CC BY
31
Рис. 2. Участки скопления культуральных фибробластов с признаками начальной дифферен-цировки и активным неоангиогенезом. 10 суток после имплантации сетки "Эсфил" с введением фибробластов на 7-е сутки: многочисленные капилляры и недифференцированные сосуды синусоидного типа непосредственно связаны с фибробластическими элементами, умеренно выраженная лимфо-гистиоцитарная инфильтрация. Окр. Г+Э. Микрофото. Х 100 (А), Х 400 (Б, В).
слоя протеза способствует активной миграции в ее толщу фибробластов, которые вследствие этого не попадают в подсчет цитограммы (рис. 3).
В динамике созревания соединительной ткани вокруг протезов содержание мигрировавших клеток в толще сетки снижается до единичных, вокруг сетки формируется тонкая фиброзная капсула.
Анализ соотношения молодых фибробла-стических элементов и фиброцитов при использовании обеих сеток свидетельствует о значимом модифицирующем действии введения культуральных клеток на скорость созревания соединительной ткани. При использовании сетки "Эсфил" с введением фибробла-стов на 7-е сутки соотношение молодых клеток и фиброцитов на 60-е сутки противопо-
ложно в сравнении с серией без имплантации клеточной культуры и по динамике не отличается от сетки "Экофлон". При использовании сетки "Экофлон" с введением фибробла-стов на сроке 60 суток содержание фиброцитов больше, чем в серии без использования клеточной культуры. Среди значительно преобладающих фиброцитов встречаются мелкие очаги пролиферации незрелых фибробластов.
Двукратное введение культуральных фибробластов при использовании сетки "Эсфил" не меняет общую динамику клеточного состава ложа имплантата. При использовании же сетки "Экофлон" отмечается эффект второго введения в виде более раннего (на 30-е сутки) выравнивания содержания фибробла-стических элементов в сравнении с использованием сетки "Эсфил".
Рис. 3. Многочисленные фибробластические элементы в поверхностном слое сетки "Экофлон" на 10-е сутки эксперимента с введением фибробластов на 7-е сутки. Окр. Г+Э. Микрофото. Х 400.
При однократном введении содержание фибробластов при использовании разных сеток выравнивается только на 60-е сутки. Вероятно, второе введение компенсирует "потерю" культуральных клеток по указанным выше причинам. Кроме этого, раньше (также на 30-е сутки) наступает изменение пропорции клеток фибробластической популяции с преобладанием фиброцитов.На основании проведенного исследования можно сделать следующие выводы.
1. Ввведение культуральных фибробла-стов оказывает выраженный модифицирующий эффект на формирование и созревание клеточных компонентов волокнистой соединительной ткани при использовании как сетки "Эсфил", так и сетки "Экофлон", ускоряя в обоих случаях дифференцировку фиброцитов.
2. Двукратное введение культуры фиб-робластов дополнительно ускоряет созревание фибробластических элементов при использовании сетки "Экофлон". При использо-
вании сетки "Эсфил" данный эффект двукратного введения клеточной культуры не выявлен.
ЛИТЕРАТУРА
1. Келлер Г., Себастиан Дж., Лакомбс Ю. и др. Сохранность инъецируемых аутологичных человеческих фибробластов // Бюлл. экспе-рим. биологии и медицины. - 2000. - Т. 130, № 8.- С. 203-206.
2. Колокольчикова Е.Г., Будкевич Л.И., Бобровников А.Э. и др. Морфологические изменения ожоговых ран после пересадки аллогенных фибробластов // Бюл. эксперим. биологии и медицины. - 2001. - № 1. - С. 107-111.
3. Милонов О.Б., Тоскин К.Д., Жебровский В.В. Послеоперационные осложнения и опасности в абдоминальной хирургии. - М.: Медицина, 1990.- 558 с.
4. Саркисов Д.С., Федоров В.Д., Глущенко Е.В. и др. Теоретические и практические аспекты использования культивированных фибробла-
стов при восстановлении кожных покровов // Вестн. Рос. АН. - 1994. - № 6. - С. 6-11.
5. Сухих Г.Т. Трансплантация фетальных клеток в медицине: настоящее и будущее // Бюл. экс-перим. биологии и медицины. - 1998. -Т. 126. - С. 3-13. - Прилож. 1.
6. Тимошин А.Д., Юрасов А.В., Шестаков А.Л. Концепция хирургического лечения послеоперационных грыж передней брюшной стенки // Герниология. - 2004. - № 1. - С. 5-10.
