CC BY
26Паёми Академияи илмх;ои тибби Тоцикистон - №4, 2017
УДК 575.1 ХАЛИМОВА Ф.Т.
ИММУННО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ МАРКЕРЫ НАСЛЕДСТВЕННОЙ ПРЕДРАСПОЛОЖЕННОСТИ К АНТИФОСФОЛИПИДНОЙ РЕАКЦИИ
Кафедра нормальной физиологии ТГМУ им. Абуали ибн Сино
Исследование посвящено изучению нарушений репродуктивной функции у женщин фертильного воз раста. У женщин из группы риска по развитию нарушений репродуктивной функции изучены маркеры антифосфолипидного синдрома: суммарные антитела класса IgG к кардиолипину, фосфатидилсерину, фосфатидилинозитолу и фосфатидиловой кислоте; в-2-гликопротеину I; аннексину V; протромбину. Показано, что циркуляция в крови у женщин антифосфолипидных антител связана с присутствием антигенов ЕЬА А29 или ИЬА Б22, что является наследственной предрасположенностью к развитию антифосфолипидной реакции.
Ключевые слова: антифосфолипидная реакция, антифосфолипидные антитела, НЬА-фенотип, антигены - А29 или НЬА - Б22. ^
KHALIMOVA FT.
THE IMMUNE-GENETIC MARKERS OF HEREDITARY PREDISPOSITION TO ANTIPHOSPHOLIPID REACTION
Department of Normal Physiology of the Avicenna Tajik State Medical University
The research is devoted to study of violations of the reproductive function of women of fertile age. In women from risk group of development of reproductive dysfunction, markers of antiphospholipid syndrome were studied: total antibodies of class IgG to cardiolipin, phosphatidylserine, phosphatidylinositol and fosfatidov acid; fi-2-glycoprotein I; annexin V; prothrombin. It is shown that the circulation in the blood of women of antiphospholipid antibodies is associated with the presence of HLA antigens A29 or HLA B22, which is a hereditary predisposition to the development of antiphospholipid syndrome.
Key words: antiphospholipid syndrome, antiphospholipid antibodies, HLA - phenotype, antigens HLA - A29 or k HLA - B22.
Актуальность. При изучении роли иммунопатологических процессов и патогенеза репродуктивных нарушений особое значение приобретает влияние аутоиммунных реакций (образование антител к некоторым собственным фосфолипи-дам) на процессы имплантации, роста, развития эмбриона и плода, течение беременности и исход родов. Являясь универсальными компонентами клеточных мембран и митохондрий, фосфоли-
Халимова Ф.Т. - зав. гафедрой нормальной физиологии ТГМУ им. Абуали ибн Сино; e-mail: farizakhalimova@ gmail.com
пиды принимают участие в формировании ци-толеммы тромбоцитов, эритроцитов, эндотелия сосудов, клеток нервной ткани [1, 2].
До настоящего времени остаются нерешенными вопросы о зависимости между циркуляцией антифосфолипидных (АФС) антител и ранними репродуктивными потерями, однако, большинство авторов склоняются к мнению о том, что повышение уровня последних может быть связано с репродуктивными нарушениями и быть частью генерализованных аутоиммунных нарушений. Среди аутоиммунных нарушений, приводящих к потере беременности, ведущее место занимает
антифосфолипидная реакция, частота встречаемости которой составляет, по литературным данным, приблизительно 5% в популяции, 27-42% - у женщин с невынашиванием беременности, 30% - при бесплодии, 27% - эндометриозе. Одним из наиболее характерных признаков АФС является акушерская патология [3, 4].
Под термином "антифосфолипидная реакция" объединяется группа аутоиммунных нарушений, характеризующаяся наличием в крови антител к содержащимся в плазме отрицательно заряженным мембранным фосфолипидам - фосфатидил-серину, кардиолипину и др. Для реализации патологического процесса необходимо присутствие в организме не только антител к фосфолипидам, но и так называемых кофакторов: ß-2-гликопро-теина-I, аннексина V и/или протромбина, при связывании с которыми формируются истинные комплексы антиген-антитело [7].
Полагают, что в основе внутриутробной гибели плода лежит гипоксия, обусловленная недостаточным маточно-планцентарным кровотоком вследствие тромбоза сосудов плаценты и нарушениям имплантации эмбриона. Инфаркт плаценты связывают также с антфосфолипидза-висимым снижением экспрессии аннексина V на поверхности плацентарных ворсинок, способностью антифосфолипидных антител перекрестно реагировать с клетками трофобласта [8]. Поэтому исследования, посвященные обоснованию и разработке методов диагностики АФС, основанные на более полном использовании возможностей, являются особенно своевременными и актуальными.
