CC BY
13
DOI: 10.17650/2313-805X-2022-9-2-97-104
C«D]
Иммуногистохимическое исследование увеальной меланомы и ее клеточного микроокружения
Контакты: Елена Борисовна Мякошина myakoshina@mail.ru
сч сч О сч
сч
>-
из о
—I
о
и
С.В. Саакян, Л.А. Катаргина, Е.Б. Мякошина, Г.П. Захарова, И.П. Хорошилова—Маслова, А.М. Майбогин ©
ФГБУ«Национальный медицински ул. Садовая-Черногрязская, 14/19
ФГБУ«Национальный медицинский исследовательский центр им. Гельмгольца» Минздрава России; Россия, 105062 Москва, ^С
О
Введение. Патогенез увеальной меланомы определяется целым рядом факторов, включая молекулярно-генетические, 5 иммунологические и др. Одним из подходов к изучению особенностей патогенеза опухолей данного типа является m определение локального содержания в них отдельных субпопуляций лимфоцитов и макрофагов в сочетании с ана- и лизом пролиферативной активности опухолевых клеток. Щ
Цель исследования - изучить иммуногистохимические особенности увеальной меланомы и ее клеточного микро- > окружения. <
Материалы и методы. Проанализированы 24 энуклеированных глаза с увеальной меланомой (144 гистологических ^ и 216 иммуногистохимических препаратов) без предшествующего лечения. Изучены клетки иммунного микроокружения: субпопуляции лимфоцитов и экспрессируемые макрофагами антигены CD68+ и CD163+ в строме меланомы s и в 2-3 мм от нее. Определен индекс пролиферации опухолевых клеток Ki-67. q
Результаты. Во всех образцах ткани увеальной меланомы выявлено наличие лимфоцитов в микроокружении опухолевых клеток. Большую часть исследуемых популяций лимфоцитов составили Т-цитотоксические CD28+-лимфо-циты (абсолютное количество положительно окрашенных клеток - 607,3 ± 431,2; относительное - 18,84 ± 12,12 %) (p = 0,018), меньшую часть (практически в равном соотношении) - Т-хелперы CD4+, T-цитотоксические CD8+- и CD25+-лимфоциты (p = 0,6). Абсолютное количество натуральных киллеров субпопуляции CD16+ оказалось ниже по сравнению с субпопуляцией CD56+ (р = 0,05). Однако отмечено практически равное относительное количество изучаемых субпопуляций (р = 0,9).
Гистологическое исследование выявило наличие в микроокружении ткани увеальной меланомы макрофагов. При им-муногистохимическом исследовании экспрессируемых противовоспалительными и проопухолевыми макрофагами антигенов CD68+ и CD163+ отмечено, что их абсолютное и относительное количество в ткани данной опухоли практически одинаковое, с небольшим преобладанием CD163+ (p = 0,7). Иммуногистохимический анализ показал, что в ядрах клеток меланомы в среднем содержится 575,2 ± 388,5 значимых клеток белка пролиферации Ki-67. Этот белок обнаружен в 16,69 ± 10,88 % опухолевых клеток.
Заключение. Иммуногистохимическое исследование позволяет выявить субпопуляции инфильтрирующих опухоль лимфоцитов, определить подтипы макрофагов и оценить индекс Ki-67 пролиферации опухолевых клеток. Полученные данные в дальнейшем дают возможность оценить значимость обнаружения отдельных субпопуляций иммунных клеток (в частности, Т-цитотоксических CD28+-лимфоцитов) в патогенезе увеальной меланомы в целях разработки таргетного воздействия, обоснования новых иммунотерапевтических подходов к лечению первичной опухоли и перепрограммирования измененных иммунных клеток.
Ключевые слова: увеальная меланома, иммуногистохимическое исследование, субпопуляции лимфоцитов, антигены макрофагов, индекс пролиферации
Для цитирования: Саакян С.В., Катаргина Л.А., Мякошина Е.Б. и др. Иммуногистохимическое исследование увеальной меланомы и ее клеточного микроокружения. Успехи молекулярной онкологии 2022;9(2):97-104. DOI: 10.17650/2313-805X-2022-9-2-97-104.
О
Q.
в; m
о ж.
и >
BY 4.0
Immunohistochemical study of uveal melanoma and its cellular microenvironment
S. V. Saakyan, L.A. Katargina, E.B. Myakoshina, G.P. Zakharova, I.P. Khoroshilova—Maslova, A.M. Maibogin
Moscow Helmholtz Research Centre of Eye Diseases; 14/19 Sadovaya-Chernogryazskaya St., Moscow 105062, Russia Contacts: Elena Borisovna Myakoshina myakoshina@mail.ru
Introduction. Uveal melanoma pathogenesis is determined by a number of factors, including the tumor molecular genetics, the organism's immune response, and other ones. One of the approaches to studying the peculiarities of pathogenesis
сч сч О сч
сч
>-
и о
-J
о и Z
о
ОС <
о ж.
