Иммуногистохимическая характеристика стромальной пролиферации в надпочечнике при хроническом эндотоксикозе Текст научной статьи по специальности «Клиническая медицина»

Волгоградского научного центра

РАМН

и Администрации Волгоградской области

НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ

к

Э10 1 доку мен i создан демо версией in i 21 di I iiot

2-2005

БЮЛЛЕТЕНЬ ВОЛГОГРАДСКОГО НАУЧНОГО ЦЕНТРА РАМН

УДК 616.45-002.18-018-097:616-008.6-074

ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА СТРОМАЛЬНОЙ ПРОЛИФЕРАЦИИ В НАДПОЧЕЧНИКЕ ПРИ ХРОНИЧЕСКОМ ЭНДОТОКСИКОЗЕ

В.В. Новочадов, С.М. Востриков, Г.Л. Снигур, С.А. Калашникова

Отел обшей и экспериментальной

В отличие от острого процесса, в пато- и морфогенезе хронического эндотоксикоза (ЭТ), помимо прямого действия эндогенных токсических соединений на органы-мишени (печень, легкие, почки, сердие, головной мозг), значительная роль отводится опосредованным эффектам в связи с нарушениями нейрогуморального баланса в организме [2, 5-8, 14]. Причины и механизмы этих влияний следует искать в морфофункииональных преобразованиях различных элементов вегетативной нервной системы и желез внутренней секреции. В то же время сведения о морфологии и функции надпочечников при остром ЭТ в доступной литературе единичны и противоречивы [11, 12, 15], а при хроническом процессе - отсутствуют. Исследование в этом направлении может привести к расширению современных представлений об ЭТ, его органах-мишенях, подходах к диагностике и патогенетической коррекции отдельных нарушений.

ЦЕЛЬ РАБОТЫ

Дать иммуногистохимическую характеристику фиброгенезу в надпочечниках как одному из морфогенетических механизмов функциональной недостаточности этого органа при хроническом эндотоксикозе. Установить закономерности морфофункииональных преобразований в надпочечниках как компонента нейрогуморальной дизре-гуляиии при остром и хроническом эндотоксикозе.

МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ

Работа носила экспериментальный характер и была выполнена с использованием. 33 белых крыс. Выбор, содержание животных, моделирование патологических процессов и выведение крыс из опыта осуществляли на основе базисных нормативных документов МЗ РФ и рекомендаций ВОЗ. Для моделирования хронического ЭТ была использована оригинальная модель с совместным введением малых доз бактериального липополи-сахарида (ЛПС) и тетрахлорметана [4]. Шесть крыс составили контрольную группу без каких-либо манипуляций до эвтаназии, по 9 животных выводились из эксперимента на 30-, 60- и 90-е сутки с момента начала эксперимента. В этой модели ранее нами были показаны высокое содержание веществ средней молекулярной массы, их ол иго пептидных и липидных фракций, снижение активности аиилазы (КФ 3.5.1.14) и лецитин-хо-

патологии BHU РАМН и АВО

лестерол-ацилтрансферазы (ЛХАТ, КФ 2.3.1.43) в тканях печени и почек, а также развитие характерных патоморфологических изменений во внутренних органах [4, 5].

Морфологическому исследованию во всех сериях экспериментов были подвергнуты ткани надпочечников. Для гистологического исследования были использованы общепринятые методики с окраской гематоксилином и эозином и по ван Гизону.

Иммуногистохимическое исследование проводили наборами фирмы "Dako" (Германия). Определялись клетки, позитивные к CD-68 (антигену макрофагов и моноцитов), виментину (антигену зрелых мезенхимальных клеток, прежде всего фибробластов) и PCNA (ядерному антигену роста и пролиферации, который экспрессируется в ядрах делящихся и репарируюших клеток). Во всех случаях количественно оценивали процент клеток, экспрессирующих антиген. Для морфомет-рического исследования иммуногистохимических препаратов также использовали компьютерный комплекс "Видеотест-Морфо 4.0" - оценивали общую светосумму свечения антигена [1].

Математическая обработка проводилась непосредственно из общей матрицы данных EXEL 7.0 (Microsoft, USA) с привлечением возможностей программы АРКАДА (Диалог-МГУ, Россия) по правилам, принятым для медико-биологических исследований [3].

