CC BY
7© Коллектив авторов, 2013
Иммунный ответ на биологическую терапию воспалительных заболеваний кишечника
О.В. КНЯЗЕВ, А.И. ПАРФЕНОВ, И.Н. РУЧКИНА, Л.Б. ЛАЗЕБНИК, В.Э. САГЫНБАЕВА
Центральный научно-исследовательский институт гастроэнтерологии Департамента здравоохранения Москвы
Immune response to biological therapy for inflammatory bowel diseases
O.V. KNYAZEV, A.I. PARFENOV, I.N. RUCHKINA, L.B. LAZEBNIK, V.E. SAGYNBAEVA Central Research Institute of Gastroenterology, Moscow Healthcare Department
Резюме
Цель исследования. Изучение динамики уровня провоспалительных цитокинов под влиянием биологической (клеточной и антицитокиновой) терапии у больных воспалительными заболеваниями кишечника (ВЗК).
Материалы и методы. Обследовали 44 больных с хроническим непрерывным и хроническим рецидивирующим течением ВЗК. В зависимости от проводимой терапии больные разделены на 3 группы: в 1-ю группу включены 16 больных, получавших инфликсимаб, во 2-ю группу — 14 больных, получавших комплексную противовоспалительную терапию с введением культуры мезенхимальных стромальных клеток (МСК), в 3-ю группу — 14 больных, получавших стандартную противовоспалительную терапию препаратами 5-аминосалициловой кислоты (5-АСК) и глюкокортикостероидами (ГКС). В сыворотке крови больных определяли концентрацию а-фактора некроза опухоли (а-ФНО), Y-интерферон (ИФН-y), интерлейкины (ИЛ) -2, -5, -8, -12, -15 до начала терапии и через 2 мес от начала лечения.
Результаты. Повышение уровней провоспалительных цитокинов а-ФНО, ИФН-Y, ИЛ-2, -5, -8, -12, -15 в сыворотке крови больных ВЗК указывает на их участие в патогенезе язвенного колита (ЯК) и болезни Крона (БК). По их уровню можно оценить как активность воспалительного процесса, так и эффективность терапии. Увеличение содержания данных цитокинов сопровождается повышением активности заболеваний, что может быть использовано для диагностики активности, прогноза течения ВЗК и проведения адекватной терапии. Снижение уровня провоспалительных цитокинов свидетельствует об эффективности лечения больных ВЗК.
Заключение. Терапия инфликсимабом, снижая уровень а-ФНО, приводит к снижению уровня других провоспалительных цитокинов (ИЛ-1, -2, -5, -8), способствуя тем самым уменьшению воспалительной активности ВЗК. Трансплантация МСК также снижает уровень большинства провоспалительных цитокинов, уменьшая тем самым интенсивность иммунопатологических процессов, что проявляется позитивной динамикой клинической картины заболевания.
Ключевые слова: болезнь Крона, инфликсимаб, мезенхимальные стромальные клетки, иммуносупрессоры, глюкокортико-стероиды, а-ФНО, ИФН-Y, ИЛ-2, ИЛ-5, ИЛ-8, ИЛ-12, ИЛ-15, язвенный колит.
Aim. To study biological (cell and anticytokine) therapy-induced changes in the levels of proinflammatory cytokines in patients with inflammatory bowel diseases (IBD).
Subjects and methods. Forty-four patients with chronic continuous or chronic recurrent IBD were examined. According to the performed therapy, the patients were divided into 3 groups: 1) 16 patients who took infliximab; 2) 14 patients who received combination anti-inflammatory therapy with the cultured mesenchymal stromal cells (MSC) being administered; 3) 14 patients who had standard anti-inflammatory therapy with 5-aminosalycilic acid preparations and glucocorticosteroids. The concentrations of tumor necrosis factor-а (TNF-а), interferon-Y (INF-y), and interleukins (IL)-2, -5, -8, -12, and -15 were determined in the patients' sera before and 2 months after therapy initiation.