ю
< >
а
<
о
of this cancer is to determine the local subpopulations of lymphocytes and macrophages in combination with the study of the proliferative activity of tumor cells.
Objective - to study the immunohistochemical features of uveal melanoma and its cellular microenvironment. Materials and methods. 24 enucleated eyes with uveal melanoma (144 histological and 216 immunohistochemical preparations) without previous treatment were analyzed. Cells of the immune microenvironment were analyzed: lymphocyte subpopulations and CD 68+ and CD 163+ antigens expressed by macrophages in the melanoma stroma and 2-3 mm from it. The tumor cell proliferation index Ki-67 was diagnosed.
Results. All tissue samples of uveal melanoma revealed the presence of lymphocytes in the microenvironment of tumor cells. A large proportion of the studied subpopulations of lymphocytes were T-cytotoxic CD28+ lymphocytes (absolute content: 607.3 ± 431.2, relative: 18.84 % ± 12.12 %) (p = 0.018). A smaller proportion, but in equal proportions, were T-helpers CD4+, T-cytotoxic CD8+ and CD25+ lymphocytes (p = 0.6). The absolute number of natural killer cells subpopulation CD16+ was lower compared to CD56+ (p = 0.05). However, an almost equal relative content of the studied subpopulations was noted (p = 0.9).
Histological examination revealed the presence of uveal melanoma macrophages in the microenvironment of the tissue. The immunohistochemical study of CD68+ and CD163+ antigens expressed by anti-inflammatory and pro-tumor macrophages showed that their absolute and relative content in the uveal melanoma tissue is almost the same with a slight predominance of CD163+ (p = 0.7). Immunohistochemical analysis showed that the nuclei of melanoma cells contain, on average, 575.2 ± 388.5 significant cells of the Ki-67 proliferation protein. This protein was found in 16.69 ± 10.88 % of tumor cells.
Conclusion. Immunohistochemical study allows to identify subpopulations of lymphocytes infiltrating the tumor, to determine the subtypes of macrophages and to estimate the Ki-67 index of tumor cell proliferation. The data obtained will make it possible to further evaluate the significance of individual immune cells (in particular, T-cytotoxic CD28+ lymphocytes) in the pathogenesis of uveal melanoma in order to develop targeted effects, substantiate new immuno-therapeutic approaches to the treatment of primary tumors and reprogramming altered immune cells.
Key words: uveal melanoma, immunohistochemical study, lymphocyte subpopulations, macrophage antigens, proliferation index
For citation: Saakyan S.V., Katargina L.A., Myakoshina E.B. et al. Immunohistochemical study of uveal melanoma and its cellular microenvironment. Uspekhi molekulyarnoy onkologii = Advances in Molecular Oncology 2022;9(2):97-104. (In Russ.). DOI: 10.17650/2313-805X-2022-9-2-97-104.
>
О
ж.
и >
ВВЕДЕНИЕ
Увеальная меланома (УМ) — злокачественная опухоль, характеризующаяся ранним метастазированием [1]. В настоящее время большое внимание уделяется патогенетическим аспектам неопластического процесса [2, 3]. Одним из компонентов опухолевой прогрессии являются иммунокомпетентные клетки организма человека, перепрограммированные на рост и развитие новообразования [4, 5]. Роль опухоль-инфильтрирую-щих лимфоцитов (ОИЛ) в канцерогенезе изучается давно. Исследования продолжаются по настоящее время [6]. Терапевтические, иммуномодулирующие стратегии, нацеленные на ингибирование контрольных точек иммунитета, имеют важное значение в комбинированном лечении УМ [7]. В связи с этим изучение иммунобиологии ОИЛ с акцентом на субпопуляционный лимфоцитарный состав играют большую роль в поиске новых мишеней для противоопухолевой терапии.
Наличие в ткани УМ значительного количества опухоль-ассоциированных макрофагов (ОАМ) связано с неблагоприятным прогнозом [8]. По данным литературы, из существующих типов макрофагов проан-гиогенными и канцерогенными считаются макрофаги М2 [9]. Углубленное изучение ОАМ и ОИЛ дает возможность проанализировать патофизиологический механизм, связанный с наличием воспаления при УМ.
Идентификация пролиферации клеток УМ имеет важнейшее значение в выживаемости и прогнозе за-
болевания [10]. Ранее доказано, что высокий индекс клеточной пролиферации коррелирует с эпителиоид-но-клеточным типом УМ и связан с более высоким риском развития метастатического поражения [11]. Анализ пролиферативной активности клеток УМ в совокупности с ОАМ и ОИЛ требует более глубокого изучения.
