CC BY
49
34 МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»
годных для их последующей конденсации с другими био- Заключение. Проведена иммобилизация pHLIP на МНЧ молекулами или МНЧ. на основе Fe3O4. pHLIP был закреплен на поверхности Работа выполнена при финансовой поддержке РФФИ(№ 14-03- 3-аминопропилсилан-модифицированных МНЧ при ис-00146-а) и УрОРАН(№ 15-21-3-6). пользовании гетерофункционального линкера EMCS. Полученные МНЧ-pHLIP малотоксичны, а по своим МР-кон- A.М. Дёмин1, А. Г. Першина2, В. В. Иванов2, трастным свойствам сопоставимы с рядом коммерческих О. Б. Шевелев3, К. В. Невская2, Д. О. Ащеулова2, препаратов и могут быть использованы для создания в даль- B.П. Краснов1, А.Э. Сазонов2, Л.М. Огородова2 нейшем препаратов для МР-диагностики. СИНТЕЗ НАНОГИБРИДНОЙ КОНСТРУКЦИИ Работа выполнена при финансовой поддержке Российского на-НА ОСНОВЕ МАГНИТНЫХ НАНОЧАСТИЦ FE3O4, учного фонда (проект № 14-15-00247). ФУНКЦИОНАЛИЗИРОВАННЫХ рН-ЗАВИСИМ I4! М ПЕПТИДОМ (PHLIP), ДЛЯ МАГНИТНО-РЕЗОНАНСНОЙ А.М. Дёмин1, А.Г. Першина2, А.Э. Сазонов2, ВИЗУАЛИЗАЦИИ ЗОН ЛОКАЛЬНОГО АЦИДОЗА Л. М. Огородова2, В. П. Краснов1 1ФГБУН«ИОС им. И.Я. Постовского УрО РАН», Екатеринбург; ХИМИЧЕСКАЯ МОДИФИКАЦИЯ МАГНИТНЫХ 2ГБОУВПО СибГМУМинздрава России, Томск; НАНОЧАСТИЦ ПЕПТИДАМИ И БЕЛКАМИ 3ФГБНУИЦГ СО РАН, Новосибирск 1ФГБУН«ИОС им. И.Я. Постовского УрО РАН», Екатеринбург; Введение. Пептиды pHLIPs (pH Low Insertion Peptides) — 2ГБОУ ВПО СибГМУ Минздрава России, Томск класс гидрофобных пептидов, способных встраиваться Введение. Наноматериалы на основе магнитных нано-в мембраны клеток при низких значениях рН. Известно, частиц (МНЧ), в первую очередь Fe3O4, часто используются что опухолевые ткани имеют пониженную pH межклеточ- как диагностические (в том числе для магнитно-резонансного пространства. Поэтому pHLIP может служить моле- ной томографии или магнитной релаксометрии) и терапев-кулярным вектором для транспортировки лекарственных тические (гипертермия) агенты, в качестве систем фарма-веществ или, например, магнитных наночастиц (МНЧ) цевтической доставки лекарственных средств, применяемых в опухоль. Таким образом, можно получить высокоэффек- в онкологии и других областях. тивные диагностические препараты для использования Цель исследования — разработка подходов к модифи-в онкологии. кации МНЧ пептидами и белками визуализирующих ди-Цель исследования — разработка нанобиогибридной агностических агентов и препаратов для терапии онколо-конструкции на основе МНЧ, модифицированных сила- гических заболеваний. новыми производными и функционализированных за счет Материалы и методы. В работе использованы МНЧ формирования ковалентной связи с рН-чувствительным на основе Fe3O4 диаметром 10 нм, полученные методом пептидом, предназначенной для выявления зон локально- осаждения из растворов солей Fe3+ и Fe2+. МНЧ предвари-го ацидоза in vivo методом магнитно-резонансной (МР) тельно функционализировали 3-аминосиланом (МНЧ-томографии. NH2) (ковалентно) или ^(фосфонометил)иминодиуксус-Материалы и методы. Для получения нанобиогибрид- ной кислотой (МНЧ-СООН) (нековалентно). В работе ной конструкции использовали МНЧ Fe3O4 диаметром 10 нм, использованы методы инфракрасного, ультрафиолетового полученные методом осаждения из растворов солей Fe3+ излучения, флуориметрии и масс-спектроскопии высоко-и Fe2+. Наночастицы охарактеризованы методами инфра- го разрешения и др. красной спектроскопии, сканирующей и просвечивающей Результаты. Иммобилизацию на функционализиро-электронной микроскопии, динамического рассеяния све- ванные МНЧ можно проводить путем конденсации амино-та. Проведены исследования МР-контрастных свойств или карбоксильных групп на их поверхности со свободными in vitro и in vivo (Bruker, Biospec 117/16 USR, Германия). карбоксильными или аминогруппами белка (или пептида) Результаты. МНЧ модифицировали 3-аминопропил- соответственно при использовании карбодиимидов. На при-силаном, далее проводили конденсацию малеимидного мере конъюгации МНЧ с pHLIP флуоресцентным белком кросс-линкера EMCS, имеющего активированную гидрок- TagGFP2 и антителами к CD117 изучены процесс иммо-сисукцинимидом карбоксильную группу, с аминогруппами билизации пептидов и белков на поверхность МНЧ при на поверхности МНЧ. Иммобилизация pHLIP на МНЧ использовании 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)кар-проведена за счет нуклеофильного присоединения SH- бодиимида (EDC) и возможность протекания побочных группы L—Cys данного пептида к двойной связи остатка процессов, связанных с поликонденсацией молекул пеп-малеимида. В результате получена наногибридная кон- тидов и белков в присутствии карбодиимида. Реакции про-струкция МНЧ — pHLIP, в которой пептид закреплен водили в фосфатном буферном растворе (рН 7,5) при ис-на поверхности ковалентно. МР-контрастные свойства пользовании эквимольных количеств EDC в расчете на МНЧ подтверждены исследованиями in vitro и in vivo, эф- количество функциональных групп на поверхности МНЧ. фективное контрастирование патологической ткани дости- В случае МНЧ-СООН на 1-м этапе проводили активацию гается при введении наноконъюгата в дозе 0,6 мг/кг, сопо- карбоксильных групп EDC, после чего добавляли соответ-ставимой с дозами введения ряда коммерческих препаратов, ствующий аминокомпонент. В случае МНЧ-NH EDC до-например Feridex. По данным ЛДГ- и МТТ-тестов полу- бавляли в реакционную массу в присутствии карбоксиль-ченный наноконъюгат в концентрации до 40 мкг/мл ной компоненты. не оказывал выраженного токсического действия in vitro Заключение. Разработаны химические подходы к по-на клетки линии HTC. лучению МНЧ-конъюгатов с пептидами и белками. Пока-
№1 / том 15 / 2016 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»
35
зано, что в выбранных условиях возможность протекания побочных процессов поликонденсации незащищенных пептидов и белков при использовании карбодиимидов незначительна.
Работа выполнена при финансовой поддержке Российского научного фонда (проект № 14-15-00247) в части синтеза и МРТ-ис-следований наноконъюгатов МНЧ-pHLIP и TagGFP2. А также РФФИ (№ 14-03-00146-а) и УрО РАН(№ 15-21-3-6) в части синтеза наноконъюгатов MH4-CD117.
А. С. Дерюжкин1, Ю.Н. Потапов2
СРАВНИТЕЛЬНОЕ МОРФОЛОГИЧЕСКОЕ
ИССЛЕДОВАНИЕ КЛЕТОЧНЫХ ПОПУЛЯЦИЙ
ПЛОСКОКЛЕТОЧНОГО РАКА ГОРТАНИ
И ЛЕГКОГО
БУЗ ВО ВОПБ, Воронеж;
2БУЗ ВО ВОКОД, Воронеж
Введение. С определенным допущением можно сказать, что плоскоклеточный рак гортани и легкого представлен разными клеточными популяциями. Это следует, например, из различий в эффективности лучевой и химиотерапии при лечении больных раком гортани и легкого одинакового гистогенеза.
Цель исследования — выявление различий в пролиферации клеток плоскоклеточного рака гортани и легкого.
Материалы и методы. Исследованы опухоли 180 больных плоскоклеточным раком гортани и 160 пациентов с плоскоклеточным раком легкого. После рутинного гистологического исследования и подтверждения диагноза плоскоклеточного рака методом иммуногистохимического анализа срезы части опухолей окрашивали антителами к Ki67 и р53. В готовых препаратах определяли долю позитивных к данным антителам опухолевых клеток.
