CC BY
30
ев
u
cv
Иммуногистохимические аспекты рака мочевого пузыря
на фоне вирусной инфекции
И.В. Косова1' 2, О.Б. Лоран1, Л.А. Синякова1, Л.В. Гундорова3, В.А. Косов4, И.Е. Погодина5, Д.Н. Колбасов2
1Кафедра урологии и хирургической андрологии ФГБОУДПО «Российская медицинская академия непрерывного профессионального образования» Минздрава России; Россия, 125993 Москва, ул. Баррикадная, 2/1, стр. 1; 2урологическое отделение ГБУЗ «Городская клиническая больница имени В.П. Демихова Департамента здравоохранения города Москвы»; Россия, 109263 Москва, ул. Шкулева, 4; 3патологоанатомическое отделение ГБУЗ «Городская клиническая больница имени В.П. Демихова Департамента ЯЕ здравоохранения города Москвы»; Россия, 109263 Москва, ул. Шкулева, 4;
о 4ГУ«Коми республиканский онкологический диспансер»; Россия, Республика Коми, 167904 Сыктывкар,
~ пос. Краснозадонский, Нювчимское шоссе, 46;
^ 5БУЗ ВО «Вологодская областная клиническая больница №2»; Россия, 162602 Череповец, ул. Данилова, 15
о
Контакты: Инга Владимировна Косова kosovainga@mail.ru
Введение. Вирусная инфекция является основополагающим фактором развития вирусиндуцированных опухолей различной лока-ем лизации.
ос Цель исследования — изучить особенности маркеров апоптоза, пролиферативной активности, ангиогенеза, ростовых факторов * у больных раком мочевого пузыря с наличием вирусной ДНК в опухолевой ткани.
2 Материалы и методы. Проведены обследование и лечение 100 больных, страдающих раком мочевого пузыря (72 мужчин и 28 жен-в щин), в возрасте 38—90лет (средний возраст 65 ± 10лет). Выполнена полимеразная цепная реакция ткани опухоли — диагностика ^ наличия вируса простого герпеса 1-го и 2-го типов, вируса папилломы человека (ВПЧ) высокого онкогенного риска, цитомегалови-ас руса (ЦМВ), вируса Эпштейна—Барр (ВЭБ). Иммуногистохимическое исследование выполнено 32 больным, определяли следующие g показатели: маркеры пролиферативной активности Ki-67, p63, маркеры супрессора опухолевого роста Bcl-2, p53, маркер ангиогенеза CD31, маркер адгезии CD44, рецептор эпидермального фактора роста (epidermal growth factor receptor, EGFR). Результаты. Наличие вирусных ДНК в ткани опухоли выявлено у 34 больных, из них 50 % опухолей являлись низкодифференцирован-ными. У 27 больных обнаружено наличие ДНК ВЭБ в опухоли, у 6 — ЦМВ, у 5 — ВПЧ высокого онкогенного риска (16, 39, 45, 52, 59-го типов), у 1 — вируса простого герпеса 1-го и 2-го типов. У 4 из 34 пациентов выявлено ДНК нескольких вирусов (в 1 случае — ВПЧ 59-го типа + ВЭБ, в 2 — ВЭБ + ЦМВ, в 1 — ЦМВ + ВЭБ + ВПЧ 31-го, 52-го типов). У пациентов с наличием вирусных ДНК в опухолевой ткани обнаружены высокие коррелятивные связи наличия ДНК ВЭБ с экспрессией CD31, Ki-67 и наличия ДНК ВПЧ высокого онкогенного риска с экспрессией Bcl-2. Высокие уровни анти-ВЭБ капсидных антител коррелировали с экспрессией EGFR, Ki-67, ну-клеарных — с CD44. Выявлены особенности экспрессии исследуемых маркеров в зависимости от стадии процесса, степени анаплазии, рецидивного характера поражения. Отмечены морфологические особенности изменения лимфоцитарно-плазмоцитарного звена. Заключение. Выявлены коррелятивные связи наличия вирусных ДНК в опухолевой ткани мочевого пузыря с маркерами пролиферативной активности, ангиогенеза и факторов апоптоза. Предположительно вирусная инфекция усиливает пролиферативную активность и супрессию факторов апоптоза, что способствует неблагоприятному течению опухолевого процесса. Требуется продолжение исследования.
Ключевые слова: рак мочевого пузыря, вирусная инфекция, вирус Эпштейна—Барр, цитомегаловирус, вирус папилломы человека высокого онкогенного риска, вирус простого герпеса 1-го и 2-го типов
Для цитирования: Косова И.В., Лоран О.Б., Синякова Л.А. и др. Иммуногистохимические аспекты рака мочевого пузыря на фоне вирусной инфекции. Онкоурология 2018;14(2):142—54.
DOI: 10.17650/1726-9776-2018-14-2-142-154
Immunohistochemical characteristics of bladder cancer in patients with virus-positive tumors I. V. Kosova1,2, O.B. Loran1, L.A. Sinyakova1, L. V. Gundorova3, V.A. Kosov4, I.E. Pogodina5, D.N. Kolbasov2
department of Urology and Surgical Andrology, Russian Medical Academy of Postgraduate Education, Ministry of Health of Russia;
Build. 1, 2/1 Barrikadnaya St., Moscow 125993, Russia;
2Department of Urology, V.P. Demikhov City Clinical Hospital, Moscow Healthcare Department; 4 Shkuleva St., Moscow 109263, Russia;
3Department of Pathology, V.P. Demikhov City Clinical Hospital, Moscow Healthcare Department;
4 Shkuleva St., Moscow 109263, Russia; 4Komi Republican Oncology Dispensary; 46 Nyuvchimskoe Shosse, Krasnozadonskiy Settlement, Syktyvkar, Republic of Komi 167904,
Russia; 5Vologda Regional Clinical Hospital No. 2; 15 Danilova St., Cherepovets 162602, Russia
Key words: bladder cancer, viral infection, Epstein—Barr virus, cytomegalovirus, human papillomavirus high-risk types, viral infection herpes simplex virus type 1 and 2
For citation: Kosova I.V., Loran O.B., Sinyakova L.A. Immunohistochemical characteristics of bladder cancer in patients with viruspositive tumors. Onkourologiya = Cancer Urology 2018;14(2):142—54.
cv
CS
Background. Viral infection is a major factor in virus-associated carcinogenesis. 2
Objective: to evaluate the expression of growth factors and markers of apoptosis, proliferative activity, and angiogenesis in patients with viral ^ DNA-positive bladder cancer.
Materials and methods. The study included 100 bladder cancer patients (72 males and 28 females) aged between 38 and 90 years (mean age i— 65 ± 10). Tumor tissue samples were tested by polymerase chain reaction to detect DNA of herpes simplex virus types 1 and 2 (HSV-1 and cv HSV-2 respectively), high-risk human papillomavirus (HPV), cytomegalovirus (CMV), and Epstein—Barr virus (EBV). Immunohistochemical analysis was performed in 32 patients and included the following markers: proliferation marker Ki-67, p63, apoptosis regulator Bcl-2, p53, angiogenesis marker CD31, adhesion protein CD44, and epidermal growth factor receptor (EGFR). Results. Viral DNA in tumor tissue was detected in 34 patients; of them, 50 % had poorly-differentiated tumors. Twenty-seven patients were e found to have EBV DNA in their tumor tissue; 6patients had CMV DNA; 5 patients had high-risk HPV DNA (types 16, 39, 45, 52, and 59); 23 1 patient had HSV1 and HSV2 DNA. Four out of 34 participants had mixed infections (1 case of HPV 59 + EBV; 2 cases of EBV + CMV; BC 1 case of CMV+EBV + HPV 31 and 52). We observed a strong correlation between the presence of EBV DNA and levels of CD31 and Ki-67 u expression as well as between high-risk HPV DNA and Bcl-2 expression. High levels of antibodies against EBV capsid antigen were associ- ^ ated with EGFR and Ki-67 expression, whereas the level of antibodies against EBV nuclear antigen correlated with CD44 expression. We evaluated specific characteristics of expression of the markers analyzed depending on the tumor stage, grade of anaplasia, and recurrence. We also assessed morphological characteristics of changes in lymphocytic and plasma cell infiltrates.