Цель исследования — изучить иммуногистохими-ческие особенности УМ и ее клеточного микроокружения.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Проанализированы 24 энуклеированных глаза с УМ (144 гистологических и 216 иммуногистохими-ческих препаратов) без предшествующего лечения. Возраст пациентов составил от 34 до 67 лет (в среднем 55 ± 2,7 года). Материал фиксировали 10 % нейтральным формалином и заливали в парафин по стандартной методике. Подготовка к патоморфологическим исследованиям включала микротомию и окрашивание парафиновых срезов (толщиной 5—6 мкм) гематоксилином, эозином и пикрофуксином по методу Ван-Ги-зона. Анализ гистологических препаратов выполняли с помощью микроскопической системы фирмы Leica DMRB2500 (Германия).
По данным патоморфологических исследований в 9 случаях наблюдалась эпителиоидно-клеточная УМ, в 9 — веретеноклеточная типа АВ, в 6 — смешанно-
клеточная (рис. 1). Проминенция опухоли составила от 1,5 до 8,9 мм (в среднем 4,7 ± 1,8 мм), диаметр основания — от 1,5 до 24,5 мм (в среднем 13,4 ± 3,3 мм). Выявлены опухоли малых размеров (5 глаз), которые локализовались юкстапапиллярно с вовлечением диска зрительного нерва, что потребовало энуклеации. Преобладали опухоли хориоидеи (n = 20). Опухоли иридоцилиохориоидальной зоны диагностировали у 4 пациентов. По степени пигментации меланомы были слабо (n = 11) или умеренно (n = 13) пигментированными.
Было определено наличие клеток иммунного микроокружения — лимфоцитов и макрофагов — в стро-ме меланомы и в 2—3 мм от нее. Количественный подсчет выполняли в 10 полях зрения при 400-кратном увеличении.
Иммуногистохимические (ИГХ) исследования включали определение в ткани УМ абсолютного и относительного состава субпопуляций лимфоцитов: Т-хелперов CD4+, T-цитотоксических CD8+, натуральных киллеров CD16+ и CD56+, Т-цитотоксичес-ких CD28+, CD25+. Также выполняли анализ экспрес-сируемых макрофагами антигенов CD68+ и CD163+, выявляли способность к пролиферации опухолевых клеток (на основе индекса пролиферации Ki-67).
В ходе ИГХ-исследования применяли поликло-нальные (CD163, CD16, CD28) и моноклональные (CD4 (клон 4B12), CD8 (клон C8/144B), CD56 (клон 123C3), CD 68 (клон KP1), CD25 (клон IL2R. 1)) мышиные антитела к человеческим антигенам в рабочем разведении для использования в стейнере Avtosteiner Link 48 (Dako, Дания).
Для выявления маркера пролиферации клеток Ki-67 применяли моноклональные мышиные антитела к человеческим Ki-67 антигенам (клон MIB-1). Клеточный пролиферативный индекс экспрессии Ki-67 (MIB-1) вычисляли путем определения процентного соотношения Ki-67-положительных клеточных ядер меланомы к общему количеству ядер клеток опухоли, подсчитанных при 400-кратном увеличении. Подсчет
проводился для клеточной популяции, насчитывающей не менее 1 тыс. клеток (не менее чем в 2 случайных полях зрения). В качестве системы детекции использовали систему EnVisionFlex (Dako, Дания).
Были проанализированы 216 ИГХ-препаратов. Для каждого случая изготавливали срезы толщиной 4 мкм для нанесения первичных антител и реагента негативного контроля. После депарафинизации и демаскировки антигенов ИГХ-исследование проводили в автоматическом режиме в автостейнере Dako-Link 48.
Анализировали срезы с ИГХ-реакцией, оценивали количество положительно окрашенных иммунных клеток и определяли их долю от общего числа иммунных клеток в 10 полях зрения. Положительным считали точечное или линейное, темно-коричневое, полное или частичное мембранное окрашивание клеток.
Статистические расчеты проводили в пакетах программ для Windows (Microsoft Excel, Statistica 12.5). Применяли t-критерий Стьюдента, критерии Фишера и X2, уровень статистической значимости (p <0,05).
РЕЗУЛЬТАТЫ
Согласно результатам патоморфологических исследований во всех образцах ткани УМ в микроокружении опухолевых клеток наблюдались лимфоциты. Они представляли собой клетки округлой формы с наличием круглого ядра и светлой узкой цитоплазмы (рис. 2, а). Иммуногистохимическое исследование выявило наличие различных субпопуляций лимфоцитов в микроокружении УМ. При этом большую их часть составили Т-цитотоксические CD28+-лим-фоциты (абсолютное количество положительно окрашенных клеток — 607,3 ± 431,2; относительное количество - 18,84 ± 12,12 %) (p = 0,018) (рис. 2, б).