Results. The elevation in the serum levels of the proinflammatory cytokines TNF-а, INF-y, and IL-2, -5, -8, -12, and -15 indicates their implication in the pathogenesis of ulcerative colitis and Crohn's disease. Their levels may evaluate both the activity of an inflammatory process and the efficiency of the therapy. The higher level of these cytokines is accompanied by the enhanced activity of diseases, which may be used to diagnose their activity, to predict the course of IBD, and to perform adequate therapy. The decreased level of the proinflammatory cytokines is indicative of the efficiency of the therapy in patients with IBD. Conclusion. By reducing TNF-а levels, infliximab therapy results in a decrease in the concentrations of other proinflammatory cytokines (IL-1, -2, -5, -8), thus lowering the inflammatory activity of IBD. MSC transplantation also reduces the level of most proinflammatory cytokines, thus diminishing the intensity of immunopathological processes, which is shown by positive changes in the clinical picture of the disease.
Key words: Crohn's disease, infliximab, mesenchymal stromal cells, immunosuppressants, glucocorticosteroids, TNF-а, INF-y, and IL-2, IL-5, IL-8, IL-12, IL-15, ulcerative colitis.
5-АСК — 5-аминосалициловая кислота БК — болезнь Крона
ВЗК — воспалительные заболевания кишечника ГКС — глюкокортикостероиды
ИНФ — инфликсимаб
МСК — мезенхимальные стромальные клетки ЯК — язвенный колит
Патогенез хронических воспалительных заболеваний кишечника (ВЗК), обусловлен сложными взаимодействиями генетических, экологических, микробных и иммунных факторов. Возможность найти новые методы терапии может дать комплексный подход в изучении патогенеза данной патологии с позиций молекулярной микробиологии, иммунологии, иммунофизиологии, нейроиммунологии и генетики. Наиболее перспективным направлением в исследовании патогенеза ВЗК и в создании новой тактики их лечения считается изучение цитокинов, которые являются новыми мишенями для современной биологической терапии. Цитокины индуцируют и регулируют при заболеваниях органов пищеварения как местные, локальные (по ауто-кринному, паракринному типу), так и общие, системные реакции. К цитокинам системного действия относятся а-фактор некроза опухоли (а-ФНО), 7-интерферон (ИФН-7), интерлейкины (ИЛ), -1в, -4, -6, -12. Секреция этих цитокинов приводит к запуску системной ответной защитной реакции организма, направленной на инактивацию, нейтрализацию повреждающих агентов, их разрушение и элиминацию.
При обострениях язвенного колита (ЯК) и болезни Крона (БК) повышается продукция ИЛ-1Р, -6, -8, -15 и уменьшается синтез ИЛ-2. Обнаружено различие в реакции мононуклеарных клеток собственной пластинки слизистой оболочки кишки на экспрессию этого цитокина. У больных БК она резко повышена, в то время как у больных ЯК — резко снижена [1]. Одним из наиболее активных цитокинов с провоспалительным действием является а-ФНО. Его считают ключевым в процессе воспаления при БК. Этот цитокин существует в трансмембранной форме и форме растворимого тримера. Особо мощными индукторами а-ФНО являются бактериальные липополи-сахариды, которые при ВЗК в избытке содержатся в просвете толстой кишки. Очень важной функцией а-ФНО как провоспалительного медиатора является его участие вместе с ИНФ-7 и ИЛ-1 в формировании гранулематоз-ного воспаления при БК [2].
У больных ЯК и БК наблюдается увеличение концентрации в крови компонентов комплемента СЗ, С4 и продуктов их расщепления (СЗс, C3d и С4ф, что подтверждает роль системной активации комплемента в патогенезе этих заболеваний [3].
До настоящего времени концепция лечения ВЗК и других аутоиммунных заболеваний основывалась на раннем подавлении иммунного воспаления с помощью системных глюкокортикостероидов (ГКС). Однако у многих больных формируется стероидорезистентность и(или) стероидозависимость, развиваются вторичная надпочеч-никовая и гипоталамо-гипофизарная недостаточность, остеопороз и другие осложнения, вынуждающие искать иные способы лечения. Одним из них стало применение
Сведения об авторах:
Парфенов Асфольд Иванович — проф., зав. отд. патологии кишечника; е-шаИ: asfold@mail.ru
Ручкина Ирина Николаевна — д.м.н., зав. отд-нием патологии кишечника; е-шаИ: ruchMnai@mail.ru Лазебник Леонид Борисович — д.м.н., проф.
