CC BY
132
УДК 619:615.33.637
ИДЕНТИФИКАЦИЯ КОРМОВОГО АНТИБИОТИКА ЦИНКБАЦИТРАЦИНА
МЕТОДОМ ВЭЖХ
Хайруллин Д.Д. - к.б.н,*Галяутдинова Г.Г. - к.б.н., *Босяков В.И.- вед. инженер,* Шангараев Н.Г. - зав. лаб., *Егоров В.И. - к.б.н. ФГБОУ ВО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э.Баумана» *ФГБНУ «Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности»
Ключевые слова: антибиотик, цинкбацитрацин, высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ), комбикорм.
Key words: antibiotic, zincbacitracin, high performance liquid chromatography (HPLC), compound feed.
Ученые прогнозируют всплеск производства и применения в животноводстве прямых и косвенных добавок, стимулирующих рост животных. Важнейшее место среди них занимают антибиотики.
К кормовым антибиотикам относят препараты, при введении которых в рационы животных и птицы улучшается обмен веществ, повышается коэффициент использования кормов, активизируется резистентность организма. Вследствие этого молодые животные лучше развиваются и быстрее растут, снижается их заболеваемость и сокращается отход. При рациональном применении кормовых антибиотиков в условиях правильного кормления и содержания животных повышается прирост массы тела, снижается расход кормов на единицу продукции и себестоимость мяса, сокращается период откорма.
Снижение продуктивности может быть вызвано стойловым утомлением животных, зависящим от степени зараженности окружающей среды микробами. Введение в раци-
он антибиотиков устраняет их неблагоприятное воздействие на организм.
В России в качестве кормовых (росто-стимулирующих) препаратов разрешено использовать только антибиотики немедицинского назначения, не применяющиеся в ветеринарной практике как лечебные и профилактические средства. В корма разрешается добавлять препараты антибиотика бацитра-цина, вырабатываемые промышленным способом. Промышленность для этого выпускают следующие препараты бацитрацина: ба-циллихин-10, бациллихин-20, бациллихин-30, в 1 г которого содержится соответственно 10, 20 или 30 мг антибиотика бацитрацина.
Препараты антибиотиков вводят в комбикорма в соответствии с дифференцированными нормами, приведенными в таблице. Указанными нормами необходимо руководствоваться при разработке рецептов комбикормов, премиксов, белково-витаминных добавок, заменителей цельного молока и при изготовлении полнорационных комбикормов [1, 2].
Таблица 1 - Нормы добавки антибиотиков в полнорационные комбикорма для сельскохозяйственной птицы и молодняка свиней (1 г чистого вещества на 1 т)
Бацитрацин Гризин Тетрациклины (по хлор-тетрациклину-биомицину)
Цыплятам: 30 4,0 30
от 1 до 30 дней
от 31 до 90 дней 20 2,0 20
Бройлерам:
от 1 до 30 дней 30 4,0 30
от 31 до 70 дней 20 2,0 20
Поросятам 2-4-месячным 20 2,0 20
Свиньям (мясной и беконный от- 15 2,0 15
корм)
Однако, эффективное использование антибиотиков возможно лишь при соблюдении требований дозированного использования препаратов в соответствии с установленными нормами, равномерное смешивание с кормами, своевременное исключение из рациона перед сдачей животных на убой.
Нарушение этих условий приводит не только к снижению эффективности от применения антибиотиков, но и может вызывать ряд нежелательных последствий, вплоть до возникновения опасности для здоровья человека.
На сегодняшний день не изучено наиболее перспективное направление оптимизации качественного и
количественного определения
цинкбацитрацина методом
высокоэффективной жидкостной
хроматографии (ВЭЖХ).
Целью данных исследований стал поиск оптимальных режимов и условий хроматографирования методом ВЭЖХ для идентификации антибиотика
цинкбацитрацина.