Conclusion. We found a correlation between the presence of viral DNA in bladder cancer tissue and markers of proliferative activity, angiogenesis, and apoptosis. Viral infection is likely to increase proliferative activity and suppression of apoptosis, which may cause tumorprogression. Further studies are needed to assess this correlation.
u
JN СЧ
Введение
В структуре заболеваемости злокачественными новообразованиями в мире на рак мочевого пузыря (РМП) приходится 3,2 %, в России — 4 % на долю мужского и 1 % женского населения [1].
Ежегодно в мире диагностируют около 30—40 тыс. новых случаев заболевания. В развитых странах РМП встречается в 6 раз чаще, чем в развивающихся. Летальный исход, связанный с основным заболеванием, отмечается у 20—25 % пациентов [2]. В большинстве (70—80 %) случаев переходно-клеточный РМП (уро-телиальную карциному) диагностируют на неинвазив-ных стадиях, при этом 30—85 % опухолей рецидивируют после проведенного лечения [3, 4]. В связи с этим основной проблемой является адекватная оценка риска развития рецидива и прогрессии у конкретного пациента.
Инфекционные заболевания и хроническое воспаление — важные факторы риска канцерогенеза и развития опухолей человека [5—7]. Международное агентство по изучению рака (International Agency for Research on Cancer, IARC) установило, что примерно 18 % всех опухолей в мире ассоциированы с инфекционными заболеваниями, вызываемыми бактериями, вирусами и паразитами [8]. Было установлено, что хронический воспалительный процесс предопределяет развитие около 25 % опухолей человека [9].
Канцерогенез — многоступенчатый процесс накопления мутаций и других генетических изменений, приводящих к нарушениям ключевых клеточных
функций, таких как регуляция пролиферации и диф-ференцировки, естественная гибель клеток (апоптоз), морфогенетические реакции клетки, а также, вероятно, к неэффективному функционированию факторов специфического и неспецифического противоопухолевого иммунитета [10].
Цель исследования — изучить особенности маркеров апоптоза, пролиферативной активности, ангиоге-неза, ростовых факторов у больных РМП с наличием вирусной ДНК в опухолевой ткани.
Материалы и методы
В пилотном исследовании проведены обследование и лечение 100 больных, страдающих РМП (72 мужчины и 28 женщин), в возрасте 38—90 лет (средний возраст 65 ± 10 лет). Выполнена полимераз-ная цепная реакция (ПЦР) ткани опухоли — диагностика наличия вируса простого герпеса 1-го и 2-го типов, вируса папилломы человека (ВПЧ) высокого онкогенного риска, цитомегаловируса (ЦМВ), вируса Эпштейна—Барр (ВЭБ). Вирусные ДНК определяли методом ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме реального времени. Исследование проводили полуавтоматическим способом с использованием ПЦР-детекторов CFX-96, Bio-Rad (США) и реактивов Вектор-Бест (Россия); верхний предел определения (с разведением) — 100 копий в пробе. Следует отметить, что из всех проанализированных в работе вирусов только ВПЧ высокого онкогенного риска и ВЭБ являются онкогенными.
ев
u
в* U
JN CJ
Для иммуногистохимического исследования использовали биопсийный и операционный материал от 32 пациентов с верифицированной опухолью мочевого пузыря. Из них в опухолевой ткани 21 больного выявлено наличие вирусных ДНК (ЦМВ, ВЭБ, вируса простого герпеса 1-го и 2-го типов, ВПЧ высокого он-когенного риска), в 11 случаях вирусные ДНК не обнаружены. Кроме того, у пациентов иммунофермент-ным методом определяли уровни противовирусных антител к герпесу 1-го и 2-го типов, ЦМВ, ВЭБ. Операционный материал фиксировали в 1 % растворе нейтрального формалина и заливали в парафин. Срезы толщиной 5 мкм, окрашенные гематоксилином и эозином, были подвергнуты обзорному морфологическому анализу, при котором стадию рака определяли в соответствии с классификацией TNM, а степень дифференцировки опухолевых клеток оценивали по рекомендациям Всемирной организации здравоохранения (1973). Микроскопическое изучение препаратов проводили с применением бинокулярного микроскопа с фотоприставкой Axio Zeis (Германия) при 400-кратном увеличении. Иммуногистохимиче-ское исследование выполняли на серийных парафиновых срезах толщиной 5 мкм с использованием стрептавидин-биотинового метода. В качестве детек-ционной системы применяли 6 маркеров. Определяли следующие показатели: маркер пролиферативной активности Ki-67 (sp6), маркер супрессора опухолевого роста Bcl-2 (D07), p53 (124), маркер ангиогенеза CD31 (sp164), маркер адгезии CD44 (spm521), рецептор эпи-дермального фактора роста (epidermal growth factor receptor, EGFR) (sp84) (Spring Bioscience, США).
Интенсивность реакций с антигенами, локализованными на мембранах клеток и внутриклеточных мембранах (Bcl-2, CD31, CD44 и EGFR), оценивали полуколичественным способом по балльной шкале от 0 до 3 с учетом выраженности реакции и ее локализации: 0 — отсутствие реакции, 1 — слабая реакция, 2 — умеренная реакция, 3 — сильная реакция. Результаты реакции с антигенами, имеющими ядерную локализацию (Ki-67, р63), анализировали по системе подсчета Histochemical score, включающей в себя интенсивность иммуногистохимической окраски по 3-балльной шкале и долю (в процентах) окрашенных клеток и представляющей сумму произведений процентов, отражающих долю клеток с различной интенсивностью окраски на балл, соответствующий интенсивности реакции. Интенсивность окраски: 0 — нет окрашивания, 1 — слабое окрашивание, 2 — умеренное окрашивание, 3 — сильное окрашивание.
Проведена оценка воспалительной инфильтрации в опухолевой ткани и подлежащей строме. Полуколичественно от 0 до 3 баллов (отсутствие, слабая, умеренная и выраженная степень) анализировали состояние лим-фоцитарно-плазмоцитарного инфильтрата: 1) в опухоли;
2) рассеянного в подлежащей строме; 3) периваскуляр-ной инфильтрации; 4) очаговой гиперплазии лимфоид-ной ткани в виде лимфоидных фолликулов.
Результаты
Характеристика группы представлена в табл. 1.
Ю-67 — белок, синтез которого начинается в фазе Gl клеточного цикла и ускоряется в фазах S и G2, достигая пика во время митотического деления, после чего он деградирует. Индекс Ю-67 коррелирует с развитием рецидива и прогрессированием заболевания, особенно уротелиального рака [11—13].
По нашим данным, при анализе показателей экспрессии Ю-67 нормальный уротелий не показал экспрессии данного маркера. По мере озлокачествления наблюдается увеличение количества и степени экспрессии опухолевых клеток. Если у больных без вирусных ДНК в опухолевой ткани отмечается четкая зависимость экспрессии Ю-67 от стадии процесса, степени анаплазии (рис. 1) и риска рецидива опухолевого процесса, что коррелирует с данными литературы [11—14], то у пациентов с наличием вирусных ДНК в опухолевой ткани такой зависимости не прослеживается (рис. 2—5).
Если сравнить медиану показателя Ю-67 у пациентов с наличием вирусных ДНК ВЭБ в опухолевой ткани и их отсутствием, то в первом случае в целом пролиферативная активность выше (48,92 % против 30,16 %; р = 0,0466) (рис. 6).
Нами выявлены коррелятивные связи (рис. 7) наличия ВЭБ в опухолевой ткани с маркером пролиферации Ю-67 ^ = 0,354; р = 0,047; п = 32). Если же рассматривать коррелятивные связи внутри группы с наличием ДНК различных вирусов в опухолевой ткани, то они становятся статистически достоверно высокими ^ = 0,611; р = 0,003; п = 21).
