CC BY
52
Иммунный статус детей с рецидивирующими заболеваниями органов бронхолёгочной системы
Зыблева С.В.1, Новиков П.Д.2
1РНПЦ радиационной медицины и экологии человека, Гомель 2 Витебский государственный медицинский университет
Zybleva S.V.1, Novikov P.D.2
'Republican Research Center For Radiation Medicine And Human Ecology, Gomel, Belarus
2 Vitebsk State Medical University, Belarus
The immune status of children with relapsing diseases
of the of the respiratory tract
Резюме. Проведена оценка иммунного статуса 28 детей в возрасте 2-6 лет из группы часто и длительно болеющих с рецидивирующими заболеваниями легких в периоде клинической ремиссии. Иммунофенотипирование лейкоцитов проводилось по маркерам CD3, CD4, CD8, CD'6, CD56, CD''a, CD'4, CD'8, CD'9, CD22, CD25, CD28, CD40, CD45, CD7', CD95, CD'54, HLA-DR, LPS. В результате исследования выявлено, что рецидивирующие заболевания легких у детей сопровождаются изменениями относительного количества CD3+CD8+CD95+, LPS+CD19+- субпопуляций лимфоцитов и нейтрофилов, экспрессирующих CD'8 рецептор. Ключевые слова: частые респираторные заболевания, дети, иммунный статус.
Summary. The estimation of the immune status at 28 children in the age of 2-6 years from group wtth relapsing diseases of the respiratory tract were inves-tigeted. Definition of subpopulations was spent by two- and three-color cytometric analysis wtth anti-CD3, CD4, CD8, CD'6, CD56, CD''a, CD'4, CD'8, CD'9, CD22, CD25, CD28, CD40, CD45, CD7', CD95, CD'54, HLA-DR, LPS. As a result research has revealed, that relapsing respiratory diseases of respiratory ways at children are accompanied by changes of relative and absolute quantity of CD3+CD4+CD95+, LPS+CD'9+, LPS+CD3+ lymphocytes and CD'8+ neutrophyl granulocytes.
Keywords: relapsing respiratory diseases, children, the immune status.
Продолжающаяся эволюция вирусных и бактериальных возбудителей, рост вторичных иммунодефицитных заболеваний, связанных с инфекционными и другими причинами, увеличивают частоту рецидивирующих заболеваний органов дыхания в детском возрасте, резистентных к традиционной терапии [1, 2, 4, 9]. Нарушения иммунной системы при рецидивирующих заболеваниях легких выражаются либо в подавлении отдельных звеньев системы иммунитета, либо в избыточной стимуляции и экспрессии показателей [4]. При этом сниженный показатель не всегда коррелирует со сниженной функцией, а высокие количественные значения тех или иных субпопуляций иногда являют собой функционально инертное состояние. Структура дефектов иммунной системы у часто болеющих детей, судя по данным литературы, полиморфна [1, 2, 4]. При анализе факторов риска и механизмов формирования нарушений в иммунной системе у часто болеющих детей сложно выделить один ведущий фактор. Как правило, на организм ребенка влияет несколько факторов и запускаются разные механизмы,
вызывающие иммунные нарушения и усиливающие их тяжесть [2, 4]. В связи с этим поиски клинико-иммунологичес-ких особенностей у детей, подверженных частым респираторным заболеваниям, особенно тех, которые сохраняются в периоде клинической ремиссии, относятся к числу актуальных проблем. Современные методы иммунофенотипирования с использованием двойных и тройных меченых моноклональных антител (МКАТ) позволяют выявлять различные популяции и субпопуляции иммунокомпетентных клеток с оценкой их функционального состояния и в конечном итоге назначать адекватную иммунокорригирующую терапию и иммунопрофилактику [1, 4, 5, 7].
Цель исследования - оценка иммунного статуса детей из группы часто и длительно болеющих с рецидивирующими заболеваниями легких.
