CC BY
39
дослщу, за винятком абсолютного контролю, вщповщала вимогам, яю ставляться до першокласного ciHa.
В цшому в четвертому yxoci за вс1ма показниками якосп, три вар1анти без бактеризацп (N6oP6oK6o, РбоКбо+ Л1гногумат та N6oP6oK6o+ Л1гногумат) та чотири вар1анти з бактеризащею (P6oK6o, N6oP6oK6o, P6oK6o+ Л1гногумат та N6oP6oK6o+ Л1гногумат) вщповщали I класу.
Висновки. Таким чином, у результат! проведених дослщжень встановлено, що в технолопях створення та використання с1яних ciHOKOciB, сумюне застосування бактер1ального, мшеральних та гумшових добрив з властивостями стимулятора росту сприяе покращенню поживносп та енергетично! цшносп корму.
Перспективи подальщих дослщжень. Змши ктмату, яю спостер1гаються останшми роками на територп Украши i проявляються зростанш температурного режиму та попршенш вологозабезпечення, а також шдвищення цш на мшеральш добрива, зумовлють потребу в подальших дослщженнях в галуз1 луювництва i3 використанням в технолопях створення та використання с1яних лучних упдь нових еколопчно безпечних та економ1чно випдних вид1в добрив та стимулятрор1в росту рослин.
Лггература
1. Боговш А. В. Трав'янисп бюгеоценози, !хне полшшення та рацюнальне використання / А. В. Боговш, I. Т. Слюсар, М. К. Царенко - К.: Аграрна наука, 2oo5. - 36o с.
2. Доспехов Б. А. Методика полевого опыта (с основами статистической обработки результатов исследований) / Доспехов Б. А. - М.: Колос, 1979. - 416 с.
3. Методика проведения дослав з кормовиробництва i год1вл1 тварин: [шд редакщею А. О. Бабича.] - Вшниця, 1998. - 78 с.
4. О гуматах [Електронний ресурс] / НПО «Реализация экологических технологий» — Режим доступу: http://www.humate.spb.ru/ about_gumat/lignogumat/
5. Петриченко В. Ф. Стратепя розвитку кормовиробництва в Украш / В. Ф. Петриченко, О. В. Корншчук // Корми i кормовиробництво. - 2o12. - вип. 73. - С. 3-11.
6. Оно. Техшчш умови : ДСТУ 4674-2oo6. [Чинний вщ 2oo7-1o-o1]. - К. : Держспоживстандарт Украши, 2oo5. - (Нацюнальний стандарт Украши).
Стаття надшшла до редакци 10.03.2015
УДК 637.136.3:66.o95.261
'Сливка I. М., acnipaHT, ^сарин: О. Й., д. с/г н., професор , 2T. Боцер © E-mail: slyvka.88@ukr.net, tsisaryk_o@yahoo.com
1Льв!вський нацгоналънийумверситет ветеринарног медицины та биотехнологий гменг С. 3. Гжицъкого, м. Львгв, Украгна 2Жешувсъкииутверситет, м. Колъбушово, Полъща
1ДЕНТИФ1КАЦ1Я МОЛОЧНОКИСЛЫХ БАКТЕР1Й 13 ЗАСТОСУВАННЯМ КОМПЛЕКСУ МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧНИХ МЕТОД1В
Молочнокислi бактерИ' належать до групи мтрооргатзм1в, якг е основою для створення пробютичних npenapamie, що позитивно впливаютъ на здоров'я людини. Вони широко використовуютъся в харчов1й промисловост1, беручиучастъ в процеа
© Сливка I.M., Щсарик О.Й., T. Боцер, 2o15
2o1
виробництва 7 тдтримцг свгжостг продукту та одночасно знижуютъ потребу у використанм в штучних консервант1в.
Метою роботи було диференщювати молочнокисл7 бактер1й, видыеш з оеечого сиру, еиготоеленого в умовах високог1рног полонини Путилъсъкого району Чермвецьког облает7. Для доеягнення цгег мети еикористано метод випадковог ампл1ф1кацИ' noлiмopфнoí ДНК (ВАРВ-РСВ) та ампл1ф1кац1ю регюну м\жгенног дыянки 16Б 7 23Б гЯЫА.
