CC BY
44
УДК 616.432-091.8:618.439: [618.3-06:616.98:578.828]
ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ АДЕНОГИПОФИЗА МЕРТВОРОЖДЕННЫХ ОТ ВИЧ-ИНФИЦИРОВАННЫХ МАТЕРЕЙ
Морфологические изменения аденогипофиза мертворожденных от ВИЧ-инфицированных матерей свидетельствуют о том, что он испытывал высокое функциональное напряжение на протяжении длительного периода внутриутробного развития, что привело к угнетению его функционального состояния в виде снижения интенсивности свечения препаратов аденогипофиза обработанных МКА к АКТГ, по сравнению с контролем. Угнетение функциональной активности данное популяции клеток аденогипофиза свидетельствует о срыве компенсаторных возможностей органа, которое в дальнейшем может явиться причиной развития тяжелых эндокринопатий. Угнетение функционального состояния аденогипофиза мертворожденных от ВИЧ-инфицированных матерей является следствием длительного использования компенсаторных возможностей органа, что в дальнейшем может явиться причиной развития декомпенсации в виде тяжелых эндокринопатий.
Ключевые слова: аденогипофиз, ВИЧ-инфекция, мертворожденный.
Работа является фрагментом НИР «Патоморфологические особенности формирования плода и новорожденного под влиянием патологии матери», № государственной регистрации 0110U001805.
Формирование центрального органа эндокринной системы плода - аденогипофиза, происходит в первую очередь, наряду с сердцем и головным мозгом [5]. Известно, что нарушение структуры и функции различных отделов гипофиза сопровождается полигландулярными расстройствами в постнатальном периоде онтогенеза. Данные указывающие на нарушение структурной дифференцировки аденогипофиза, на этапах развития, обусловленные развитием беременности на фоне соматических заболеваний матери, акушерской патологии, влияния профессиональных вредностей, в доступной литературе имеются [2, 5, 9]. Однако морфологических данных аденогипофиза мертворожденных от ВИЧ-инфицированных матерей, в доступной литературе найти не удалось. На наш взгляд изучение данной проблемы является весьма актуальным, так как количество случаев инфицирования ВИЧ женщин репродуктивного возраста и беременных неуклонно растет [4, 6].
Целью работы было выявление иммуногистохимических особенностей аденогипофиза мертворожденных от ВИЧ-инфицированных матерей.
Материал и методы исследования. Материалом исследования послужили мертворожденные от ВИЧ-инфицированных матерей. Материал был собран в период с 1998 по 2010 гг. Одесским патологоанатомическим бюро. Исследуемую группу (группа М) составили 20 мертворожденных от матерей с серологически подтвержденной ВИЧ-инфекцией. Для получения достоверных данных материал подбирался тщательно, поэтому ни в одном из этих наблюдений не были зарегистрированы оппортунистические заболевания. Смерть мертворожденных наступила вследствие острого нарушения пуповинно-плацентарного кровообращения (отслойка плаценты, обвитие пуповины вокруг различных частей тела плода) и родовой травмы. В группу контроля (группа К) вошли мертворожденные, от здоровых матерей (12 случаев), умерших по причине острого нарушения пуповинно-плацентарного кровообращения и родовой травмы. Срок гестации всех мертворожденных составил от 36 недель до 40 недель.
Аденогипофиз измерялся и взвешивался. Вырезались кусочки которых после спиртовой проводки заливались в целлоидин-парафин и изготавливались срезы толщиной 5-6 мкм. Эти срезы окрашивали гематоксилином и эозином, пикрофуксином по ван Гизон и по методу Маллори. Иммуногистохимическое исследование производилось с использованием непрямого метода Кунса в модификации M. Brosman (1979) [1]. АКТГ (адренокортикотропный гормон) и ТТГ (тиреотропный гормон) выявляли с помощью МКА (моноклональные антитела) к АКТГ и ТТГ фирмы Chemicon international (a Serological company). Иммуногистохимическое исследование проводилось в люминисцентном микроскопе «Axioskor 40» с использованием программного обеспечения Biostat. ехе. Оптическую плотность иммунофлюоресценции определяли по методу Губиной-Вакулик Г.И. и соавторов (Губша-Вакулик Г.1., Сорокша 1.В., Марковський В.Д., Купрiянова Л.С., Сидоренко Р.В. «Спошб кшьюсного визначення вмюту антигену в бюлопчних тканинах». Патент на корисну модель № 46489 G01N 33/00, 24.12.2009. Бюл. №4). Комплекс гистологических, морфометрических, исследований проводился на микроскопе Olympus BX-41 с
использованием программ Olympus DP-Soft (Version 3:1) и Microsoft Excel [3]. Плотность клеточных элементов пересчитывалась при увеличении 400, в 10 ограниченных полях зрения. Все цифровые данные обрабатывались методами математической статистики с использованием вариационного и альтернативного анализа [3]. При использовании методов альтернативной и вариационной статистики вычисляли среднюю арифметическую степень дисперсии, среднеквадратическое отклонение, среднюю ошибку разницы, вероятность различия. Вероятность различия между двумя средними при малых выборках определяли по таблице Стьюдента с соблюдением условия (n1+n2-2) [7]. При определении степени вероятности допускали точность р<0,05, что, как известно, соответствует Р>95,0%.