Материалы и методы
Обследовано 28 пациентов в возрасте 2-6 лет из группы часто и длительно болеющих детей с рецидивирующими заболеваниями органов дыхания. В опытную группу были включены дети, у которых наряду с эпизодами инфекции верхних
дыхательных путей (ринит, фарингит, соответственно J.01, J.02) в течение года имели место по крайней мере 2 эпизода заболевания с поражением органов брон-холегочной системы: ларинготрахеит, бронхит или пневмония (соответственно J.04, J.15, J.20). Обследование проводилось на момент клинической ремиссии. Контрольную группу составили 20 здоровых детей, по данным анамнеза и формы 112У не болевших в течение месяца до обследования острыми инфекционными заболеваниями. Получены информированные согласия от родителей детей обеих групп на проведение дополнительных исследований.
Материалом для исследования служили клетки периферической крови и сыворотка крови.
Определение иммунофенотипа лейкоцитов и лимфоцитов проводилось на основе моноклональных антител (МКАТ) фирмы «Beckman Coulter» (Франция) к CD3 (Fitc), CD4 (Fitc, PE), CD8 (PC-5, PE), CD56, CD16 (PE), CD11a (PE), CD14, CD18 (Fitc), CD19, CD22 (Fitc), CD25 (PC-5), CD28 (PC-5), CD40 (PE), CD45 (Fitc, PC-5), CD71 (Fitc), CD95 (PE), CD154 (PE),
Табпица 1 Показатели абсолютного и относительного содержания субпопуляций лейкоцитов и лимфоцитов у детей с рецидивирующими заболеваниями легких и группы контроля
Показатель Группы обследованных
Me [LQ/UQ], % Абсолютное кол-во х 109 кл/л Me [LQ/UQ]
Опытная (n=28) Контрольная (n=20) Опытная (n=28) Контрольная (n=20)
Лейкоциты - 8,1 [5,9-9,1] 7,4 [6,6-9,6]
Лимфоциты - 3,96 [3,26-4,43] 3,44 [2,89-4,27]
CD3+ 67,5 [63,1-72,4] 67,9 [65,05-72,6] 2,43 [2,03-2,94] 2,43 [2,03-2,94]
CD3+CD4+ 36,9 [31,7-38,7] 36,46 [32,1-39,45] 1,32 [0,92-1,62] 1,32 [0,92-1,62]
CD3+CD8+ 22,8 [19,5-28,1] 21,36 [20,1-23,25] 0,8 [0,66-0,94] 0,8 [0,66-0,94]
CD4+CD8+ 1,5 [1,2-1,9] 1,8 [1,35-2,1] 1,8 [1,35-2,1] 1,8 [1,35-2,1]
CD19+ 16,7 [13,8-20,0] 17,1 [13,75-9,75] 0,56 [0,49-0,75] 0,56 [0,49-0,75]
CD3-CD16+CD56+ 11,7 [7,6-17,0] 11,86 [8,2-13,35] 0,36 [0,26-0,6] 0,36 [0,26-0,6]
CD3+CD16+CD56+ 2,4 [1,7-3,3] 2,35 [1,75-3,25] 0,09 [0,06-0,13] 0,09 [0,06-0,13]
CD3-CD4+ 0,9 [0,7-1,3] 1,25 [0.55-2,1] 0,05 [0,02-0,08] 0,05 [0,02-0,08]
CD3-CD8+ 3,8 [2,3-5,3] 2,65 [1,9-4,05] 0,11 [0,08-0,16] 0,11 [0,08-0,16]
CD22+ 15,7 [13,8-19,0] 15,35 [13,1-17,2] 0,52 [0,43-0,61] 0,52 [0,43-0,61]
HLA-DR (PC-5), фирмы «Sigma» - LPS (Fitc), с использованием проточного ци-тофлуориметра «PAS» (фирма «Partec», Германия) с применением двух- и трехпа-раметрического анализа согласно инструкции производителя.
Определение в сыворотке крови иммуноглобулинов G, M, A, Е и С3, С4-ком-понентов комплемента проводилось тур-бодиметрическим методом с помощью автоматического анализатора «Architect c8000» («Abbott», США); фагоцитоз определяли стандартным методом, вычисляли ФЧ и ФИ [1].
