ИММУНОФЕНОТИПИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЛОКНИСТОГО КОМПОНЕНТА ГЕМАТОТЕСТИКУЛЯРНОГО БАРЬЕРА У ПАЦИЕНТОВ С НЕОБСТРУКТИВНОЙ АЗООСПЕРМИЕЙ ПОСЛЕ ПРИМЕНЕНИЯ КЛЕТОЧНОЙ ТЕРАПИИ Текст научной статьи по специальности «Клиническая медицина»

DOI: 10.17650/2070-9781-2022-23-2-27-33

С«)]

Иммунофенотипическая характеристика волокнистого компонента гематотестикулярного барьера у пациентов с необструктивной азооспермией после применения клеточной терапии

BY 4.0

М.В. Епифанова1, 2, Г.А. Демяшкин3, А.А. Костин1, 3, Е.В. Гамеева1, 2, С.А. Артеменко1, А.А. Епифанов4

ФГАОУВО «Российский университет дружбы народов»; Россия, 117819 Москва, ул. Миклухо-Маклая, 6; 2Московский научно-исследовательский онкологический институт им. П.А. Герцена — филиал ФГБУ«Национальный медицинский исследовательский центр радиологии» Минздрава России; Россия, 125284 Москва, 2-й Боткинский пр-д, 3; ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр радиологии» Минздрава России; Россия, 249031, Обнинск, ул. Маршала Жукова, 10;

ФГБОУВО «Московский государственный медико-стоматологический университет им. А.И. Евдокимова» Минздрава России; Россия, 127473 Москва, ул. Делегатская, 20, стр. 1

Контакты: Майя Владимировна Епифанова epifanova_maya@mail.ru

Цель исследования - иммуногистохимическая оценка коллагенов тестикулярной ткани при лечении пациентов с необструктивной азооспермией аутоплазмой, обогащенной тромбоцитарными факторами роста (АОТ), в комбинации с экстракорпоральной ударно-волновой терапией (ЭУВТ).

Материалы и методы. В работе использовали биопсийный материал фрагментов яичек 14 пациентов с секреторной формой азооспермии до и после курса комбинированной терапии - АОТ с ЭУВТ (патент № RU2738543 от 14.12.2020). Средний возраст пациентов составил 33,07 ± 4,64 года (28-43 года), средняя продолжительность заболевания - 4,1 ± 2,26 года (1-9 лет). Лечение проводилось в течение 6 нед - по 2 сеанса в неделю: 1-й сеанс - инъекции АОТ в яичко, семенной канатик под ультразвуковым контролем с последующей активацией ее с помощью ЭУВТ (Dornier Aries); 2-й сеанс - ЭУВТ на яички и придатки яичек. Биопсийный материал яичка оценивали с помощью иммуногистохимического метода (антитела к коллагену I, III и IV типов) за 90 дней до начала терапии и через 180 дней после последнего лечебного сеанса.

Результаты. До проведения терапии доля коллаген-позитивных клеток составила: коллаген I типа - 22,9 ± 4,2 % (р <0,05), III типа - 7,3 ± 2,2 % (p <0,05), IV типа - 21,4 ± 1,5 % (р <0,05). После проведения комбинированного лечения АОТ с ЭУВТ: коллаген I типа - 27,3 ± 5,7 % (р <0,05), III типа - 7,2 ± 1,5 % (р <0,05), IV типа - 32,2 ± 2,6 % ^ (р <0,05).

Выводы. Продукция биологически активных веществ на фоне комбинированного лечения АОТ с ЭУВТ стиму-

лирует синтез разных типов коллагена, что способствует восстановлению волокнистого компонента гематотестикулярного барьера и улучшению сперматогенеза.

Ключевые слова: аутоплазма, обогащенная тромбоцитарными факторами роста, экстракорпоральная ударно-волновая терапия, факторы роста, мужское бесплодие, азооспермия, коллаген, гематотестикулярный барьер

Для цитирования: Епифанова М.В., Демяшкин Г.А., Костин А.А. и др. Иммунофенотипическая характеристика волокнистого компонента гематотестикулярного барьера у пациентов с необструктивной азооспермией после применения клеточной терапии. Андрология и генитальная хирургия 2022;23(2):27-33. DOI: 10.17650/2070-9781-2022-23-2-27-33.

