Иммунофенотипические особенности редких вариантов диффузной В-крупноклеточной лимфомы Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

4. Duman BB, Sahin B, Ergin M, Guvenc B. Loss of CD20 antigen expression after rituximab therapy of CD20 positive B cell lymphoma (diffuse large B cell extranodal marginal zone lymphoma combination): a case report and review of the literature//Med Oncol. 2012 Jun; 29(2): 1223-6.

5. Hiraga J, Tomita A, Sugimoto T, Shimada K, Ito M, Nakamura S, Kiyoi H, Kinoshita T, Naoe T. Down-regulation of CD20 expression in B-cell lymphoma cells after treatment with rituximab-containing combination chemotherapies: its prevalence and clinical significance//Blood. 2009 May 14;113(20): 4885-93.

6. Ferreri AJ, Dognini GP, Verona C, Patriarca C, Doglioni C, Ponzoni M. Re-occurrence of the CD20 molecule expression subsequent to CD20-negative relapse in diffuse large B-cell lymphoma //Haematologica. 2007 Jan; 92(1): e1-2.

7. Iguchi T, Miyazawa K, Okabe S, Kawakubo K, Shimamoto T, Kuriyama Y, Ito Y, Kimura Y, Ohyashiki K, Serizawa H, Iwaya K, Mukai K. Relapse of diffuse large B cell lymphoma to CD20-negative multiple cutaneous tumors immediately after anti-CD20 monoclonal antibody (rituximab) therapy //Rinsho Ketsueki. 2004 0ct;45(10): 1129-34.

8. Venugopal P, Leslie WT, O'Brien T, Gregory SA. CD20-negative relapse after (131)I-anti-CD20 therapy //J Clin Oncol. 1999 Nov;17(11):3692-3.

9. Nakamaki T, Fukuchi K, Nakashima H, Ariizumi H, Maeda T, Saito B, Yanagisawa K, Tomoyasu S, Homma M, Shiozawa E, Yamochi-Onizuka T, Ota H.//Eur. J. Haematol. 2012 0ct;89(4):350-5.

10. Teruya-Feldstein J, Chiao E, Filippa DA, Lin O, Comenzo R, Coleman M, Portlock C, Noy A. CD20-negative large-cell lymphoma with plasmablastic features: a clinically heterogenous spectrum in both HIV-positive and -negative patients //Ann Oncol. 2004 Nov;15(11): 1673-9.

11. Li Y.J, Li Z.M., Rao H.L., Xia Y, HuangH.Q., Xia Z.J., Li S., Li W.Y., Jiang W.Q.. CD20-negative de novo diffuse large B-cell lymphoma in HIV-negative patients: a matched case-control analysis in a single institution //J. Transl. Med. 2012 May 3;10: 84

12. Suzuki Y, Yoshida T, Wang G, Togano T, Miyamoto S, Miyazaki K, Iwabuchi K, Nakayama M, Horie R, Niitsu N, Sato Y, Nakamura N. Association of CD20 levels with clinicopathological parameters and its prognostic significance for patients with DLBCL //Ann Hematol. 2012 Jul;91(7): 997-1005.

13. Stein H., Warnke R.A., Chan W.C. et al. Diffuse large B-cell lymphoma not otherwise specified. In: WHO classification of tumours of haematopoietic and lymphoid tissues (Swerdlow S.H., Campo E. Harris N.L. et al. -Eds). -WHO Press. -2008. -P.233-237

Е.Н.Шолохова, П.А.Зейналова, Е.А.Османов, Н.Н.Тупицын II. ИММУНОФЕНОТИПИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ

РЕДКИХ ВАРИАНТОВ ДИФФУЗНОЙ В-КРУПНОКЛЕТОЧНОЙ ЛИМФОМЫ

Резюме

Иммунофенотипирование опухолевой ткани 338 больных диффузной В-крупноклеточной лимфомой позволило выделить особые варианты заболевания, встречавшиеся с различной частотой: HLA-DR- - 9,3 % (32/331), CD45- - 3,9% (13/332), CD38+ - 55,9 (184/329), CD21+ - 12,4 (33/266), CD23+ - 12% (39/326), CD10+ -6,3% (15/238), CD30+ - 23,9% (21/88). Экспрессия ряда антигенов была взаимсвязана. Так, наличие на клетках ДВКЛ CD38 коррелировало с экспрессией рецепторов CD21 и CD23 (экспрессия этих двух антигенов также была достоверно взаимосвязана); в CD45- группе отмечена высокая экспрессия Ki-1 антигена (CD30), а при CD21+ фенотипе антиген CD30 не встречался. Наибольшую связь с клетками микроокружения имели CD38+ фенотипы - в этих случаях отмечена более выраженная реакция макрофагов, плазмоцитов, Т-лимфоцитов, присутствие в опухолевой ткани фолликулярных дендритных клеток (CD23+). Экспрессия маркеров светлых центров CD23 ассоциировалось с Т-клеточной реакцией, а CD10 - с макрофагальной. Для случаев CD30+ была нехарактерна плазмоклеточная реакция, а для HLA-DR- - Т-клеточная.

Ключевые слова: диффузная В-крупноклеточная лимфома, CD45, CD23, CD21, CD30, HLA-DR, CD10, CD38.