Статистическую обработку полученных данных проводили с использованием пакета прикладных статистических программ «Statistica» 6.0. Результаты считали статистически значимыми при достигнутом уровне значимости менее 0,05. Описательная статистика качественных признаков представлена абсо-
лютными и относительными частотами количественных признаков - в формате медиана (интерквартильный размах) -Ме Проверка гипотез о виде
распределения количественных признаков осуществлялась с помощью критерия Шапиро - Уилка.
Для сравнения значений использовался метод числовых характеристик (по критерию Манна - Уитни и Вилкоксона) с оценкой распределения переменных. Связь показателей с помощью корреляционного анализа оценивали по методу Спирмана и Кендала [6].
С целью сравнения групп по полу проводился анализ таблиц сопряженности с использованием двустороннего точного критерия Фишера. Статистически значимых различий по этому показателю между группами (р=0,38) не выявлено. Полученные результаты указывают на сопоставимость групп по полу и воз-
расту, что позволяет проводить дальнейший анализ данных.
Результаты и обсуждение
Данные, полученные при проведении исследования фенотипа лейкоцитов у детей из группы часто и длительно болеющих с рецидивирующими заболеваниями органов дыхания, находящихся в состоянии клинической ремиссии, представлены в табл. 1. Статистически достоверных отличий по относительным или абсолютным показателям основных популяций и субпопуляций Т- и В-лимфоцитов, моноцитов между опытной и контрольной группами не выявлено, хотя известно, что в периоде обострения данной патологии наблюдаются изменения иммунофеноти-па клеточного звена иммунитета со снижением числа СD3+, СD4+ Т-лимфоцитов, соотношения СD4+/СD8+клеток как по относительным, так и по абсолютным показателям [2, з].
Как видно из табл. 2, обнаруживается статистически достоверное снижение содержания CD3+CD4+CD95+ субпопуляции Т-лимфоцитов у пациентов исследуемой группы (7,7% [5,3%-10,4%]) по сравнению с контрольной (10,6% [8,3%-14,2%]) в относительных показателях (р=0,024). Известно, что в остром периоде иммуноде-фицитных заболеваний, ассоциированных с вирусной или бактериальной инфекцией, повышается готовность лимфоцитов к апоптозу, что проявляется гиперэкспрессией рецептора CD95, которая может сохраняться и в периоде реконвалесцен-ции [1]. В то же время CD95 - рецептор двойной функции, который проявляет про- или антиапоптические эффекты в зависимости от уровня клеточной активации, антигенной нагрузки, профиля ци-токинов и др. [9]. По-видимому, снижение CD3+CD4+CD95+ субпопуляции Т-хелперов говорит о сохраняющейся дисрегуляции в системе иммунитета детей с рецидивирующими заболеваниями легких в периоде клинической ремиссии.
Относительный уровень нейтрофилов, несущих рецепторы адгезии CD18, был статистически достоверно выше (р=0,003) показателей у детей с рецидивирующими заболеваниями нижних дыхательных путей (99,9% [99,6%-100%]) по сравнению со здоровыми (98,75% [97,85%-99,25%]) (табл. 3). Это может свидетельствовать о сохранении активационных процессов в системе иммунитета у детей, больных рецидивирующими заболеваниями легких, хотя есть данные о снижение экспрессии молекул адгезии CD11c и CD18 у больных рецидивирующими заболеваниями верхних дыхательных путей [11].