Меньшими долями, но в равном соотношении, были представлены Т-хелперы CD4+, T-цитотокси-ческие CD8+- (рис. 2в, г) и CD25+- (рис. 2, д) лимфоциты. Их абсолютное количество составило 387,6 ± 362,5; 409,4 ± 383,9 и 371,9 ± 332,6 положительно
сч сч о сч
сч
>-
из о
—I
о и Z
о
ОС <
о ж.
ю
< >
а
<
о m
а.
в;
£ m
о ж.
и >
Рис. 1. Патоморфологические типы увеальной меланомы: а — эпителиоидно-клеточный; б — веретеноклеточный; в — смешанно-клеточный. Окраска гематоксилином и эозином. х 100. Шкала 200мкм
Fig. 1. Pathomorphological types of uveal melanoma: а — epithelioid cell; б — spindle cell; в — mixed cell. Stained with hematoxylin and eosin. х 100. Scale 200 microns
Рис. 2. Иммунногистохимическое исследование образцов увеальной меланомы (УМ): а — лимфоидный инфильтрат в ткани УМ (окраска гематоксилином и эозином; х 100); б — положительная иммуногистохимическая (ИГХ) реакция с антителами CD28 для выявления Т-цитотоксических CD28+-лимфоцитов в ткани УМ (х 100); в — положительная ИГХ-реакция с антителами CD4 для выявления Т-хелперов CD4+-лимфоциmов в ткани УМ (х 100); г — положительная ИГХ-реакция с антителами CD8 для выявления Т-цитотоксических CD8+-лимфоциmов в ткани УМ (х 100); д — положительная ИГХ-реакция с антителами CD25 для выявления CD25+-лимфоциmов в ткани УМ(х 100); е — положительная ИГХ-реакция с антителами CD16 для выявления натуральных киллеров CD16+ в ткани УМ(х200); ж — положительная ИГХ-реакция с антителами CD56 для выявления натуральных киллеров CD56+ в ткани УМ (х 100); з — макрофаг в ткани УМ (окраска гематоксилином и эозином; х200); и — положительная ИГХ-реакция с антителами CD68 для выявления макрофагов CD68+ в ткани УМ(х 100); к — положительная ИГХ-реакция с антителами CD163 для выявления макрофагов CD163+ в ткани УМ; л — положительная ИГХ-реакция с антителами к белку пролиферации Ki-67 в ткани УМ (х100). Шкала 100 мкм
Fig. 2. Immunohistochemical study of uveal melanoma (UM) samples: a — lymphoid infiltrate in the UMtissue (staining with hematoxylin and eosin; x100); б — positive immunohistochemical (IHC) reaction with antibodies CD28for the detection of T-cytotoxic CD28+ lymphocytes in the tissue UM(х 100); в — positive IHC reaction with antibodies CD4 for the detection of T-helpers CD4+ lymphocytes in the tissue UM (х 100); г — positive IHC reaction with CD8 antibodies to detect T-cytotoxic CD8+ lymphocytes in the UM tissue (х100); д — positive IHC reaction with antibodies CD25for the detection of CD25+ lymphocytes of tissue UM (х 100); е — positive IHC reaction with antibodies CD16 for the detection of natural killer cells CD16+ in the tissue UM (х200); ж — positive IHC reaction with antibodies CD56for the detection of natural killer cells CD56+ in the tissue UM (х 100); з — macrophage in the tissue UM (х300; staining with hematoxylin and eosin); и — positive IHC reaction with antibodies CD68for the detection of macrophages CD68+ in the tissue UM ( х100); к— positive IHC reaction with antibodies CD163 for the detection of macrophages CD163+ in the tissue of the UM (х 100); л — positive IHC reaction with antibodies to the proliferation protein Ki-67 in the UM tissue ( х 100). Scale 100 microns
Таблица 1. Иммуногистохимическое исследование субпопуляций лимфоцитов в ткани увеальной меланомы Table 1. Immunohistochemical study of lymphocyte subpopulations in uveal melanoma tissue
Субпопуляция лимфоцитов Lymphocyte subpopulation Абсолютное количество положительно окрашенных клеток субпопуляций лимфоцитов, M ± m (мин.—макс.) Относительное количество субпопуляций лимфоцитов (%), M ± m, (мин.—макс.)