Анал1з результат1в св1дчить, що бактер1альна флора, яка бере участь у виробництв1 сиру доситъ р1зномаштна. Нам едалося отримати 8 р1зних генетичних профтв, якг еказуютъ на /снуеання восьми груп бактер1й. Досл1джуванм МКБ не можутъ бути в1днесем до конкретного виду через в1дсутмстъ схожих генетичних профтв референтних штам1в.
Метод ЕАРО-РСЯ е доцыъним при визначенш р1зномаштност1 МКБ в кглъкгеному егдношенш, але не достаттм з точки зору якгеного аналгзу. Осктъки, молочнокисла флора, яка /золъована /з оеечого сиру Карпатсъкого регюну Украгни, не еиечена, то еикористання методу ЕАРО-РСЯ е початкоеим етапом в гг доелгдженнг.
Ключовг слова: молочнокисл/ бактери, молекулярно-генетичм методи, ¡дентифтащя, пол1меразна ланцюгоеареакщя, ампл1ф1кац1я, гетерогенметъ.
УДК 637.136.3:66.095.261
Н. Сливка, аспирант, 10. И. Цисарык, д. с/г н., професор, 2Т. Боцер
1 Львовский национальный университет ветеринарной медицины и биотехнологий имени С. 3. Гжицкого, Украина 2Жешувскийуниверситет, Польша
ИДЕНТИФИКАЦИЯ МОЛОЧНОКИСЛЫХ БАКТЕРИЙ С ПРИМЕНЕНИЕМ КОМПЛЕКСА МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИХ МЕТОДОВ
Молочнокислые бактерии относятся к группе микроорганизмов, которые являются основой для создания пробиотических препаратов, которые положительно влияют на здоровье человека. Они широко используются в пищевой промышленности, участвуя в процессе производства и поддержке свежести продукта и одновременно снижают потребность в использовании искусственных консервантов.
Целью работы было дифференцировать молочнокислые бактерий, выделенные из овечьего сыра, изготовленного в условиях высокогорной долины Путильского района Черновицкой области. Для достижения этой цели использован метод случайной амплификации полиморфной ДНК (ВАРВ-РСВ) и амплификациирегиона межгенного участка 16Б 7 23Б гЯЫА.
Анализ результатов показывает, что бактериальная флора, которая участвует в производстве сыра весьма разнообразна. Нам удалось получить 8 различных генетических профилей, которые указывают на существование восьми групп бактерий. Исследование МКБ не могут быть отнесены к конкретному виду за отсутствия похожих генетических профилей референтных штаммов.
Метод ЕАРО-РСЯ является целесообразным при определении разнообразия МКБ в количественном отношении, но не достаточным с точки зрения анализа. Поскольку молочнокислые флора, которая изолирована с овечьего сыра Карпатского региона Украины, не изучена, то использование метода ЕАРБ-РСЯ есть начальным этапом в ее исследовании.
202
Ключевые слова: молочнокислые бактерии, молекулярно-генетические методы, идентификация, полимеразная цепная реакция, амплификация, гетерогенность.
UDC 637.136.3:66.095.261
I. M. Slyvka, O. Y. Tsisaryk, 2T. Bocer
1Lviv National University of Veterinary Medicine and Biotechnologies named after S. Z. Gzhytskyj, Lviv, Ukraine 2University of Rzeszow, Kolbuszowa, Poland
THE APPLICATION OF THE COMPLEX OF MOLECULAR-GENEIC METHOD FOR IDENTIFICATION OF LACTIC ACID BACTERIA
Lactic acid bacteria belong to the group of microorganisms, that are basis for creation of preparations of probiotic, that positively influence on a health man. They are widely used in food industry, participating in the process of production and to support of freshness of product and also reduce a requirement in the use at artificial preservatives.