Сагынбаева Венера Эсанбаевна — к.м.н., зав. лаб. иммунологии; е-mail: venera_32@rambler.ru
инфликсимаба (ИНФ) — химерных моноклональных мышиных антител к а-ФНО, соединенных с иммуноглобулином 01 человека (1я01к).
ИНФ специфически связывает а-ФНО человека, причем не только обладает очень высоким сродством к растворимому тримеру ФНО, но блокирует и связанный с мембранами а-ФНО. Накопленный опыт свидетельствует, что ИНФ и другие ингибиторы провоспалительных цитокинов способны быстро купировать рецидив, обеспечивать длительную клиническую и эндоскопическую ремиссию, уменьшить потребность в ГКС у многих больных с гормонорезистентной и гормонозависимой формами БК и ЯК [4]. Однако длительная антицитокиновая терапия чревата развитием осложнений, связанных с мощным подавлением иммунной системы (обострение оппортунистических инфекций, развитие опухолей и т.д.).
Открытие в 70-е годы ХХ века А. Фриденштейном ме-зенхимальных стромальных клеток (МСК) положило начало новому направлению в терапии ВЗК. Эти клетки продуцируют определенные цитокины и факторы роста. К ним относятся ИЛ-6, -7, -8, -11, -12, -14, гранулоцитар-ный, макрофагальный и гранулоцитарно-макрофагаль-ный колониестимулирующие факторы [5]. Введенные в кровь экзогенные МСК также способны циркулировать в ней и оседать в различных тканях организма, избирательно накапливаясь в поврежденных участках и способствуя их репарации [6, 7]. МСК костного мозга человека являются гипоиммуногенными и могут рассматриваться как кандидаты для аллогенной клеточной терапии, что может быть более предпочтительно именно при аутоиммунных заболеваниях, так как МСК собственного организма не всегда способны купировать иммунопатологический процесс. Клетки, мигрируя в область воспаления по хемотак-сическому градиенту, выделяют вещества, ингибирующие продукцию провоспалительных цитокинов, подавляют пролиферацию Т-клеток [8], что приводит к восстановлению иммунного равновесия [9]. МСК индуцируют супрессивное местное микроокружение путем продукции простагландинов и ИЛ-10, которые и создают иммуносу-прессивную среду в ткани, подвергшейся иммунной агрессии. МСК могут также ингибировать некоторые функции В-клеток [10], естественных киллеров (КК-клеток) [11] и дендритных клеток [12].
Целью нашего исследования являлась оценка эффективности и безопасности лечения больных ВЗК с помощью трансплантации аллогенных МСК костного мозга, полученных от доноров, основанная на анализе уровня провоспалительных цитокинов в образцах крови.
Материалы и методы
Обследовали 44 больных с хроническим непрерывным и хроническим рецидивирующим течением ВЗК, находившихся на лечении в отделении патологии кишечника ЦНИИГ, из них 29 больных ЯК (19 мужчин, 10 женщин) и 15 — БК (7 мужчин, 8 женщин). Возраст больных составлял 17—68 лет, средний возраст — 37,4+2,0 года (И+а). Диагноз верифицирован результата-
Контактная информация:
Князев Олег Владимирович — д.м.н., зав. лаб. биотерапии отд. патологии кишечника ЦНИИ гастроэнтерологии; 111024 Москва, ш. Энтузиастов, д. 86; тел.: +7(495)304-3078; е-mail: oleg7@bk.ru
Таблица 1. Уровень а-ФНО и ИФН^ в сыворотке крови больных ВЗК в зависимости от вида терапии
а-ФНО, пг/мл ИФН-у, пг/мл
Полученная терапия до лечения после лечения Р до лечения после лечения Р
ИНФ («=16) 165,1+52,4 33,7+6,5 <0,001 86,9+28,4 136,6+42,3 <0,001
МСК («=14) 31,4+15,7* 22,2+11,4 0,08 125,8+45,9* 69,3+28,7 <0,001
5-АСК и ГКС («=14) 26,3+13,7 28,6+15,0 0,7 30,1+9,6 47,7+22,3 0,009
Примечание. * — р<0,001 при сравнении с ИНФ.