E.N.Sholokhva, P.A.Zeinalova, E.A.Osmanov, N.N.Tupitsyn

II. IMMUNOPHENOTYPIC PECULIARITIES

OF RARE VARIANTS OF DIFFUSE LARGE B-CELL LYMPHOMA

Summary

We have identified some specific variants of diffuse large B-cell lymphoma which take place with different frequency: HLA-DR- - 9,3% (32/331), CD45- - 3,9% (13/332), CD38+ - 55,9 (184/329), CD21+ - 12,4 (33/266), CD23+ - 12% (39/326), CD10+ - 6,3% (15/238), CD30+ - 23,9% (21/88). CD38+ variant correlated with expression of CD21 and CD23 (correlation between CD21 and CD23 was also noted); CD45- DBCL was characterized of high frequency of CD30-expression, and in CD21+ phenotype CD30 antigen was absent. In CD38-phenotype most of tumor microenvironment cells were prominent: macrophages, plasmacytes, T-lymphocytes, CD23+ follicular dendritic cells. Follicular center cell markers CD23 were associated with T-cell reaction, and CD10 - with macrophage infiltration. Prominent plasma cell reaction was not characteristic for CD30+ cases, and T-cell reaction - for HLA-DR- cases.

Key words: diffuse large B-cell lymphoma, CD45, CD23, CD21, CD30, HLA-DR, CD10, CD38

Введение

ДВКЛ является достаточно гетерогенным заболеванием. В основе диагностики редких вариантов лежит установление В-линейной принадлежности и

периферического иммунофенотипа опухоли. Чаще всего для этих целей используется маркер СБ20. Наибольшую популярность и клиническую значимость получила оценка профилей вЕР, позволившая выделить варианты ДВКЛ из клеток типа вСВ и из

АВС пост-герминальных этапов дифференцировки [1]. Применение так называемых суррогатных имму-ногистохимических маркеров явилось менее надежным и информативным, чем GEP, и не рекомендовано к клиническому использованию [2].

Клетка диффузной В-крупноклеточной лим-фомы имеет своим нормальным неопухолевым аналогом периферический активированный В-лимфоцит и характеризуется всем многообразием дифференциро-вочных и активационных антигенов, присущих этой клетке. В их числе - молекулы активации, экспресси-рованные на клетках светлых центров - CD23, CD10, CD38. При продолжающейся антигенной стимуляции центроциты способны трансформироваться во вторичные В-бласты, экспрессирующие молекулу CD30 [4]. Определенную гетерогенность ДВКЛ привносят экспрессия CR2 (CD21), а также нелинейных антигенов CD45 и HLA-DR.

В литературе есть сообщения, свидетельствующие о важности изучения активационных антигенов [5]и, в частности, показано, что экспрессия CD23 на клетках ДВКЛ [б].

Утрата молекул HLA-DR при В-клеточных лимфомах известна давно и считается признаком аберрантности и анаплазии [7-11].

Отсутствие CD45 при ДВКЛ наблюдается чаще при экстранодальной локализации опухоли [12-15]. Как правило, эти случаи характеризовались признаками анаплазии с экспрессией цитокератинов или ALK.

Утрата экспрессии НЬЛ-БЯ находит отражение в количественном составе клеток опухолевого микроокружения. Достоверные данные получены в отношении Т-лимфоцитов - мы не наблюдали ни одного случая выраженной Т-клеточной реакции при НЬЛ-БК- иммунофено-типе ДВКЛ, в то время как в случаях наличия НЬЛ-БЯ на опухолевых клетках частота выраженной Т-лимфоцитарной инфильтрации была на уровне 10-11% (табл. 2).

Экспрессия АДФ-рибозил-циклазы (СБ38) на опухолевых клетках ДВКЛ Частота экспрессии СБ38 составила 56% (184 из 329) - в 70 случаях (21,2%) отмечена экспрессия на части клеток, в 114 (34,7%) - на всех клетках. Взаимосвязь экспрессии молекул СБ38 на опухолевых клетках ДВКЛ наблюдается с активационными АГ СБ21 и СБ23: в С038+ группе частота данных маркеров вдвое выше, табл. 3.

Экспрессия СБ38 на клетках ДВКЛ находит отражение в количественном составе клеток опухо-

СБ38+-иммунофенотип является достаточно частым при ДВКЛ, в том числе - в случаях сочетания транслокации 1(14;18) и реаранжировки 8q24/cMYC [16]. В последние годы интерес к экспрессии СБ38 при лимфомах обусловлен еще и тем, что получены лечебные моноклональные антитела Даратумумаб против антигена СБ38, которые способны вызывать гибель СБ38+ опухолевых клеток [17].

Экспрессия СБ30 при ДВКЛ хорошо известна. В последние годы они более детально изучаются в связи с получением лечебных препаратов Брен-туксимаба Ведотина, против антигена СБ30 [18].

Мы рассмотрели различные варианты ДвКл с детальной иммунофенотипической характеристикой и субпопуляционным составом клеток микроокружения.

Результаты

Молекулы

гистосовместимости II класса - НЬЛ-БЯ

Частота экспрессии НЬЛ-БЯ при ДВКЛ составила 90,7% (299 из 331). К отрицательным случаям относили только те наблюдения, где молекула НЬЛ-БЯ отсутствовала на всех или значительной части опухолевых клеток, случаи со слабой интенсивностью экспрессии относили к позитивным.

Какая-либо связь экспрессии НЬЛ-БЯ с другими иммунофенотипическими маркерами отсутствовала (табл. 1).

Таблица 1

левого микроокружения. Достоверные данные получены в отношении Т-лимфоцитов, макрофагов, плазмоцитов, фолликулярных дендритных клеток СБ23+. Все это свидетельствует об особых иммунобиологических свойствах СБ38+ диффузных В-крупноклеточных лимфом, табл. 4.