Мы обнаружили высокие обратные корреляции стадии процесса с экспрессией Ю-67 (в баллах) у пациентов с наличием вирусных ДНК в опухолевой ткани ^ = —0,805; р = 0,016), при этом у пациентов с ВЭБ корреляционная зависимость увеличивается ^ = —0,926; р = 0,074). Такая же тенденция наблюдается при наличии положительных лимфатических узлов ^ = —0,781; р = 0,038). Что касается множественности поражения, то пролиферативная активность (Ю-67 в баллах) выше при одиночных опухолях ^ = —0,33; р = 0,425), тогда как у пациентов с наличием только ВЭБ корреляционная зависимость сильнее ^ = —0,926; р = 0,074). Такие же корреляционные связи получены и при первичном/рецидивном поражении мочевого пузыря (Ю-67 в баллах) (в группе пациентов с наличием вирусных ДНК R = —0,33; р = 0,425; с наличием только ВЭБ R = -0,926; р = 0,074). Мы не выявили значимых корреляций степени анаплазии с экспрессией Ю-67. Таким образом, на наш взгляд,
у данной категории больных нарушение пролифера-тивной активности на фоне вирусной инфекции происходит в начальной стадии опухолевого процесса, а затем снижается по мере прогрессирования
Таблица 1. Характеристика исследуемой группы пациентов Table 1. Patient characteristics
заболевания. Именно поэтому средние показатели экспрессии этого маркера (см. рис. 2) ниже, чем у пациентов с отсутствием ДНК вирусов в опухолевой ткани. Однако медиана маркера в целом выше у пациентов
Пациенты с наличием вирусных ДНК в опухолевой ткани (n = 21)
Patients with viral DNA-positive tumors (n = 21)
Пациенты с отсутствием вирусных ДНК в опухолевой ткани (n = 11)
Patients with viral DNA-negative tumors (n = 11)
CS
u <
u
Возраст, лет Age, years 66,0 ± 2,1 65,0 ± 1,8
Пол, n: Gender, n: женский female мужской male 8 13 3 8
Стадия процесса, n: Tumor stage, n: Т1 Т2—4 12 9 6 5
Степень анаплазии, n: Grade of anaplasia, n: G1 G2 G3 7 4 10 5 1 5
Наличие лимфоузлов, n: Lymph node status, n: N0 N+ 16 4 8 3
Характер поражения, n: Tumor, n: первичный primary рецидивный recurrent 14 7 10 1
Опухоль, n: Lesion, n: единичная solitary множественное поражение multiple lesions 13 8 3 8
Выявленные вирусные ДНК в опухолевой ткани, n Viral DNA detected in tumor tissue, n ВЭБ — 14 EBV — 14 ВЭБ + ВПЧ высокого онкогенного риска -EBV + high-risk HPV — 3 ВПЧ высокого онкогенного риска — 2 High-risk HPV — 2 ЦМВ — 2 CMV- 2 — 3
JN СЧ
Примечание. Здесь и в табл. 2: ВЭБ — вирус Эпштейна—Барр; ВПЧ — вирус папилломы человека; ЦМВ — цитомегаловирус. Note. Here and in Table 2: EBV — Epstein—Barr virus; HPV — human papillomavirus; CMV — cytomegalovirus.
i р
сч
CS
U
et u
F (1, 16) = 6,3119; p = 0,02309 Вертикальными линиями отмечен 95 % доверительный интервал/Ver
al lines have a 95% confidence interval
JN СЧ
7.5 7.0 6,5 6,0 5,5 5,0 4,5 4,0 3,5 3,0 2,5 2,0
Отсутствие вирусных ДНК
в опухолевой ткани/ Viral DNA-negative tumors
Наличие вирусных ДНК в опухолевой ткани/ Viral DNA-positive tumors
Рис. 1. Уровень экспрессии Ki-67y пациентов с наличием и отсутствием вирусных ДНК в опухолевой ткани (сравнение средних показателей) Fig. 1. Ki-67 expression in patients with viral DNA-positive and negative tumors (comparison of means)
F (1, 14) = 2,3541; p = 0,14724 Вертикальными линиями отмечен 95 % довеpuтельныú интервал/ Vertical lines have a 95% confidence intetva!
12
1O
8
1
Первичная/Мшу Рецидивная/ffea/ttení
Отсутствие вирусных ДНК в опухолевой ткани/ Viral DNA-negative tumors
Наличие вирусных ДНК в опухолевой ткани/ Viral DNA-positive tumors
Рис. 2. Уровень экспрессии Ki-67 у пациентов с наличием и отсутствием вирусных ДНК в опухолевой ткани и рецидивным характером опухолевого процесса
Fig. 2. Ki-67 expression in patients with recurrent viral DNA-positive and negative tumors
Вертикальными линиями отмечен 95 % доверительный интервал/ Vertical lines have a 95% confidence inteival
Отсутствие вирусных ДНК в опухолевой ткани/ Vital DNA-negative tumors
Наличие вирусных ДНК в опухолевой ткани/ Vital DNA-positive tumots
Степень дифференцировки опухоли/Tumor differentiation grade
Рис. 3. Уровень экспрессии Ki-67 у пациентов с наличием и отсутствием вирусных ДНК в опухолевой ткани в зависимости от степени анаплазии
Fig. 3. Ki-67 expression in patients with viral DNA-positive and negative tumors depending on the grade of anaplasia
с наличием вирусной ДНК (см. рис. 6). Сводные данные приведены на рис. 8.
Мы выявили статистически достоверное увеличение показателей лимфоцитарно-плазмоцитарного звена у больных с ВЭБ и ЦМВ в опухолевой ткани (табл. 2).
Кроме того, в группе пациентов с наличием вирусных ДНК обнаружены коррелятивные связи наличия лимфоцитов в опухолевой ткани со стадией опухолевого процесса (R = 0,343; p = 0,024), наличием лимфатических узлов (R = 0,327; p = 0,055), степенью анаплазии (R = 0,341; p = 0,031). Отмечены обратные коррелятивные связи первичного характера поражения с перива-скулярной инфильтрацией (R = —0,345; p = 0,017),
Отсутствие вирусных ДНК в опухолевой ткани/ Viral DNA-negative tumors
Наличие вирусных ДНК в опухолевой ткани/ Viral DNA-positive tumors
12 3 4
Стадия опухолевого npouecca/Tumor stage
Рис. 4. Уровень экспрессии Ki-67 у пациентов с наличием и отсутствием вирусных ДНК в опухолевой ткани в зависимости от стадии опухолевого процесса
Fig. 4. Ki-67 expression in patients with viral DNA-positive and negative tumors depending on the tumor stage
очаговой гиперплазией лимфоцитов (в том числе в виде фолликулов) (R = —0,305; p = 0,037). Наличие положительных лимфатических узлов также коррелировало с очаговой гиперплазией лимфоцитов (в том числе в виде фолликулов) (R = 0,332; p = 0,051).
Нами также отмечена выраженная инфильтрация лимфоцитов в собственной пластинке слизистой оболочки мочевого пузыря.
Что касается серологических маркеров, в нашем исследовании мы получили статистически достоверные коррелятивные связи уровня анти-ВЭБ IgG-VCA с пролиферативной активностью Ki-67 (в процентах) (R = 0,337; p = 0,05), что свидетельствует о влиянии именно латентной вирусной инфекции на пролиферативную
14
1.5
100
8о
so
7о
во
60
5о
40
4о
2o
зо
2о
o
1о
о
з
90
so
70 60 50
«
I 40
àS
í 30 20
10
o
r = 0,3544, p = 0,0466 I
Öтрuцaтельный/Negative
Положительный/Positive
Наличие виру/л Эпигтейна-Барр в опухолевой ткани/ Epstein-Ban vira! DNA in tumor tissue
■ Среднее значение/Median □ 25-75 % I Min-Max
Öтрuцaтельный/Negative
1
2
3
,-.- 4
5
Положительный/Positive О 6
Рис. 5. Экспрессия Ki-67 у пациентов с наличием и отсутствием вирусных ДНК вируса Эпштейна—Барр в опухолевой ткани Fig. 5. Ki-67 expression in patients with Epstein—Barr virus-positive and negative tumors
Таблица 2. Сравнение средних показателей лимфоцитарно-плазмоцитарного звена и уровня некоторых противовирусных антител у больных раком мочевого пузыря с наличием и отсутствием ЦМВ и ВЭБ в опухолевой ткани
Table 2. Comparison of lymphocytic and plasma cell infiltrates and levels of some antiviral antibodies in patients with bladder cancer with and without CMV and EBV in tumor tissue
Показатель лимфоидно плазмоцитарного инфильтрата
Characteristics of the lymphocytic and plasma cell infiltrate
Лимфоциты, рассеянные в строме (в зоне, граничащей с опухолью) Lymphocytes scattered in the stroma (area adjacent to the tumor edge) 2,27 1,79 0,05 2,14 1,72 0,0171
Лимфоциты в опухоли Lymphocytes in the tumor 2,0 1,42 0,0330 1,83 1,34 0,0092
Периваскулярная лимфо-идная инфильтрация Perivascular lymphoid infiltration 2,0 1,48 0,1136 1,90 1,38 0,0238
Очаговая гиперплазия лимфоцитов (в том числе в виде фолликулов) Focal lymphoid hyperplasia (including lymphoid follicles) 1,73 0,85 0,0099 0,93 0,96 0,9176
Примечание. Полужирным шрифтом выделены статистически достоверные данные, p <0,05. Note. In bold type, statistically valid data are identified, p <0.05.