Our purpose was to identify LAB, isolated from ewe's cheese produced in the alpine mountain valley of Putyla district of Chernivtsi region. the random amplification ofpolymorphic DNA(RAPD-PCR) and amplification of region of intergenic area of 16S -23 S rRNA have been used to achieve this purpose.
The analysis of results testifies that bacterial flora that participates in the production of cheese various enough. 8 different genetic profiles that specify on existence of eight groups of bacteria we succeeded to get. Investigated LAB can not be attributed to a specific type because of the lack of similar genetic profiles of reference strains.
The method RAPD-PCR is appropriate in determining the diversity LAB quantitatively, but not sufficient in terms of qualitative analysis. Since lactic flora, which is isolated from sheep cheese Carpathian region of Ukraine, has not been studied, the use of RAPD-PCR method is the first step in its study.
Key words: lactic acid bacteria, molecular genetic methods, identification, polymerase chain reaction amplification, heterogeneity.
Вступ. Молочнокисл! бактерп (МКБ) все бшьше привертають велику увагу науковщв створенням на i'x основ1 пробютичних препарата з метою оздоровления оргашзму людини [1]. Питания видшення, селекцп й удосконалення штам1в МКБ, яю продукують бюлопчно активш речовини, е актуальними в даний час [2].
EioxiMi4Hi та морфолопчш властивосп лактобактерш на сьогодш е основним i единим критер1ем м1жродово! i видово! приналежносп цих м1крооргашзм1в. Проте численш даш, що стосуються особливостей i'x бюлогп, морфологи та 6ioxiMii, все одно часто виявляються недостатшми, а шод1 тшьки ускладнюють визначення досл1джуваних об'екпв, а саме встановлення i'x таксоном1чного положения. Тому альтернативою класичн1й 6ioxiMi4Hrn ¿дентиф1кацА1 е метод генотипування з використанням пол1меразно1 ланцюгово! реакц11 (англ. Polymerase Chain Reaction)
[3].
Метою роботи е застосування комплексу генетично-молекулярних метод1в для вивчення генетичного р1зномашття штам1в МКБ, як1 були видшеш традиц1йного харчового продукту укра1нц1в — бринзи. Варто в1дзначити, що генетичний анал1з бактер1ально! флори, видшено! з овечого сиру, виготовленого в домашшх умовах на теренах украшських Карпат, буде зроблено вперше.
Для вивчення генетичного пол1морф1зму ДНК МКБ, використовували молекулярно-генетичний метод PCR з випадковими праймерами RAPD-PCR (англ.
203
Random Amplification of Polymorphic DNA) та метод риботипування (ампл1ф1кащя perioHy мгж генами 16S i 23S rRNA).
RAPD-PCR — це метод, який дозволяе проводити анал1з генома без точного знания його послщовностей, вш заснований на PCR, що проводиться на геномнш ДНК. На вщмшу вщ стандартно! пол1меразно! ланцюгово! реакцп використовують один праймер, як правило, з довжиною вщ 10 до 20 пар основ. Залежно вщ способу диференщацп можна застосовувати бшьше праймер1в. Ц1 праймери з довшьною послщовшстю, як правило, шшдюють ампл1ф1кащю фрагмента ДНК в р1зних областях генома одночасно [4].
Риботипування — один з метод1в генетичного типування. Метод полягае у роздшенш м1крооргашзм1в завдяки високш гетерогенносп гешв i кодуючих рибосомальних РНК (рРНК) мало! i велико! субодинищ прокарютично! рибосоми. H,i гени вкладеш в оперон rrn, який е характерним для Bcix бактершних м1крооргашзм1в. М1ж послщовностями, вщповщальними за синтез 16S, 23S i 5S рРНК, е пол1морфш дшянки р1зно! послщовносп i розм1ру. Вони е щеальними для використання у фшогенетичних дослщженнях [5].
Розробка нових та оптим1защя вщомих молекулярно-генетичних метод1в шдикацп i точно! видово! !дентиф!кац!! МКБ е актуальним i практично потр!бним завданням, якому прид!ляеться велика увага закоронних i в!тчизняних досл!дник!в [6].