Результаты. В популяциях исследованных опухолей обеих локализаций имело место практически отсутствие новообразований высокой и низкой степеней дифферен-цировки. Среди опухолей гортани было 2 случая высоко-дифференцированного рака и 1 — низкодифференцирован-ного. Среди опухолей легкого выявлены 4 случая рака высокой степени дифференцировки и 2 случая низкой степени дифференцировки. Средняя доля Ю67-положи-тельных клеток составила соответственно 17,5 и 25,0 % в высокодифференцированных новообразованиях гортани и легкого. В низкодифференцированных опухолях гортани и легкого доля Ю67-положительных клеток была равна соответственно 80 и 70 %. При сравнении двух групп, включавших по 15 случаев умеренно-дифференцированного рака гортани и легкого, выявлено, что пролифератив-ная активность клеток в этих новообразованиях практически не различалась: средний Ki67 при раке гортани составил 49,2 % при разбросе от 30 до 70 %, при раке легкого — 50,2 % (колебания 43—72 %). Экспрессия мутант-ного гена p53 имела место во всех исследованных случаях умеренно-дифференцированного рака гортани со средней долей клеток в опухоли 48,9 % (колебания 10—70 %). В 4 из 15 случаев умеренно-дифференцированного рака легкого клетки опухоли не экспрессировали мутантный ген p53, а в 11 опухолях среднее количество клеток с его гиперэкспрессией составила 47,1 % (разброс 17—97 %).
Заключение. Среди популяций плоскоклеточного рака гортани и легкого преобладают умеренно-дифференцированные новообразования, в которых нет зависимости интенсивности клеточного деления от локализации опухоли. Популяция умеренно-дифференцированного рака легкого более гетерогенна по способности клеток к р53-опосредо-ванному апоптозу, но в опухолях, где имеются клетки, экс-прессирующие этот антиген, доля таких клеток одинакова в новообразованиях обеих локализаций. Отсутствие значимых отличий по параметрам пролиферации клеток при раке гортани и легкого позволяет предположить, что их различная чувствительность к цитотоксическим воздействиям определяется другими характеристиками клеточных популяций.
Е.В. Долгова, Е.А. Поттер, А. С. Проскурина, С. С. Богачев СВОЙСТВО СТВОЛОВЫХ ИНИЦИИРУЮЩИХ РАКОВЫХ КЛЕТОК ИНТЕРНАЛИЗОВАТЬ ЭКЗОГЕННУЮ ДВУЦЕПОЧЕЧНУЮ ДЕЗОКСИРИБОНУКЛЕИНОВУЮ КИСЛОТУ И ЕГО ПРАКТИЧЕСКОЕ ПРИМЕНЕНИЕ ФГБНУИЦГ СО РАН, Новосибирск
Введение. В настоящее время общепризнанной остается модель строения опухоли, где на вершине иерархической лестницы находятся стволовые инициирующие раковые клетки (СИРК). Основными свойствами, характерными для СИРК, являются самоподдержание в ряду неограниченного числа делений, способность производить комми-тированную дочернюю клетку, устойчивость к многократной пересадке с сохранением гистологических характеристик опухоли. Индивидуализация СИРК в массе опухолевых клеток является необходимым условием терапевтического изменения статуса раковой клетки или ее прямой элиминации.
Цель исследования — поиск принципиально нового универсального маркера низкодифференцированных клеток различного генеза, включая СИРК, и характеристика возможных направлений его применения в диагностике и лечении онкологических заболеваний.
Материалы и методы. Экспериментальными моделями исследования являлись мышиная опухоль Кребс-2, а также человеческая глиома. В качестве экзогенной дезоксирибо-нуклеиновой кислоты (ДНК) использовали меченную флу-орофором TAMRA ДНК человеческого АИ-повтора. В исследовании использовались современные молекулярные и цитологические методы работ, такие как проточная ци-тометрия, флуоресцентная и конфокальная микроскопия, а также физиологические методы работы с лабораторными животными.
Результаты. В настоящей работе впервые показано, что в различных сообществах активно пролиферирующих клеток млекопитающих присутствует популяция клеток, способная интернализовать фрагменты двуцепочечной ДНК (TAMRA-позитивные клетки), и что эта популяция в сообществах раковых клеток обладает признаками СИРК. Впервые приводятся данные (на модели опухоли Кребс-2) о том, что совместная обработка цитостатиком циклофос-фаном и препаратом двуцепочечной ДНК приводит к эра-дикации туморогенных свойств перевиваемого графта,
№1 / том 15 / 2016
РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
