CC BY
108
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2017 удк 616.33-002.2-022:579.835.12]-07
Плавник р.Г.1, рапопорт С.и.2, Плавник К.р.3, Эльман А.р.4, невмержицкий В.и.5
«хеликарб» — первый Российский дыхательный тест с ^-мочевиной 99 % обогащения на HELICOBACTER PYLORI: от идеи До регистрации
'ГАОУ ВО «Российский университет дружбы народов», 117198, Москва;
2ФГБОУ ВО «Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова» Минздрава
России, 119991, Москва;
3ООО «ИЗОКАРБ», 121069, Москва;
4ООО «Ростхим», 111024, Москва;
5ФГБОУ ВПО «Московский государственный физико-технический институт», 117303, Москва
Настоящее исследование выполнено с целью разработки для применения в практической медицине первого российского тест-набора для 13С-уреазного дыхательного теста на Helicobacter pylori с 13С-мочевиной 99% обогащения. Созданный тест-набор, получивший коммерческое название «ХЕЛИКАРБ», успешно прошел технические, токсикологические, клинические и клинико-лабораторные испытания, определены оптимальные дозы 13С-мочевины, проведена сравнительная оценка разных приборов, применяемых при выполнении теста. По результатам испытаний Федеральной службой по надзору в сфере здравоохранения (Росздравнадзор) выдано регистрационное удостоверение № РЗН 2016/3773 (приказ от 29.02.16 г. № 1641), дающее право производства и медицинского применения тест-набора «ХЕЛИКАРБ» на территории Российской Федерации.
Ключевые слова: 13С-уреазный дыхательный тест; C-мочевина; Helicobacter pylori; «ХЕЛИКАРБ»; масс-спектрометрия; инфракрасная спектрометрия.
для цитирования: Плавник Р.Г., Рапопорт С.И., Плавник К.Р., Эльман А.Р., Невмержицкий В.И. «Хеликарб» — первый российский дыхательный тест с 13С-мочевиной 99 % обогащения на Helicobacter pylori: от идеи до регистрации. Клин. мед. 2017; 95(1): 78—84. DOI http://dx.doi.org/10.18821/0023-2149-2017-95-1-78-84
для корреспонденции: Плавник Роман Генрихович — генеральный дир. ООО «ИЗОКАРБ; e-mail: 1175459@gmail.com
Plavnik R.G.1, Rapoport S.I.2, PlavnikK.R.3, Elman A.R.4, Nevmerzhitskiy V.I.5 «HELICARB» — THE FIRsT RussiAN BREATH TEsT KIT wiTH 99% 13C-DREA FOR HELICOBACTER PYLORI: FROM IDEA TO REGISTRATION
'Peoples Friendship University of Russia, 117198 Moscow, Russia;
2I.M. Sechenov First Moscow State Medical University, 119991 Moscow, Russia;
3«ISOCARB» 121069 Moscow, Russia;
4«Rostchim», 111024, Moscow, Russia
5Moscow Institute of physics and technology, 141701 Dolgoprudnuy, Russia
The present study was aimed to develop and introduce in medical practice the first Russian kit for the 13C-urea breath test of Helicobacter pylori. The newly created kit was given the commercial name «HELICARB» and successfully passed technical,
toxicological, clinical, and laboratory testing. The optimal dose of 13C-urea was determined and various devices needed
to perform the test were compared. The results were approved by the Federal Service for Supervision in the health sector Roszdravnadzor) that issued the Registration certificate № RZN 2016/3773 (order № 1641 of 02.29.2016), which gives the right to manufacture and use the «HELICARB» test kit at the territory of the Russian Federation.
K e y w o r d s: 13C-urea breath test; 13C-urea; Helicobacter pylori; «HELICARB»; mass spectrometry; infrared spectrometry.
For citation: Plavnik R.G., Rapoport S.I., Plavnik K.R., Elman A.R., Nevmerzhitskiy V.I. «HELICARB» — the first Russian breath test
kit with 99 % 13C-urea for Helicobacter pylori: from idea to registration. Klin. med. 2017; 95 (1): 78—84. DOI http://dx.doi.org/10.18821/0023-2149-2017-95-1-78-84
For correspondence: Roman G. Plavnik director-general, «ISOCARB» 121069, Moscow, Russia; e-mail: 1175459@gmail.com Conflict of interest. The authors declare no conflict of interest. Acknowledgments. The study had no sponsorship.
13С-уреазный дыхательный тест (13С-УДТ) для не-инвазивной диагностики обсемененности слизистой оболочки желудка Helicobacter pylori впервые был выполнен в 1987 г. в Великобритании D. Graham и соавт. [1]. В 2000 г. Маастрихтским консенсусом II он был утвержден в качестве золотого стандарта в диагностике хеликобактериоза [2]. В настоящее время только в США (при показателе обсемененности H. pylori не более 30 [3]) выполняется от 5 до 7 млн 13С-УДТ в
Received 22.03.16 Accepted 22.03.16
год [4], в то время как в России (при показателе обсемененности H. pylori, достигающем 70%) выполняется не более 15—20 тыс. 13С-УДТ в год. Основными причинами отставания России, на наш взгляд, являются абсолютное отсутствие на рынке тест-наборов с 13С-мочевиной 99% обогащения и относительная дороговизна приборов, применяемых для 13С-УДТ [5]. Существующие ныне тест-наборы, зарегистрированные для применения в Российской Федерации,
В помощь практическому врачу
либо содержат 13С-мочевину 28—32% обогащения («13С-КАРБАМИД-ТЕСТ»), что негативно влияет на показатели диагностической информативности метода, либо используют 13С-мочевину 98% обогащения, но производимую в США («ПИЛОРИ-ТЕСТ») [6], что в современных экономических условиях делает практически невозможным их промышленное производство в России [5].