CS
U
u
Наличие вируса Зпштейна-Барр в опухолевой тхани/ Epstein-Ban viral DNA in tumor tissue
Рис. 6. Коррелятивные связи экспрессии Ki-67 с наличием ДНК вируса Эпштейна—Барр в опухолевой ткани
Fig. 6. Correlation between Ki-67 expression and presence of Epstein—Barr viral DNA in tumor tissue
JN СЧ
активность опухоли как у пациентов с наличием вирусной ДНК в опухолевой ткани, так и при ее отсутствии.
Выявлены умеренные коррелятивные связи наличия ДНК ВЭБ с экспрессией CD31 (процентное отношение сосудов к площади всей опухоли) ^ = 0,325; р = 0,066). В группе с наличием вирусных ДНК
коррелятивные связи статистически достоверно более высокие ^ = 0,492; р = 0,028) (рис. 9).
Обнаружены существенные различия в экспрессии CD31 в опухолях с разной дифференцировкой. Так, у пациентов с низкой степенью дифференцировки показатель CD31 (процентное отношение сосудов
70
60
50
40
30
20
CS
U
et
U
Рис. 7. Переходно-клеточная уротелиальная карцинома низкой степени злокачественности (фрагмент опухоли): выраженная экспрессия Ki-67 (до 60 % опухолевых клеток) (х 40)
Fig. 7. Low-grade transitional cell (urothelial) carcinoma (tumor fragment): pronounced Ki-67 expression (in up to 60% of tumor cells) (х 40)
Рис. 9. Переходно-клеточная уротелиальная карцинома низкой степени злокачественности (фрагмент опухоли): выраженная экспрессия CD31 в строме и опухолевой ткани (х 40)
Fig. 9. Low-grade transitional cell (urothelial) carcinoma (tumor fragment): pronounced CD31 expression in the stroma and tumor tissue (x 40)
JN СЧ
к площади всей опухоли) составил 34,44 ± 17,48, с высокой степенью дифференцировки — 17,86 ± 17,99 (р = 0,0456) (см. рис. 8).
Мы не выявили корреляционных связей экспрессии CD31 со стадией процесса, тогда как общее число сосудов коррелировало с наличием положительных лимфатических узлов ^ = 0,562; р = 0,019) и степенью анаплазии ^ = 0,467; р = 0,038). Наблюдалась обратная корреляция при единичном характере поражения ^ = -0,377; р = 0,101).
EGFR (HER1) играет важную роль в пролиферации эпителиальных клеток. Белок EGFR имеет тирозин-киназную активность, которая необходима
Ki-67 R = -0,805; p = 0,016; ВЭБ(+) R = -0,926; p = 0,074 Bcl-2 R = -0,589; p = 0,044
Ki-67 R = -0,781; p = 0,038 CD31R = 0,562; p = 0,019
CD31R = 0,467; p = 0,038 EGFR R = 0,723; p = 0,012 CD44 R = -0,557; p = 0,152 Bcl-2 R = 0,430; p = 0,163
Первичный/рецидивный Primary/recurrent
Ki-67 R = -0,33; p = 0,425; ВЭБ(+) R = -0,926; p = 0,074 Bcl-2 R = -0,327; p = 0,30
Единичная/множественная Single/multiple
Ki-67 R = -0,33; p = 0,425; ВЭБ(+) R = -0,926; p = 0,074 CD31R = -0,377; p = 0,101 CD44 R = -0,429; p = 0,076 Bcl-2 R = -0,516; p = 0,086
Рис. 8. Уровень экспрессии маркеров апоптоза, пролиферации, ростовых факторов, маркеров ангиогенеза в зависимости от стадии опухолевого поражения, степени анаплазии, множественного и рецидивного характера поражения у пациентов с наличием вирусных ДНК в опухолевой ткани. EGFR (epidermal growth factor receptor) — рецептор эпи-дермального фактора роста; ВЭБ — вирус Эпштейна—Барр Fig. 8. Expression ofgrowth factors and markers of apoptosis, proliferation, and angiogenesis depending on the tumor stage, grade of anaplasia, presence of multiple lesions, and tumor recurrence in patients with viral DNA-positive tumors. EGFR — epidermal growth factor receptor; EBV— Epstein—Barr virus
для передачи сигнала при его активации. Активация механизмов с участием EGFR приводит к усилению пролиферативной активности опухолевых клеток, неоангиогенезу, замедлению апоптоза, более раннему появлению метастазов [15]. Частота мутаций EGFR зависит от клинических характеристик пациентов (курение, пол, этническое происхождение). Мы выявили статистически достоверные сильные связи уровня анти-ВЭБ IgG-VCA с экспрессией EGFR как у пациентов исследуемой группы (R = 0,489; p = 0,004), так и у пациентов с наличием вирусных ДНК в опухолевой ткани (R = 0,47; p = 0,032); у больных, у которых в опухолевой ткани был выявлен ВЭБ, уровень корреляции составляет R = 0,57; p = 0,049. У пациентов c наличием только ВЭБ в опухолевой ткани обнаружены достоверные сильные связи экспрессии EGFR со степенью анаплазии (R = 0,723; p = 0,012). Кроме того, отмечены достоверные сильные связи уровня EGFR с экспрессией Ki-67 (в баллах) (R = 0,748; p = 0,05), p53 (R = 0,499; p = 0,025) и CD44 (R = -0,66; p = 0,107) (см. рис. 8).
Способность опухолевых клеток утрачивать адгезивные свойства отражается на вероятности метаста-зирования, в связи с чем была исследована экспрессия CD44 (рис. 10). Мы также выявили достоверные сильные связи уровня нуклеарных антител к ВЭБ, анти-ВЭБ IgG-EBNA с экспрессией CD44 (R = 0,54; p = 0,025), равно как и в группе с наличием вирусных ДНК в опухолевой ткани (R = 0,707; p = 0,050). При сравнении средних показателей уровень экспрессии CD44 был выше у пациентов с наличием вирусных ДНК в опухолевой ткани (5,63 ± 1,19 против 4,75 ± 1,98; p = 0,3023). Мы выявили обратные коррелятивные связи экспрессии CD44 со степенью анаплазии (R = -0,557; p = 0,152) и близкие к достоверности коррелятивные связи с единичным характером поражения (R = -0,429; p = 0,076).