Диагностика АФС должна базироваться на комплексном исследовании аутоиммунных нарушений. Мы подчеркиваем необходимость определения при АФС нетолько антикардиоли-пиновых антител, но и титра антител к другим мембранным фосфолипидам (фосфатдилсерину, фосфатдилинозитолу, фосфатидиловой кислоте).
Иммунодиагностика АФС, согласно современным рекомендациям, должна включать в себя, помимо определения титра антифосфолипид-ных антител, принадлежащих к разным классам иммуноглобулинов, исследование антител к некоторым гликопротеинам, фиксированным на фосфолипидных мембранах. Важнейшими из них являются b-гликопротеин I, протромбин и аннексин V [9].
Другой важной характеристикой этого синдрома является нарушение ряда параметров свертываемости крови - развитие гипокоагуляции в различных так называемых фосфолипидзависимых тестах, выполняемых на бедной тромбоцитами плазме (БТ П). Эта гипокоагуляция, которая обозначается как наличие в плазме крови антикоагулянтов волчаночного типа (АВТ), устраняется или
становится значительно менее выраженной при добавлении к БТП эмульсии нормальных фосфо-липидных мембран, полученных из разрушенных тромбоцитов, либо эритрофосфатида [10] .
Несмотря на то, что в последние годы появилось много исследований по вопросам этиологии, диагностики и лечения тромбоэмболических осложнений, анализ данных литературы показывает, что еще многие аспекты этой патологии неясны и нуждаются в тщательном и последовательном изучении [11].
Необходимым аспектом является поиск им-муногенетических маркеров наследственной предрасположенности к АФС, сопряженному с репродуктивными нарушениями, так как показано, что в ряде случаев нарушение репродукции может быть связано с системой генов главного комплекса тканевой совместимости (HLA) [12, 13, 14].
Цель исследования. Определить иммуноге-нетические маркеры наследственной предрасположенности к антифосфолипидной реакции (АФР), сопряженной с репродуктивными нарушениями.
Материал и методы исследования. В число обследуемых вошли 135 женщин из группа риска развития нарушений репродуктивной функции, которые имели отягощенный акушерский анамнез (привычные выкидыши, тяжелые гестозы, преждевременная отслойка нормально расположенной плаценты (ПОНРП), синдром задержки внутриутробного плода (СЗВРП), антенатальная гибель плода (АГП) и др.), у которых после проведения гинекологического, гормонального, бактериологического и генетического исследований причина нарушений в репродуктивной системе оставалась неясной. Выборка определялась случайным порядком в процессе прохождения ими медицинского осмотра.
У всех обследуемых было проведено определение суммарных антител класса IgG к кардиоли-пину, фосфатидилсерину, фосфатидилинозитолу и фосфатидиловой кислоте; Р-2-гликопротеину I; аннексину V; протромбину.
Использовали анализатор для иммунного анализа BioRad, производства SanofiDi-agnosticsPasteur, (Франция - США) с помощью наборов реактивов фирмы «ОщеШес».
Всем обследуемым определяли в плазме крови антикоагулянты волчаночного типа: люпус-чувствительное АПТВ (ВА+) (экспресс-люпус тест); протромбиновый тест с разведенным ядром гюрзы (лебетокс-тест). Использовались реактивы «Технология - стандарт».
Проведено исследование иммуногенетического статуса. Выделение ДНК из лимфоцитов периферической крови проводили по методу Higuchi (R.Higuchi, Н.ЕгНЛ, 1989) с некоторыми модифика-
Паёми Академияи илмх,ои тибби Тоцикистон - №4, 2017
циями с Hoechst 33258 на ДНК-минифлуориметре (Hoefer, США). Типирование лимфоцитов периферической крови по антигенам главного комплекса гистосовместимости I и II класса проводили методом полимеразной цепной реакции. Амплификацию выделенной ДНК проводили на многоканальном термо-циклере "МС2" (НПФ "ДНК-Технология", Москва).
Статистическая обработка данных выполнена на индивидуальном компьютере с помощью электронных таблиц «MicrosoftExcel» и пакета прикладных программ SPSS 22 версия. Статистически значимыми считали отличия при р<0,05 (95%-й уровень значимости).
Результаты и их обсуждение. В результате проведенного исследования определен удельный
Как видно из таблицы, у 18 женщин из группы риска все показатели маркеров АФР находились в пределах физиологической нормы. В сравнении со среднерегиональной нормой, критические показатели уровня АФЛ были выше на 46,1%, P-2-гликопротеина - на 45,3%, Аннексина-V - на 24,0%, Протромбина - на 32,0%, АПТВ, (Люпус-тест) - на 20,0%, Время свертывания по ЛЕТ в Лебетокс-тесту - на 13,3%. Таким образом, в качестве критериальных показателей для формирования группы риска нарушений репродуктивной функции следует считать показатели маркеров АФР с положительным отклонением от среднерегиональных значений АФА на 46,1%, P-2-гликопротеина - на 45,3%, Аннексина-V - на 24,0%, Протромбина - на 32,0%, АПТВ (Люпус-тест) - на 20,0%, Время свертывания по ЛЕТ в Лебетокс-тесте - на 13,3%.