78 МЕДИЦИНСКИЕ НОВОСТИ
№5 • 2012
Таблица 2 Показатели абсолютного и относительного содержания субпопуляций лейкоцитов и лимфоцитов, экспрессирующие рецепторы активации и апоптоза, у детей с рецидивирующими заболеваниями легких и группы контроля
Показатель Группы обследованных
Ме [LQ/UQ], % Абсолютное кол-во х 109 кл/л Ме [доися
Опытная (п=28) Контрольная (п=20) Опытная (п=28) Контрольная (п=20)
CD3+HLA-DR+ 1,8 [1,3-3,1] 1,8 [1,3-3,3] 0,07 [0,05-0,12] 0,07 [0,05-0,11]
CD3+CD4+CD25+ 6,7 [4,40-7,50] 5,5 [4,65-7,7] 0,18 [0,11-0,22] 0,14 [0,1-0,22]
CD3-HLA-DR+ 18,1 [14,9-20,1] 17,5 [14,35-19,8] 0,63 [0,54-0,86] 0,56 [0,48-0,8]
CD3+CD95+ 12,8 [7,0-19,9] 16,3 [14,0-20,0] 0,57 [0,25-0,76] 0,54 [0,28-0,83]
CD3+CD4+CD95+ 7,7* [5,3-10,4] 10,6 [8,3-14,2] 0,21 [0,14-0,26] 0,24 [0,16-0,32]
CD3+CD28+ 58,5 [54,0-64,6] 58,65 [52,2-64,0] 2,30 [1,89-2,62] 2,08 [1,63-2,46]
CD3+CD8+CD28+ 27,2 [23,0-33,7] 23,8 [17,45-30,8] 0,74 [0,54-0,89] 0,58 [0,39-0,82]
CD71+ 1,8 [1,3-2,6] 2,1 [1,7-3,15] 0,06 [0,05-0,13] 0,08 [0,06-0,11]
CD40+ 18,6 [16,9-21,4] 20,1 [16,8-21,9] 0,70 [0,61-0,95] 0,66 [0,57-0,8]
CD154+ 6,5 [2,8-12,7] 11,4 [5,75-18,0] 0,27 [0,11-0,47] 0,4 [0,23-0,54]
П р и м е ч а н и е:* отличие от контроля с р<0,05.
Таблица 3 Показатели абсолютного и относительного содержания субпопуляций лейкоцитов и лимфоцитов, экспрессирующие рецепторы адгезии и липополисахаридные рецепторы, у детей с рецидивирующими заболеваниями легких и группы контроля
Показатель Группы обследованных
Ме [LQ/UQ], % Абсолютное кол-во х 109 кл/л Ме ОД/иО)
Опытная (п=28) Контрольная (п=20) Опытная (п=28) Контрольная (п=20)
Нейтрофилы
CD11a+ 99,9** [99,6-100,0] 98,75 [97,85-99,25] 2,62 [1,59-3,77] 2,87 [2,32-3,67]
CD18+ 99,3 [98,8-100,0] 99,15 [98,75-99,5] 2,24 [1,59-3,78] 2,88 [2,3-3,75]
Моноциты
CD11a+ 96,0 [90,6-98,5] 95,1 [91,25-96,6] 0,43 [0,22-0,68] 0,44 [0,27-0,56]
CD18+ 96,5 [94,30-98,4] 97,4 [95,5-98,3] 0,44 [0,24-0,66] 0,44 [0,28-0,58]
Лимфоциты
CD11a+ 41,8 [37,2-50,6] 43,5 [34,6-50,4] 1,65 [1,29-2,27] 1,46 [1,24-1,82]
CD18+ 98,5 [97,0-99,4] 98,6 [96,45-99,0] 3,81[3,13-4,4] 3,32 [2,87-4,02]
LPS+CD19+ 0,2* [0,1-0,3] 0,4 [0,25-0,45] 0,01* [0,01-0,01] 0,01 0,01-0,019
LPS+CD3+ 0,7* [0,6-1,1] 1,1 [0,9-1,6] 0,03* [0,02-0,04] 0,04 [0,03-0,06]
П р и м е ч а н и е:* отличие от контроля с р<0,05; ** отличие от контроля с р<0,01.
Относительное и абсолютное содержание субпопуляций Т- и В-лимфоцитов, несущих рецептор к липополисахариду, было статистически достоверно ниже в исследуемой группе по сравнению с контролем: относительное количество LPS+CD19+ субпопуляции лимфоцитов основной и контрольной групп и
LPS+CD3+ субпопуляции лимфоцитов отличались с одинаковым уровнем значимости р=0,019; абсолютное количество LPS+CD19+ и LPS+CD3+ субпопуляций лимфоцитов с р=0,047 и р=0,035 соответственно (табл.3).
Известно, что ЛПС может связываться не только Сй14, так как име-
ются и другие структуры. В прямом связывании ЛПС участвуют ТОН-рецепторы (TLR-1-11) лимфоцитов. ЛПС-связывающая способность лимфоцитов является интегральным показателем состояния защиты системы иммунитета от бактериальной инфекции и может служить показателем работы состояния системы иммунитета [2, 10].