ми клинических, лабораторных, инструментальных и гистологических исследований. В зависимости от проводимой терапии больные разделены на 3 группы. В 1-ю группу включены 16 больных, получавших ИНФ в дозе 5 мг на 1 кг массы тела по стандартной схеме (0, 2, 6, 8 нед и далее). Во 2-ю группу вошли 14 больных, которым проводилась комплексная противовоспалительная терапия с введением культуры МСК. За 2—3 дня до введения МСК больным отменяли азатиоприн и снижали дозу ГКС до 15—20 мг/сут. ГКС отменяли в отсутствие синдрома отмены в течение 6—8 нед. Дозу 5-аминосалициловой кислоты (5-АСК) оставляли на уровне 2 г/сут. В состав 3-й группы включены 14 больных, получавших стандартную противовоспалительную терапию препаратами 5-АСК 3—4 г/сут и ГКС 0,5—0,75 мг на 1 кг массы тела в сутки.
Концентрацию а-ФНО, ИФН-у, ИЛ-2, -5, -8, -12, -15 определяли в сыворотке крови больных иммуноферментным методом с применением тест-систем протеиновый контур (Санкт-Петербург), Вювоигсе (Австрия), ВепдегМед$у81ет§ (Австрия).
Статистическую обработку данных проводили с использованием компьютерной программы $1ай§йса 6.0, достоверность полученных величин определяли при помощи критерия Манна— Уитни—Вилкоксона.
Результаты и обсуждение
В каскаде провоспалительных цитокинов ключевая роль принадлежит а-ФНО, обладающему воспалительной и иммунорегуляторной активностью. При воспалении этот цитокин стимулирует Т1-хелперы и макрофаги, индуцирует системные реакции острой фазы воспаления с повышенным синтезом ИЛ-1, -2, -6, -8. Значительное повышение их уровней обусловлено выраженностью острофазового ответа и активностью ВЗК.
Индивидуальные колебания концентрации а-ФНО у обследованных больных составляли 30—1100 пг/мл. Пик концентрации а-ФНО в сыворотке крови больных с впервые выявленным ВЗК достигал 340—790 пг/мл, с длительным хроническим течением в отсутствие иммунодепрес-сантной терапии — 90—240 пг/мл. У больных с непрерывным и часто рецидивирующем течением заболевания, получавших иммуносупрессивную терапию, уровень а-ФНО не превышал 90 пг/мл.
Нами исследована динамика уровня а-ФНО у больных ЯК и БК под влиянием различных методов терапии — ИНФ, комплексной противовоспалительной терапии с применением МСК и стандартной противовоспалительной терапии. Выявлено, что средний исходный уровень а-ФНО у больных ЯК составил 76,5±8,7 пг/мл, после терапии ИНФ он достоверно снизился до 43,7±5,9 пг/мл (р<0,001); достоверное снижение уровня а-ФНО с 24,12+8,7 до 7,9±2,9 пг/мл отмечалось также после клеточной терапии и ГКС — с 60,1+20,0 до 27,0+9,5 пг/мл.
Средний исходный уровень а-ФНО у больных БК составил 110,75+35,2 пг/мл. После терапии ИНФ он достоверно снизился до 45,5+6,7 пг/мл (р<0,001); достоверное
снижение уровня а-ФНО отмечалось также после клеточной терапии с 70,6+29,0 до 9,6+2,8 пг/мл и после терапии ГКС с 77,4+23,2 до 30,7+11,9 пг/мл.