Результаты исследований и их обсуждение. Аденогипофиз мертворожденных от ВИЧ-инфицированных матерей был покрыт соединительнотканной капсулой, от которой вглубь железы отходили перегородки, разделяющие железу на дольки. Микроскопически в аденогипофизе были различимы эпителиальные трабекулы, формирующие густую сеть, в промежутках между которыми определялась рыхлая волокнистая соединительная ткань и синусоидные капилляры (рис. 1). По периферии трабекул определялись хромофильные клетки, а в центральных отделах располагались хромофобные эндокриноциты.
Хромофильные эндокриноциты были представлены, в зависимости от окраски их секреторных гранул, базофильными эндокриноцитами, секреторные гранулы которых окрашивались основными красителями и ацидофильными эндокриноцитами, их секреторные гранулы окрашивались кислыми красителями. Тиреотропоциты, являющиеся представителями базофильных эндокриноцитов, имели полигональную форму, овальное ядро и хорошо выраженный аппарат Гольджи. Иммуногистохимическое исследование данной популяции клеток аденогипофиза группы М выявило преимущественно яркое свечение тиреотропоцитов в препаратах, обработанных МКА к ТТГ (рис. 2). Оптическая плотность иммунофлюоресценции тиреотропоцитов в аденогипофизе мертворожденных от ВИЧ-инфицированных матерей оказалась выше контрольного показателя (таблица 1). Адренокортикотропоциты имели неправильную форму, дольчатое ядро, занимающее центральное положение в клетке, а в цитоплазме этих клеток определялся хорошо выраженный аппарат Гольджи. Интенсивность свечения адренокортикотропоцитов, обработанных МКА, была неравномерной - от слабой до яркой (рис. 3). При этом показатель оптической плотности оказался ниже контрольного (таблица
Рисунок 1. Аденогипофиз Рисунок 2. Преимущественно яркое
мертворожденного от ВИЧ- свечение тиреотропоцитов,
инфицированной матери. Сеть экспрессирующих рецепторы к ТТГ в
полнокровных синусоидных капилляров аденогипофизе мертворожденного от
с рыхлым периваскулярным склерозом. ВИЧ-инфицированной матери. Прямой
Окраска по методу ванГизон. х100 метод Кунса с МКА к АКТГ, х600
Известно что, патологическое течение беременности может усиливать либо подавлять функциональную активность аденогипофиза. Характер изменений функционального состояния аденогипофиза эмбрионов и плодов тесно связан со временем начала и длительностью действия патологического фактора [2, 8]. Кратковременное действие повреждающего агента (острая инфекция) способствует активизации функционального состояния аденогипофиза, а длительное действие (длительно текущий поздний токсикоз, сердечно-сосудистая патология, профвредности и др.) - может привести к угнетению (иногда резкому) функционального состояния аденогипофиза, что проявляется снижением активности ферментов и клеточных белков [2, 8, 9, 10].
Проведенное нами иммуногистохимическое исследование эндокриноцитов, аденогипофиза мертворожденных от ВИЧ-инфицированных матерей, показало, что популяция тиреотропоцитов имела преимущественно яркое свечение в препаратах, обработанных МКА к ТТГ, а показатель
Рисунок 3. Неравномерной интенсивности свечение
адренокортикотропоцитов в
аденогипофизе мертворожденного от ВИЧ-инфицированной матери. Прямой метод Кунса с МКА к АКТГ, х600
оптической плотности адренокортикотропоцитов, обработанных МКА, оказался ниже контрольного, что, безусловно, свидетельствует о высоком функциональном напряжении аденогипофиз данной исследуемой группы [2].
Таблица 1
Оптическая плотность иммунофлюоресценции гормонов в клетках аденогипофиза
(условные единицы)
Группы сравнения АКТГ ТТГ
К 0,174±0, 006 0,153±0, 003
М 0,155±0, 005* 0,168±0, 006*
* Р<0,05 по сравнению с К.
Таким образом, учитывая морфологические изменения аденогипофиза мертворожденных от ВИЧ-инфицированных матерей, которые свидетельствуют о состоянии высокого напряжения функциональной активности органа, граничащего со срывом, можно предположить, что орган испытывал высокое функциональное напряжение на протяжении длительного периода внутриутробного развития, что и привело к угнетению его функционального состояния, на что указывает снижение интенсивности свечения препаратов аденогипофиза обработанных МКА к АКТГ, по сравнению с контролем.