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Как показали исследования, в нормальном надпочечнике отсутствуют макрофаги и вимен-тин-позитивные клетки, содержание PCNA-пози-тивных эндокриноцитов не превышает 2 %. При окраске по ван Гизону выявляются нитевидные структуры.

При хроническом ЭТ, начиная с 30-х суток эксперимента, в надпочечниках выявлялись единичные макрофаги (CD-68 позитивые клетки). Они располагались преимущественно вблизи сосудов на границе между корковым и мозговым веществом. При более поздних сроках опыта количество макрофагов возрастало весьма незначительно, местами они образовывали скопления по 2-4 клетки (рис. 1).

Надпочечники, по данным литературы, не относятся к эндокринным органам с большими возможностями заместительного фиброгенеза.

Э10 1 доку мен I создан демо версией 1x1 I 21 1 ы^с 211611081

БЮЛЛЕТЕНЬ ВОЛГОГРАДСКОГО НАУЧНОГО ЦЕНТРА РАМН

2-2005

Тем не менее при окраске по ван Гизону и при иммуногистохимическом окрашивании на ви-ментин в надпочечниках при хроническом ЭТ достоверно увеличивалось представительство соединительнотканных элементов.

На 30-е сутки опыта соединительнотканная пролиферация могла быть расценена лишь как небольшое увеличение стромального компонента в мозговом веществе и сетчатой зоне надпочечника. На более поздних сроках ЭТ элементы соединительной ткани образовывали пролифераты от капсулы в глубь пучковой зоны и осгровковые участки - в более глубоких зонах коркового вещества {рис. 2).

При исследовании РСМА, начиная с 30-х суток эксперимента, заметное увеличение клеток с ядрами, окрашенными на РСМА, выявлялось исключительно в сетчатой зоне коркового вещества надпочечников. К 90-м суткам количество РСЫА-позитивных клеток среди эндокриноцитов

было минимальным, что свидетельствовало о падении пролиферативного и компенсаторного потенциала этих клеток на поздних сроках ЭТ.

Количественные исследования подтвердили различия в экспрессии РСИА и СО-68 по зонам коркового вещества и в мозговом веществе надпочечников (табл.).

По данным литературы, токсическое повреждение коркового и мозгового вещества надпочечников может сопровождаться макрофагальной инфильтрацией ткани органа (СО-68 позитивные клетки), запуском механизмов апоптоза эндокриноцитов (Р-45 и каспаза-3 позитивные клетки) [9, 10]. В наших исследованиях мы выявили весьма умеренные реакции со стороны макрофагов. Они ограничивались только зоной границы между корковым и мозговым веществом надпочечника, что может говорить об особенностях взаимодействия эндогенных токсических соединений с мо-ноцитарно-макрофагальной системой организма.

Рис. 1. Экспрессия СЭ-68 в ядрах моноцитов вблизи сосудов на границе коркового и мозгового вещества надпочечника, Иммуногистохимическое окрашивание. Ув. х320: а - 30 е сут. Единичные клетки, б - 90-е сут. Небольшие сколения

рши

Рис. 2. Стромальная пролиферация в надпочечнике при хроническом ЭТ: а - характер увеличения тканевых стромальных компонентов. Окр. по вам Гизону. Ув. 320; б - экспрессия виментана в сенатом зоне коркового вещества надпочечника. Иммуногистохимическое окрашивание. Ув. х320

Э10 1 доку I

I I созда!

демо иерс

I ilOt

I 2-2005

1

БЮЛЛЕТЕНЬ ВОЛГОГРАДСКОГО НАУЧНОГО ЦЕНТРА РАМН

Таблица

Иммуногнстохимическая характеристика ткани надпочечников при хроническом энлотоксикозе

Показатели Контрольная группа Время эксперименте;

30-е сут. 60-е сут. 90-е сут.

PCNA: % позит. клеток Интегр. яркость CD-68: % позит. клеток Интегр, яркость 1,8±0,2 7,3±0,5 0 1,1 ±0,1 (фон) 3,7±0,5* 12,4±0,9' 1,8±0,2' 5,6±0,6* 2,4±0,5 9,0±1,0* 1,3±0,2* 7,0±0,8* 1,1 ±0,2 7,4±0,8 2,5+0,2* 9,9±0,8*

- достоверные различия по сравнению с показателем в контрольной группе.