Absolute number of lymphocyte subpopulations, M ± m (min-max) Relative number of lymphocyte subpopulations, %, M ± m (min—max)
Т-хелперы CD4+ T-helpers CD4+ 387,6 ± 362,5 (5-2500) 8,18 ± 4,45 (2,80-20,91)
T-цитотоксические CD8+ T-cytotoxic CD8+ 409,4 ± 383,9 (3-1600) 7,59 ± 4,96 (0-16,26)
Т-цитотоксические CD28+ T-cytotoxic CD28+ 607,3 ± 431,2 (11-1920) 18,84 ± 12,12 (3,17;42,02)
CD25+ 371,9 ± 332,6 (5-1800) 8,19 ± 4,52 (2,59-17,36)
Натуральные киллеры CD16+ Natural killers CD16+ 394,3 ± 387,1 (4-1520) 9,77 ± 6,07 (1,84-25,04)
Натуральные киллеры CD56+ Natural killers CD56+ 466,8 ± 436,6 (2-1600) 9,02 ± 4,71 (1,12-14,93)
СЧ СЧ
о
СЧ
СЧ
>-
(J
о
-J
о и z о
ОС <
о ж
to
LU
и
z <
>
a
<
Таблица 2. Иммуногистохимическое исследование экспрессируемых макрофагами антигенов CD68+ и CD163+ в ткани увеальной меланомы Table 2. Immunohistochemical study of CD68+ and CD163+ antigens expressed by macrophages in uveal melanoma tissue
Вид макрофагов Абсолютное количество различных видов макрофагов положительно окрашенных клеток, Относительное количество различных видов макрофагов, %, M ± m (мин.—макс.)
Type of macrophages Relative content of different types of macrophages in the uveal melanoma tissue, %, M ± m (min-max)
The absolute number of different types of macrophages in uveal melanoma tissue, M ± m (min-max)
М2-макрофаги CD68+ M2 macrophages CD68+ 457,2 ± 381,8 (4-1530) 10,52 ± 5,58 (1,67-24,59)
М2-макрофаги CD163+ M2 macrophages CD163+ 461,6 ± 376,9 (4-2100) 11,20 ± 7,89 (0-30,61)
О X
о о
X Q_
в;
£ m
о ж.
окрашенных клеток соответственно, относительное количество - 8,18 ± 4,45; 7,59 ± 4,96 и 8,19 ±4,52 % соответственно (р = 0,6).
Анализ 2 субпопуляций натуральных киллеров CD16+ и CD56+ показал, что абсолютное количество CD16+ оказалось ниже по сравнению с CD56+ (р = 0,05) (рис. 2, е, ж; табл. 1). Однако отмечено отсутствие статистически значимых различий в относительном количестве этих субпопуляций (р = 0,9).
Гистологическое исследование выявило наличие в микроокружении ткани УМ макрофагов. При окраске гематоксилином и эозином они представляли собой клетки небольших размеров, как правило, овальной формы с четкими границами и глубокими складками оболочки с эксцентрично расположенным ядром (рис. 2з). Согласно данным ИГХ-исследования экс-прессируемых противовоспалительными и проопухо-левыми макрофагами антигенов CD68+ и CD163 + их абсолютное и относительное содержание в ткани УМ было практически одинаковым, с небольшим преобладанием CD163+ (р = 0,7) (рис. 2, и, к; табл. 2).
В ходе ИГХ-исследования о наличии белка пролиферации Ю-67 в ядрах клеток меланомы свидетельствовало коричневое окрашивание на фоне светло-голубых опухолевых клеток (рис. 2л). В 10 полях зрения выявлено в среднем 575,2 ± 388,5 значимых клеток. Это составило 16,69 ± 10,88 % относительного количества опухолевых клеток.
ОБСУЖДЕНИЕ
Увеальная меланома - злокачественная опухоль, в патогенезе которой большую роль играют молекуляр-но-генетические мутации, запускающие неадекватный иммунный ответ организма [12]. Злокачественный неопластический процесс приводит к метастазированию [13]. Несмотря на то, что существуют различные стратегии лечения УВ, ни одна из них не показала увеличения показателей общей выживаемости [14-16]. Это обусловливает необходимость поиска новых терапевтических мишеней.
Исследованию «воспалительного» клеточного микроокружения опухоли посвящен ряд работ [17-19].
и >
сч сч О сч
сч
>-
и о
-J
о и Z
о
ОС <
о ж
ю
< >
а
<
о
а. те
>
Большую роль в неоангиогенезе, пролиферации, про-грессировании новообразования и неблагоприятном витальном прогнозе при УМ играет наличие лимфо-цитарного и макрофагального инфильтратов [20—24]. В связи с этим особое внимание уделяют иммуно-фенотипированию лимфоцитарного инфильтрата в микроокружении опухоли [25]. По мнению ученых, инфильтрация ткани меланомы CD4+- и CD8+-T-лим-фоцитами оказывает прямое цитотоксическое воздействие на клетки опухоли [26]. По данным литературы проангиогенными и канцерогенными свойствами обладают макрофаги М2 [9]. Некоторые исследователи считают, что наличие в ткани УМ значительного количества опухоль-инфильтрирующих макрофагов связано с неблагоприятным прогнозом [8]. Содержание в ткани меланомы макрофагов CD68+ подтверждено, хотя их значимость в витальном прогнозе разноречива [27].