Материалы и методы исследований. Искусственная затравка корма проводилась стандартным раствором цинкбацитрацина, с содержанием действующего вещества не менее 90% (European Pharmacopeia Reference Standard). Образцы корма, свободные от антибиотика, были использованы в качестве контрольного материала. Все химические вещества и растворители были аналитической или ВЭЖХ класса.
Экспериментальные работы
проводились на жидкостном хроматографе Spectra-Physics Spectra 100 с УФ детектором. Разделение проводилось на колонке (250:4 мм) Reprosil ODS - 18 (5 мкм). Объем вкола -20 мкл. Скорость потока - 1мл/мин. Состав подвижной фазы: 0,3 М КН2РО4 в воде рН 6.0 - метанол ацетонитрил (v/v/v - 40/45/15). Температура колонки - 30оС.
Результаты исследований.
Бацитрацин - смесь полипептидных антибиотиков, причем каждое вещество в смеси обладает сложной структурой.
Бацитрацин представляет собой полипептидный антибиотик с различными активными компонентами в виде Аь Вь В2 и
В3, обладающие основным терапевтическим значением, в то время как бацитрацин F представляет собой продукт разложения, который показывает нейротоксичность. Это означает, что анализ содержания бацитрацина в пробах - непростая задача. Кроме того, в качестве кормовых добавок используются смеси, содержащие и другие вещества различного происхождения и целевого назначения. Это еще больше осложняет определение бацитрацина в кормах и пищевых продуктах.
Монография Фармакопии США для цинкбацитрацина включает композиционный тест, который содержит изократические нормы для метода ВЭЖХ, при котором содержание бацитрацина А должно быть не менее 40%, и не менее 70% от суммы бацитрацинов А, В1, В2, В3 и не более 6% от деградации продукта бацитрацина F.
Предел композиции форм бацитрацина служит уровнем качества стандарта цинкбацитрацина [1, 2].
Однако существует проблема восстановления пика бацитрацина А при низких концентрациях. Двухвалентные катионы металлов, такие как Fe2+ и Си2+, как правило, присутствующие в системах ВЭЖХ могут взаимодействовать с бацитрацином, чем можно объяснить его потерю при низких концентрациях [3, 4].
Для того чтобы проверить, что низкое восстановление бацитрацина было связано из-за хелятации с ионами металла, вводили 0,1 М раствор соли динатриевой этилендиаминтетрауксусной кислоты
(ЭДТА) в водной части подвижной фазы. ЭДТА обычно используется в качестве сильного металл-хелатирующего агента для двухвалентных катионов металла,
присутствующих в системе ВЭЖХ [5].
Максимальную чувствительность
бацитрацина измеряли от 0,5% до 100% от уровня концентрации раствора.
Это показало, что добавление ЭДТА к подвижной фазе улучшило перехват до приемлемого уровня.
На рис. 1 представлена хроматограмма с 0,5% концентрацией испытуемого раствора без ЭДТА, как мобильного модификатора фазы.
Рисунок 1 - Хроматограмма с 0,5% концентрацией испытуемого раствора без ЭДТА
Эти данные свидетельствуют о том, что потери в процессе восстановления были вызваны взаимодействием в системе ВЭЖХ. На рис.2 показана хроматограмма с 0,5%
концентрацией испытуемого раствора при условии добавления ЭДТА в подвижной фазе.
АЦП-1, мВ АЦП-1 Время, МИН Компонент
Рисунок 2 - Хроматограмма с 0,5% концентрацией испытуемого раствора с добавлением ЭДТА
Пики бацитрацинов А, В1, В2, В3 были восстановлены. Модифицированная
подвижная фаза была успешной в выявлении бацитрацина при всех концентрациях необходимых для исследования.
Заключение. Низкое обнаружение пиков бацитрацина А, В1, В2, В3 вызвано способностью данного антибиотика образовывать комплексы с ионами металлов в системе ВЭЖХ. Добавление небольшого количества ЭДТА позволило предотвратить это явление.
Метод добавления ЭДТА в подвижную фазу увеличил чувствительность анализа при определении цинкбацитрацина.