Сравнение показателей гуморального иммунитета и фагоцитоза детей с рецидивирующими заболеваниями легких и контрольной группой не показало статистически достоверных отличий (табл. 4), хотя в остром периоде заболевания, по данным других исследований, у детей из группы часто и длительно болеющих выявляются различные виды дисиммуноглобулинемий, снижение уровня 1дА, компонентов комплемента и нарушения показателей врожденного иммунитета [1-4].
После анализа ранговой корреляции Спирмана было отмечено наличие более высокой степени корреляции относительных показателей между CD19+ и CD3"HLA-DR+ (г=0,98, р=0,0000) основной группы по сравнению с корреляцией этих показателей в контрольной группе (г=0,68, р=0,0008). Сходная ситуация отмечается в изменении корреляционного коэффициента у детей с рецидивирующими заболеваниями нижних дыхательных путей CD19+ и CD40+ (р=0,02) в сторону повышения (г=0,92 р=0,0000) по сравнению с контролем (г=0,7 р=0,001) (табл.5).
Выводы
1. У детей в возрасте 2-6 лет с рецидивирующими заболеваниями легких в периоде клинической ремиссии достоверно повышен относительный уровень нейтрофилов, экспрессирующих рецепторы адгезии CD18 (р=0,003) по сравнению со здоровыми детьми. Также достоверно снижено содержание CD3+CD4+CD95+ субпопуляции Т-хел-перов по относительным показателям (р=0,024).
2. Статистически достоверно снижена экспрессия рецепторов к липо-полисахариду на CD3+ Т-лимфоцитах и CD19+В-лимфоцитах в группе с рецидивирующими заболеваниями легких, по сравнению с контролем, как по относительным (р =0,019), так и по абсолютным показателям (р=0,035 и р=0,047 соответственно).
3. Изменение CD3+CD8+CD95+, LPS+CD19+ субпопуляций лимфоцитов, а также нейтрофилов, несущих рецептор адгезии CD18 в периоде клинической
Таблица 4 Показатели гуморального иммунитета и фагоцитоза у детей с рецидивирующими заболеваниями легких и группы контроля
Показатель Группы обследуемых (Me [LQ-UQ])
Опытная группа (n=24) 1руппа контроля (n=20)
ЦИК 28,0 [17,5-41,5] 30,0 [22,0-40,4]
igG 9,24 [7,98-10,22] 9,29 [6,74-9,95]
igA 0,93 [0,69-1,32] 0,8 [0,58-1,08]
igM 0,93 [0,84-1,56] 1,12 [0,83-1,33]
igE 30,3 [8,2-156,6] 24,2 [2,6-76,5]
C3 1,20 [1,05-1,25] 1,14 [1,06-1,19]
C4 0,23 [0,20-0,29] 0,23 [0,21-0,27]
ФИ 67,0 [56,5-80,0] 68,0 [57,0-77,0]
ФЧ 6,0 [4,5-8,0] 6,0 [5,0-8,0]
Таблица 5 Уровень корреляции между относительным количеством лейкоцитов и лимфоцитов периферической крови у детей опытной и контрольной групп
Субпопуляции лимфоцитов и лейкоцитов Коэффициент корреляции, г (p)
Контрольная группа (n=20) Опытная группа (n=28)
CD19+ / CD3-HLA-DR+ +0,68 (р=0,0008) +0,98 (p=0,0000)
CD19+ / CD40+ +0,7 (р=0,001) +0,91 (p=0,0000)
CD40+ / CD3-HLA-DR+ +0,58 (р=0,01) +0,9 (p=0,0000)
CD154+/CD3+CD4+CD95+ -0,13 (р=0,6) +0,56 (р=0,002)
ремиссии, указывают на необходимость проведения противорецидивной иммунокорригирующей терапии детей из группы часто и длительно болеющих респираторными заболеваниями органов дыхания.
Л И Т Е Р А Т У Р А
1. НовиковД.К., Новиков П.Д. Клиническая иммунопатология. - М., 2009. - 448 с.
2. НовиковП.Д., Новикова В.И. Бронхиты у детей. -Витебск, 1998. - 124 с.