Наши комплексные ИГХ-исследования, проведенные впервые в России, показали наличие ОИЛ и ОАМ во всех изученных образцах слабо и умеренно пигментированных форм первичной УМ. Было выявлено, что в основном встречаются CD28+-лимфоциты, реже — Т-хелперы CD4+, Т-цитотоксические CD8+-и CD25+-лимфоциты (в равном соотношении). Также в микроокружении опухоли обнаружено больше CD56+ натуральных киллеров по сравнению с CD16+. Иммуногистохимическое исследование макрофагов показало практически одинаковое содержание CD68+ и CD163+.
Ранними событиями канцерогенеза являются нарушение механизмов пролиферации и апоптоза клеток
[25]. Одним из методов определения пролиферативной активности опухоли служит подсчет индекса Ю-67 [28]. Его пограничные значения различаются в зависимости от локализации опухоли. В случае меланоцитарных новообразований индекс Ю-67 менее 10 % свидетельствует о низком уровне пролиферации, 10—20 % — о пограничном уровне, более 20 % — о высоком уровне [28]. Иммунореактивность Ю-67 коррелирует с доброкачественностью или злокачественностью меланоцитарных поражений [29]. Проведенное ИГХ-исследование показало наличие 16,69 ± 10,88 % клеток с положительной реакцией с Ю-67 в ткани УМ.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Иммуногистохимическое исследование позволило выявить в ткани слабо и умеренно пигментированной УМ наличие субпопуляций лимфоцитов со значительным преобладанием Т-цитотоксических CD28+-лим-фоцитов. Наблюдалось практически одинаковое количество экспрессируемых противовоспалительными и проопухолевыми макрофагами антигенов CD68+ и CD163 + . Иммуногистохимическое исследование белка пролиферации Ю-67 в ядрах клеток меланомы показало, что он содержится в 16,69 ± 10,88 % опухолевых клеток. Полученные данные позволят в дальнейшем оценить значимость отдельных иммунных клеток (в частности, субпопуляции Т-цитотоксиче-ских CD28+-лимфоцитов) в патогенезе УМ с целью разработки таргетного воздействия, обоснования новых иммунотерапевтических подходов к лечению первичной опухоли и перепрограммирования измененных иммунных клеток.
о ж.
и >
ЛИТЕРАТУРА/REFERENCES
1. Бровкина А.Ф., Панова И.Е., Са-акян С.В. Офтальмоонкология: новое за последние два десятилетия. Вестник офтальмологии 2014;130(6):13—9. [Brovkina A.F., Panova I.E., Saakyan S.V. Ophthalmic oncology: new over the past two decades. Vestnik oftal'mologii = Ophthalmology bulletin 2014;130(6): 13-9. (In Russ.)].
2. Саакян С.В., Балацкая Н.В., Катарги-на Л.А. и др. Субпопуляционный состав лимфоцитов периферической крови при увеальной меланоме. Медицинская иммунология 2019;21(4):765-72. [Saakyan S.V., Balatskaya N.V., Katargina L.A. et al. Subpopulation composition of peripheral blood lymphocytes in uveal melanoma. Meditsinskaya immunologiya = Medical immunology 2019;21(4):765-72.
(In Russ.)].
DOI: 10.15789/1563-0625-2019-4765-772.
3. Саакян С.В., Амирян А.Г., Цыганков А.Ю. и др. Клинические, патомор-фологические и молекулярно-генети-ческие особенности увеальной меланомы с высоким риском метаста-зирования. Российский офтальмологический журнал 2015;8(2):47-52. [Saakyan S.V., Amiryan A.G., Tsygan-kov A.Yu. et al. Clinical, pathological and molecular genetic features of uveal melanoma with a high risk of metastasis. Rossiyskiy oftal'mologicheskiy zhurnal = Russian Ophthalmological Journal 2015;8(2):47-52. (In Russ.)].
4. Fidler I.J., Kim S.J., Langley R.R.
The role of the organ microenvironment in the biology and therapy of cancer metastasis. J. Cell Biochem 2007;101(4): 927-36. DOI: 10.1002/jcb.21148.
5. Саакян С.В., Захарова Г.П., Мякошина Е.Б. Тучные клетки в микроокружении увеальной меланомы. Архив патологии 2019;81(6):63-70. [Saakyan S.V., Zakharova G.P., Myakoshina E.B. Mast cells in the microenvironment of uveal melanoma. Arkhiv patologii = Archive of pathology 2019;81(6):63-70. (In Russ.)].
DOI: 10.17116/patol20198106163.
6. Johansson J., Siarov J., Kiffin R. et al. Presence of tumor-infiltrating CD8+ T cells and macrophages correlates
to longer overall survival in patients undergoing isolated hepatic perfusion for uveal melanoma liver metastasis. Oncoimmunology 2020;10;9(1):1854519. DOI: 10.1080/2162402X.2020.1854519.