Матер1али та методи дослщження. Матер!алом для досл!джень був овечий сир буц (бринза, до моменту солшня), виготовлений в умовах високог!рно! полонини Путильського району Черн!вецько! облает!. Об'ектом досл!дження слугували м!кроорган!зми, !зольован! i3 овечого сиру. Предметом досл!дження були морфолого-культуральн! та гетерогенн! властивост! !зольованих МКБ. 1з досл!дного зразка сиру було !зольвано 28 чистих культур МКБ.
Визначення приналежност! видшених бактер!й до роду Lactobacterium проводили за ГОСТ 10444.11-89 «Продукта харчовг Методи виявлення молочнокислих м!крорган!зм!в».
Для ¿золяцп чистих культур МКБ використовували метод noeißy десятикратних розведень дослщжуваного матер1алу на тверд! поживш середовища MRS та М17, що мютили 2% агару Поживш середовища були приготоваш на основ! дистильовано! води i стерил1зоваш в автоклав! при температур! 121 °С, тиску 1 атм, протягом 15 хв. Метод виявлення молочнокислих паличок базувався на ix здатносп розвиватися на поживному середовищ1 MRS. Для ¿золяцп лактокоюв використовували середовище М17. 1нкубащю молочнокислих паличок здшенювали в анаеробних та мшроаерофшьних умовах за температури +38 °С, шкубащю лактокоюв при температур! +25 °С та +42 °С. Пюля шкубування на твердих поживних середовищах окрем1 КУО МКБ переносили у рщке поживне середовище MRS та М17 для нарощення бюлопчно! маси для подальшо! ¿золяцп геномно! ДНК бактерш.
1золящю геномно! ДНК проводили, використовуючи Ha6ip Genomic Mini ф1рми A&A Biotechnology згщно з шетрукщею виробника. Визначення концентрацп i чистоти ¿зольовано! ДНК проводили на спектрофотометр! NanoDrop 2000 ф1рми Thermo Scientific.
Ампл1ф1кащю ДНК виконано на основ! PCR з використанням праймера 1254 (Sigma-Aldrich). Нуклеотидна секвенц1я стартера 1254, який використаний для RAPD-PCR, була 5'- CCGCAGCCA -3'. PCR для дшянки 16S-23S рРНК проведено з використанням пари праймер1в 16-1A та 23-1В (Sigma-Aldrich). Нуклеотидна
204
послщовшсть для праймер1в, що були використаш для PCR-ITS (англ. internal transcribed spacer PCR):16-1A 5'- GTCGGAATCGCTAGTAATCG -3' та для 23-1В 5 - GTCGGAATCGCTAGTAATCG -3'.
Реакцшна cyMim для RAPD-PCR та PCR-ITS складалась i3 дистильовано! води, dNTP, буферу, пол1мерази Taq, стартер1в 1254 (RAPD-PCRJ, 16-1A та 23-1В (PCR-ITS) та матриц! ДНК.
Ампл1ф1кащю виконували за допомогою термоциклера Mastercycler Gradient ф1рми Eppendorf, беручи до уваги темиератури плавления праймер1в i л1тературш даш щодо умов проведения RAPD-PCR та PCR-ITS [7].
Для проведения RAPD-PCR застосовано режими, що представлено в табл. 1.
Таблиця 1
Режими проведения RAPD-PCR__
Етап Температура (°C) Час (хв.) Кшьшсть
ЦИКЛ1В
Денатурац1я 94 5
Приеднання стартера 36 5 4
Елонгащя 72 5
Денатурац1я 94 1
Приеднання стартера 36 1 30
Елонгащя 72 2
Кшцеве подовження 72 10 1
PCR-ITS проведено при режимах , що представлено в таблиц! 2.
Таблиця 2
Режими проведения PC R-ITS
Етап Температура (°C) Час Кшьшсть циктв
Денатуращя вступна 94 5 хв. 1
Денатурац1я 94 40 с. 35
Приеднання стартера 55 45 с.