га

£1 О

к .о

к га i .о

га

а О

Immunophenotypic characteristics of the fibrous component of the blood-testis barrier when using cell therapy for azoospermia treatment

M.V. Epifanova2, G.A. Demyashkin3, A.A. Kostin1,3, E.V. Gameeva1,2, S.A. Artemenko1, A.A. Epifanov4

1RUDN University; Bld. 3, 21 Miklukho-Maklaya St., Moscow 117198, Russia;

2P.A. Hertsen Moscow Oncology Research Institute — branch of the National Medical Research Radiological Centre, Ministry of Health of Russia; 3 2nd Botkinskiy proezd, Moscow 117198, Russia;

3National Medical Research Radiological Centre, Ministry of Health of Russia; 10, Marshala Zhukova St., Obninsk 249031, Russia; 4A.I. Evdokimov Moscow State University of Medicine and Dentistry, Ministry of Health of Russia; Bld. 1, 20 Delegatskaya St., Moscow 127473, Russia

Contacts: Maya Vladimirovna Epifanova epifanova_maya@mail.ru

Objective. Immunohistochemistry testicular tissue collagens evaluation in the treatment of azoospermia with platelet-rich plasma (PRP) and extracorporeal shock wave therapy (ESWT).

Materials and methods. We used biopsy material of testicular fragments from 14 patients with an established diagnosis of secretory azoospermia before and after the use of PRP plus ESWT (patent granted RU2738543 from 14.12.2020). The mean age was 33.07 ± 4.64 (28-43 years), the mean duration of the disease - 4,1 ± 2,26 years (1-9 years). All participants received 2 therapy sessions per week during 6 weeks. 1st session included ultrasound-guided PRP injections into testicles and spermatic cords, finally PRP was activated with ESWT (Dornier Aries), 2nd session included ESWT per testicles and epididymis. Immunohistochemistry analysis with antibodies to collagen types I, III and IV of patient's biopsies with azoospermia were completed on 90 days before treatment and 180 days from last PRP-injection.

Results. Before PRP and ESWT therapy: type I collagen was 22.9 ± 4.2 % (p <0.05), type III collagen - 7.3 ± 2.2 % (p <0.05), type IV collagen - 21.4 ± 1.5 % (p <0.05); after combined therapy: type I collagen - 27.3 ± 5.7 % (p <0.05), type III collagen - 7.2 ± 1.5 % (p <0.05), type IV collagen - 32.2 ± 2.6 % (p <0.05).

Conclusion. The production of biologically active substances against the background of PRP and ESWT therapy stimulates the collagen various types synthesis, which promotes to the restoration of the fibrous component of the blood-testicular barrier and improves spermatogenesis.

Keywords: platelet-rich plasma, extracorporeal shock wave therapy, male infertility, azoospermia, growth factors, collagen, blood-testicular barrier

For citation: Epifanova M.V., Demyashkin G.A., Kostin A.A. et al. Immunophenotypic characteristics of the fibrous component of the blood-testis barrier when using cell therapy for azoospermia treatment. Andrologiya i genital'naya khirurgiya = Andrology and Genital Surgery 2022;23(2):27-33. (In Russ.). DOI: 10.17650/2070-9781-2022-23-2-27-33.

о a

<u

IB

с

'5 o

к .0

к

re

.0

re

a О

Введение

Согласно определению Всемирной организации здравоохранения, бесплодием считается отсутствие беременности у женщины в течение 1 года или более в сексуально активной паре, которая не использует методы контрацепции [1]. По данным той же организации, около 15 % сексуально активных пар не достигают беременности в течение 1 года и поэтому обращаются к специалистам. Но даже при попытках лечения около 5 % из них остаются бездетными. В связи со значительной частотой возникновения бесплодия, обусловленного мужским фактором, использование современных методов лечения становится все более актуальным и перспективным. К их числу относится применение технологий регенеративной медицины, а именно аутоплазмы, обогащенной тромбоцитарными факторами роста (АОТ), а также экстракорпоральной ударно-волновой терапии (ЭУВТ). Терапевтическое действие АОТ обусловлено содержанием в тромбоцитах факторов роста, таких как PDGF, ШF-p, VEGF, EGF, HGF, FGF, IGF-I, аденозиндифосфата, аденозинтрифосфата, ионов

кальция, гистамина, серотонина и дофамина. Действие перечисленных биологически активных веществ стимулирует пролиферацию и активацию фибробластов, эн-дотелиоцитов, кератиноцитов, созревание и дифферен-цировку стволовых клеток и опосредует регенерацию и организацию тканей [2—5]. Механизм действия ЭУВТ схож с действием АОТ и заключается в увеличении концентрации оксида азота и синтазы оксида азота в тканях, неоангиогенезе, выработке VEGF и FGF [6, 7], коррекции процессов оксидативного стресса [8, 9], стимуляции стволовых и прогениторных клеток [8, 10].

Оба метода (АОТ и ЭУВТ) показали высокую эффективность во многих клинических областях: травматология, хирургия, дерматология, стоматология и др. [11—13]. Однако безопасность и эффективность использования АОТ в комбинации с ЭУВТ в лечении мужского бесплодия, в том числе у мужчин с необ-структивной азооспермией, остаются малоизученными. Единичные научные работы свидетельствуют о положительных эффектах АОТ-терапии в восстановлении сперматогенеза на модели животных. В одной из таких

работ после токсического действия доксорубицина отмечали нарушение гистоархитектоники семенников и целостности герминативного эпителия (расширение семенных канальцев, утолщение базальной мембраны, увеличение объема интерстициальной ткани), а после применения АОТ происходило восстановление нормального строения и функции органа [14].

При бусульфан-индуцированном бесплодии у крыс также обнаружили положительную динамику на фоне терапии с использованием АОТ. По окончании исследования отмечалось увеличение количества и повышение подвижности сперматозоидов, повышение концентрации тестостерона крови [15].

Несмотря на определенные положительные результаты, полученные в ряде экспериментов, остаются малоизученными внутриклеточные механизмы действия АОТ и ЭУВТ, способствующие восстановлению фертильности.

Как известно, для нормального течения сперматогенеза необходимо сохранение целостности гематотестику-лярного барьера, препятствующего проникновению в семенные канальцы токсичных и мутагенных агентов. Основным элементом этой структуры, обеспечивающим ее прочность, является волокнистый компонент, состоящий преимущественно из коллагена. Таким образом, представляется важным изучить влияние биологически активных веществ, продуцируемых под действием АОТ и ЭУВТ, на коллагеновые структуры интерстиция яичек.

Цель исследования — иммуногистохимическая оценка коллагенов тестикулярной ткани при лечении пациентов с необструктивной азооспермией АОТ в комбинации с ЭУВТ.

Материалы и методы

В проспективном открытом плацебо-неконтролируемом клиническом исследовании приняли участие 14 мужчин с верифицированной секреторной азооспермией. Все участники исследования подписали соответствующее информированное согласие.

Критерии включения: возраст от 20 до 65 лет, подтвержденный диагноз мужского бесплодия (отсутствие зачатия более 1 года при активной половой жизни без использования методов контрацепции), азооспермия по данным спермограммы.

До начала лечения, а именно за 90 ± 7 дней, и через 180 ± 7 дней после последнего терапевтического сеанса выполняли биопсию яичек (testicular sperm extraction, TESE) с последующей иммуногистохимической оценкой коллагенов в биопсийных материалах тестикул.

Аутоплазму, обогащенную тромбоцитарными факторами роста, получали методом двухэтапного центрифугирования 45 мл (при объеме яичек <10 мл) или 54 мл (при объеме яичек >10 мл) венозной крови, забранной в стерильные вакуумные пробирки, содержащие 3,8 %

Na3C6H5O7 (цитрат натрия). Инъекции АОТ выполняли под ультразвуковым контролем по передней поверхности в области нижнего полюса яичка билатерально, учитывая объем органа (<10 мл — 0,5 мл, >10 мл — 1,0 мл), и в семенные канатики в проекции наружного пахового кольца в объеме 2,0 мл с каждой стороны. Частота проведения АОТ-терапии — 1 раз в неделю на протяжении 6 нед [16].

В качестве 2-го применяемого метода лечения выступала ЭУВТ (аппарат Dornier Aries, Dornier Medtech GmbH, Германия; ФСЗ 2011/09554). Выставляемые параметры — 2000 ударов, энергетический уровень — 4, максимальная частота импульсов — 8 Гц, максимальная плотность потока энергии — 0,051 мДж/мм2.