7. Lee N., Zakka L.R., Mihm M.C. Jr. et al. Tumour-infiltrating lymphocytes
in melanoma prognosis and cancer
immunotherapy. Pathology
2016;48(2):177-87.
DOI: 10.1016/j.pathol.2015.12.006.
8. Bronkhorst I.H., Ly L.V., Jordanova E.S. et al. Detection of M2-macrophages
in uveal melanoma and relation with survival. Invest Ophthalmol Vis Sci 2011;3;52(2):643-50. DOI: 10.1167/iovs.10-5979.
9. Toivonen P., Makitie T., Kujala E. et al. Microcirculation and tumor-infiltrating macrophages in choroidal and ciliary body melanoma and corresponding metastases. Invest Ophthalmol Vis Sci 2004;45(1):1-6. DOI: 10.1167/iovs.03-0622.
10. Mooy C.M., de Jong P.T., Van der Kwast T.H. et al. Ki-67 immunostaining in uveal melanoma. The effect of pre-enucleation radiotherapy. Ophthalmology 1990;97(10):1275-80.
DOI: 10.1016/s0161-6420(90)32420-x.
11. Al-Jamal R.T., Kivela T. KI-67 immunopositivity in choroidal and ciliary body melanoma with respect to nucleolar diameter and other prognostic factors. Curr Eye Res 2006;31(1):57-67.
DOI: 10.1080/02713680500478535.
12. Tian T., Olson S., Whitacre J. et al. The origins of cancer robustness and evolvability. Integr Biol 2011;3(1):17-30. DOI: 10.1039/c0ib00046a.
13. Lane A.M., Kim I.K., Gragoudas E.S. Survival rates in patients after treatment for metastasis from uveal melanoma. JAMA Ophthalmol 2018;136(9):981-6. DOI: 10.1001/jamaophthalmol.2018.2466.
14. Rantala E.S., Hernberg M., Kivela T.T. Overall survival after treatment for me-tastatic uveal melanoma: a systematic review and meta-analysis. Melanoma Res 2019;29(6):561-8.
DOI: 10.1097/CMR.0000000000000575.
15. Heppt M.V., Heinzerling L., Kahler K.C. et al. Prognostic factors and outcomes
in metastatic uveal melanoma treated with programmed cell death-1 or combined PD-1/cytotoxic T-lymphocyte antigen-4 inhibition. Eur J Cancer
2017;82:56-65.
DOI: 10.1016/j.ejca.2017.05.038.
16. Roma-Rodrigues C., Mendes R., Baptista P. V. et al. Targeting Tumor Microenvironment for Cancer Therapy. Int J Mol Sci 2019;20(4):840.
DOI: 10.3390/ijms20040840.
17. Bronkhorst I.H.G., Jager M.J. Uveal melanoma: the Inflammatory microenvironment. J Innate Immun 2012;4:454-62.
DOI: 10.1159/000334576.
18. Cаакян C.B., Захарова Г.П., Мякошина Е.Б. Клеточное микроокружение увеальной меланомы: клинико-морфологические корреляции и предикторы неблагоприятного прогноза. Молекулярная медицина 2020;18 (3):27—33. [Saakyan S.V., Zakharova G.P., Myakoshina E.B. Cellular microenvironment of uveal melanoma: clinical and morphological correlations and predictors of poor prognosis. Molekulyarnaya meditsina = Molecular Medicine 2020;18(3):27—33. (In Russ.)]. DOI: 10.29296/24999490-2020-03-04.
19. Франк ГА., Кузнецова G.A., Завалишина Л.Э. и др. Исследование PD-L1-статyса рака молочной железы с использованием моноклонального антитела SP142 и перспективы для определения лечебной тактики. Aрxив патологии 2019;81(5):5—10. [Frank G.A., Kuznetsova O.A., Zavalishina L.E. et al. Investigation
of PD-L1-status of breast cancer using monoclonal antibody SP142 and prospects for determining therapeutic tactics. Arkhiv patologii = Archive of pathology 2019;81(5):5—10. (In Russ.)]. DOI: 10.17116/patol2019810515.
20. Oble D.A., Loewe R., Yu P. et al. Focus on TILs: prognostic significance of tumor infiltrating lymphocytes in human melanoma. Cancer Immun 2009;9(1):3.
21. McLean I.W., Saraiva V.S., Burnier M.N. Pathological and prognostic features
of uveal melanomas. Can J Ophthalmol
2004;39:343-50.
DOI: 10.1016/s0008-4182(04)80004-8.
22. Qin Y., Bollin К., Petaccia de Macedo M. et al. Immune profiling of uveal melanoma identifies a potential signature associated with response
to immunotherapy. J Immunother Cancer 2020;8(2):e000960. DOI: 10.1136/jitc-2020-000960.