Елонгащя 72 60 с.
Кшцеве подовження 72 7 хв. 1
Електрофорез в агарозному reni здшснено в anapaTi ф1рми Bio-Rad. Приготовлено 1,5 % агарозний гель i розведення буферу lxTBE (TrisHCl, H3BO3, EDTA). Для в1зуал1зацп ДНК в агарозний гель додавали бромистий етидш (EtBr) у розрахунку 0,5 мг/мл. Фотографування виконували у трансшюмшатор1 G-Box (Syngene). К1льк1сть ампл1ф1кованого ДНК визначали на основ1 маркера молекулярно! маси GeneRuler 1kb DNA Ladder ф1рми Fermentas (рис 1).
Для пор1вняльного анал1зу ампл1ф1кованих фрагмент1в ДНК використано референтн1 штами МКБ ¿з колекц1! Katedry Mikrobiologii Przemyslowej i Zywnosci (промислово! MiKpo6ionorii' i продовольства) Uniwersytetu Warminsko-Mazurskiego, Rzeczpospolita Polska). У робот1 використано 12 штам1в МКБ: Lactococcus lactis spp. lactis 6; Lactococcus lactis ssp. cremoris; Lactococcus lactis ssp. lactis 1267; Lactococcus lactis subsp. lactis var. diacetylactis; Lactobacillus plantarum 295/1; Lactobacillus brevis 211; Enterococcus faecalis; Lactobacillus plantarum 21; Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus; Lactobacillus acidophilus 43/15; Lactobacillus brevis 32; Leuconostoc mesenteroides ssp. mesenteroides.
Результата дослшжень. Впеоше пооведено анатз бактео1ально1 мшоо&лоои овечого chdv i3 застосуванням комплексу м1кробюлопчних та генетично-молекулярних метод1в RAPD-PCR та PCR-ITS.
205
GeneRuler™ 1 O'GeneRuler" ready-to-use
hp ng/D.5 на
kb Plus DNA Ladder
1 kb Plus DNA Ladder,
va
2СЮГО 20.0 4.0
10000 20.0 4.0
7000 20.0 4.0
¿ООО 75,0 1&.0
4000 20.0 4.0
3000 20.0 4.0
2000 20.0 4.0
1SOO »0.0 16.0
1000 25.0 5.0
700 25.0 5.0
540 7S.0 15,0
400 25.0 5.0
300 25.0 5.0
200 25.0 5.0
75 25.0 5.0
O.d ^-lane, S cm length gel. 1XTAE, 7 V/cm, 45 min
Рис.1 Маркер величини ДНК GeneRuler 1kb DNA Ladder Результати визначення ступеня чистоти i концентрацн
Таблиця 3
№ !золяту МКБ Концентращя ДНК нг/мкл Чистота ДНК А260/А280 № 1золяту МКБ Концентращя ДНК нг/мкл Чистота ДНК А260/А280
1 84,7 1,81 15 93,7 1,69
2 83,6 1,80 16 185,4 1,63
3 72,4 1,81 17 87,3 1,78
4 113,4 1,82 18 145,2 1,69
5 96,6 1,66 19 53,6 1,73
6 87,5 1,78 20 122,2 1,62
7 77,0 1,78 21 189,7 1,60
8 94,4 1,80 22 134,0 1,62
9 84,3 1,76 23 103,8 1,75
10 164,1 1,61 24 78,9 1,83
11 79,5 1,76 25 87,6 1,67
12 86,8 1,81 26 107,3 1,78
13 95,6 1,77 27 73,4 1,86
14 76,6 1,81 28 82,6 1,68
За морфолого-культуральними властивостями МКБ вщносилися до родин Lactobacteriaceae та Streptococcaceae та трьох podie Lactobacterium, Lactococcus i Streptococcus.
1золящю геномно! ДНК виконано i3 28 чистих культур МКБ. Концентращю та чистоту ¿зольовано! ДНК представлено у таблиц! 3.