Курс лечения предполагал 2 еженедельных визита на протяжении 6 нед. В 1-й визит выполняли инъекции АОТ в яички и семенные канатики, после чего проводили ЭУВТ — 2000 ударов в местах введения АОТ с целью активации высвобождения факторов роста из а-гранул тромбоцитов: по 500 ударов на каждое яичко и по 500 ударов в проекции наружного пахового кольца билатерально. Во 2-й визит выполняли ЭУВТ — 2000 ударов: по 1000 ударов на каждое яичко и придаток яичка [16].

Для гистологического исследования биоптатов яичек использовали стандартный метод (фиксация раствором Буэна, заливка в парафин, окраска гематоксилином и эозином).

Иммуногистохимическое исследование проводили после депарафинизации и регидратации парафиновых срезов по стандартному протоколу в автоматическом режиме в иммуногистостейнере Bond-Max (Leica, Германия). В качестве первичных использовали антитела к коллагену I типа (clone ab138492; 1:400), III типа (clone ab23445; 1:400) и IV типа (clone ab165342; 1:400). Для каждого маркера выполняли контрольные тестирования с целью исключения ложноположительных и ложно-отрицательных результатов. Ядра клеток докрашивали гематоксилином Майера, срезы промывали под проточной водой, дегидратировали и заключали в бальзам.

Подсчет количества иммунопозитивных клеток проводили по 3-балльной системе в 10 случайно отобранных полях зрения при увеличении х 400. Доли коллаген-позитивных клеток различных типов сперматогенного эпителия отражали в процентном эквиваленте.

Визуализацию биопсийного материала выполняли на светооптическом микроскопе Leica DM2500 (Leica Microsystems, Германия), совмещенном с видеокамерой Leica (Германия) и штатным программным обеспечением.

Статистическую обработку полученных в результате подсчета данных проводили с использованием компьютерной программы SPSS 7.5 for Windows statistical software package (IBM Analytics, США), уровень значимости различий был определен какp <0,05.

о а

<и

га

ъ! О

к .о

к га г .о

га

а О

Результаты

Средний возраст пациентов с мужским бесплодием составил 33,07 ± 4,64 года (28—43 года), средняя продолжительность заболевания — 4,1 ± 2,26 года (1—9 лет).

В основе патогенеза азооспермии лежат в том числе метаболические изменения половых клеток и клеток микроокружения на молекулярном уровне в результате реакций окислительного стресса при воздействии повреждающего фактора. Описанные альтерации характеризуются увеличением анаболизма коллагена III типа, снижением анаболизма и повышением катаболизма коллагена I типа и эластина.

Иммуногистохимические реакции на антитела к коллагену I, III и IV типов. Иммунопозитивные реакции на коллагены I, III и IV типов наблюдали до и после терапии, однако были выявлены достоверные различия в степени их иммунореактивности и распределения в структурах изучаемых образцов биоптатов яичек. При контрольной TESE отмечено преобладание количества иммунопо-зитивных мужских половых клеток к коллагену I типа (27,3 ± 5,7 %, р <0,05). При первой TESE (до начала терапии) данный показатель составил 22,9 ± 4,2 % (р <0,05), а в сперматогенном эпителии отмечалась умеренная положительная реакция (см. рисунок и таблицу).

До терапии АОТ + ЭУВТ / Before PRP+ESWT

После терапии АОТ + ЭУВТ / After PRP+ESWT

о а

<u

га с

'5 о

к

-О

к га г .о

га

a О

ш

ШЩс *

чЛ** f.

Яичко, извитые семенные канальцы и интерстициальная ткань (доокрашивание гематоксилином, x40):результаты иммуногистохимического исследования на антитела к коллагену I(а), III (б) и IV (в) типов до и после терапии аутоплазмой, обогащенной тромбоцитарными факторами роста (АОТ), в комбинации с экстракорпоральной ударно-волновой терапией (ЭУВТ); *положительная реакция

Testicle, convoluted seminiferous tubules (staining with hematoxylin, x 40): results of immunohistochemical studies for antibodies to type I (a), III (б) and IV (в) of collagen before and after platelet-rich plasma therapy (PRP) combined with extracorporeal shock wave therapy (ESWT); *positive reaction

а

в

Доля коллаген-позитивных клеток сперматогенного эпителия по результатам иммуногистохимического исследования биоптатов яичек до и после АОТ-терапии в сочетании с ЭУВТ, %

Results of testicular biopsies immunohistochemistry study before and after PLP-therapy with ESWT:proportion of immunopositive cells, %