Общелейкоцитарный антиген СБ45

При исследовании 332 случаев ДВКЛ отсутствие общелейкоцитарного антигена отмечено лишь в 13 (3,9%) случаях.

Достоверные связи обнаружены с экспрессией СБ30: в СБ45- группе частота экспрессии антигена составила 55,6%, в то время как в основной группе ДВКЛ - 20,5%, что в 2,5 раза ниже, табл. 5.

Представленные в табл. 6 данные убедительно свидетельствуют об отсутствии какой-либо связи клеток опухолевого микроокружения с СБ45-иммунофенотипом ДВКЛ.

Взаимосвязь экспрессии HLA-DR с другими иммунофенотипическими признаками ДВКЛ

Показатель Градации Экспрессия HLA-DR X2; P

+ -

CD45 Отсутствует 10 (3,4) 3 (9,4) 2,7; 0,12

Присутствует 286 (96,6) 29 (90,6)

CD21 отсутствует 207 (87,3) 25 (92,6) 0,6; 0,72

Часть клеток 17 (7,2) 1 (3,7)

Все клетки 13(5,5) 1 (3,7)

CD23 отсутствует 257 (88,3) 27 (84,4) 3,2; 0,2

Часть клеток 23 (7,9) 5 (15,6)

Все клетки 11 (3,8) 0 (0)

CD38 отсутствует 126 (42,9) 16 (50,0) 0,6; 0,44

присутствует 168 (57,1) 16 (50,0)

CD10 отсутствует 197 (93,8) 25 (92,6) 0,17; 0,93

Часть клеток 8 (3,8) 1 (3,7)

Все клетки 5 (2,4) 1 (3,7)

CD30 отсутствует 53 (74,6) 12 (80,0) 0,2; 0,91

Часть клеток 12 (16,9) 2 (13,3)

Все клетки 6 (8,5) 1 (6,7)

Таблица 2

Взаимосвязь экспрессии HLA-DR с клетками опухолевого микроокружения__

Показатель Градации Экспрессия HLA-DR X2; P

+ -

Макрофаги D11 (CD163) отсутствуют 59 (20,3) 2 (6,3) 3,7; 0,098

умеренное кол-во 181 (62,2) 23 (71,9)

многочисленные 50 (17,5) 7 (21,9)

Фолликулярные дендритные клетки (CD21) отсутствуют 190 (80,2) 25 (92,6) 3,7; 0,12

умеренное кол-во 40 (16,9) 1 (3,7)

многочисленные 7 (3,0 1 (3,7)

Фолликулярные дендритные клетки CD23 отсутствуют 257 (88,3) 27 (84,4) 3,2 (0,2)

умеренное кол-во 23 (7,9) 5 (15,6)

многочисленные 11 (3,8) 0 (0)

CD5 отсутствуют 88 (29,6) 13 (40,6) 4,7; 0,02

умеренное кол-во 176 (59,3) 19 (59,4)

многочисленные 33 (11,1) 0 (0)

CD7 отсутствуют 90 (30,2) 12 (37,5) 4,0; 0,029

умеренное кол-во 176 (59,1) 20 (62,5)

многочисленные 32 (10,7) 0 (0)

CD3 отсутствуют 71 (33,6) 12 (44,4) 3,6; 0,049

умеренное кол-во 118 (55,9) 15 (55,6)

многочисленные 22 (10,4) 0 (0)

Плазмоциты CD38++ отсутствуют 191 (65,0) 19 (59,4) 2,8 (0,24)

умеренное кол-во 76 (25,9) 12 (37,5)

многочисленные 27 (9,2) 1 (3,1)

Таблица 3

Взаимосвязь экспрессии CD38 с другими иммунофенотипическими маркерами ДВКЛ__

Показатель Градации Экспрессия HLA-DR X2; P

+ -

CD45 Отсутствует 4 (2,2) 9 (6,2) 3,4; 0,065

Присутствует 178 (97,8) 136 (93,8)

CD21 отсутствует 105 (92,1) 127 (84,7) 3,4; 0,048

присутствует 9 (7,9) 23 (15,3)

CD23 отсутствует 132 (91,7) 153 (85,0) 3,4; 0,047

присутствует 12 (8,3) 27 (15,0)

CD10 отсутствует 93 (93,0) 129 (94,2) 0,72

присутствует 7 (7,0) 8 (5,8)

CD30 отсутствует 24 (70,6) 40 (78,4) 0,41

присутствует 10 (29,4) 11 (21,6)

Таблица 4

Взаимосвязь CD38+ иммунофенотипа ДВКЛ с клетками опухолевого микроокружения.__

Показатель Градации Экспрессия HLA-DR X2; P

+ -

Макрофаги Б11 (СБ163) отсутствуют 37 (26,4) 25 (13,8) 19,1; 0,000

умеренное кол-во 91 (65,0) 110 (60,8)

многочисленные 12 (8,6) 46 (25,4

Фолликулярные дендритные клетки (СБ21) отсутствуют 99 (86,8) 116 (77,3) 4,0; 0,14

умеренное кол-во 13 (11,4) 28 (18,7)

многочисленные 2 (1,8) 6 (4,0)

Фолликулярные дендритные клетки СБ23 отсутствуют 137 (95,1) 151 (84,4) 10,6; 0,006

умеренное кол-во 7 (4,9) 25 (14,0)

многочисленные 0 (0) 3 (1,7)

СБ5 отсутствуют 64 (44,4) 38 (20,7) 22,1; 0,000

умеренное кол-во 71 (49,3) 123 (66,8)

многочисленные 9 (6,3) 23 (12,5)