В последнее время большое внимание уделяется влиянию микроокружения на развитие опухоли. Мы
G
а
M
r /M i
т
й/^^ЭВЙШк^я^flR ' • -чг"
Б^^ПЯк^^: ¿L
Рис. 10. Инвазивная уротелиальная карцинома умеренной степени злокачественности (фрагмент опухоли): высокая степень экспрессии CD44 (выраженное мембранное окрашивание опухолевых) (х 10 (а); х 40 (б)) Fig. 10. Intermediate-grade invasive urothelial carcinoma (tumor fragment): high CD44 expression (pronounced membrane staining in tumor cells) (х 10 (a); х 40 (б))
проанализировали морфологические изменения лим-фоцитарно-плазмоцитарного инфильтрата и показатели пролиферативной активности, ангиогенеза, ростовых факторов и маркеров метастазирования (табл. 3). Статистически достоверные данные мы получили только в отношении экспрессии маркера пролиферации
Ю-67 и ангиогенеза CD31. Несмотря на умеренные и достоверные сильные связи показателей в группе пациентов с наличием вирусных ДНК, мы не получили статистической достоверности результатов. По нашему мнению, это связано с гиперэкспрессией маркеров пролиферации на начальном этапе онкогенеза, тогда как лимфоидная инфильтрация нарастает по мере увеличения стадии и анаплазии опухоли. И наоборот, сосудистый фактор увеличивается по мере роста лимфо-идной инфильтрации.
Экспрессия Вс1-2 в опухолях низкого потенциала малигнизации выявлена в базальном слое клеток, в типично злокачественных опухолях достоверной разницы не обнаружено. Средние показатели у пациентов с наличием и отсутствием ВЭБ в опухолевой ткани составили 4,50 ± 1,60 и 4,07 ± 1,03 (р = 0,4381), с наличием и отсутствием ВПЧ высокого онкогенного риска — 5,50 ± 2,12 и 4,10 ± 1,14 (р = 0,129) соответственно. Высокая корреляция отмечена у больных с наличием ДНК ВПЧ высокого онкогенного риска с экспрессией Вс1-2 ^ = 0,524; р = 0,045). Экспрессия Вс1-2 у пациентов с наличием вирусных ДНК в опухолевой ткани коррелировала со стадией процесса
CS
U
et
U
JN СЧ
Таблица 3. Коррелятивные связи изменений лимфоцитарно-плазмоцитарного инфильтрата с показателями пролиферативной активности и ангиогенеза у пациентов, которым выполнено иммуногистохимическое исследование
Table 3. Correlation between changes in lymphocytic and plasma cell infiltrates and parameters ofproliferative activity and angiogenesis in patients that underwent immunohistochemical testing
Пациенты с наличием вирусных ДНК в опухолевой ткани (n = 21)
Показатель лимфоидно-плазмоцитарного инфильтрата Все пациенты (n = 32)
Characteristics of the lymphocytic and plasma cell infiltrate All patients (n = 32) Patients with viral DNA-positive tumors (n = 21)
CD31 (процентное соотношение сосудов к площади всей опухоли) CD31 (percent ratio of vessel area to total tumor area)
Лимфоциты, рассеянные в строме (в зоне, граничащей с опухолью) R = 0,355; p = 0,005 R = 0,320; p = 0,169
Lymphocytes scattered in the stroma (area adjacent to the tumor edge) Экспрессия Ki-67 (в процентах) Ki-67 expression (percent)
R = 0,355; p = 0,046 R = 0,312; p = 0,169
Лимфоциты в опухоли Экспрессия Ki-67 (в процентах) Ki-67 expression (percent)
Lymphocytes in the tumor R = 0,453; p = 0,009 R = 0,431; p = 0,05
CD31 (процентное соотношение сосудов к площади всей опухоли) CD31 (percent ratio of vessel area to total tumor area)
Периваскулярная лимфоидная инфильтрация R = 0,389; p = 0,03 R = 0,451; p = 0,046
Perivascular lymphoid infiltration Ki-67 (в процентах) Ki-67 expression (percent)
R = 0,339; p = 0,058 —
Примечание. Полужирным шрифтом выделены статистически достоверные данные, p <0,05. Note. In bold type, statistically valid data are identified, p <0.05.
ев
u
в* U
JN CJ
(R = -0,589; р = 0,044), единичной опухолью (R = -0,516; р = 0,086) и степенью анаплазии (R = 0,430; р = 0,163), обратно коррелировала с первичным характером поражения (R = -0,327; р = 0,3). Не все данные статистически достоверны, что связано с небольшим числом больных. Следует отметить высокие коррелятивные связи с маркером пролиферации Ki-67 (R = 0,53; р = 0,221) (см. рис. 8).
Видно, что наличие обратных коррелятивных связей факторов апоптоза, пролиферации со стадией процесса свидетельствует о том, что гиперэкспрессия этих факторов на фоне способности уклоняться от иммунного ответа приводит, по-видимому, как к прогресси-рованию опухолевого процесса до клинически выявляемых форм, так и к способности к рецидивированию опухоли у этой категории больных, тогда как ростовые факторы, факторы ангиогенеза и метастазирования ассоциированы со степенью анаплазии и лимфоген-ным метастазированием. Кроме того, обратные коррелятивные связи экспрессии CD44 со степенью ана-плазии свидетельствуют о том, что у пациентов с наличием вирусных ДНК в опухолевой ткани способность к метастазированию имеется даже при высо-кодифференцированных опухолях.
Обсуждение
Около 15 % всех опухолевых заболеваний являются вирусоассоциированными. К ним традиционно относятся заболевания шейки матки, печени, дыхательных путей, опухоли головы и шеи, назофарингеальная карцинома, рак желудка, лимфомы и т. д. Роль вирусной инфекции в генезе РМП считается недоказанной. Мы провели анализ показателей маркеров пролиферации, ангиогенеза, ростовых факторов и факторов адгезии у пациентов, страдающих РМП, с наличием вирусных ДНК в опухолевой ткани. В большинстве случаев имело место инфицирование опухоли ВЭБ.
M. L. Gulley подчеркивает, что ВЭБ является не просто сторонним наблюдателем развития адено-карциномы желудка, но тесно связан с патогенезом развития и поддержания опухолевого процесса [16]. Q. Liang и соавт. выявили около 5 сигнальных путей, на которые влияют только ВЭБ-ассоциированные геномные и эпигеномные альтерации со снижением периода выживания у пациентов с ВЭБ-положительным раком желудка (p = 0,006) [17]. K.L. Chuang и соавт. обнаружили наличие ДНК ВЭБ в более чем 50 % случаев уротелиальной карциномы в стадии Та—Т1, при этом высокая степень анаплазии опухоли коррелировала с количеством геномов ВЭБ в опухоли [18]. Мы также не исключаем, что степень анаплазии и инвазии у этой категории больных зависит от количества геномов ВЭБ в опухоли.
Нами выявлено увеличение пролиферативной активности Ki-67 в зависимости от стадии, степени
анаплазии и рецидивного характера опухоли у пациентов с отсутствием вирусных ДНК в опухолевой ткани, что согласуется с данными литературы. Так, J. Вгеуег и соавт. указывают на высокие корреляционные связи экспрессии Ю-67 со степенью анаплазии опухоли мочевого пузыря ^ = 0,52;р <0,0001), стадией процесса (R = 0,49; р <0,0001) у пациентов с мышечно-неинвазивным РМП (стадии Та и Т1) [19]. М.'ЭД \fetterlein и соавт. установили связь индекса Ю-67 >40 у больных мышечно-неинвазивным РМП после выполнения трансуретральной резекции стенки мочевого пузыря со снижением сроков безрецидивной выживаемости [20]. Результаты исследования М.В. Ковылиной и соавт. продемонстрировали, что у больных с рецидивом мышечно-неинва-зивного РМП отмечается повышенная экспрессия антигена Ю-67 по сравнению с пациентами без рецидива заболевания (чувствительность теста 70,7 %) [14].
У пациентов с наличием вирусных ДНК в опухолевой ткани пролиферативная активность была выше на начальных стадиях заболевания, при этом у больных с наличием ВЭБ в опухолевой ткани эти корреляции были статистически достоверно выше. Аналогичные результаты получили Т. Yoshizaki и соавт. при изучении пролиферативной активности ВЭБ-ас-социированной назофарингеальной карциномы. Авторы указывают на усиление пролиферативной активности и снижение апоптоза за счет активации белка-онкогена LMP-1 на начальных стадиях онкоге-неза [21].