1. Иммуногистохимическое исследование эндокриноцитов, аденогипофиза мертворожденных от ВИЧ-инфицированных матерей выявило высокое функциональное напряжение органа, проявившееся уменьшением оптической плотности адренокортикотропоцитов, обработанных МКА к АКТГ.
2. Угнетение функционального состояния аденогипофиза мертворожденных от ВИЧ-инфицированных матерей является следствием длительного использования компенсаторных возможностей органа, что в дальнейшем может явиться причиной развития декомпенсации в виде тяжелых эндокринопатий.
Перспективы дальнейших исследований. Перспективным является иммуногистохимическое исследование аденогипофиза детей, умерших в возрасте до 6 месяцев от ВИЧ-инфицированных матерей.
1. Атраментова Л. А. Статистические методы в биологии / Л. А. Атраментова, О. М. Лутевская// Горловка, - 2008. - 247 с.
2. Деревцов В. В. Состояние здоровья и адаптационно-резервные возможности в неонатальном периоде новорожденных детей матерей с анемиями / В. В. Деревцов // Фундаментальные исследования. - 2010. - № 8 - С. 10-21.
3. Лапач С. К. Статистические методы в медико-биологических исследованиях с использованием Exel. / С. К. Лапач, А. В. Чубенко, П. Н. Бабич // - К.:МОРИОН, - 2001. - С. 144-155.
4. Марциновская В. А. Эпидемиологическая характеристика ВИЧ-инфекции у детей, рожденных ВИЧ-инфицированными женщинами, в Украине / В. А. Марциновская // Украшський медичний часопис. - 2006. -№1. - С. 109-113.
5. Милованов А. П. Внутриутробное развитие человека / А. П. Милованова, С. В. Савельева// - М.: «МДВ», - 2006. - 384 с.
6. Кколаенко Д. В. Характеристика еп1дем1чно1 ситуацн з В1Л/СН1Д в адмшютративних областях Укра'ши на базе Г1С / Д. В. Кколаенко, М. О. Трюхан // Вюник геодезп та картографн. - 2007. - №4.- С. 28 - 31.
7. Сергиенко В. И. Математическая статистика в клинических исследованиях / В. И. Сергиенко, И. Б. Бондарева // - М.: ГЭОТАР МЕДИЦИНА, - 2000. - 256 с.
8. Шабалов Н. П. Асфиксия новорожденных / Н. П. Шабалов, В. А. Любименко, А. Б. Шабалов [и др.] // - М.: МЕДпресс-информ. - 2003. - 368 с.
9. Щеплягина Л. А. Состояние здоровья новорожденных от матерей с увеличением щитовидной железы / Л. А. Щеплягина, О. С. Нестеренко, Н. А. Курмачева // Рос. педиатр, журнал. - 2009. - № 4. - С. 56-58.
10. Smith R. Alterations in the hypothalamic pituitary adrenal axis during pregnancy and the placental clock that determines the length of parturition /R. Smith // - J.Reprod.Immunol.-1998.-Vol.39.-N1-2.-P.215-220.
ШУНОПСТОХШ1ЧШ ОСОБЛИВОСТ1 АДЕНОГ1ПОФ1ЗА МЕРТВОНАРОДЖЕНИХ В1Д В1Л-1НФ1КОВАНИХ МАТЕР1В Шерстюк С. О.
Морфолопчш змши аденогiпофiза мертвонароджених вщ В1Л-шфжованих матерiв свщчать про те, що вш вщчував високе функцюнальне напруження протягом тривалого перюду внутршньоутробного розвитку, що призвело до пригшчення його функцюнального стану у виглядi зниження штенсивност свтння препараив аденогiпофiза оброблених МКА до АКТГ, в порiвняннi з контролем. Пригшчення функцюнально! активност
IMMUNOHISTOCHEMICAL FEATURES OF ADENOHYPOPHYSIS STILLBIRTHS FROM HIV-INFECTED MOTHERS Sherstiuk S. A.
Morphological changes of adenohypophysis stillbirths from HIV-infected mothers indicate that he felt highly functional stress for a long period of fetal development, leading to inhibition of its functional state in the form of reduced intensity of luminescence drugs adenohypophysis ICA processed to ACTH, compared with the control. Suppression of the
популяцп клтн аденогiпофiза свщчить про зрив компенсаторних можливостей органу, яке в подальшому може стати причиною розвитку важких ендокршопатш. Пригнiчення функцiонального стану аденогiпофiза мертвонароджених вiд ВIЛ-iнфiкованих матерiв е наслiдком тривалого використання компенсаторних можливостей органу, що надалi може стати причиною розвитку декомпенсацй у виглядi тяжких ендокринопатiй.