СБ7 отсутствуют 65 (44,8) 38 (20,7) 24,4; 0,000

умеренное кол-во 73 (50,3) 122 (66,3)

многочисленные 7 (4,8) 24 (13,0)

СБ3 отсутствуют 51 (51,0) 33 (23,9) 20,3; 0,000

умеренное кол-во 45 (45,0) 88 (63,8)

многочисленные 4 (4,0) 17 (12,3)

Плазматические клетки СБ38++ отсутствуют 77 (53,1) 33 (23,9) 20,3; 0,000

умеренное кол-во 55 (37,9) 88 (63,8)

многочисленные 13 (9,0) 17 (12,3)

Таблица 5

Связь экспрессии СР45 с другими иммунофенотипическими маркерами ДВКЛ

Показатель Градации Экспрессия СБ45 X2; Р

- +

СБ21 отсутствует 11 (91,7) 222 (87,4) 0,19; 0,7

присутствует 1 (8,3) 32 (12,6)

СБ23 отсутствует 11 (84,6) 275 (88,4) 0,18; 0,7

присутствует 2 (15,4) 36 (11,6)

СБ10 отсутствует 13 (100) 210 (93,3) 0,9 (0,33)

присутствует 0 15 (6,7)

СБ30 отсутствует 4 (44,4) 62 (79,5) 5,4; 0,02

присутствует 5 (55,6) 16 (20,5)

Таблица 6

Связь СЭ45- иммунофенотипа с реакцией клеток микроокружения при ДВКЛ__

Показатель Градации Экспрессия СБ45 X2; Р

- +

Макрофаги Б11 (СБ163) отсутствуют 3 (23,1) 59 (19,0) 0,98; 0,6

умеренное кол-во 9 (69,2) 195 (62,7)

многочисленные 1 (7,7) 57 (18,3)

Фолликулярные дендритные клетки (СБ21) отсутствуют 10 (83,3) 207 (81,5) 0,4; 0,8

умеренное кол-во 2 (16,7) 39 (15,4)

многочисленные 0 (0) 8 (3,1)

Фолликулярные дендритные клетки СБ23 отсутствуют 12 (92,3) 277 (89,1) 0,21; 0,9

умеренное кол-во 1 (7,7) 31 (10,0)

многочисленные 0 (0) 3 (1,0)

СБ5 отсутствуют 6 (46,2) 98 (30,9) 2,3; 0,31

умеренное кол-во 7 (53,8) 186 (58,7)

многочисленные 0 (0) 33 (10,4)

СБ7 отсутствуют 6 (46,2) 99 (31,1) 2,2; 0,33

умеренное кол-во 7 (53,8) 187 (58,8)

многочисленные 0 (0) 32 (10,1)

СБ3 отсутствуют 6 (46,2) 78 (34,7) 1,7; 0,4

умеренное кол-во 7 (53,8) 125 (55,6)

многочисленные 0 (0) 22 (9,8)

Плазматические клетки СБ38++ отсутствуют 6 (46,2) 205 (65,3) 2,6; 0,28

умеренное кол-во 6 (46,2) 82 (26,1)

многочисленные 1 (7,7) 27 (8,6)

Экспрессия CR2-рецептора комплемента (CD21) на клетках ДВКЛ Частота экспрессии СБ21 при ДВКЛ составила 12,4% (33 из 266) - в 18 случаях (7%) отмечена экспрессия на части опухолевых клеток, в 15 случаях (5,6%) - на всех клетках опухоли.

Отсутствие корреляции с НЬЛ-БЯ и СБ45, а также наличие корреляции с СБ38 отмечены в соответствующих разделах. Связь экспрессии молекул СБ21 на опухолевых клетках ДВКЛ наблюдается только с активационными антигенами СБ23. Обращает на себя внимание факт отсутствия СБ30 в случаях экспрессии СБ21, эти маркеры могут являться взаимоисключающими, однако, для подтверждения этого факта потребуется накопление большего числа наблюдений; в анализируемой выборке связь недостоверна (р=0,098), табл. 7.

Представленные в табл. 8 данные свидетельствуют, что экспрессия СБ21 на клетках ДВКЛ не связана с количественным составом клеток опухолевого микроокружения.

Экспрессия

низкоаффинного Fcрецептора II для ^Б ^сеШ1) - CD23 Частота экспрессии СБ23 при ДВКЛ составила 12,0% (39 из 326), в том числе в 28 случаях (8,6%) отмечена экспрессия на части клеток, в 11 -(3,4%) на всех клетках.

Как было показано ранее, отсутствовала корреляции с НЬЛ-БЯ и СБ45, а также имела место взаимосвязь с СБ38 и СБ21. Связь с СБ10 и СБ30 отсутствовала, табл. 9.

Таблица 7

Взаимосвязь экспрессии СР23 с иммунофенотипическими маркерами ДВКЛ__

Показатель Градации Экспрессия СБ21 X2; Р

- +

СБ23 отсутствует 210 (90,5) 21 (70,0) 10,7; 0,001

присутствует 22 (9,5) 9 (30,0)

СБ10 отсутствует 174 (94,6) 21 (91,3) 0,4; 0,5

присутствует 10 (5,4) 2 (8,7)

СБ30 отсутствует 40 (67,8) 6 (100) 2,7; 0,098

присутствует 19 (32,2) 0

Таблица 8

Взаимосвязь между экспрессией СР21 на клетках ДВКЛ и клетками микроокружения

Показатель Градации Экспрессия СБ21 X2; Р

- +

Макрофаги Б11 (СБ163) отсутствуют 42 (18,7) 8 (24,2) 0,9; 0,65

умеренное кол-во 141 (62,7) 18 (54,5)