Если рассматривать вирусную коинфекцию как фактор риска развития неоплазий, то J.O. Окоуе и соавт. указывают на развитие вагинальных неопла-зий на фоне низкого содержания CD4 и наличие герпес-вирусной (вируса простого герпеса 2-го типа и ВЭБ) коинфекции. При этом по мере малигнизации экспрессия Ю-67 начинает повышаться. Авторы предлагают использовать этот биомаркер как диагностический и прогностический фактор развития вагинальной интраэпителиальной неоплазии [22]. Другие авторы исследовали опухоль молочной железы и выявили наличие вирусного генома у 43 % женщин, страдающих раком молочной железы, при этом повышение анти-ВЭБ ^ УСА + IgG-EBNA1 было положительным в 87 % случаев. Имели место обратная зависимость гиперэкспрессии Ю-67 в опухоли от наличия вируса в опухолевой ткани и прямая зависимость экспрессии НЕЯ2 от наличия вируса в опухоли. Была выявлена зависимость ВЭБ-инфекции от развития инфильтративной протоковой карциномы [23], в то время как гиперэкспрессия Ю-67 и циклина Е2 у детей с ВЭБ-ассоциированными лимфопролифера-тивными заболеваниями ассоциирована с неблагоприятным прогнозом течения основного заболевания [24].
В нашем исследовании экспрессия фактора адгезии CD44 была несколько выше у пациентов
с наличием вирусных ДНК в опухолевой ткани, при этом имела место обратная корреляция экспрессии CD44 со степенью анаплазии и единичным характером поражения. По-видимому, метастатический потенциал опухолей у этой категории больных не зависит от множественности поражения и возможен даже при высокодиф-ференцированных опухолях. C.F Yang и соавт. при изучении ВЭБ-положительной назофарингеальной карциномы доказали, что LMP-1 может индуцировать развитие CD44-положительных стволовых клеток у пациентов этой категории. LMP-1 активирует и является триггером для гиперактивации фосфоинозитид-3-киназ-ного пути (PI3K/AKT), что в свою очередь стимулирует экспрессию CD44 и развитие опухолевой формации [25].
Мы получили высокие коррелятивные связи EGFR со степенью анаплазии. Кроме того, мы выявили статистически достоверные коррелятивные связи уровня кап-сидного антигена к ВЭБ как у пациентов с наличием, так и с отсутствием вирусных ДНК в опухолевой ткани. Обнаружены высокие коррелятивные связи экспрессии EGFR с уровнем p53 и Ki-67, что подтверждает значимость этого маркера в онкогенезе РМП. Одним из предложенных механизмов развития ВЭБ-ассоциированно-го канцерогенеза является тот факт, что ВЭБ под воздействием факторов внешней среды (курения, приема острой, соленой пищи и т. д.) может индуцировать ядерную аккумуляцию EGFR и IL-6-опосредован-ную активацию STAT3 (signal transducer and activator of transcription 3, сигнальный белок и активатор транскрипции 3), приводящие в конечном итоге к образованию 8-оксо-2' — дезоксигуанозина (В-оксо-dG), который в свою очередь и повреждает ДНК клеток. Подобные изменения были получены у пациентов с назофаринге-альной карциномой [26]. S. Rebouissou и соавт. указывают на целесообразность использования анти-EGFR-пре-паратов у пациентов с мышечно-инвазивным РМП базального фенотипа [27]. В качестве иммунной терапии РМП в целях активации T-клеток N. Ma и соавт. использовали специфические антитела, направленные на инактивацию EGFR и HER2. Авторы получили обнадеживающие результаты [26]. Супрессия EGFR (miR-202) уменьшает пролиферативную активность уротелиальных клеток, инвазивность и миграционную способность опухолевых клеток мочевого пузыря [28]. Таким образом, с учетом наших данных у пациентов, особенно с наличием ВЭБ в опухолевой ткани и высокими уровнями анти-ВЭБ IgG-VCA, возможно применение препаратов, ингибирущих EGFR, как патогенетически обусловленную противоопухолевую терапию.
Основным морфологическим отличием, в частности, ВЭБ-ассоциированной назофарингеальной карциномы от ВЭБ-отрицательной является выраженность лимфоидной стромальной инфильтрации [29]. Мы также выявили статистически достоверное повышение составляющих лимфоцитарно-плазмоцитарного
инфильтрата у пациентов с наличием вирусных ДНК в опухолевой ткани. Кроме того, T. Yoshizaki и соавт. уделяют большое внимание микроокружению опухоли, поскольку именно взаимодействие стромального компонента с находящимися в нем вирусными онкогенами и опухолью приводит к появлению инвазивных свойств и прогрессии опухоли [21].
Особое значение в вирусном онкогенезе придается неоангиогенезу. В группе пациентов с наличием вирусных ДНК мы выявили высокие коррелятивные связи наличия экспрессии CD31 с ДНК ВЭБ, степенью ана-плазии. Аналогичные данные получили Y.W Koh и со-авт. при изучении ВЭБ-ассоциированной ходжкинской лимфомы. Авторы указывают на высокие коррелятивные связи наличия ВЭБ с факторами ангиогенеза (CD31, фактором роста эндотелия сосудов (vascular endothelial growth factor, VEGF)) и сделали вывод о том, что ВЭБ играет важную роль в опухолевом ангиогенезе. Исследователи предлагают использовать противовирусные препараты и ингибиторы ангиогенеза в качестве терапии ВЭБ-положительных лимфом [30]. Эти же авторы указывают на корреляции CD31 с PD-L1 у пациентов с ВЭБ-положительными лимфомами и предлагают инновационный поход к лечению этой категории больных с использованием ингибиторов контрольных точек и ингибиторов VEGF. Они подчеркивают, что повышение экспрессии этих маркеров указывает на неблагоприятный прогноз течения опухолевого процесса [31]. Ранее в наших исследованиях мы также продемонстрировали достаточно высокую экспрессию PD-L1 у больных с наличием вирусных ДНК в опухолевой ткани [32]. Однако требуется продолжение исследования. В целом роль экспрессии данного маркера в течении и прогнозе опухолевых заболеваний различных локализаций активно обсуждается в литературе [33-35], однако все сходятся во мнении, что при ВЭБ-ассоциированных неоплазмах экспрессия PD-L1 повышается [34, 36]. Таким образом, по мере развития опухолевого процесса экспрессия факторов ангиогенеза увеличивается у этой категории больных.
Что касается факторов апоптоза, то наиболее сильные коррелятивные связи мы получили при наличии ДНК ВПЧ высокого онкогенного риска. При этом, как и в случае маркера пролиферации, имели место обратная корреляция со стадией процесса, первичным поражением и единичным характером опухоли, прямая корреляция со степенью анаплазии. По нашему мнению, у этой категории больных процесс онкогенеза начинается с высокой пролифератив-ной активности и снижения апоптоза.
Немаловажную роль играет способность инфицированных клеток уклоняться от иммунной атаки макроорганизма.
Таким образом, можно предположить, что у пациентов, страдающих РМП, с наличием вирусных ДНК
CS
U
et
U
JN СЧ
CS
U
et
U
в опухолевой ткани, хронической герпес- и ВПЧ-вирус-ной инфекции имеют место повышение пролифератив-ной активности и снижение апоптоза на этапе «према-лигнизации» [21]. По мере прогрессии опухоли происходит активизация факторов ангиогенеза, адгезии и факторов роста. Все процессы протекают на фоне способности инфицированных опухолевых клеток уклоняться от иммунного ответа и вторичной иммуносупрес-сии, латентного воспаления. Характерной особенностью данной категории больных является выраженная лим-фоидная инфильтрация стромального компонента и микроокружения опухоли. На наш взгляд, немаловажную роль играет сочетанная вирусная инфекция, которая, по-видимому, потенцирует действие друг друга.
Заключение
В нашем исследовании выявлены коррелятивные связи наличия вирусных ДНК в опухолевой ткани мочевого пузыря с маркерами пролиферативной активности, ангиогенеза и факторов апоптоза. Предположительно, вирусная инфекция (возможно и соче-танная) способствует усилению пролиферативной активности и супрессии факторов апоптоза на этапе «премалигнизации» опухолевого процесса с последующей активацией факторов ангиогенеза, ростовых факторов. Требуется продолжение исследования, так как, несмотря на степень корреляции, не все данные статистически достоверны из-за небольшой выборки больных.
