CC BY
12Актуальность
При разработке концепции доклинических исследований аутологичной дендритно-клеточной вакцины (ДКВ) основная сложность заключена в выборе релевантных моделей тестирования противоопухолевой эффективности in vivo (Maletzki C. et al., 2017). Использование персонализированных клеточных систем способствует получению объективных результатов для проведения мониторинга и прогноза эффективности лечения ДКВ.
Цель
Выбор экспериментальных in vitro моделей для достоверной оценки функциональной эффективности клеточного продукта на основе аутологичных вакцинных дендритных клеток (ДК), нагруженных ра-ково-тестикулярными антигенами (РТА+) в условиях опухолевого микроокружения.
Материалы и методы
Для исследования цитотоксической активности эффекторных Т-лимфоцитов (ЦТЛ) были использованы 2D in vitro модели, включающие аутологичные опухолевые клетки и in vitro — генерированные ЦТЛ, специфичные к РТА+ больных диссеминированной меланомой кожи (n = 10) и саркомами (n = 7), получавших вакцинотерапию на основе ДК, с использованием аналитической системы xCELLigence®, и изучением секреции цитокинов и цитолитических белков с помощью метода мультиплексного анализа (Bio-Plex System, Bio-Rad, США).
Результаты
Выявлено 2 типа взаимодействия ЦТЛ с опухолевыми клетками: 1) отсутствие изменений клеточ-
ного индекса (CI) культуры клеток аутологичной опухоли при кокультивировании с активированными ЦТЛ в сравнении с контролем, при этом у 11 пациентов среднее значение изменения коэффициента Slope составило 10% за 72 ч наблюдения и сопровождалось ростом IL-2 (12,7-180,4 пг/мл; р = 0,02), TNF-a (330,0-3030,0 пг/мл; р = 0,02), IL-4 (14,1-20,8 пг/мл; р = 0,01), IL-10 (16,6-86,5 пг/мл; р = 0,01); 2) снижение CI в сравнении с контролем культуры клеток аутологичной опухоли под влиянием активированных ЦТЛ было выявлено у 6 пациентов, при этом среднее значение изменения коэффициента Slope составило 81% за 72 ч наблюдения и увеличение продукции IL-2 (29,4-315,1 пг/мл; р = 0,000 01), TNF-a (226,1-2104,9 пг/мл; р = 0,000 01), но снижение концентрации IL-4 (27,7-25,7 пг/ мл; р = 0,018), IL-10 (43,9-27,5 пг/мл; р = 0,03). Это демонстрирует влияние цитокинового статуса злокачественного новообразования пациента на ци-тотоксическую способность РТА+ специфических Т-лимфоцитов, полученных в результате индукции зрелыми ДК в отношении аутологичной культуры опухолевых клеток.
Выводы
Таким образом, разработанная лабораторная модель оценки эффективности клеточного продукта на основе аутологичных вакцинных ДК, нагруженных РТА+, с учетом функционального состояния опухолевого микроокружения может быть использована для персонализированного мониторинга и прогноза эффективности проводимого лечения ДКВ. Исследование поддержано грантом РНФ № 22-25-00723.
Список литературы
Maletzki C . , Gladbach Y S ., Hamed M . et al . Cellular vaccination of MLH1-/- mice — an immunotherapeutic proof of concept study // Oncoimmunology. 2017 . Vol . 7 (3) . https://doi . org/10 .1080/2162402X. 2017 .1408748 .
Иммунное микроокружение рака яичников и нормальной ткани
Авторы
Заботина Татьяна Николаевна, tatzabotina@yandex.ru, ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва
Захарова Елена Николаевна, zakharovaen@yandex.ru, ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва
Борунова Анна Анатольевна, borunova-a@yandex.ru, ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва
Паниченко Игорь Валерианович, igorronc@mail.ru, ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва
Ключевые слова:
TIL, клеточный иммунитет, проточная цитометрия, Актуальность
Наличие инфильтрирующих опухоль лимфоцитов (TILs) связано с благоприятным прогнозом при мно-
рак яичников
гих видах рака, включая рак яичников (РЯ). Однако мало что известно об изменениях в Т^ во время прогрессирования и метастазирования. Установление
таких изменений имеет решающее значение для понимания взаимодействия опухоли и ее микроокружения во время канцерогенеза и реакции на лечение [1, 2].
Цель
Цель исследования. Сравнить характер инфильтрации иммунными клетками первичного очага, метастатического очага у больных РЯ и нормальной ткани яичника.