многочисленные 42 (18,7) 7 (21,2)

Фолликулярные дендритные клетки (СБ21) отсутствуют 190 (81,5) 27 (81,8) 1,4; 0,49

умеренное кол-во 37 (15,9) 4 (12,1)

многочисленные 6 (2,6) 2 (6,1)

Фолликулярные дендритные клетки СБ23 отсутствуют 208 (89,7) 27 (90) 1,6; 0,44

умеренное кол-во 22 (9,5) 2 (6,7)

многочисленные 2 (0,9) 1 (3,3)

СБ5 отсутствуют 76 (32,8) 12 (36,4) 2,4; 0,3

умеренное кол-во 132 (56,9) 15 (45,5)

многочисленные 24 (10,3) 6 18,2)

СБ7 отсутствуют 77 (33) 12 (36,4) 2,6; 0,27

умеренное кол-во 133 (57,1) 15 (45,5)

многочисленные 23 (9,9) 8 (18,2)

СБ3 отсутствуют 67 (36,8) 8 (33,3) 1,5; 0,47

умеренное кол-во 99 (54,4) 12 (50,0)

многочисленные 16 (8,8) 4 (16,70

Плазматические клетки СБ38++ отсутствуют 143 (61,6) 25 (78,1) 3,6; 0,17

умеренное кол-во 66 (28,4) 6 18,8)

многочисленные 23 (9,9) 1 (3,1)

Таблица 9

Взаимосвязь экспрессии СШ.З с экспрессией СР10 и СР30__

Показатель Градации Экспрессия СБ23 X2; Р

- +

СБ10 отсутствует 192 (94,6) 28 (87,5) 2,3; 0,12

присутствует 11 (5,4) 4 (12,5)

СБ30 отсутствует 61 (77,2) 4 (57,1) 1,4; 0,24

присутствует 18 (22,8) 3 (42,9)

Таблица 10

Связь экспрессии СБ23 на клетках ДВКЛ с клетками микроокружения__

Показатель Градации Экспрессия СБ23 X2; Р

- +

Макрофаги Б11 (СБ163) отсутствуют 56 (20,0) 6 (15,8) 0,5; 0.78

умеренное кол-во 174 (62,1) 24 (63,2)

многочисленные 50 (17,9) 8 (21,1)

Фолликулярные дендритные клетки (СБ21) отсутствуют 192 (83,1) 22 (71,0) 3,1; 0,22

умеренное кол-во 32 (13,9) 8 (25,8)

многочисленные 7 (3,0) 1 (3,2)

Фолликулярные дендритные клетки СБ23 отсутствуют 254 (88,5) 35 (92,1) 2,4; 0,3

умеренное кол-во 31(10,8) 2 (5,3)

многочисленные 2 (0,7) 1 (2,6)

СБ5 отсутствуют 93 (32,5) 8 (24,2) 3,0; 0,22

умеренное кол-во 166 (58,0) 25 (57,6)

многочисленные 27 (9,5) 6 15,4)

СБ7 отсутствуют 94 (32,8) 8 (20,5) 3,2; 0,2

умеренное кол-во 167 58,2) 25 (64,1)

многочисленные 26 (9,1) 6 (15,1)

СБ3 отсутствуют 74 (36,5) 8 (24,2) 4,5; 0,11 (0,051)

умеренное кол-во 113 (55,7) 19 (57,6)

многочисленные 16 (7,9) 6 (18,2)

Плазматические клетки СБ38++ отсутствуют 184 (64,6) 24 (61,5) 1,2; 0,56

умеренное кол-во 76 (26,7) 13 (33,3)

многочисленные 25 (8,8) 2 (5,1)

Экспрессия СБ23 на клетках ДВКЛ связана с количественным составом Т-клеток опухолевого микроокружения. При использовании Т-клеточных маркеров СБ7 и СБ5 частота выраженной реакции Т-клеток в СБ23+ группе в 1,5 раза выше, чем в случаях отсутствия СБ23 на опухолевых клетках.

При использовании специфического маркера Т-клеток СБ3 частота выраженных реакций в 2,5 раза выше в СБ23+ группе, и при применении теста оценки линейно-линейной связи уровень достоверности р=0,051, то есть, взаимосвязь между признаками близка к достоверной, табл. 10.

Разница в данных между СБ3, СБ5 СБ7 может быть обусловлена тем, что СБ7 помимо Т-клеток присутствует на МК-клетках, а СБ 5 - на некоторых В-клетках. Следовательно, СБ23+ группа ДВКЛ взаимосвязана с уровнями зрело-Т-клеточного микроокружения.

Нейтральная эндопептидаза (СБ10) Частота экспрессии СБ10 при ДВКЛ составила 6,3% (15 из 238) - в 9 случаях (3,8%) отмечена экспрессия на части клеток, в 6 (2,5%) - на всех. Интерес к этому антигену обусловлен тем, что в иммуногистохимии он используется как один из маркеров вСБ-типа ДВКЛ. В числе иммунофено-типических маркеров клеток ДВКЛ оценены обще-

Ш-1 антиген (СБ30)

Частота экспрессии СБ30 при ДВКЛ составила 23,9% (21 из 88) - в 14 случаях (15,9%) отмечена экспрессия на части клеток, в 7 (8,0%) - на всех клетках.