Ампл1ф1кащю гена 16S рРНК i дшянки м1ж генами, що кодують 16S i 23S рРНК, проведено для шдтвердження якосп вид1лено! ДНК i подальшого И
206
використання, як матриц! для методу ЯЛРВ-РСЯ. Праймери, що використаш в реакцп були гомолопчш високо консервативно дшянщ. Таким чином, при вщсутносп продукту ампл1ф1кацп потр1бно автоматично дисквал1ф1кувати даний зразок 1 виключити його ¿з подальших дослщжень. Пюля електрофоретичного анал1зу, продукти ампл1ф1кацп були виявлеш в кожному з анал1зованих зразюв (рис. 2, рис. 3). Тшьки в одному випадку (ампл1ф1кащя гена 168 рРНК, зразкок 15) вихщ реакцп не був найвищим. Але при проведенш РСЯ-ГТ8, кшьюсть ¿зольовано! ДНК е достатньою 1 реакщя вщбуваеться позитивно.
Рис. 2. Електрофоретичне роздшення продукт1в ампл1ф1кацн
гена 16S рРНК.
М- маркер молекулярногмаси (GeneRuler 1kb DNA Ladder). Дор1жки №1-28 - досл1джувам зразкиМКБ. Дор1жка №15 - брак продукту PCR.
Ml 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14151617 18 19 202122 23 2425 26 2728
I/ И.....b. i ........
Рис. 3. Електрофоретичне роздшення продукт1в ампл1ф1кащя пол1морфного perioHy, що кодуеться 16S i 23S рРНК (PCR-ITS)
М- маркер молекулярногмаси (GeneRuler 1kb DNA Ladder).
Дор1жки № 1-28 - досл^джуват зразкиМКБ.
Результата, отримаш при проведенш RAPD-PCR дали можливють встановити значний стушнь гетерогенносп всередиш дослщжуваних штам1в МКБ. Оскшьки, кожний окремий ¿золят МКБ характеризувався р1зною кшьюстю ампл1ф1кованого ДНК i вщподно р1зною кшьюсть ix молекулярно! маси. Профш ампл1ф1кацп ДНК дослщжуваних ¿золят1в МКБ, що отримаш шд час роздшення в електрофоретичному noni, представлено на рисунку 4.
На рисунку 5 представлен! профш ампл1ф1кацп ДНК референтних штам1в МКБ отримаш при електрофоретичному роздшенш Електрофорез референтних штам1в МКБ проведено для пор1вняння ¿з отриманими профшями ДНК дослщжуваних штам1в МКБ.
Дор1жки № 1-12 референтш штами МКБ. 1 - Lactococcus lactis spp. lactis 6, 2 - Lactococcus lactis ssp. cremoris, 3 - Lactococcus lactis ssp. lactis 1267, 4 -Lactococcus lactis subsp. lactis var. diacetylactis, 5 - Lactobacillus plantarum 295/1, 6 -Lactobacillus brevis 211, 7 - Enterococcus faecalis, 8 - Lactobacillus plantarum 21, 9 -
207
Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus, 10 - Lactobacillus acidophilus 43/15, 11-Lactobacillus brevis 32, 12- Leuconostoc mesenteroides ssp. mesenteroides.
MI 2 3 4 5 6 7 S 9 10 II 12 13 14 M
m "
Щ 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 25 27 28 M
Рис. 4. Електрофоретичне роздшення продуктов RAPD-PCR.
М — маркер молекулярног маси (GeneRuler 1kb DNA Ladder). _Дopiжкu №1-28 до^джуват зразки МКБ_
М 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 М
Рис. 5. Електрофоретичне роздшення продуклв RAPD - PCR.
М - маркер молекулярно! маси (GeneRuler 1kb DNA Ladder ).