23. Krishna Y., McCarthy C., Kalirai Н. et al. Inflammatory cell infiltrates in advanced metastatic uveal melanoma. Human Pathology 2017;66:159-66.
DOI: org/10.1016/j.humpath.2017.06.005.
24. Ly L.V., Bronkhorst I.H.G., van Beelen E. et al. Inflammatory cytokines in eyes with uveal melanoma and relation with macrophage infiltration. Invest Ophthalmol Vis Sci 2010;51(11):5445-51. DOI: 10.1167/iovs.10-5526.
25. Coussens L.M., Werb Z. Inflammation and cancer. Nature 2002;420(6917):860-7. DOI:10.1038/nature01322.
26. Tobal K., Deuble K., Mccartney A. et al. Characterization of cellular infiltration in choroidal melanoma. Melanoma Res 1993;3(1):63-5. DOI: 10.1097/00008390199304000-00009.
27. Mantovani A. Tumor-associated macrophages in neoplastic progression: a paradigm for the in vivo function
of chemokines. Lab Invest 1994;71(1):5-16.
28. Sun X., Kaufman P.D. Ki-67: more than a proliferation marker. Chromosoma 2018;127(2):175-86. DOI:10.1007/ s00412-018-0659-8.
29. Новикова И.А., Максимова Н.А., Позднякова В.В. и др. Некоторые иммуногистохимические особенности меланоцитарных образований кожи. Современные проблемы науки и образования 2016;5:1-8. [Novikova I.A., Maksimova N.A., Pozdnyakova V.V. et al. Some immunohistochemical features
of skin melanocytic formations. Sovre-mennye problemy nauki i obrazovaniya = Modern problems of science and education 2016;5:1-8. (In Russ.)].
СЧ СЧ
о
СЧ
СЧ
>-
(J
о
—I
о и z о
ОС <
о ж
to
< >
а
<
о m
а.
в;
Ii
m
о ж.
и >
Благодарность. Авторы выражают благодарность д.м.н., профессору, академику РАН, заслуженному деятелю науки Российской Федерации Г.А. Франку и д.б.н., профессору кафедры патологической анатомии ФГБОУ ДПО «Российская медицинская академия непрерывного профессионального образования» Минздрава России Л.Э. Завалишиной за помощь в проведении исследований, научное консультирование и научное редактирование статьи.
Acknowledgment. The authors express their gratitude to G.A. Frank, MD, Professor, Academician of the Russian Academy of Sciences, Honored Scientist of the Russian Federation, and L.E. Zavalishina, PhD, Professor of the Department of Pathological Anatomy of the Russian Medical Academy of Continuing Professional Education, Ministry of Health of Russia for assistance in conducting research and scientific consulting and scientific editing of the article. Вклад авторов
С.В. Саакян, Л.А. Катаргина, И.П. Хорошилова-Маслова: разработка концепции и дизайна исследования;
Е.Б. Мякошина: разработка концепции и дизайна исследования, сбор и обработка материала, статистическая обработка полученных данных, написание текста статьи, редактирование статьи;
Г.П. Захарова: разработка концепции и дизайна исследования, сбор и обработка материала, редактирование статьи; А.М. Майбогин: редактирование статьи.
Authors' contribution
см О см
S.V. Sahakyan, L.A. Katargina, I.P. Khoroshilova—Maslova: development of the concept and design of the study;
E.B. Myakoshina: development of the concept and design of the study, collection and processing of the material, statistical processing of the data obtained, article writing, article editing;
G.P. Zakharova: development of the concept and design of the study, collection and processing of material, article editing;
A.M. Maybogin: article editing. >-
«£ ORCID авторов / ORCID of authors
С.В. Саакян / S.V. Saakyan: https://orcid.org/0000-0001-8591-428X О Л.А. Катаргина / L.A. Katargina: https://orcid.org/ 0000-0002-4857-0374
Е.Б. Мякошина / E.B. Myakoshina: https://orcid.org/0000-0002-2087-7155 О Г.П. Захарова/ G.P. Zakharova: https://orcid.org/ 0000-0002-0824-534X
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов. Э Conflict of interest. The authors declare no conflict of interest.
CM >-
и о
—I
о
и
о ж
о m
а. те
> m
О
ж
U >
Финансирование. Исследование проведено без спонсорской поддержки. Financing. The study was performed without external funding.
„ Соблюдение прав пациентов и правил биоэтики. Все пациенты подписали информированное согласие на участие в исследовании.
to Compliance with patient rights and principles of bioethics. All patients gave written informed consent to participate in the study. LU
и
Z <
>
a
<
Статья поступила: 20.06.2021. Принята к публикации: 13.04.2022. Article submitted: 20.06.2021. Accepted for publication: 13.04.2022.