Сравнивая полученные результаты, мы выявили, что достоверные различия по уровню а-ФНО между больными ЯК и БК после проведения антицитокиновой, клеточной и стандартной терапии отсутствовали. После терапии ИНФ у больных ЯК уровень а-ФНО составил 43,7+5,9 пг/мл, у больных БК — 45,5+6,7 пг/мл (р=0,56), после комплексной терапии с применением МСК у больных ЯК — 7,9+2,9 пг/мл, у больных БК — 9,6+2,8 пг/мл (р=0,33), у больных ЯК, получавших ГКС, — 27,0+9,5 пг/мл, у больных БК — 30,7+11,9 пг/мл (р=0,46). Учитывая, что а-ФНО является ключевым провоспалительным цитокином, участвующим в воспалительном каскаде у больных ВЗК, мы оценивали динамику уровня провоспалительных цитокинов под влиянием различных методов лечения, объединив больных ЯК и БК в одну группу — больных ВЗК.
Распределение больных по группам в зависимости от назначенного лечения указано выше. Концентрация а-ФНО в сыворотке крови у больных 1-й группы, получавших ИНФ, составляла 165,1+52,4 пг/мл и была в несколько раз выше, чем у больных, получавших МСК (2-я группа) и стандартную терапию 5-АСК и ГКС (3-я группа): 31,4+15,7 и 26,3+13,7 пг/мл соответственно (р<0,001). Это обусловлено тем, что в данную группу включались больные с наибольшей продолжительностью и высокой активностью заболевания, которые оказались рефрактерными к терапии препаратами 5-АСК и ГКС, а также им-муносупрессорами.
Влияние терапии на уровень а-ФНО и ИФН-7 отражено в табл. 1. У больных 1-й группы он снизился более чем в 4 раза по сравнению с исходным уровнем и составил в среднем 33,7+6,5 пг/мл (р<0,001). У больных 2-й и 3-й групп концентрация а-ФНО мало изменилась к концу лечения обострения и оставалась в пределах нормы с тенденцией к снижению. Наблюдалась прямая корреляция между исходными уровнями а-ФНО, клинической активностью ЯК, оцененной в соответствии с индексом Рахми-левича (г=0,6; р<0,05), и клинической активностью БК по данным индекса Беста (г=0,88; р<0,01). Исходная концентрация ИФН-7 была особенно высокой в группе больных, получивших МСК, а низкой у больных, леченных 5-АСК и ГКС. После лечения отмечено достоверное снижение продукции ИФН-7 с 125,8+45,9 до 69,3+28,7 пг/мл в группе больных, которым проводилась трансплантация МСК. У больных 1-й и 3-й групп, уровень ИФН-7, наоборот, достоверно повысился с 86,9+28,4 до 136,6+42,3 пг/мл и с 30,1+9,6 до 47,7+22,3 пг/мл соответственно. По мнению D. Байеп и соавт. [13], увеличение синтеза ИФН-7 является прогностически благоприятным, так как отражает способность ИФН восстанавливать тип ТЫ иммунного ответа. Другими исследователями показано, что введение
Таблица 2. Уровень ИЛ-2 и ИЛ-5 в сыворотке крови больных ВЗК в зависимости от вида терапии
ИЛ-2, пг/мл ИЛ-5, пг/мл
Полученная терапия до лечения после лечения Р до лечения после лечения Р
ИНФ («=16) 158,1+45,4 135,3+31,3 0,103 30,6+4,2 38,1+3,2 <0,001
МСК («=14) 294,3+55,5* 288,2+50,9 0,764 43,7+13,1* 28,4+3,7 <0,001
5-АСК и ГКС (п=14) 279,6+58,8 192,8+49,1 <0,001 54,8+8,7 30,8+3,6 <0,001
Примечание. Здесь и в табл. 3 * — р<0,001 при сравнении между ИНФ и МСК.