При проведенш пор1вняльного анал1зу профшв ампл1ф1кацп досл1джуваних МКБ та референтних штам1в МКБ теля проведения RAPD-ПЛР не вдалося вщшукати спшьних електрофоретичних зразюв. Що в свою чергу не дае нам можливосп визначити, яю МКБ беруть участь у процеш виробництва сиру. Але за схожютю електрофоретичних профшв м1ж дослщжуваними штамами МКБ, ix можна об'еднати у 8 груп, що вказуе на юнування восьми груп бактерш, яю були ¿зольоваш ¿з сиру.
208
Дослщжуваш зразки МКБ, яю вщнесеш до певних груп представлено в таблиц! 4.
Таблиця 4
Групи дослщжуваних зразк1в МКБ, що мають под1бш
Номер групи, що мають подабний генетичний проф1ль Номери дор1жок електрофоретичних зшмшв, що мають схож! генетичш профш
I 1,3,4,6,7,9,10,13,14
II 2,8,14,21,22,25,26,27,28
III 11,12,16
IV 17,18
V 19,20
VI 5
VII 15
VIII 23
За результатами ампл1ф1кацп випадково пол1морфно! ДНК дослщжуваних штам1в МКБ можна встановити ix м1жродинш зв'язки та стверджувати про ix гетерогенш властивосп всередиш родини Lactobacteriaceae. Встановлення родинних зв'язюв кожного виду та щентифшащя на видовому i штамовому piBHi вимагатиме застосування шших молекулярно-генетичних метод1в анал1зу.
Висновки. Щдсумовуючи проведену роботу, вважаемо застосування методу RAPD-PCR доцшьним при визначенш р1зномаштносп МКБ в кшьюсному вщношенш, але не найкращим з точки зору яюсного анал1зу. Оск1льки, молочнокисла флора, яка ¿зольована i3 овечого сиру Карпатського perioHy Укра!ни, не вивчена абсолютно, то використання методу RAPD-PCR е початковим етапом в И досл1дженн1. За анал1зом електрофоретичних зн1мк1в, можемо стверджувати, що бактер1альна флора досл1джуваного овечого сиру е р1зноман1тна i волод1е досить гетерогенними властивостями, оск1льки И не вдалося пор1вняти i3 референтними штамами.
Перспективи подальших досл1джень. Подальш1 досл1дження будуть спрямован1 на застосування додаткових метод1в досл1дження. Одним i3 таких метод1в е анал1з пол1морф1зму довжин рестрикцшних фрагмент1в (RFLP-PCR), який при сшвввставленнш i3 уже отриманими результатами дасть можлив1сть б1льш детально охарактеризувати ¿зольовану молочнокислу флору i3 овечого сиру. Однак, визначення остаточно! приналежност1 ¿золят1в МКБ можливо провести i3 застосуванням секвенування гена 16S рРНК або пол1морфно! д1лянки м1ж генами 16S i 23S рРНК.
Л1тература
1. Bondarenko V. М. i drugie. Probiotyky i mehanizmy ih lechebnogo deystvija [Probiotics and their mechanisms of therapeutic action] Eksperymentalna klinicheskaja gastroenterologija, 2004. no. 3. pp. 83 - 87 (in Ukrainian).
2. Herich R., Levkutvet M., (2002) Lactic acid bacteria, probiotics and immune system. Vet. Med. - Czech, 47, (6): 169-180.
3. Kovalenko N. K., Laschevskyy V. V. Primenenija metoda polymeraznoj tsepnoj reaktsii (PCR) dlja identyfikatsij molochnyh bakterij [Application of the polymerase chain reaction (PCR) for identification of lactic acid bacteria]. Molochna promyslovist' — Dairy Industry, 2003 vol. 1, no 4, pp. 24-25 (in Ukrainian).
4. Tingej S. V., del Tufo J. P. Genetic analysis with random amplified polymorphic DNA markers Plant Physiol, 1993, 101, pp. 349-352.
209
5.Bouchet V., H. Huot, R. Goldstein (2008) Molecular genetic basis of ribotyping. Clin. Microbiol. Rev. April 2008 vol. 21 no. 2 262-273.