В числе иммунофенотипических маркеров клеток ДВКЛ нами оценены общелейкоцитарный антиген НЬЛ-БЯ, СБ45, БсеН (СБ23), СБ10, СБ38. Явных взаимосвязей с экспрессией каких-либо антигенов не выявлено, что рассмотрено в предыдущих разделах. Экспрессия СБ30 на клетках ДВКЛ связана только с количеством инфильтрирующих

лейкоцитарный антиген НЬЛ-БЯ, СБ45, СБ21, РееП (СБ23), СБ38, СБ30. Отсутствие корреляции с НЬЛ-БЯ и СБ45, СБ38, СБ21, СБ23 рассмотрено выше. Оценить связь между СБ10 и СБ30 не удалось, так как все 69 больных, у которых были изучены оба антигена, относились к СБ10- группе.

Экспрессия СБ10 на клетках ДВКЛ не связана с количественным составом клеток опухолевого микроокружения.

Исключением являются интратуморальные макрофаги, выраженная реакция которых в СБ10+-случаях наблюдается у 33,3% больных (в 1,5 раза выше, чем в группе сравнения), что при оценке по ряду тестов является достоверным (р=0,033), табл. 11.

Таблица 11

Таблица 12

опухоль плазмоцитов - выраженная реакция этих клеток нехарактерна для СБ30+ ДВКЛ, табл. 12.

Обсуждение

В нашей работе определены частоты встречаемости ряда особых, обычно не изучаемых стандартной иммуногистохимией по парафиновым блокам, вариантов ДВКЛ. При проведении исследования по криостатным срезам представленные в работе антигены легко визуализируются. Частота НЬЛ-БЯ- опухолей составила в нашем исследовании

Взаимосвязь экспрессии СБ10 на опухолевых клетках с клетками микроокружения

Показатель Градации Экспрессия СБ 10 X2; Р

- +

Макрофаги Б11 (СБ163) Отсутствуют 43 (19,7) 0 4,2; 0,12 (0,033)

умеренное кол-во 131 (60,1) 10 (66,7)

Многочисленные 44 (20,2) 5 (33,3)

Фолликулярные дендритные клетки (СБ21) Отсутствуют 157 (80,5) 10 (83,3) 1,4; 0,5

умеренное кол-во 32 (16,4) 1 (8,3)

Многочисленные 6 (3,1) 1 (8,3)

Фолликулярные дендритные клетки СБ23 Отсутствуют 194 (88,2) 14 (93,3) 0,4; 0,8

умеренное кол-во 23 (10,5) 1 (6,7)

Многочисленные 3 (1,4) 0

СБ3 Отсутствуют 76 (36,5) 4 (30,8) 0,6; 0,7

умеренное кол-во 113 (54,3) 7 (53,8)

Многочисленные 19 (9,1) 2 (15,4)

Плазматические клетки СБ38++ Отсутствуют 140 (63,1) 8 (53,3) 0,6; 0,7

умеренное кол-во 62 (27,9) 5 (33,3)

Многочисленные 20 (9) 2 (13,3)

Взаимосвязь экспрессии СБ30 на клетках ДВКЛ с клетками микроокружения

Показатель Градации Экспрессия СБ30 X2; Р

- +

Макрофаги Б11 (СБ163) отсутствуют 12 (18,2) 1 (4,8) 2,3; 0,3

умеренное кол-во 40 (60,6) 15 (71,4)

многочисленные 14 (21,4) 5 (23,8)

Фолликулярные дендритные клетки (СБ21) отсутствуют 38 (82,6) 14 (73,7) 2,4; 0,3

умеренное кол-во 6 (13) 5 (26,3)

многочисленные 2 (4,4) 0

Фолликулярные дендритные клетки СБ23 отсутствуют 58 (89,2) 18 (85,7) 0,2; 0,7

умеренное кол-во 7 (10,8) 3 (14,3)

СБ3 отсутствуют 11 (22,4) 6 (28,6) 1,3; 0,5

умеренное кол-во 28 (57,1) 13 (61,9)

многочисленные 10 (20,4) 2 (9,5)

Плазматические клетки СБ38++ отсутствуют 42 (65,6) 10 (47,6) 6,4; 0,04

умеренное кол-во 13 (20,3) 10 (47,6)

многочисленные 9 (14,5) 1 (4,8)

9,3% (32 из 331 случая ДВКЛ). Это вполне сопоставимо с данными других исследователей. Так [6] при исследовании 104 случаев установили 8 ИЬЛ-БЯ- (7,7%). Подобные находки неудивительны, поскольку экспрессия ИЬЛ-БЯ отмечена на всех стадиях дифференцировки В-лимфоцитов от про-В-клетки до зрелого В-лимфоцита. Утрата этой молекулы наблюдается на плазматических клетках и при некоторых В-клеточных опухолях. Экспрессия ИЬЛ-БЯ не имела связи ни с одним из изученных нами маркеров, включая СБ38, что служит дополнительным подтверждением отсутствия плазмокле-точной направленности дифференцировки в ИЬЛ-БЯ-негативных случаях.

Крайне редко встречаются СБ45- опухоли. В нашей работе их частота составила 3,9% (13 из 332 случаев). Обычно ДВКЛ характеризуются отчетливой экспрессией этого общелейкоцитарного антигена. Он может отсутствовать на анапластических крупноклеточных лимфомах и лимфомах из клеток-предшественниц. При ДВКЛ отсутствие антигена может быть иммунологическим признаком анапла-зи, что в нашей работе подтверждено высокой частотой антигена СБ30 в СБ45- случаях.