Таблица 3. Уровень ИЛ-8, ИЛ-12 и ИЛ-15 в сыворотке крови больных ВЗК в зависимости от вида терапии
ИЛ-8, пг/мл ИЛ-12, пг/мл ИЛ-15, пг/мл
Полученная терапия до лечения после после до лечения лечения после до лечения лечения
лечения Р Р Р
ИНФ («=16) 208,4+59,4 190,8+35,6 0,317 145,5+27,0 28,8+9,4 <0,001 59,3+16,0 45,5+15,2 0,013
МСК (п=14) 167,9+28,9 157,5+34,4 0,39 71,2+10,1* 28,1+8,8 <0,001 111,4+42,5* 62,8+22,6 <0,001
5-АСК и ГКС («=14) 189,4+40,1 148,8+35,8 0,008 53,8+17,9 94,5+45,3 <0,05 55,8+9,0 55,2+6,5 0,73
ИНФ, наоборот, приводит к существенному снижению синтеза ИФН-7 Т-лимфоцитами, вследствие чего происходит ослабление системной и местной воспалительной реакции [14]. Вероятнее всего, поддержание воспалительного процесса в отсутствие ответа или при неполном ответе на антицитокиновую терапию может поддерживаться провоспалительными свойствами ИФН-7.
Исходный уровень ИЛ-2 во всех сравниваемых группах больных ВЗК был повышен (норма <50 пг/мл) и находился в прямой зависимости от степени активности заболевания. Более тесная связь выявлена с обострением БК (г=0,88; р<0,01), нежели с обострением ЯК (г=0,7; р<0,01). После лечения в группе больных, которые получали 5-АСК и ГКС, уровень ИЛ-2 достоверно снизился с 279,6+58,8 до 192,8+49,1 пг/мл (р<0,001). В группе больных получавших ИНФ, выявлено недостоверное снижение продукции провоспалительного ИЛ-2 с 158,1+54,4 до 135,3+31,3 пг/мл (р=0,103), после трансплантации МСК уровень ИЛ-2 незначительно снизился с 294,3+55,5 до 288+50,9 (р=0,764) (табл. 2).
Динамика уровня ИЛ-5 на фоне противовоспалительной терапии ВЗК представлена в табл. 2. Концентрация ИЛ-5 в период обострения в группе больных, получавших МСК и стандартную противовоспалительную терапию, была выше, чем у больных, которые получали ИНФ, причем наибольший его уровень отмечался в группе больных, получавших ГКС. Наименьший уровень ИЛ-5 в группе больных, получавших ИНФ, может быть связан с тем, что в данную группу включались больные ЯК и БК с более тяжелым течением заболевания. В свою очередь увеличение продолжительности заболевания, частоты рецидивов, высокая активность процесса обусловливали необходимость более частого применения высоких доз иммуносупрессо-ров. Следовательно, уменьшение уровня концентрации некоторых цитокинов, в частности ИЛ-5, можно расценить как результат угнетения функциональной, в том числе цитокинпродуцирующей активности иммунокомпе-тентных клеток, развитием вторичного иммунодефицита, а также ингибирующим эффектом интенсивной терапии антибактериальными препаратами, ГКС, иммуносупрес-сорами.
После лечения отмечалось достоверное снижение продукции ИЛ-5 у больных, которым проводилась си-
стемная трансплантация МСК, и у пациентов, получавших ГКС, с 43,7+13,1 до 28,4+3,7 и с 54,8+8,7 до 30,8+3,6 пг/мл соответственно (р<0,001). В группе больных, получавших ИНФ, несмотря на проводимую терапию, выявлено достоверное увеличение продукции ИЛ-5 с 30,6+4,2 до 38,1+3,2 пг/мл (р<0,001).
По данным проведенных исследований во всех сравниваемых группах в период обострения ВЗК отмечалась повышенная концентрация провоспалительного хемоки-на ИЛ-8, причем наибольший его уровень отмечался в группе получавших ИНФ и ГКС (табл. 3). Повышение содержания ИЛ-8 сопровождалось увеличением активности ВЗК. После лечения во всех сравниваемых группах выявлено снижение уровня ИЛ-8, но только в группе больных, получавших системные иммуносупрессоры, снижение ИЛ-8 носило достоверный характер (с 189,4+40,1 до 148,8+35,8 пг/мл; р=0,008).
