. — Ташкент, 1985. — С. 117.
3. Лебедев С. В., Александровский В. Г., Прыгун А. В. // Физиология экстремальных состояний и индивидуальна защита человека. — М., 1986. — С. 218.
4. Храмова И. И., Абелев Г. И. // Бюл. экспер. биол. — 1961. —№ 12. —С. 107—109.
5. Banaszak Е. F., Thiede W. Н., Fink J. N. // New Engl. J. Med. — 1970. —Vol. 283. — P. 271—276.
6. Edwards J. H. 11 Thorax. — 1977. — Vol. 32. — P. 653— 663.
7. Ganier M., Lieberman P., Fink J. N. et al.//Chest. — 1980. —Vol. 77.— P. 183—187.
8. Laurell С. В.Ц Analyt. biochem. — 1965. — Vol. 10.— P. 358—362.
Поступила 26.06.87
УДК 613.632:665.637]-074
Л. А. Юшкова, С. М. Соколов, В. /С. Луговский, Л. А. Шматкова,
Г. Л. Захарова
О ХАРАКТЕРЕ НЕКОТОРЫХ КОМПЕНСАТОРНО-ПРИСПОСОБИТЕЛЬНЫХ РЕАКЦИЙ, ВЫЯВЛЕННЫХ ПРИ ВОЗДЕЙСТВИИ ЗОЛЫ МАЗУТА НА ОРГАНИЗМ
Минский медицинский институт
Задачей настоящего исследования явилось определение биологической значимости некоторых компенсаторно-приспособительных реакций для характеристики патологического или предпатологического состояния при воздействии золы мазута.
Дисперсный и морфологический состав золы изучен на сканирующем электронном микроскопе. Определение качественного и количественного состава металлов, содержащихся в золе, проведено методом эмиссионного атомного спектрального анализа.
В эксперименте мы использовали высокие концентрации золы — 50 мг/м3. Опыты проводили на беспородных крысах-самцах массой 160—230 г. Затравку золой осуществляли ингаляционно, непрерывно в течение 30 сут. Отбор крови производили 1 раз в 3 сут из хвостовой вены у контрольных и подопытных животных. Наблюдаемую нами в процессе эксперимента картину токсического воздействия характеризуют в первую очередь биохимические показатели; физиологические гематологические лишь несколько дополняют ее.
Так, при изучении динамика И-ацетилнейраминовой кислоты (НК) обнаружено резкое снижение ее содержания с 3-х по 15-е сутки, в последующие 6 сут в результате включения компенсаторно-приспособительных реакций положение несколько стабилизировалось, хотя в дальнейшем
(с 21-х по 30-е сутки) отмечены резкие колебания в содержании НК. Снижение уровня НК можно объяснить существенным увеличением интенсивности ее катаболизма на обеих стадиях ферментативного распада при участии ней-раминидазы и альдолазы НК, что, вероятно, обусловлено токсическим действием тяжелых металлов, присутствующих в золе.
При изучении изолированного действия различных веществ (502, N0, Ы02 и др). мы наблюдали обычное увеличение содержания НК, что могло быть свидетельством ла-билизации мембран или мембраноповреждающего действия указанных агентов. Повышение уровня НК может означать также преобладание биосинтеза сиаловых кислот над их отщеплением от молекул белка. Снижение уровня НК может рассматриваться как проявление тяжелой формы токсического эффекта, затрагивающего многие метаболические реакции. Аналогичная направленность изменения содержания НК была обнаружена при изучении биологического действия металлов [1].
Динамика активности К-АТФазы показывает, что токсическое воздействие, проявившееся уже в 1-е сутки затравки в виде повышения активности фермента, наблюдается во всех точках отбора и особенно велико на 21-е сутки. Известно, что уровень ферментативной активности Ыа, К-АТФазы коррелирует с количеством траиспортируе-