СЯ2-антиген (рецептор комплемента) в нормальных лимфатических узлах экспрессирован на клетках фолликулов и фолликулярных дендритных клетках. Согласно номенклатуре лейкоцитарных антигенов он носит название СБ21. Частота выявления данного антигена при ДВКЛ составила 12,4% (33 из 266 больных). Примерно с такой же частотой (12%; 39 из 326) выявлялся маркер СБ23+. Это низкоаффинный Бе-рецептор II для ^Е (РееЯП), который в нормальных лимфатических узлах экспрес-сирован на клетках светлых центров фолликулов, активированных В-клетках, фолликулов и фолликулярных дендритных клетках. По данным литературы этот маркер обнаруживают в 16% случаев ДВКЛ [5]. Интересно отметить, что маркеры, ассоциированные с клетками светлых центров, коррелировали между собой, хотя и встречались с различной частотой. Так, СБ38 выявлялся более, чем в половине случаев - 56% (184 из 329). Особняком стоит нейтральная эндопептидаза (СБ10), которая в нормальных лимфатических узлах экспрессирована

на клетках светлых центров фолликулов, частота этих случаев составила 6,3% (15 из 238). В последнее время в связи с попытками классифицировать вСВ_ и ЛВС-типы частота случаев ДВКЛ с экспрессией данного антигена явно завышается. Вместе с тем, хорошо известно, что СБ10 наблюдается при лимфомах из клеток-предшественниц, лимфо-ме Беркитта и фолликулярных лимфомах, а случаи СБ10 ДВКЛ являются редкими.

В нашем исследовании антиген Кь1 или CD30 обнаружен в 23,9% случаев (21 из 88), что точно совпадает с данными самых последних публикаций - 25% [18]. Этот антиген особенно часто наблюдался при СБ45- ДВКЛ, но никогда не встречался при СБ21+ ДВКЛ.

В литературе описаны ассоциации отсутствия НЬЛ-БЯ на клетках ДВКЛ с ослаблением ин-тратуморальной инфильтрации Т-лимфоцитами [11]. Этот факт подтвержден и в нашем исследовании. Убедительной связи других маркеров с уровнями интратуморальных клеток микроокружения в литературе не представлено.

На большом материале (338 случаев ДВКЛ) установлены новые взаимосвязи иммунофенотипа ДВКЛ с клетками микроокружения: ассоциация СБ23+ случаев с выраженностью Т-клеточной реакции, а СБ10+ - с макрофагальной реакцией. Для СБ30 иммунофенотипа нехарактерна инфильтрация опухоли плазмоцитами.

Наиболее интересным с точки зрения клеток микроокружения оказался СБ38+ вариант ДВКЛ. Экспрессия СБ38 ассоциировалась с большей выраженности реакции практически всех клеток микроокружения - макрофагов, Т-лимфоцитов, плазматических клеток, а также присутствием СБ23+ фолликулярных дендритных клеток.

Следовательно, представленные данные указывают на существование целого ряда взаимосвязей между иммунофенотипическими маркерами ДВКЛ. Вывод относится также к клеткам микроокружения. Это может иметь важное значение в разработке программ иммунотерапии, а также способствовать правильному назначению лечебных моно-клональных антител к активационным антигенам клеток ДВКЛ.

Литература

1. Alizadeh A.A., Eisen M.B., Davis R.E. et al. Distinct types of diffuse large B-cell lymphoma identified by gene-expression profiling. //Nature. -2000. -V.403 - P. 503-11.

2. Ghelmini M., Vitolo U., Kimbyz E. et al. ESMO Guidelines consensus conference on malignant lymphoma 2011 part 1: diffuse large B-cell lymphoma (DLBCL), follicular lymphoma (FL) and chronic lymphocytic leukemia (CLL). //Annals of Oncology. - 2013. -V.24. - P: 561-76.

3. Rimza L.M., Roberts R.A., Miller T.P. et al. Loss of MHC class II gene and protein expression in diffuse large B-cell lymphoma is related to decreased tumor immunosurveillance and poor patient survival regardless of other prognostic factors: a follow up study from the Leukemia and lymphoma molecular profiling project. //Blood. - 2004. -V. 103. - P. 4251-8.

4. Andre-Schwartz J. et al. In: Hematology (Second Edition). Basic principles and practice. (Eds. Hoffman R. et al.), 1995, pp. 86-108. Churchill Livingstone, N.-Y.

5. Linderoth J., Jerkeman M., Cavalin-Stahl E. et al. Immunohistochemical expression of CD23 and CD40 may identify prognostically favourable subgroup of diffuse large B-cell lymphoma: A Nordic lymphoma group study.//Clinical Cancer Research. - 2003. - V.9. - P. 722-8.

6. Schuurman H.J., Huppes W., VerdonckL.F. et al. Immunophenotyping of non-Hodgkin's lymphoma. Correlation with relapse-free survival.//Am.J.Pathol. - 1988. - V. 131. - P.102-11.

7. Berndt H.-W., ZiepertM., Thorns C. et al. Loss of HLA-DR expression and immunoblastic morphology predict adverse outcome in diffuse large B-cell lymphoma - analyses of cases from two prospective randomized clinical trials. //Haematologica. - 2009. - V.94, №11. - P.1569-80

8. Miller T.P., Lippman S.M., Spier C.M. et al. HLA-DR (Ia) immune phenotype predicts outcome for patients with diffuse large cell lymphoma.//J. Clin. Invest. - 1988. - V.82. - P.370-2.

9. Rybski J.A., Spier C.M., Miller T.P. et al. Prediction of outcome in diffuse large cell lymphoma by the mayor histocompatibility complex class I (HLA-A,-B, -C) and class II (HLA-DR, -Dp, -DQ) pheno-

type.//Leuk. Lymphoma. - 1991. - V.6. - P.31-8.