7. Фёдоров И.В., Чугунов А.Н. Протезы в хирургии грыж: столетняя эволюция // Герниоло-гия. - 2004. - № 2. - С. 45-52.
8. Хрупкин В.И., Низовой А.В., Леонов С.В. и др. Использование фибробластов для лечения гранулирующих ран // Воен.-мед. журн. -1998. - № 1. - С. 38-42.
9. Jordana M., Sarnstrand B., Sime P.J., Ramis I. Immune-inflammatory functions of fibroblasts //
Eur. Respir. J. - 1994. - Vol. 7, N 12. - P. 22122222.
10. Hebda P.A., Dohar J.E. Transplanted fetal fibroblasts: survival and distribution over time in normal adult dermis compared with autogenic, allogenic, and xenogenic adult fibroblasts // Otolaryngol. Head Neck Surg. - 1999. - Vol. 121, N 3. - P.245-251.
11. Sciaky D., Brazer W. Center et al Cultured human fibroblasts express constitutive IL-16 mRNA: cytokine induction of active IL-16 protein synthesis through a caspase-3-dependent mechanism // J. Immunol. - 2000. - Vol. 164, N 7. - P. 3806-3814.
12. Smith R.S., Smith T.J., Blieden T.M., Phipps R.P.
Fibroblasts as sentinel cells. Synthesis of chemo-kines and regulation of inflammation // Am. J. Pathol. - 1997. - Vol. 151, N 2. -
P.317-322.
УДК 618.12-002-089.168.1-06-097:615.03
ИММУННЫЕ НАРУШЕНИЯ И ИЗМЕНЕНИЯ СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНЫХ СВОЙСТВ ЭРИТРОЦИТОВ В УСЛОВИЯХ ОБОСТРЕНИЯ ХРОНИЧЕСКОГО
САЛЬПИНГООФОРИТА
© Конопля А.А., **Газазян М.Г., Караулов А.В., **Кеня А.А., **Рыбников В.Н.
Кафедра акушерства и гинекологии ФПО Курского государственного медицинского университета, Курск;
*
кафедра клинической иммунологии и аллергологии Московской медицинской академии им. И.М. Сеченова, Москва;
**
городской клинический родильный дом, Курск
E-mail: kanabis@nm.ru
У пациенток с хроническим сальпингоофоритом, осложненным пиосальпинксом, пельвиоперитонитом, при поступлении в крови повышено содержание CD95 и снижено CD4, CD16 и CD25-клеток, в плазме крови повышена концентрация ФНОа, ИЛ-ip, ИЛ-6, ИЛ-8, С3 и С4-компонентов системы комплемента, активность кислородзависимых систем нейтрофилов, снижена концентрация ИЛ-4, активность и интенсивность фагоцитоза нейтрофилов. Выявленные нарушения иммунного статуса усугубляются на фоне проводимого оперативного вмешательства у данной категории больных. Выявленные изменения иммунного статуса у пациентов с хроническим сальпингоофоритом коррелируют с нарушениями структурно-функциональных свойств эритроцитов, что диктует необходимость использования дополнительно в фармакотерапии таких пациентов средств, влияющих на фосфолипидный "каркас" мембран клеток органов и тканей.
Ключевые слова: обострение хронического сальпингоофорита, иммунные нарушения, структурнофункциональные свойства эритроцитов.
IMMUNE DISTURBANCES AND CHANGES OF STRUCTURAL AND FUNCTIONAL PROPERTIES OF ERYTHROCYTES IN CASE OF EXACERBATION OF CHRONIC SALPINGOOPHORITIS Konoplya A.A., Gazazyan M.G., Karaulov A.V., Kenya A.A., Rybnikov V.N.
Department of Obstetrics and Gynecology of the Postgraduate Faculty of the Kursk State Medical University, Kursk;
Clinical Immunology & Gynecology Department of the I.M. Sechenov Moscow Medical Academy, Moscow;
Kursk City Clinical Maternity Hospital, Kursk In admitted patients with purulent salpingoperitonitis in blood the maintenance of CD95 is raised and the same of CD4, CD16- and CD25-cells is lowered, in blood plasma the concentration of TNFa, IL-ip, IL-6, IL-8, С3 and С4-components of complement systems, activity of oxygen systems of neutrophils is raised, the concentration of IL-4, activity and intensity of phagocytosis of neutrophils is lowered. The given disturbances of the immune status are aggravated after operation. The given changes of the immune status in patients with chronic salpingophoritis correlate with disturbances of structural and functional properties of erythrocytes. Therefore it is necessary to use in treatment of such patients the preparations, which influence on phospholipids of cell membranes.