Маркер До терапии АОТ + ЭУВТ После терапии АОТ + ЭУВТ Значение р по отношению к началу исследования

Molecular marker

1 » ll/I^V-Ulill 111<41 IYVI 1 Before PRP + ESWT | After PRP + ESWT p value, versus baseline

Коллаген I типа Collagen I 22,9 ± 4,2 27,3 ± 5,7 <0,05

Коллаген III типа Collagen III 7,3 ± 2,2 7,2 ± 1,5 <0,05

Коллаген IV типа Collagen IV 21,4 ± 1,5 32,2 ± 2,6 <0,05

Примечание. АОТ — аутоплазма, обогащенная тромбоцитарными факторами роста; ЭУВТ — экстракорпоральная ударно-волновая терапия.

Note. PRP — platelet-rich plasma; ESWT — extracorporeal shock wave therapy.

Обратный корреляционный результат получен при оценке экспрессии на антитела к коллагену III типа. Слабое окрашивание на «молодой» коллаген

III типа в половых клетках изучаемых биоптатов обнаружили при повторной TESE — 7,2 ± 1,5 % (p <0,05), в то время как при первой TESE оно было выше — 7,3 ± 2,2 % (p <0,05) (см. таблицу и рисунок).

Соотношение коллагенов I и III типов для пациентов с азооспермией составило 0,5, а после комбинированной терапии АОТ с ЭУВТ — 2,0, что указывает на активацию пластических процессов герминального компонента яичек на фоне проводимого лечения.

В настоящем исследовании наблюдалось более сильное окрашивание коллагена IV типа в сперматогенном эпителии, базальной мембране, а также в субэндотелии кровеносных сосудов (см. таблицу и рисунок). До комбинированной терапии АОТ с ЭУВТ доля коллагена

IV типа составила 21,4 ± 1,5 %, а после нее — 32,2 ± 2,6 % р <0,05. На основании этих данных можно полагать, что АОТ в комбинации с ЭУВТ активно участвует в репарации волокнистого компонента гематотестикуляр-ного барьера. Это приводит к восстановлению его трофической функции и, как следствие, к возобновлению нормального сперматогенеза.

Обсуждение

Согласно данным специализированной литературы, в препарате AOT присутствуют факторы роста, опосредующие синтез коллагена: TGF-ß1/ß2, PDGF, FGF, EGF [2-5].

Эти вещества либо сами стимулируют мужские половые клетки и фибробласты к выработке коллагена (TGF-ß1/ß2, EGF, PDGF), либо способствуют этому через активацию пролиферации клеток фибробласти-ческого ряда (FGF).

Известно, что изменения в интерстициальной ткани связаны с фенотипическим преобразованием про-

и фибробластов под действием PDGF-ß (тромбоцитар-ного фактора роста ß) с последующим интенсивным синтезом коллагена III типа при отсутствии апоптоза, что в целом объясняет нарушение функции гематотес-тикулярного барьера как ключевого компонента сперматогенеза.

Имеются сведения, что серотонин и гистамин тромбоцитов являются хемотоксическими маркерами для макрофагов, которые активируют и координируют работу фибробластов, продуцирующих коллаген. Кроме того, сами макрофаги производят коллагеназу, регулирующую постройку коллагеновых комплексов. Таким образом, макрофаги, привлеченные серотони-ном и гистамином, работают сообща с фибробластами, как единая клеточная система, восстанавливающая волокна коллагена [17].

Обнаруженные иммунофенотипические признаки демонстрируют, что коллагены I и IV типов синтезируются не только фибробластами матрикса, но и самими мужскими половыми клетками, что указывает на вовлечение их в репаративные процессы, приводящие к восстановлению волокнистого компонента гематотестикулярного барьера. Полученные данные совпадают с результатами других авторов (но продемонстрированными в экспериментах на животных)

[18, 19].

Исходя из вышеизложенного, можно предположить, что действующие вещества АОТ опосредуют ^ укрепление и построение межклеточного матрикса J гематотестикулярного барьера. £

Терапевтический эффект АОТ в комбинации с ЭУВТ, «

по-видимому, основан на снижении активности окис- 5

г

лительного стресса в результате повышения степени -п

васкуляризации патологически измененных зон яичек, «

соответствующего улучшения трофики тканей и сни- ^

жения количества активных форм кислорода у пациен- ^

тов после терапии [20-22]. °

Заключение

Продуцируемые на фоне комбинированной терапии АОТ и ЭУВТ биологически активные вещества стимулируют синтез коллагена I типа и ингибируют

синтез коллагена III типа, что способствует восстановлению волокнистого компонента гематотестикулярно-го барьера и улучшает сперматогенез.