Дальнейшее исследование было продолжено с целью поиска иммунно-генитических маркеров наследственной предрасположенности к АФР, проявляющейся нарушением репродуктивной функции. Принимая во внимание, что в ряде случаев нарушение репродукции может быть связано с системой генов главного комплекса тканевой совместимости (HLA), проведено HLA-типирование по I классу жен-
вес обследуемых женщин, значения показателей маркеров АФР которых имели достоверные статистические различия с полученными в ходе исследования среднерегиональными нормами.
У 86,7% обследуемых показатели статистически не отличались от среднерегиональной нормы. Установлено, что у 18 (13,3 %) обследуемых женщин отмечались изменения в динамике анти-фосфолипидных антител и показателей коагуля-ционного звена гемостаза. Выявленное состояние иммунного реагирования может быть оценено как срыв адаптации их организма, что стало причиной развития аутоиммунных реакций у женщин, возможно, имеющих генетическую предрасположенность к этому патологическому состоянию (табл.).
щин, имеющих критериальные значения маркеров АФР с популяционным распределением антигенов.
Статистический анализ частот антигенов выявил достоверные различия в распределении НЬА-антигенов у женщин с критериальными значениями маркеров АФР. У женщин, в крови которых обнаружены повышенные значения маркеров АФР в сравнении с группой контроля, достоверно чаще встречались антигены А29 - в 4 раза, В22 - в 3 раза, режеантиген В16 - в 4 раза.
Чтобы оценить силу ассоциации антигена НЬА-А29 с заболеванием, был проведен расчет величины относительного риска. Показатель RR в данном случае был равен 4,0, что указывает на положительную ассоциативную связь, т.к. показатель относительного риска более 2,0 считается значимым. Следовательно, женщины, несущие в своем НЬА-фенотипе антиген А29, имеют в 4 раза выше риск развития данной формы нарушения репродукции по сравнению с женщинами, неиме-ющими названного антигена. Величина относительного риска для НЬА-В22 составила 3,56, что также является значимым.
Проведенные исследования дали основание говорить о положительной ассоциации между антигенами НЬА-А29, НЬА-Б22 и риском нару-
Критериальные показатели маркеров АФРМ±т, n=18
Показатель Группа риска, n=18
среднерегиональные значения критериальные значения
АФА,(Ед/мл) 2,8±1,0 5,2±1,2*
Р-2-гликопротеин, (Ед/мл) 3,5±1,5 6,4±1,2*
Аннексин-У, (Ед/мл) 1,9±0,8 2,5±0,9*
Протромбин, (Ед/мл) 3,6±1,9 5,3±0,2*
АПТВ, Люпус - тест, Ед 0,8±0,1 1,0±0,1*
Время свертывания (ЛЕТ), Лебетокс-тест, (мин) 1,3±0,3 1,5±0,1*
Примечание: * при р<0,05 в сравнении со среднерегиональными значениями
шения репродуктивной функции, связанной с критериальными значениями маркеров АФР. Иначе говоря, данные антигены можно рассматривать как показатель высокого риска наследственной предрасположенности к АФС, сопряженному с репродуктивными нарушениями. В свою очередь антиген HLA- В16 в группах риска по нарушению репродуктивной функции встречался реже, чем в контрольных группах в 3 раза. Данный антиген можно рассматривать как протективный, т.е. в его присутствии снижен риск развития АФР.
Заключение. Таким образом, определены им-муногенетические маркеры повышенного риска нарушений репродуктивной функции. Показано, связь определенных «маркерных» вариантов генов системы HLA с развитием аутоиммунных процессов, очевидно, играет определенную роль в нарушении репродуктивной функции. Присутствие в HLA-фенотипе женщины антигенов HLA - А29 или HLA - Б22 является показателем наследственной предрасположенности к развитию антифос-фолипидного синдрома, связанного с циркуляцией антифосфолипидных антител, приводящего к осложнениям беременности или к бесплодию.
ЛИТЕРАТУРА
1. Пастман Н.М., Черных Е.Р., Хонина Н.А., Дударева А.В., Тихонова М.А., Останин А.А., Кустов С.М. Иммунный статус женщин группы высокого риска по преждевременному прерыванию беременности // Вопросы гинекологии, акушерства и перинатологии.- 2010.-№ 9 (4).- С. 28-32.