ИЛ-12, являясь провоспалительным цитокином, образуется макрофагами, дендритными клетками и В-лимфоцитами под влиянием стимуляции бактериальными продуктами. Показано, что в исследуемых образцах сыворотки крови у больных ВЗК, получавших ИНФ, в стадии обострения отмечалась повышенная концентрация противовоспалительного ИЛ-12. Уровень ИЛ-12 в данной группе был повышен в 2 раза и более, в среднем до 145,5+27,0 пг/мл. После терапии ИНФ отмечалось достоверное снижение содержание ИЛ-12 с 145,5+27,0 до 28,8+9,4 пг/мл (р<0,001). Данное снижение сопровождалось клиническим улучшением течения как ЯК, так и БК, а также уменьшением активности воспалительного процесса. Содержание ИЛ-12 в сыворотке крови у больных, получавших МСК, до лечения составило 71,2+10,1 пг/мл, что было достоверно ниже, чем у получавших ИНФ (145,5+27,0 пг/мл; р<0,001). После системной трансплантации МСК уровень ИЛ-12 составил 28,1+8,8 пг/мл. В группе получавших ГКС, несмотря на лечение больных ВЗК, концентрация ИЛ-12 достоверно повысилась с 53,8+17,9 до 94,5+45,3 пг/мл (р<0,05) (см. табл. 3). Изученные иммунологические параметры коррелировали с клиническим течением заболевания в период как обострения, так и ремиссии, что подтверждает точку зрения об участии ИЛ-12 в качестве одного из основных факторов воспалительного каскада при ВЗК.
На фоне противовоспалительной терапии ИНФ по мере уменьшения клинической активности ЯК и БК отмечалось достоверное снижение концентрации ИЛ-15 с 59,3+16,0 до 45,5+15,2 пг/мл (р=0,013). Анализ уровня ИЛ-15 у больных, получавших МСК, демонстрирует достоверное снижение с 111,4+42,5 пг/мл в стадии обострения заболевания до 62,8+22,6 пг/мл в период ремиссии (р<0,001). На фоне терапии препаратами 5-АСК и ГКС уровень ИЛ-15 практически не изменился: до начала терапии он составил 55,8+9,0 пг/мл, после — 55,2+6,5 пг/мл (р=0,73) (см. табл. 3).
При анализе полученных результатов установлено, что содержание провоспалительных цитокинов максимально повышено у пациентов с впервые выявленным заболеванием, но снижается при терапии 5-АСК, ИНФ и достигает минимальных значений при длительном применении им-муносупрессоров. Базисная терапия при хронических ВЗК сопровождается у большинства больных достоверным снижением содержания цитокинов в сыворотке крови по сравнению с уровнем, предшествующим лечению. Эти данные отражают положительную динамику заболевания, улучшение показателей клинической, биохимической, морфологической активности, иммунного статуса, эффективность применяемой терапии.
Стойкое повышение уровня провоспалительных ци-токинов (ИЛ-2, -5, -8, -12, -15, ИНФ-7, а-ФНО) на фоне терапии свидетельствует об отсутствии выраженных позитивных изменений, прогрессировании воспалительных, иммунопатологических процессов. Следовательно, обострения хронических ВЗК сопровождаются многократным увеличением содержания в сыворотке крови ши-
рокого спектра провоспалительных цитокинов, отражающих динамику патологического процесса. С нарастанием активности воспалительного процесса отмечалось повышение уровней провоспалительных цитокинов, что согласуется с данными литературы [15—17]. Повышение содержания этих цитокинов совпадало с обострением заболеваний, что может быть использовано для оценки активности ВЗК.
Заключение
Выполненные нами исследования свидетельствуют об увеличении уровней провоспалительных цитокинов: а-ФНО, ИФН-7, ИЛ-2, -8, -12, -15 в сыворотке крови больных ВЗК, указывая на участие этих цитокинов в механизмах развития данных заболеваний. Анализ динамики уровня провоспалительных цитокинов позволяет оценить как активность воспалительного процесса, так и эффективность проводимой терапии.