10. Rimsza L.M., Roberts R.A., Miller T.P. et al. Loss of MHC class II gene and protein expression in diffuse large B-cell lymphoma is related to decreased tumor immunosurveillance and poor patient survival regardless of other prognostic factors: a follow-up study from the Leukemia and Lymphoma Molecular Profiling Project.//Blood. - 2004. - V.103. - P.4251-8.

11. Rimsza L.M., Farinha P., Fuchs D.A. et al. HLA-DR protein status predicts survival in patients with diffuse large B-cell lymphoma treated on the MACOP-B chemotherapy regimen. //Leuk. Lymphoma. - 2007. -V.48. - 542-6.

12. Lasota J., Hyjek E., Koo S.H. et al. Cytokeratin-positive large-cell lymphomas of B-cell lineage. A study of five phenotypically unusual cases verified by polymerase chain reaction.//Am.J.Surg. Pathol. -1996. - V.20. - P.346-54.

13. Donner L.R., Mott F.E., Tafur I. Cytokeratin-positive, Cd45-negative primary centroblastic lymphoma of the adrenal gland. A potential for the diagnostic pitfall.//Arch. Pathol. Lab. Med. - 2001. - V. 125. - P. 1104-6.

14. Inaba T., Nishimura H., Saito J. et al. A case of CD45-negative diffuse large B-cell lymphoman in thyroid gland. //Lab. Hem. - 2008. -V.14. -P. 12-4.

15. Nath P., Bhattacharya S., Bharadwaj R. ALK-positive diffuse large B-cell lymphoma - unusual subtype of diffuse large B-cell lymphoma (DLBCL).//Lymphoma Chronic lymphocytic leuk. - 2010. -V.2. -P. 1-5.

16. Le Gouill S., Talmant P., Touzeau C. et al. The clinical presentation and prognosis of diffuse large B-cell lymphoma with t(14;18) and 8q24/cMYC rearrangement.//Haematologica. - 2007. -V.92. - P. 1335-42.

17. De Weers M., Tai Y.-T., van der Veer M.S. et al. Daratumumab, a novel therapeutic Human CD38 monoclonal antibody, induces killing of multiple myeloma and other haematological tumors. //J.Immunol. - 2011. -V. 186. - P. 1840-8.

18. Slack J. W., Steidl C., Sehn L.N., Gascone R.D. CD30 expression in de novo diffuse large B-cell lymphoma: a population based study from British Columbia. //Br. J. Haematol. - 2014, Aug. 19. Doi:10.1111/bjh.13085.

III. КЛИНИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ КЛЕТОК

ОПУХОЛЕВОГО МИКРООКРУЖЕНИЯ

ПРИ ДИФФУЗНОЙ В-КРУПНОКЛЕТОЧНОЙ ЛИМФОМЕ

Резюме

Проанализировано клиническое значение выраженности макрофагальной (CD163+), плазмоклеточной (CD38++), Т-клеточной (CD7, CD3, CD5) инфильтрации опухолевой ткани ДВКЛ и наличие в опухолевой ткани фолликулярных дендритических клеток двух субпопуляций (CD21, CD23). При ДВКЛ с наличием выраженной макрофагальной реакции отмечены более низкие уровни ЛДГ и более старший возраст больных. Отсутствовала взаимосвязь с клинико-лабораторными показателями выраженности плазмоцитарной инфильтрации ткани ДВКЛ, а также наличия в опухолевых срезах фолликулярных дендритических клеток (CD21, CD23). При ДВКЛ с Т-клеточной инфильтрацией значительно реже наблюдались экстранодальные локализации ДВКЛ. Т-кле-точная инфильтрация ДВКЛ характеризовала группу более благоприятного прогноза, что убедительно доказано при длительном наблюдении за больными (до 10 и более лет). Целесообразно дальнейшее изучение и использование в клинике нового показателя, Т-клеточная инфильтрация опухоли.

Ключевые слова: диффузная В-крупноклеточная лимфома, микроокружение, Т-лимфоциты, макрофаги, плазмоциты, фолликулярные дендритные клетки.

III. CLINICAL SIGNIFICANCE OF TUMOR

MICROENVIRONMENT

IN DIFFUSE LARGE B-CELL LYMPHOMA

Summary

Clinical significance of tumor microenvironment study was estimated in 338 patients with DLBCL. We have studied macrophage infiltration (CD163), level of plasma cells, T-lymphocyte infiltration (CD3, CD5, CD7) and presence of 2 types of follicular dendritic cells (CD21, CD23) in tumor tissue sections. Prominent macrophage reaction was noted in patients with older age and lower serum lactate dehydrogenase concentrations. There were no any relationships between clinical laboratory data and levels of plasma cells and follicular dendritic cells in tumor sections. Presence of T-cell infiltration of tumor was the only favorable immunological parameter associated with higher overall survival and less frequent extranodal localizations of DLBCL.

Key words: diffuse large B-cell lymphoma, microenvironment, T-lymphocytes, macrophages, plasmacytes, fol-licular dendritic cells

Введение

В последние годы очень важная роль в исследовании неходжкинстких лимфом уделена характеристике не только опухолевого субстрата, но и клеток неопухолевого микроокружения. Наибольшее распространение эти исследования полу-

чили при фолликулярной лимфоме. Изучение профилей генной экспрессии опухолевой ткани фолликулярной лимфомы позволило установить, что иммунный ответ 1 (Ш.1) определяется присутствием Т-лимфоцитов, а иммунный ответ 2 (Ш2) - макрофагов. Данные профили генной экспрессии имели четкую связь с прогнозом фолликулярной лимфо-