Материалы и методы
Материалы и методы. С помощью метода проточной цитометрии (FACSCounto II, BD, США) исследованы степень инфильтрации, клеточный состав иммунных клеток 53 образцов рака яичников, из них в 31 случае попарно изучены первичная опухоль и метастатический очаг, так же проанализировано 14 образцов нормальной ткани яичников.
Результаты
Показаны достоверные различия степени инфильтрации иммунными клетками ткани первичных очагов опухоли, метастазов и здоровой ткани. Медиана уровня CD45+ TIL в метастазе превышала показатели первичного очага в общей группе более чем в 2 раза и составила 1,35 и 3,4% соответственно. При попарном сравнении образцов первичной опухоли и метастатического очага 31 больной РЯ выявлена аналогичная закономерность (р = 0,05; коэффициент
ранговой корреляции Спирмена r = 0,43). В то же время количество CD45+ лимфоцитов в нормальной ткани составило только 0,2%, что достоверно ниже, чем в образцах как первичной (р = 0,02), так и метастатической (р = 0,01)опухолевой ткани. Исследование иммунофенотипа клеток первичного очага и метастазов показало достоверно значимое увеличение содержания В-лимфоцитов (CD3-CD19+; р = 0,05) и снижение числа NK-клеток (CD3-CD8+; р = 0,05). Корреляционный анализ показателей в ткани первичного очага и метастазов выявил заметную связь уровня клеток, экспрессирующих антиген ги-стосовместимости II класса (r = 0,7), высокую связь уровня CD8+Perforin+ клеток (r = 0,73), заметную связь числа PD-1 (CD279)+ клеток (r = 0,61). Показатели активированных CD4+CD25+ лимфоцитов первичной опухоли оказались достоверно выше, чем в нормальной ткани в 2 раза (9,7 и 4,6%; р = 0,03). Обращает на себя внимание высокий уровень CD4 (CD4+CD25+CD127-low) и CD8 регуляторных (CD8+11b-28-) клеток в первичном очаге и метастазах по сравнению с нормальной тканью — 17,7-20, 6-6,6% и 54,8%-53%-37% соответственно.
Выводы
Таким образом, степень инфильтрации иммунными клетками в метастатической ткани выше, чем в первичном очаге и нормальной ткани яичников, фенотип TIL тканей опухоли характеризуется как активированный и регуляторный.
Список литературы
1. Dötzer K. , Schlüter F., Schoenberg M . B . et al . Immune Heterogeneity between primary tumors and corresponding metastatic lesions and response to platinum therapy in primary ovarian cancer // Cancers . 2019 . № 11 (9) . Р 1250 . https:// doi . org/10 . 3390/cancers11091250 2 . James F. R . , Jiminez-Linan M ., Alsop J . et al . Association between tumour infiltrating lymphocytes, histotype and clinical outcome in epithelial ovarian cancer // BMC Cancer. 2017 . № 17 . Р 657 . DOI: 10 ,1186/s12885-017-3585-x .
Анализ особенностей локального клеточного иммунитета при опухолях правой и левой половин ободочной кишки
Авторы
Кит Олег Иванович, тю1@Ш1ги,ФГБУ «НМИЦ онкологии» Минздрава России, Ростов-на-Дону Дженкова Е.А., ФГБУ «НМИЦ онкологии» Минздрава России, Ростов-на-Дону
Мирзоян Э.А., ellada.mirzoyan@yandex.ru, ФГБУ «НМИЦ онкологии» Минздрава России, Ростов-на-Дону Сагакянц А.Б., ФГБУ «НМИЦ онкологии» Минздрава России, Ростов-на-Дону
Бондаренко Елена Сергеевна, lena.lenalen@mail.ru, ФГБУ «НМИЦ онкологии» Минздрава России, Ростов-на-Дону
Златник Елена Юрьевна, elena-zlatnik@mail.ru, ФГБУ «НМИЦ онкологии» Минздрава России, Ростов-на-Дону
Шульгина Оксана Геннадьевна, ggaalliinnaa1@mail.ru, ФГБУ «НМИЦ онкологии» Минздрава России, Ростов-на-Дону
Ульянова Елена Петровна, uljanova_elena@lenta.ru, ФГБУ «НМИЦ онкологии» Минздрава России, Ростов-на-Дону
Золотарева Екатерина Игоревна, kate.matthews@yandex.ru, ФГБУ «НМИЦ онкологии» Минздрава России, Ростов-на-Дону
Шапошников А.В., ФГБУ «НМИЦ онкологии» Минздрава России, Ростов-на-Дону