Keywords: exacerbation of the chronic salpingoophoritis, immune disturbances, structural and functional properties of erythrocytes.
У женщин репродуктивного возраста хронический сальпингоофорит следует рассматривать как общее полисистемное заболевание. Оно сопровождается вовлечением в патологический процесс систем, с которыми связано течение адаптационных процессов в организме женщины: симпатоадреналовой, иммунной, эндокринной, причем за последнее время в патогенезе воспалительных заболеваний органов женской половой системы
большое значение придается состоянию как общего, так и местного иммунитета [1].
Хроническое воспаление придатков матки характеризуется затяжным, часто рецидивирующим течением, с последующим развитием хронических тазовых болей, спаечного процесса, бесплодия, а также формированием гнойных образований по типу пиосальпинкса, пиовара, тубовариальных абсцессов и др. [1, 11]. При хроническом сальпингоофорите
(ХСО) отмечаются выраженные склеротические и дистрофические изменения, затрагивающие все структурные компоненты придатков матки, что сопровождается их морфологическими и функциональными изменениями [10], а также часто встречается несоответствие между выраженностью жалоб, данными гинекологического осмотра, инструментальных методов исследования и морфологическими изменениями в придатках матки [4]. Причины подобной клинической ситуации заключаются в меняющейся вирулентности и многообразии микрофлоры, вызывающей воспаление, в нарушении иммунитета и метаболического статуса, сложностях, связанных с рациональным и наиболее эффективным подбором лечения [8].
Целью данного исследования явилось установление взаимосвязей между составляющими показателями иммунного статуса и структурно-функциональных свойств эритроцитов у больных хроническим сальпинго-фооритом (ХСО), осложненным пиосаль-пинксом, пельвиоперитонитом на фоне проводимого комплексного лечения.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
В работе представлены данные обследования и лечения на базе ОГУЗ "Областной перинатальный центр" г. Курска и МУЗ "Городской клинический родильный дом" г. Курска 49 женщин в возрасте от 22 до 43 лет с установленным диагнозом хронический сальпингоофорит в стадии обострения, осложненный пиосальпинксом, пельвиопери-тонитом, и подвергшихся оперативному лечению. Группа контроля состояла из 18 здоровых доноров-добровольцев в том же возрасте.
Всем больным проводили традиционную консервативную терапию: цефазолин (1,0
внутримышечно 4 раза в день № 20), гента-мицин (80 мг внутримышечно 3 раза в день № 21), нистатин (1 табл. внутрь 4 раза в день № 28), трихопол (1 табл. внутрь 3 раза в день № 15), индометацин (1 свеча per rectum однократно № 10) и местно клотримазол (1 табл. per vagina вечером однократно № 10).
Иммунологическое обследование осуществляли сразу при поступлении в стационар, через 24 часа после операции и при выписке. В работе фенотип лимфоцитов определялся методом иммунофлюоресцентного
анализа с помощью моноклональных антител (ООО "Сорбент", г. Москва) к структурам CD3 (общие Т-лимфоциты), CD22 (В-лимфоциты), CD4 (Т-хелперы), CD8 (цито-токсические Т-клетки), CD16 (NK-клетки), CD25 (рецептор к ИЛ-2), CD95 (индукторный фактор апоптоза) [6].
Содержание С3, С4-компонентов комплемента определяли в плазме крови методом радиальной иммунодиффузии по Манчини, используя диагностический набор ООО НПЦ "Медицинская иммунология" (г. Москва). Количественная оценка уровней ФНОа, ИЛ-1Р, ИЛ-6, ИЛ-8, гранулоцитарного колиние-стимулирующего фактора (Г-КСФ), ИЛ-4 и ИЛ-10 проводилась с помощью набора реагентов (ООО "Цитокин", г. Санкт-Петербург) методом твердофазного иммуноферментного анализа.
Активность и интенсивность фагоцитоза нейтрофилов периферической крови оценивали по фагоцитарному индексу (ФИ), фагоцитарному числу (ФЧ) и индексу активности фагоцитоза [7, 13]. Активность кислородза-висимых систем нейтрофилов оценивали по реакции восстановления нитросинего тетра-золия спонтанного (НСТ-сп.) и стимулированного (НСТ-ст.) зимозаном с расчетом функционального резерва [2, 14].