ЛИТЕРАТУРА/REFERENCES

о а

<и

га с

'5 о

к .0

1. WHO Laboratory manual

for the examination and processing of human semen, 5th edn. Geneva, 2010.

2. Lee J.W., Kwon O.H., Kim T.K. et al. Platelet-rich plasma: quantitative assessment of growth factor levels and comparative analysis of activated and inactivated groups.

Arch Plast Surg 2013;40(5):530-5. DOI: 10.5999/aps.2013.40.5.530.

3. Pavlovic V., Ciric M., Jovanovic V. et al. Platelet Rich Plasma: a short overview of certain bioactive components. Open Med (Wars) 2016;11(1):242-7. DOI: 10.1515/med-2016-0048.

4. Virag R., Sussman H., Lambion S. et al. Evaluation of the benefit of using

a combination of autologous platelet rich-plasma and hyaluronic acid for the treatment of Peyronie's disease. Sex Health Issues 2017;1(1):1-8. DOI: 10.15761/SHI.1000102.

5. Epifanova M.V., Gvasalia B.R., Durashov M.A. et al. Platelet-rich plasma therapy for male sexual dysfunction: myth or reality? Sex Med Rev 2020;8(1):106-13. DOI: 10.1016/j.sxmr.2019.02.002.

6. Hatanaka K., Ito K., Shindo T. et al. Molecular mechanisms of the angiogenic effects of low-energy shock wave therapy: roles of mechanotransduction.

Am J Physiol Cell Physiol

2016;311(3):378-85.

DOI: 10.1152/ajpcell.00152.2016.

7. Pan M.M., Raees A., Kovac J.R. Low-intensity extracorporeal shock wave as a novel treatment for erectile dysfunction. Am J Mens Health 2016;10(2):146-8.

DOI: 10.1177/1557988315574511.

8. Liu T., Shindel A.W., Lin G. et al. Cellular signaling pathways modulated by low-intensity extracorporeal shock wave therapy. Int J Impot Res 2019;31(3):170-6.

DOI: 10.1038/s41443-019-0113-3.

9. Mariotto S., Cavalieri E., Amelio E. et al. Extracorporeal shock waves: from lithotripsy to anti-inflammatory action by NO production. Nitric Oxide 2005;12(2):89-96. DOI: 10.1016/j.niox.2004.12.005.

10. Lin G., Reed-Maldonado A.B., Wang B. et al. In situ activation of penile progenitor cells with low-intensity extracorporeal shockwave therapy.

J Sex Med 2017;14(4):493-501. DOI: 10.1016/j.jsxm.2017.02.004.

11. Bos-Mikich A., de Oliveira R., Frantz N. Platelet-rich plasma therapy

and reproductive medicine. J Assist Reprod Genet 2018;35(5):753-6. DOI: 10.1007/s10815-018-1159-8.

12. Rassweiler J. Re: Extracorporeal shock wave therapy (ESWT) in urology: a systematic review of outcome

in peyronie's disease, erectile dysfunction, and chronic pelvic pain. Eur Urol 2018;74(1):115-7. DOI: 10.1016/j.eururo.2018.01.037.

13. Simplicio C.L., Purita J., Murrell W. et al. Extracorporeal shock wave therapy mechanisms in musculoskeletal regenerative medicine. J Clin Orthop Trauma 2020;11(Suppl 3):S309-18. DOI: 10.1016/j.jcot.2020.02.004.

14. Zaporozhan V., Kholodkova O., Kuleshova O. Platelet-rich plasma induces morphofunctional restoration of mice testes following doxorubomycine hydrochloride exposure.

J Exp Clin Med 2014;31(3):183-7.

15. Dehghani F., Sotoude N., Bordbar H. et al. The use of platelet-rich plasma (PRP) to improve structural impairment of rat testis induced by busulfan. Platelets 2019;30(4):513-20. DOI: 10.1080/09537104.2018.1478400.

16. Епифанова М.В., Епифанов А.А., Артеменко С.А. Способ лечения мужского бесплодия. Патент на изобретение РФ № RU2738543 от 14.12.2020.