3. Симонова А.В. Фенотип лимфоцитов крови при воспалительных заболеваниях человека. - М.: Инто, 2001. - 228 с.
4. Стефани Д.В., Вельтищев Ю.Е. Иммунология и иммунопатология детского возраста. - М.: Медицина, 1996. - 382 с.
5. Хаитов Р.М, Пинегин Б.В. // Иммунология. -2001. - №4. - P. 4-6.
6. Халафян А.А. Статистический анализ данных. -М., 2006.
7. Ярилин А.А. //Иммунология. - 2001. - №4. -С.16-20.
8. Don M. // Pediatr. Int. - 2007. - Vol. 49. - P.40-47.
9. Paulsen M, Valentin S, Mathew B. et al. // Cell. Death. Differ. - 2011. - Vol.18(4). - P.619-631.
10. Rabin R.L., BieberM.M., Teng N.N.H. // J. Infect. Dis. - 1993. - Vol. 168. - P.135-142.
11. Wasik M., Kaczorowska M., Demkow U. // J. Physiol. Pharmacol. - 2005. - Vol.56, suppl. 4. -P.237-243.
Поступила 17.04.2012 г.
ВЫХОДНЫЕ ДАННЫЕ
«Медицинские новости» № 5 (212) 2012 г. Рецензируемый научно-практический информационно-аналитический журнал. Свидетельство о регистрации № 965
выдано Министерством информации Республики Беларусь 9 июля 2010 года. Периодичность - 1 раз в месяц
Учредитель
Частное издательское
унитарное предприятие «ЮпокомИнфоМед» Юридический адрес: 220018, г. Минск, ул. Якубовского, 70-5 УНП 191350993
Редакция
Шарабчиев Юрий Талетович (гл. редактор, директор)
Третьякова Ирина Георгиевна (отв. секретарь, реклама)
Марковка С.Н., Пручковская О.Н. (редакторы) Шусталик М.В. (дизайн) Колоницкая О.М. (верстка) Вашкевич С.В. (зам. директора)
Адрес редакции:
220030, Минск, пл. Свободы, 23-35. Тел./ факс (+375-17) 226-03-95, 327-07-54 (гл. редактор), моб. (029) 695-94-19 (Velcom).
Е-mail: redakcia@tut.by www.mednovosti.by
Для сведения
Рукописи рецензируются независимыми специалистами.
C информацией «К сведению авторов» можно ознакомиться на сайте www.mednovosti.by
Ответственность за достоверность и интерпретацию предоставленной информации несут авторы.
Редакция оставляет за собой право по своему усмотрению размещать полные тексты публикуемых статей на сайте редакции www.mednovosti.by и в электронных базах данных (на сайтах) своих партнеров. Перепечатка материалов только с разрешения редакции. Рукописи не возвращаются.
Подписано в печать 17.05.2012 г Формат 60х84 1/8. Гарнитура Helvetica Narrow. Уч.-изд. л.11,88. Тираж 1099 экз. Заказ 1044 Цена свободная.
Подписка: по каталогу РУП «Белпочта» индексы: 74954 (инд.), 749542 (вед.); по каталогу ОАО «Агентство Роспечать» индекс: 74954
Типография ООО «Поликрафт» Лицензия №02330/0494199 от 03.04.09 Минск, ул. Кнорина, 50
|— ЧИТАЙТЕ В СЛЕДУЮЩЕМ НОМЕРЕ -
ЛЕКЦИИ
Романенко В.В., Романенко З.В. - Внезапная сердечная смерть: причины, патофизиология, диагностика, лечение, профилактика (часть 1)
ПРОБЛЕМНЫЕ СТАТЬИ И ОБЗОРЫ
Полонецкий О.Л., Полонецкий Л.З. - Дисфункция эндотелия и атеросклероз
Анацкая Л.Н., Шанько Ю.Г. - Клеточные технологии - новая эра нейрорепарации инфаркта мозга
Суджаева С.Г., Феоктистова Н.В. - Инфекционный эндокардит: эпидемиология и этиология
Выхристенко К.С., Смирнова О.В., Новиков Д.К., Зеньков А.А. - Роль системы иммунитета в воспалении после искусственного кровообращения