Кроме того, при хроническом эндотоксикозе имеет место накопление клеток, экспрессирую-щих виментин, что указывает на локусы генерации соединительнотканных элементов. Подтверждением виментин-продуцируюшей функции служат обнаруженные при окраске по ван Гизону соединительнотканные волокна, преимущественно в клубочковом слое коркового вещества надпочечников. Анализ данных гистохимических находок позволяет предположить, что к числу реакций эндокриноцитов на ЛПС и другие эндогенные токсические субстанции, помимо прямого повреждения и непрямого действия цитокинов, относится и индукция запрограммированной гибели клеток надпочечника как возможный механизм ликвидации потенциально опасных опухолевидных клеток либо как источник вторичных эндогенных токсинов внутриклеточного содержимого эндокриноцитов, поступающего при альтерации последних в системный кровоток.

Данные об экспрессии виментина и разрастания соединительной ткани в клубочковом слое являются прямым подтверждением преобладания фибропластического компонента в морфогенезе повреждения надпочечников при хроническом эндотоксикозе.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Развитие стромальной пролиферации относится к основным проявлениям дисметаболического и дизрегуляторного повреждения надпочечников при хроническом ЭТ. Она сопровождается неравномерным накоплением СВ-68 позитивных и виментин-позитивных клеток в надпочечнике с преобладанием фиброгенеза на границе между мозговым и корковым веществом органа. Дальнейшее изучение морфофункциональных преобразований в надпочечниках перспективно в плане

раскрытия механизмов срыва неироэндокриннои регуляции - одного из основных компонентов па-то- и морфогенеза вторичного повреждения внутренних органов при хроническом ЭТ.

ЛИТЕРАТУРА

1. Авташилов Г.Г. Основы количественной патологической анатомии. - М.: Медицина, 2002. - 240 с.

2. Мишнёв О,Д., Щеголев А.И., Лысова Н.Л. и лр. Печень и почки при энлотоксемии. - №.. РГМУ, 2003. -210 с.

3. Новиков Д.А., Новочалов В.В. Статистические методы в экспериментальной биологии и медицине. -Волгоград, 2005.-84 с.

4. Новочалов В.В., Писарев В.Б. Эндотоксикоз: моделирование и органопато/югия. - Волгоград: Изл-во ВолГМУ, 2005. - 240 с.

5. Новочалов В.В., Писарев В.Б., Фролов В.И. // Веста. ВолГМУ. - 2004. - № 10. - С. 7-11.

6. Созинов A.C. // Бюл. экспер. биол. и медицины -

2002. - № 2. - С. 183-185.

7. Фролов В.И. Патоморфология вегетативной нервной системы при хроническом эндотоксикозе: авто-реф. лис. ... д-ра мед. наук. - Волгоград, 2004. - 42 с.

8. Яковлев М.Ю. // Бюл. ВолгГМУ ВНЦ РАМН и АВО. - 2005 - № 1 - С. 32-33.

9. Agelaki S., Tsatsanis С., Gravanis А., et а!. // Infect. Immunol. - 2002. - Vol. 70, № 11. - P. 60686074.

10. RnkM.P. // Crit. Care Clin. - 2001. - Vol. 17. -P. 219-237.

11. Roth J., Hubschle Т., Pehl U„ et al. // Pflugers. Arch. - 2002. - Vol. 443, № 3. - P. 411^117.

12. Touchette K.J., Carroll J. A., Alke G.L., et al. // J. Anim. Sei. - 2002. - Vol, 80, № 2. - P. 494-501.

13. Toward T.J., Broadley K.J. // J. Pharmacol. Exp. Ther. - 2002. - Vol. 302, № 2. - P. 814-821.

14. Vargaftig B.B., Lefort J. // J. Endotoxin Res. -2000. - Vol. 6.-P. 83.

15. Watanobe H., Habu S. // NeuroendocrinoLogy. -

2003. - Vol. 78, № 1. - P. 23-28.

© Коллектив авторов, 2005