Эритроциты получали из 5 мл гепарини-зированной крови по методу E. Beutler [15]. Мембраны эритроцитов получали методом G.T. Dodge [16]. Электрофорез проводили в присутствии додецилсульфата натрия в вертикальных пластинах полиакриламидного геля по методу U.K. Laemmli [18]. Белки окрашивали кумаси голубым R-250 по модифицированной методике G. Fairbanks [17].
Статистическую обработку результатов исследования проводили, используя непараметрические методы: критерии Вилкоксона-Манна и Уитни, Крускала-Уоллиса, Фридмана и непараметрический вариант критерия Ньюмена-Кейлса [5]. Статистически значимыми считали различия с p<0,05.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
У больных ХСО, осложненным пиосаль-пинксом, пельвиоперитонитом, при поступлении в крови выявлено снижение относительного содержания CD4+ (с 42,5±3,1% у здоровых доноров до 30,2±3,1%), CD 16+ (с
12,8±1,4% до 5,2±1,5%), СБ25+-клеток (с 7,1±1,0% до 4,2±0,7%), повышение предста-пг/м
1200
1000
800
600
400
200
ФНОа ИЛ-1Р
ИЛ-6
ИЛ-8
Г-КСФ
ИЛ-4
ИЛ-10
Рис. 1. Концентрация цитокинов в плазме крови у больных ХСО.
Примечание: по оси абсцисс - группы больных: 1 - здоровые доноры, 2 - больные ХСО при поступлении, 3 - больные ХСО через 24 часа после операции; 4 - больные ХСО после традиционного послеоперационного лечения. Звездочкой (*) отмечены достоверные отличия средних арифметических (р<0,05) по отношению к показателям у здоровых доноров.
вительности СБ95+-клеток (с 9,7±1,1% до 13,2±1,2%). После проведенного оперативного лечения снижается общее количество СБ3+-клеток (с 59,0±4,1% у здоровых доноров до 40,4±2,8%), СБ22+-клеток (с 16,8±0,9% до 13,3±1,3), еще больше уменьшается количество СБ4+ (22,5±2,0%), повышается представительность СБ8+ (с 28,3±2,1% до 40,4±3,1%) и СБ16+-клеток (17,2±1,1%). Традиционная фармакотерапия в послеоперационном периоде у таких пациенток нормализовала только представительность СБ3+, СБ8+ и СБ22+-клеток.
При поступлении в клинику у больных ХСО наблюдались выраженные изменения цитокинового статуса, что проявлялось дисбалансом про- и противовоспалительных ци-токинов: в плазме крови повышены концентрации практически всех изученных цитоки-нов, обладающих провоспалительной активностью: ФНОа, ИЛ-1Р, ИЛ-6 и ИЛ-8 при снижении противовоспалительного цитоки-на - ИЛ-4 (рис. 1). Кроме этого, у данной категории пациенток установлена активация системы комплемента, о чем свидетельствует повышение в плазме крови концентрации С3 и С4-компонентов системы комплемента (с
145,7±26,2 мг/л у здоровых доноров до 249,4±37,6 мг/л и с 336,8±42,4 мг/л до 845,3±71,4 мг/л, соответственно). После оперативного вмешательства еще больше возрастает концентрация ФНОа, ИЛ-1Р, ИЛ-6 и повышается содержание Г-КСФ (рис. 1).
Традиционная фармакотерапия позволила нормализовать в крови концентрацию С3-компонента системы комплемента, уменьшить, но не до уровня здоровых доноров, концентрацию ФНОа, ИЛ-1Р, ИЛ-6 и С4-компонента, повысить концентрацию ИЛ-10, обладающего противовоспалительной активностью (рис. 1).
Известно, что в печени под влиянием ци-токинов увеличивается синтез острофазовых белков и компонентов системы комплемента, нужных для борьбы с патогеном, но одновременно снижается синтез альбумина. То есть на уровне регуляции экспрессии отдельных генов цитокины направляют энергетические потоки, выбирая только то, что нужно для развития защитных реакций. Видимо, такая система регуляции сформировалась эво-люционно и несет безусловные выгоды для наиболее оптимального защитного ответа макроорганизма [4].
0