2. Шешукова Н.А., Боровкова Е.И., Большакова О.В. Этиопатогенетические варианты спонтанного выкидыша // Гинекология.- 2014.- Т. 16, № 2.- С. 84-88.
3. Алиева С.А., Одаманова М.А., Аллахкулиева С.З., Хаша-ева Т.Х. Значение циркуляции антифосфолипидных антител у женщин с аутоиммунными заболеваниями щитовидной железы и синдромом потери плода в анамнезе// Акушерство, гинекология и репродукция.- 2015.- Т. 9, № 1.- С. 13-18.
4. Тухфатуллина С.И., Гайнетдинова Д.Д. Ишемические и неишемические проявления при антифосфолипидном
синдроме //Казанский медицинский журнал.- 2015.- Т. 96, № 1.- С. 61-69.
5. Долгих Т.И., Баринов С.В., Кадцына Т.В. Диагностическое значение антител к аннексину и к Ь2-гликопротеину для верификации активного течения герпесвирусных инфекций у беременных // Клиническая лабораторная диагностика. - 2014.Т. 59, № 5.- С. 44-48
6. Хизроева Д.Х., Бицадзе В.О., Макацария Н.А. Анти-фосфолипидный синдром в акушерской практике // Вопросы гинекологии, акушерства и перинатологии.- 2013.- Т. 12, № 1.- С. 64-74.
7. Степанова Р.Н., Косова А.С., Макарова О.М., Пехото
0.К. Антифосфолипидные антитела афла как предикторы неблагополучных исходов гестации у здоровых беременных женщин обзор литературы // Ученые записки Орловского государственного университета. Серия «Естественные, технические и медицинские науки».- 2013.- № 6.- С. 257-264.
8. Озолиня Л.А. Профилактика венозных тромбозов и тромбоэмболий в акушерстве и гинекологии // Российский вестник акушера-гинеколога.- 2011.- Т. 11, № 5.- С. 98-101.
9. Малышева Е.В., Назирова А.А., Гулин А.В. Принципы лабораторной диагностики антифосфолипидного синдрома в акушерстве // Вестник Тамбовского государственного университета. Серия «Естественные и технические науки».- Тамбов, 2010.- Т. 15, Вып. 1.- С. 29 - 32.
10. Назирова А.А., Гулин А.В., Малышева Е.В. Критерии диагностики АФС. Вестник Тамбовского государственного университета. Серия «Естественные и технические науки». Том. 16. Выпуск 5. - Тамбов, 2011. С. 1388 - 1389
11. Небесных А.Л. Особенности проявления метаболического синдрома в различных этнических группах // Сибирский медицинский журнал. - 2013. - № 7. - С. 19-23.
12. Хаитов Р.М., Алексеев Л.П. Иммуногенетика и биомедицина// Российский аллергологический журнал.- 2013.- №
1.- С. 5-14.
13. Анохова Л.И., Белокриницкая Т.Е., Тарбаева Д.А., Смоляков Ю.Н. Полиморфизм генов HLAII-DRB1 у пациенток с преждевременными родами // Забайкальский медицинский вестник.- 2017.- № 1.- С. 24-27.
14. Тарбаева, Д.А., Кузник Б.И., Загородняя Э.Д., Иозефсон С.А. Функция HLA в репродуктивной системе // Забайкальский медицинский вестник. - 2009.- №1.- С. 19-32.
^АЛИМОВА Ф.Т.
МАРКЁР^ОИ ИММУННОГЕНЕТИКЙ ГИРИФТОРШАВИИ ИРСЙ БА ЧАРАЁНИ АНТИФОСФОЛИПИДЙ
Кафедраи физиологияи ДДТТ ба номи Абуали ибн Сино
К'алимачои калидИ: чараёни антифосфолипидй, антителадои антифосфолипидй, фенотипи HLA, антигендои HLA-А29 ё HLA - Б22.
Тадцицоти мазкур ба омузиши вайроншавии вазифаи репродуктивии занон бахшида шудааст. Дар занони гуру^и хатардошта бо ташаккул ёфтани вайроншавии вазифаи репродуктивй маркёр^ои синдроми антифосфолипидй омух-та шуд: антителадои синфи IgG ба кардиолипин; фосфатидилсерин, кислотаи фосфатидилинозитол ва фосфатидил; ß-2-гликопротеин I; аннексину V; протромбин. Муцаррар гардид, ки гардиши антителадои антифосфолипидй дар хуни занон ба цой дошатни антигещои HLA A29 ё HLA Б22 вобаста буда, боиси гирифторшавии ирсй ба пайдоиши цараёни антифосфолипидй мегардад.