Ключовi слова: аденогiпофiз, ВIЛ-iнфекцiя, мертвонароджений.
Стаття надiйшла 15.10.2014 р.
functional activity of the cell population adenohypophysis shows the breakdown of compensatory capacity of which may subsequently cause of severe endokrinopatiy. Inhibition of the functional state of the adenohypophysis stillbirths from HIV-infected mothers is the result of prolonged use of compensatory capacities of the body that can further cause of decompensation in a serious endokrynopatiy.
Key words: anterior pituitary, HIV infection,
stillborn.
Рецензент Старченко I.I.
УДК 616.5-001.17-091.8-076] -092.9
Г1СТОЛОПЧШ ТА ПСТОХ1М1ЧШ ЗМ1НИ УШКОДЖЕНО1 Д1ЛЯНКИ ШК1РИ В ДИНАМ1Ц1 П1СЛЯ ЕКСПЕРИМЕНТАЛЬНО1 ТЕРМ1ЧНО1 ТРАВМИ
В експеримент на морських свинках проведет пстолопчт та гiстохiмiчнi дослщження ушкоджено! дiлянки шюри в рiзнi термiни пiсля тяжко! термiчноi' травми. Встановлено, що стутнь деструктивних змiн епiдермiсу та дерми залежить вiд термiну пiсля отку. Значнi судиннi розлади та пошкодження структурних компонентiв сполучно! тканини, змши !! гiстохiмiчних показникiв пригнiчують регенераторт процеси як в центральнiй, так i в крайовiй дiлянцi рани.
Ключов! слова: пстолопчт та пстошьячш змши, шюра, терм1чна травма.
Робота е фрагментом НДР "Ремоделювання кровоносних русел внутршшх оргашв та тканин при рiзних патологiчних станах в експериментi", номер державноI реестраци 0111и008026.
Аварп та пожеж на виробницта, транспорт!, техногенш катастрофи, терористичш акти, збройш конфл1кти, побутовий травматизм - все це невщ'емш складов! сучасного життя. У зв'язку з цим кшьюсть травм взагал1, а, зокрема, 1 терм1чних у свт зростае [2, 7]. Частота опшв у розвинутих кранах сягае 1:1000 населення в р1к, а летальшсть коливаеться вщ 1,5 до 5,9 % при цьому 85-90 % постраждалих - це люди працездатного в1ку [5]. Безпосереднього ушкодження при отках зазнае зовшшнш покрив людини. У шюр1 добре розвинеш процеси регенерацл, в основ1 яких лежать мехашзми м1грацл та мгготичного подшу клггин дерми та етдермальних клггин. Проблемою вщновлення пошкоджених тканин займаються з давтх чаав, оскшьки тшьки маючи точне уявлення про функцп { мехашзми взаемодп клггин, що беруть участь в раневому процесс можна розробити ращональт, високоефективт методи лшування ран та попередити виникнення ускладнень !х переб1гу [3, 6, 8]. Але до цього часу патогенез ошково! рани залишаеться не до юнця вивченим.
Метою роботи було встановлення пстолопчного та пстох1м1чного стану ешдермюу та дерми шюри морських свинок в динамщ шсля експериментально! терм1чно! травми.
Матер1ал та методи дослщження. Експериментальш дослщження виконано на 25 статевозрших морських свинках. При проведенш дослщжень дотримувалися м1жнародних правил та принцишв "Свропейсько! конвенцп про захист хребетних тварин, як використовуються для експерименпв та з ¡ншою науковою метою" (Страсбург, 1986) { "Загальних етичних принцишв експерименпв на тваринах" (Ки!в, 2001).
Ошк III ступеня на епшьовану поверхню шюри спини тварини наносили водяною парою при температур! 96-97 °С протягом 60 секунд шд загальним еф1рним наркозом. Розм1ри дшянки ураження становили 18-20 % поверхш тша. Для дослщження особливостей морфолопчних та пстох1м1чних змш шюри шсля ошково! травми тварин декаштували за допомогою гшьйотини тд загальним еф1рним наркозом на 1, 7, 14, та 21 доби дослщу, що вщповщае стад1ям шоку, ранньо! та тзньо! токсеми та септикотоксемп ошково! хвороби.
Заб1р матер1алу для м1кроскошчних дослщжень проводили згщно загальноприйнято! методики [1, 4]. Шматочки шюри фшсували в 10 % розчиш формал1ну, при цьому тривалють експозици не перевищувала 1-2 доби. Застосований фшсуючий розчин запобпае процесу аутол1зу та стабшзуе кл1тини та тканини для !х подальшо! обробки та використання в процедурах забарвлення. Дал1 проводили дегщратащю шматочюв в спиртах зростаючо! концентрацп в автомат для пстолопчно! обробки тканин АТ-4, заливали в парафшов1 блоки. Отримаш на санному мшротом1 МС-2 зр1зи