Несмотря на селективность действия ИНФ на а-ФНО, диапазон его биологического действия намного шире, а лечебный потенциал выше, чем у стандартных базисных препаратов. Терапия ИНФ, снижая уровень а-ФНО, приводит к снижению концентрации других провоспалитель-ных цитокинов (ИЛ-1, -2, -6, -8), способствуя тем самым уменьшению воспалительной активности ВЗК.
Трансплантация МСК также снижает уровень большинства провоспалительных цитокинов, уменьшая тем самым интенсивность иммунопатологических процессов одновременно с позитивной динамикой клинической картины заболевания.
ЛИТЕРАТУРА
1. Sands B.E., Winston B, Salzberg B. et al. Randomized, controlled trial of recombinant human interleukin II in patients with active Crohn's disease. Aliment Pharmacol Ther 2002; 16: 399—406.
2. Beutler B.A. The role of tumor necrosis factor in health and disease. J Rheumatol 1999; 26 (Suppl. 57): 16—21.
3. Ahrenstedt O., Knutson L., Nilson B. et al. Enhanced local production of complement components in the small intestines of patients with Crohn's disease. N Engl J Med 1990; 322: 1345— 1349.
4. Rutgeerts P., Feagan B.G., Lichtenstein G.R. et al. Comparison of scheduled and episodic treatment strategies of infliximab in Crohn's disease. Gastroenterology 2004; 126: 402—413.
5. Eapen M., Rubinstein P., Zhang M.J. et al. Outcomes of transplantation of unrelated donor umbilical cord blood and bone marrow in children with acute leukemia: a comparison study. Lancet 2007; 369: 1947—1954.
6. ЦыбА.Ф., Рошаль Л.М., Южаков В.В. и др. Морфофункцио-нальное изучение терапевтического эффекта аутологичных мезенхимальных стволовых клеток при экспериментальной диффузной травме головного мозга крыс. Клеточн технол в биол и мед 2006; 3: 157—165.
7. Porada C.D., ZanjaniE.D., Almeida-Porad G. Adult mesenchymal stem cells: a pluripotent population with multiple applications. Curr Stem Cell Res Ther 2006; 1 (3): 365—369.
8. Uccelli A., Pistoia V., Moretta L. Mesenchymal stem cells: a new strategy for immunosuppression? Trends Immunol 2007; 28: 219—226.
9. Abdi R., Fiorina P., Adra C.N. et al. Immunomodulation by mesenchymal stem cells: a potential therapeutic strategy for type 1 diabetes. Diabetes 2008; 57: 1759—1767.
10. Corcione A., Benvenuto F., Ferretti E. et al. Human mesenchymal stem cells modulate B-cell functions. Blood 2006; 107: 367—372.
11. Sotiropoulou P.A., Perez S.A., Gritzapis A.D. et al. Interactions between human mesenchymal stem cells and natural killer cells. Stem Cells 2006; 24 (1): 74—854.
12. Zhang W., Ge W., Li C. et al. Effects of mesenchymal stem cells on differentiation, maturation, and function of human monocyte -derived dendritic cells. Stem Cells Dev 2004; 13: 263—271.
13. Baeten D., van Damme N., van den Bosch F. et al. Impaired Th1 cytokine production in spondiloarthropathy is restored by anti-TNF alpha. Ann Rheum Dis 2001; 60: 755—765.
14. Zou J.X., Rudmaleit M., Brandt J. et al. Down-regulation of nonspecific and antigen-specific T cell cytokine response in ankylosing spondilitis during treatment with infliximab. Arthritis Rheum 2003; 48: 780—790.
15. Фарелл Р., Пепперкорн М. Язвенный колит. Междунар мед журн 2003; 1: 73—80.
16. Белоусова Е.А., Морозова Н.А., Никитина Н.В. Инфликсимаб (ремикейд) в лечении рефрактерных форм болезни Крона. Рус мед журн 2005; 1: 28—32.
17. Белоусова Е.А. Биологическая стратегия в лечении воспалительных заболеваний кишечника. Фарматека 2006; 6: 6—10.
Поступила 18.09.2012