ЛИТЕРАТУРА / REFERENCES
JN СЧ
1. Eble J.N., Sauter G., Epstein J.I., Sesterhenn I.A. Tumors of the Urinary system and Male Genital Organs. Lyon press, 2004.
2. Brauers A., Jakse G. Epidemiology and biology of human urinary bladder cancer.
J Cancer Res Clin Oncol 2000;126 (10):575-83. PMID: 11043394.
3. Theodorescu D. Molecular pathogenesis of urothelial bladder cancer. Histol Histo-pathol 2003;18(1):259-74. DOI: 10.14670/HH-18.259. PMID: 12507305.
4. Babjuk M., Osterlinck W., Sylvester R. et al. EAU Guidelines on Ta, T1 (non-muscle-invasive) Bladder Cancer. In: EAU Guidelines. Edition presented at the EAU Annual Congress Milan, 2008.
5. Coussens L.M., Werb Z. Inflammation and cancer. Nature 2002;420 (6917): 860-7. DOI: 10.1038/nature01322. PMID: 12490959.
6. Kawanishi S., Hiraku Y. Oxidative and ni-trative DNA damage as biomarker for carcinogenesis with special reference to inflammation. Antioxid Redox Signal 2006;8 (5-6):1047-58. DOI: 10.1089/ars. 2006.8.1047. PMID: 16771694.
7. Murata M., Thanan R., Ma N., Kawani-shi S. Role of nitrative and oxidative DNA damage in inflammation-related carcino-genesis. J Biomed Biotechnol 2012;2012:623019. DOI: 10.1155/2012/623019. PMID: 22363173.
8. IARC. Chronic infectionsin. In: World Cancer Report. Eds.: B.W. Stewart,
P. Kleihues. Lyon, France: IARC Press, 2008. Pp. 128-135.
9. Hussain S.P., Harris C.C. Inflammation and cancer: an ancient link with novel potentials. Int J Cancer 2007;121(11):2373-80. DOI: 10.1002/ijc. 23173.
PMID: 17893866.
10. Андреева Ю.Ю. Морфологические и молекулярно-биологические факто-
ры прогноза рака мочевого пузыря. Дис. ... д-ра мед. наук. М., 2008 [Andreeva Yu.Yu. Morphological and molecular-biological prognostic factors of bladder cancer. Thesis ... of doctor of medical sciences. Moscow, 2008. (In Russ.)].
11. Wang L., Feng C., Ding G. et al. Ki-67 and TP53 expressions predict recurrence of non-muscle-invasive bladder cancer. Tumour Biol 2014;35(4):2989-95. DOI: 10.1007/s13277-013-1384-9. PMID: 24241960.
12. Krause F.S., Feil G., Bichler K.H. Immu-nohistochemical examinations (Ki-67, p53, nm23) and DNA cytophotometry in bladder cancer. Anticancer Res 2000;20 (6D):5023-8. PMID: 11326661.
13. Ding W., Gou Y., Sun C. et al. Ki-67 is an independent indicator in non-muscle invasive bladder cancer (NMIBC); combination of EORTC risk scores and Ki-67 expression could improve the risk stratification of NMIBC. Urol Oncol 2014;32(1):42.e13-9. DOI: 10.1016/j. urolonc.2013.05.004. PMID: 24360660.
14. Ковылина М.В., Прилепская Е.А., Тупи-кина Н.В., Рева И.А. Прогностическая роль экспрессии К-67в определении риска развития рецидива мышечно-неин-вазивного рака мочевого пузыря. Онко-урология 2017;13(1):67—73. DOI: 10.17650/1 726-9776-2017-13-1-67-73. [Kovyli-
na M.V., Prilepskaya E.A., Tupikina N.V., Reva I.A. Prognostic role of Ki-67 expression in determination of risk of non-muscle invasive bladder cancer recurrence. Onkou-rologiya = Cancer Urology 2017;13(1):67— 73. (In Russ.)].
15. Woodburn J.R. The epidermal growth factor receptor and its inhibition in cancer therapy. Pharmacol Ther 1999;82(2— 3):241-50. PMID: 10454201.
16. Gulley M.L. Genomic assays for Epstein— Barr virus-positive gastric adenocarcino-
ma. Exp Mol Med 2015;47:e134. DOI:
10.1038/emm.2014.93.
PMID: 25613731.
17. Liang Q., Yao X., Tang S. et al. Integrative identification of Epstein—Barr virus-associated mutations and epigenetic alterations in gastric cancer. Gastroenterology 2014;147(6):1350—62. DOI: 10.1053/j. gastro.2014.08.036. PMID: 25173755.
18. Chuang K.L., Pang S.T., Liao S.K. et al. Epstein—Barr virus DNA load in tumour tissues correlates with poor differentiation status in non-muscle invasive urothelial carcinomas. BJU Int 2011;107(1):150-4. DOI: 10.1111/j.1464-410X.2010.09474.x. PMID: 20735392.
19. Breyer J., Wirtz R.M., Otto W. et al. Predictive value of molecular subtyping in NMIBC by RT-qPCR of ERBB2, ESR1, PGR and MKI67 from formalin fixed TUR biopsies. Oncotarget 2017;8 (40):67684-95. DOI: 10.18632/oncotar-get.18804. PMID: 28978063.
20. Vetterlein M.W., Roschinski J., Gild P. et al. Impact of the Ki-67 labeling index and p53 expression status on disease-free survival in pT1 urothelial carcinoma of the bladder. Transl Androl Urol 2017;6 (6):1018-26. DOI: 10.21037/tau. 2017.11.10. PMID: 29354488.
21. Yoshizaki T., Kondo S., Endo K. et al. Modulation of the tumor microenvironment by Epstein—Barr virus latent membrane protein 1 in nasopharyngeal carcinoma. Cancer Sci 2018;109(2):272-8. DOI: 10.1111/cas.13473.
PMID: 29247573.
22. Okoye J.O., Erinle C., Ngokere A.A., Jimoh A. Low CD4 cells and viral co-infection increase the risk of VaIN: use of SCCA1 and Ki-67 as diagno-prognostic biomarkers. Pathophysiology 2018;25 (1):51-6. DOI: 10.1016/j.pathophys. 2017.09.004. PMID: 29269193.
23. Yahia R., Zaoui C., Derbale W. et al. Epstein—Barr virus and invasive mammary carcinomas: EBNA, EBERs and molecular profile in a population of West Algeria. Ann Biol Clin (Paris) 2018;76 (1):75-80. DOI: 10.1684/abc. 2017.1312. PMID: 29336321.
24. Ng S.B., Ohshima K., Selvarajan V. et al. Prognostic implication of morphology, cy-clinE2 and proliferation in EBV-associated T/NK lymphoproliferative disease in non-immunocompromised hosts. Orphanet J Rare Dis 2014;9:165. DOI: 10.1186/ s13023-014-0165-x. PMID: 25475054.
25. Yang C.F., Yang G.D., Huang T.J. et al. EB-virus latent membrane protein 1 potentiates the stemness of nasopharyngeal carcinoma via preferential activation
of PI3K/AKT pathway by a positive feedback loop. Oncogene 2016;35 (26):3419-31. DOI: 10.1038/onc. 2015.402. PMID: 26568302.
26. Ma N., Kawanishi M., Hiraku Y. et al. Reactive nitrogen species-dependent DNA damage in EBV-associated nasopharyngeal carcinoma: the relation to STAT3 activation and EGFR expression. Int J Cancer 2008;122(11):2517-25. DOI: 10.1002/ijc. 23415. PMID: 18307254.
27. Rebouissou S., Bernard-Pierrot I.,
de Reynies A. et al. EGFR as a potential therapeutic target for a subset of muscle-invasive bladder cancers presenting a basal-like phenotype. Sci Transl Med 2014;6 (244):244ra91. DOI: 10.1126/scitrans-
lmed.3008970. PMID: 25009231.
28. Zhang L., Xu J., Yang G. et al. miR-202 inhibits cell proliferation, migration, and invasion by targeting EGFR in human bladder cancer. Oncol Res 2018. DOI: 10.3 727/096504018X15149787144385. PMID: 29298735.