6. Точилина А. Г. Индикация и идентификация бактерий рода Lactobacillus с использованием полимеразной цепной реакции/ Точилина А. Г., Новикова Н. А., Соколова К. Я., Соловьева И. В., Белова И. В., Иванова Т. П .// Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. - 2008, №3. - С. 69-73.
7. Mora D., Ricci G., Guglielmetti S., Daffonchio D., Fortina M. G. (2003) 16S-23S rRNA intergenic spacer region sequence variation in Streptococcus thermophiles and related dairy streptococci and development of a multiplex iTS-SSCP analysis for their identification. Microbiology 149, 807-813.
Стаття надшшла доредакци 24.03.2015
УДК 636.2.082
Соколова Г. О., к. с.-г. н., доцент (sokolovagalya56@ukr.net)1;
Ковальчук Н. А., к. вет. н., м. н. с.2; Попадюк С. С., к. с.-г. н., доцент1.
1Льв1вський нац^ональнийумверситет ветеринарногмедицини та 6iomexHonoziü iмем С. 3. Гжицъкого, м. Льв1в, Украгна;
21нститут бгологгг теаринНААН, м. Лъвiв, Украгна.
ЕКСТЕР'СР ТА РОБОТОЗДАТШСТЬ КОНЕЙ yKPAÏHCbKOÏ BEPXOBOÏ
ПОРОДИ Р13НИХ Л1Н1И В УМОВАХ ИРАТ «РАЙЗ-МАКСИМКО» (ЯПЛЬИИЦЬКИЙ К1ИИИЙ ЗАВОД)
npoMipu та жвав1сть е основными показниками, якг характеризуютъ роботоздатмстъ та розеиток верхового коня. Базуючисъ на зв'язку м1ж npoMipaMU та жвав1стю, встановлено, що роботоздатмстъ коней можна прогнозувати за показникамиросту молодняку.
Було проведено вивчення екстер'еру (на ocHoei взяття 4-х основних npoMipie та вирахування mdeKcie будови mina) та роботоздатност1 коней украгнськог eepxoeoï породи pi3HUX лтт. Встановлено, що особливоï р1зниц1 за величиною npoMipie у коней pi3HUX лтт не спостер1галося. Проте сл1д зауважити, що незначно быъшими лгнгйними показниками вгдзначилися kohí р!зного вгку з лтп Фактотума.
Що стосуетъся po6omo3damHOcmi, то сл1д зазначити, що кращ1 резулътати у конноспортивных змаганнях i заводсъкых выпробуваннях показалы також представныкы з лтп Фактотума i це стосуетъся коней ecix вжовых категорий.
Ключовг слова: kohí, екстер'ер, роботоздатмстъ, укратсъка верхова порода, лШя, npoMipn, тдексы, трентг, выпробування, жвав1стъ.
УДК 636.2.082
Соколова Г. А., к. с.-х. н., доцент (sokolovagalya56@ukr.net)1;
Ковальчук Н. А., к. вет. н., м. н. с. ; Попадюк С. С., к. с.-х. н., доцент . 1Лъвовсъкый национальный уныверсытет ветерынарной медыцыны и быотехнологый ымены С. 3. Гжицкого, г. Львов, Украына; 2Институт биологии животныхНААН,
г. Львов, Украина
ЭКСТЕРЬЕР И РАБОТОСПОСОБНОСТЬ ЛОШАДЕЙ УКРАИНСКОЙ ВЕРХОВОЙ ПОРОДЫ РАЗНЫХ ЛИНИЙ В УСЛОВИЯХ ПрАТ «РАЙЗ-МАКСИМКО» (ЯГОЛЬНИЦКИЙ КОННЫЙ ЗАВОД)
Промеры и резвость являются основными показателями, характеризующимиработоспособность и развитие верховой лошади. Основываясь на связи между промерами и резвостью, установлено, что работоспособность лошадей можно прогнозировать по показателям роста молодняка.
Было проведено изучение экстерьера (на основании 4-х основных промеров и индексов телосложения) и работоспособности лошадей украинской верховой
210