Бюлл. № 35 от 14.12.2020. [Epifanova M.V., Epifanov A.A., Artemenko S.A. Method of treatment of male infertility. Patent for invention of Russian Federation No. RU2738543 from 14.12.2020. Bull. No. 35 from 14.12.2020 (In Russ.)].

17. Юшков Б.Г. Клетки иммунной системы и регуляция регенерации. Бюллетень сибирской медицины 2017;16(4):94-105. [Yushkov B.G. Cells of the immune system and regulation of regeneration. Bulleten sibirskoy meditsiny = Bulletin

of Siberian Medicine 2017;16(4):94-105. (In Russ.)].

18. He Z., Feng L., Zhang X. et al. Expression of Col1a1, Col1a2 and procollagen I in germ cells

of immature and adult mouse testis. Reproduction 2005;130(3):333-41. DOI: 10.1530/rep.1.00694.

19. Siu M.K., Cheng C.Y. Extracellular matrix and its role in spermatogenesis. Adv Exp Med Biol 2008;636:74-91. DOI: 10.1007/978-0-387-09597-4_5.

20. Rah D.K., Min H.J., Kim Y.W. et al. Effect of platelet-rich plasma

on ischemia-reperfusion injury in a skin flap mouse model. Int J Med Sci 2017;14(9):829-39. DOI: 10.7150/ijms.19573.

21. Josh F., Soekamto T.H., Adriani J.R. et al. The combination of stromal vascular fraction cells and platelet-rich plasma reduces malondialdehyde

and nitric oxide levels in deep dermal burn injury. J Inflamm Res 2021;14: 3049-61.

DOI: 10.2147/JIR.S318055.

22. Rizal D.M., Puspitasari I., Yuliandari A. Protective effect of PRP against testicular oxidative stress on D-galactose induced male rats. AIP Conference Proceedings 2020;2260:040005.

DOI: 10.1063/5.0015830.

к

re

.0

re

a О

Вклад авторов

М.В. Епифанова: консультирование пациентов, выполнение диагностических и лечебных процедур, сбор данных для анализа, анализ полученных данных, написание и редактирование текста статьи;

Г.А. Демяшкин: иммуногистохимический анализ тестикулярной ткани, написание и редактирование текста статьи; А.А. Костин, Е.В. Гамеева: научное редактирование текста статьи, научное консультирование;

С.А. Артеменко: обзор публикаций по теме статьи, сбор данных для анализа, анализ полученных данных, написание текста статьи; А.А. Епифанов: обзор публикаций по теме статьи, сбор данных для анализа, написание текста статьи.

Authors' contributions

M.V. Epifanova: consulting patients, performing diagnostic and treatment procedures, data collection for analysis, analysis of the data obtained, article writing, editing of the article;

G.A. Demyashkin: immunohistochemistry analysis of testicular fragments, editing article writing, editing of the article; А.А. Kostin, E.V. Gameeva: scientific editing of the article, scientific consulting;

S.A. Artemenko: review of publications on the topic of the article, data collection for analysis, analysis of the data obtained, article writing; А.А. Epifanov: review of publications on the topic of the article, data collection for analysis, article writing.

ORCID авторов / ORCID of authors

М.В. Епифанова / M.V. Epifanova: https://orcid.org/0000-0002-8398-7255 Г.А. Демяшкин / G. A. Demyashkin: https://orcid.org/0000-0001-8447-2600 А.А. Костин / А.А. Kostin: https://orcid.org/0000-0002-0792-6012 Е.В. Гамеева / E.V. Gameeva: https://orcid.org/0000-0002-8509-4338 С.А. Артеменко / S.A. Artemenko: https://orcid.org/0000-0002-3630-9427 А.А. Епифанов / А.А. Epifanov: https://orcid.org/0000-0003-4111-6037

Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов. Conflict of interest. The authors declare no conflict of interest.

Финансирование. Работа выполнена без спонсорской поддержки. Financing. The work was performed without external funding.

Соблюдение прав пациентов. Все пациенты подписали информированное согласие на участие в исследовании. Compliance with patient rights. All patients gave written informed consent to participate in the study

о a

<u

с о

к

-О

к

re

.о

re

а

Статья поступила: 15.02.2022. Принята к публикации: 22.03.2022. Article submitted: 15.02.2022. Accepted for publication: 22.03.2022.