29. Petersson F. Nasopharyngeal carcinoma: a review. Semin Diagn Pathol 2015;32 (1):54-73. DOI: 10.1053/j. semdp. 2015.02.021. PMID: 25769204.
30. Koh Y.W., Han J.H., Yoon D.H. et al. Epstein—Barr virus positivity is associated with angiogenesis in, and poorer survival of, patients receiving standard treatment for classical Hodgkin's lymphoma. Hema-tol Oncol 2017;36(1):182—8. DOI: 10.1002/hon.2468. PMID: 28744882.
31. Koh Y.W., Han J.H., Yoon D.H. et al. PD—L1 expression correlates with VEGF and microvessel density in patients with uniformly treated classical Hodgkin lymphoma. Ann Hematol 2017;96(11):1883— 90. DOI: 10.1007/s00277-017-3115-6. PMID: 28842748.
32. Лоран О.Б., Синякова Л.А., Гундоро-ва Л.В. и др. Влияние латентной вирусной инфекции на течение и прогноз рака мочевого пузыря. Доклад на XIII Съезде XVII Конгресса Российского общества урологов, 8—10 ноября 2017. [Loran O.B., Sinyakova L.A., Gundoro-va L.V. et al. The Influence of latent viral infection on the course and prognosis of bladder cancer. Report on the XIII Con-
gress, of the Russian society of urology, November 8-10, 2017. [Loran O.B., Sinyakova L.A., Gundorova L.V. et al. Impact of latent viral infection on the course and prognosis of bladder cancer. Oral presentation at the 17th Congress of the Russian Society of Urology; November 8-10, 2017. (In Russ.)].
33. Bracarda S., Altavilla A., Hamzaj A. et al. Immunologic checkpoints blockade in renal cell, prostate, and urothelial malignancies. Semin Oncol 2015;42(3):495-505. DOI: 10.1053/j.seminoncol.2015.02.004. PMID: 25965369.
34. Seo A.N., Kang B.W., Kwon O.K. et al. Intratumoural PD-L1 expression is associated with worse survival of patients with Epstein-Barr virus-associated gastric cancer. Br J Cancer 2017;117(12):1753-60. DOI: 10.1038/bjc.2017.369. PMID: 29073638.
35. Wankowicz S.A. M., Werner L., Orsola A. et al. Differential expression of PD-L1
in high grade T1 vs muscle invasive bladder carcinoma and its prognostic implications. J Urol 2017;198(4):817-23. DOI: 10.1016/j.juro.2017.04.102. PMID: 28487100.
36. Chen B.J., Chapuy B., Ouyang J. et al. PD-L1 expression is characteristic
of a subset of aggressive B-cell lymphomas and virus-associated malignancies. Clin Cancer Res 2013;19(13):3462-73. DOI: 10.1158/1078-0432.CCR-13-0855. PMID: 23674495.
CS
U
u
JN СЧ
Вклад авторов
И.В. Косова: выбор темы проекта, разработка дизайна исследования, задач и целей, получение данных для анализа, анализ полученных данных (включая статистический), обзор публикаций по теме статьи, написание текста рукописи;
0.Б. Лоран, Л.А. Синякова: выбор темы проекта, разработка дизайна исследования, задач и целей, анализ полученных данных, общее руководство исследованием;
Л.В. Гундорова, И.Е. Погодина: проведение основных морфологических исследований, включая выполнение иммуногистохимических исследований и оценку полученных результатов; В.А. Косов, Д.Н. Колбасов: получение данных для анализа, анализ полученных данных. Authors' contributions
1.V. Kosova: selection of the project theme, developing the research design and objectives, obtaining data for analysis, analysis of the obtained data (including statistical), reviewing of publications of the article's theme, article writing; O.B. Loran, L.A. Sinyakova: selection of the project theme, developing the research design, objectives, analysis of the obtained data, overall research management;
L.V. Gundorova, I.E. Pogodina: carrying out of the basic morphological researches, including performance of
immunohistochemical researches and an estimation of the received results;
V.A. Kosov, D.N. Kolbasov: obtaining data for analysis, analysis of the obtained data.
ORCID авторов
И.В. Косова: https://orcid.org/0000-0002-0051-0583
0.Б. Лоран: https://orcid.org/0000-0002-7531-1511 ORCID of authors
1.V. Kosova: https://orcid.org/0000-0002-0051-0583 O.B. Loran: https://orcid.org/0000-0002-7531-1511
2 Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов. о Conflict of interest. The authors declare no conflict of interest.
JN CV
CS
JN СЧ
Финансирование. Исследование проведено без спонсорской поддержки. Financing. The study was performed without external funding.
Информированное согласие. Все пациенты подписали информированное согласие на участие в исследовании. Informed consent. All patients gave written informed consent to participate in the study.
ос Статья поступила: 31.03.2018. Принята к публикации: 15.06.2018 " Article received: 31.03.2018. Accepted for publication: 15.06.2018
DOI: 10.17650/1726-9776-2018-14-2-154-155
Рецензия на статью «Иммуногистохимические аспекты рака мочевого пузыря на фоне вирусной инфекции»
Review of the article "Immunohistochemical characteristics of bladder cancer in patients with virus-positive tumors"
В своей работе авторы изучали экспрессию маркеров апоптоза, пролиферативной активности, ангиогенеза, а также ростовых факторов у больных раком мочевого пузыря (РМП) и их ассоциацию с наличием вирусной инфекции. В исследование включено 100 больных с верифицированным РМП. Авторы исследовали клинические образцы на наличие ДНК вирусов простого герпеса 1-го и 2-го типа, цитомегаловируса, вируса папилломы человека (ВПЧ) и вируса Эпштейна—Барр (ВЭБ), а также серологические маркеры инфекции. Наличие вирусных ДНК в ткани опухоли было выявлено у 34 больных, причем преобладающим вирусом был ВЭБ (обнаружен в 27 случаях). Данные, полученные авторами, совпадают с данными литературы [1, 2]. Новым в данной работе является исследование экспрессии молекулярно-биологи-ческих маркеров опухоли и их ассоциации с наличием вирусной ДНК в опухолевой ткани. Так, иммуногисто-химическое исследование данных маркеров было выполнено для 32 пациентов. Выявлены статистически значимые положительные корреляции между наличием ДНК ВЭБ и экспрессией CD31, Ю-67, а также между наличием ДНК ВПЧ высокого онкогенного риска и экспрессией маркера апоптоза (Вс1-2). Высокий титр анти-ВЭБ капсидных антител коррелировал с экспрессией EGFR и Ю-67, а уровень нуклеарных антител — с экспрессией CD44. Выявлены особенности экспрессии исследуемых маркеров в зависимости от стадии опухолевого процесса, степени анаплазии, рецидивного характера поражения.
В настоящее время уделяется особое внимание роли инфекционных процессов, вызванных некоторыми вирусами, бактериями и паразитами, в развитии онкологических заболеваний. Показана ассоциация рака мочевого пузыря с вирусной инфекцией. Среди вирусов, часто обнаруживаемых в опухолях этой локализации, можно выделить ВПЧ, ВЭБ, цитомегало-вирус и полиомавирусы [1]. Многочисленные исследования показали прямую корреляцию наличия ДНК ВПЧ высокого канцерогенного риска [2—4] и ВЭБ [5, 6] с развитием РМП. Анализ имеющихся данных показывает, что потенциальными этиологическими агентами РМП могут быть также полиомавирусы [7]. Однако современные исследования носят скорее эпидемиологический характер, что не является достаточным для доказательства этиологической роли вирусов в канцерогенезе РМП. Выяснение молекулярных механизмов действия вирусов остается актуальной задачей. Требуются дальнейшие исследования, направленные на изучение молекулярно-биологических механизмов воздействия вирусов на основные клеточные сигнальные пути, регулирующие пролифератив-ную и апоптотическую активность инфицированных клеток.
В связи с этим данные, представленные в публикации, хотя и носят предварительный характер, важны для понимания этиологической роли вирусов в развитии РМП. Исследования в этом направлении будут