Таким образом, при условии добавления раствора соли динатриевой этилендиаминтетрауксусной кислоты
(ЭДТА) в водную часть подвижной фазы ВЭЖХ увеличивается чувствительность анализа при определении цинкбацитрацина в кормах.
ЛИТЕРАТУРА:
1. Барам, Г.И. Новые возможности высокоэффективной жидкостной хроматографии в фармакопейном анализе / Г.И. Барам, Д.В. Рейхарт, Е.Д. Гольдберг // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2003. - Т. 135. - № 1. - С.75-79.
2. Барам, Г.И. Высокоэффективная жидкостная хроматография в контроле
качества лекарственных средств / Г.И.Барам, Д.В. Рейхарт, Е.Д. Гольдберг // Фарматека. -2005. - № 2. - С. 12-16.
3. Луговской, А.А. Разработка и валидация определения антибиотиков фторхинолового ряда в куриных яйцах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии / А.А.Луговской // Ветеринария сегодня. - 2016. - № 1. - С. 3036.
4. Потехин, А.В. Мониторинг антибиотикорезистентных изолятов Actino-
bacillus Pleuropneumoniae, выделенных в Российской Федерации в 2012-2014 гг. / А.В.Потехин // Ветеринария сегодня. - 2016. - № 1. - С. 24-26.
5. Validation of an analytical methodology for determination of tetracyclines residues in honey by UPLC - MS/MS detection Indian Journal of Natural Products and Resources. / S.P.Singh, A.Pundhir // Natural Products and Resources. 2015. - Vol. 6(4). - C. 293-298.
ИДЕНТИФИКАЦИЯ КОРМОВОГО АНТИБИОТИКА ЦИНКБАЦИТРАЦИНА МЕТОДОМ ВЭЖХ
Хайруллин Д.Д., Галяутдинова Г. Г., Босяков В.И., Шангараев Н.Г., Егоров В.И.
Резюме
На основе проведенных исследований методом ВЭЖХ, при использовании УФ детектора, произведен анализ состава цинкбацитрацина. Установлено, что добавление эквимолярного количества ЭДТА в мобильную фазу увеличивает эффективность разделения компонентов, приводящее в итоге к повышению чувствительности ВЭЖХ анализа.
IDENTIFICATION OF THE FEED ANTIBIOTIC ZINC BACITRACIN BY HPLC METHOD
Khairullin D.D., Gаlyautdinova G.G., Bosyakov V.I., Shangaraev N.G., Egorov V.I.
Summary
On the basis of testes by HPLC method, using UV detector, was analysed a composition of zinc bac-itracin. It has been established, that the addition of an equimolar amount of EDTA into the moving mobile phase increases the efficiency of separation of components, resulting in an increased sensitivity of HPLC analysis.
УДК636.52/58:612.1:616-089.165
ГЕМАТОЛОГИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ РЕМОНТНОГО МОЛОДНЯКА ПТИЦЫ ПОД ВЛИЯНИЕМ ПРЕПАРАТА АРГОДЕЗ
Цыганков Е.М. - аспирант, Менькова А.А. - д.б.н., профессор, *Андреев А.И. - д.с.-х.н.,
профессор
ФГБОУ ВО «Брянский государственный аграрный университет» *ФГБОУ ВО «Национальный исследовательский Мордовский государственный университет
им. Н.П. Огарева»
Ключевые слова: кровь, цыплята, наночастицы, газация. Key words: blood, chickens, nanoparticles, gassing.
В современное время серебро рассматривается, как микроэлемент, необходимый для нормального функционирования внутренних органов и систем, а также как мощное средство, активно действующее на болезнетворные бактерии и вирусы [1].
Щвейцарским ботаником Карлом Негели был изучен механизм действия серебра на микробную клетку. В 80-е годы 19 века он установил, что ионы металла серебра взаимодействия с клетками микроорганизмов вызывают их гибель. Ученый доказал, что серебро