Целью настоящего исследования явились разработка и внедрение в практическую медицину первого российского тест-набора для 13С-УДТ с 13С-мочевиной 99% обогащения, которая синтезируется из сырья отечественного производства и соответствует всем требованиям, предъявляемым к тест-наборам для качественного выполнения 13С-УДТ в больших объемах. Для реализации цели исследования были поставлены следующие задачи:
• поиск отечественного сырья (13С02, 99%) для производства 13С-мочевины;
• разработка и осуществление химического синтеза 13С-мочевины 99% обогащения в лабораторных условиях;
• брендинг и комплектация тест-наборов;
• разработка нормативной документации для тест-набора с 13С-мочевиной 99% обогащения, включающей технические условия (ТУ), инструкцию по применению, опытно-промышленный регламент производства;
• утверждение нормативной документации в установленном порядке;
• производство опытных серий тест-наборов;
• выбор оптимальных приборов для проведения 13С-УДТ с применением тест-наборов;
• проведение технических и токсикологических испытаний тест-наборов;
• сравнительный анализ тест-набора с аналогами, зарегистрированными для применения в РФ;
• получение разрешения на клинические испытания в Федеральной службе по надзору в сфере здравоохранения (Росздравнадзор);
• проведение клинических и клинико-лаборатор-ных испытаний, исследование диагностической чувствительности, специфичности и точности теста, определение оптимальной дозы 13С-мочевины 99% обогаще -ния в составе тест-набора;
• государственная регистрация тест-набора с получением регистрационного удостоверения;
• разработка и публикация пособия для врачей по применению 13С-УДТ в практической медицине.
1. Сырье для производства "Омочевины 99% обогащения
Сырьем для производства 13С-мочевины 99% обогащения является либо диоксид углерода (13С02), либо моноксид углерода (13СО) с содержанием стабильного изотопа13С в них не менее 99% [7], тогда как природное соотношение стабильных изотопов углерода 13С/12С в обоих веществах составляет 1,11%/98,89%. Увели-
чение содержания изотопа 13С в оксидах углерода до ~99% осуществляют либо методом центрифугирования (для 13С02), либо методом криогенной ректификации (для13СО) с постепенным разделением изотопов с разной атомной массой. Эти технологии дают возможность получать высокообогащенное 13С-изотопное сырье в достаточном количестве по конкурентоспособным ценам. Альтернативные способы разделения изотопов углерода либо значительно сложнее и дороже (ионно-циклотронный резонанс), либо позволяют получить только 28—32% содержание 13С-углерода (лазерное разделение), что является недостаточным для обеспечения высокой точности теста. Основным производителем сырья (13С02 99% обогащения) для производства 13С-мочевины стало предприятие госкорпорации «Росатом» — АО «ПО «Электрохимический завод» (АО «ПО ЭХЗ», Зеленогорск). К настоящему времени предприятием АО «ПО ЭХЗ» произведено и поставлено для синтеза 13С-мочевины около 1000 л 13С02 99% обогащения, отвечающего всем требованиям производства диагностического препарата. В перспективе предприятие планирует выполнение научно-исследовательских и опытно-конструкторских работ с целью многократного увеличения объемов выпуска 13С02 для производства 13С-мочевины и других отечественных 13С-препаратов.
2. Химический синтез "Омочевины для "Оуреазного дыхательного теста
В рамках научно-технической интеграции компанией ООО «Ростхим» (Москва) разработан эффективный способ синтеза 13С-мочевины на базе 13СО методом одностадийного окислительного карбонилирования аммиака (патент РФ 2393141). Метод прост, характеризуется высоким качеством синтеза 13С-мочевины (99 ат.%), малым количеством отходов и практически полным использованием изотопного сырья — наиболее дорогого компонента. С учетом возможных изменений на рынке 13С-изотопного сырья разработан альтернативный метод получения 13СО восстановлением промышленного 13С02 (патент РФ 2319664). Спроектирована, собрана и испытана лабораторная установка синтеза 13С-мочевины производительностью 360 г в месяц. В настоящее время проводятся работы по созданию промышленной технологии производства 13С-мочевины на базе возрастающих объемов выпуска 13С02 производства АО «ПО ЭХЗ». 2
3. Брендинг и комплектация тест-наборов
Первый российский тест-набор для 13С-УДТ с 13С-мочевиной 99% обогащения, созданный в ООО «ИЗОКАРБ», получил коммерческое название «ХЕЛИ-КАРБ». Основу названия составили части двух ключевых слов: «ХЕЛИ» — хеликобактер и «КАРБ» — карбон, углерод. Комплектация тест-набора разработана с учетом возможности выполнения 13С-УДТ с применением как масс-спектрометрии, так и инфракрасной
(ИК)-спектрометрии. На первом этапе было создано два варианта комплектации: А и Б. Вариант А включал флакон объемом 70—100 мл с порошком 13С-мочевины 99% изотопного обогащения в количестве 50 мг —
1 шт., одноразовые пакеты со штуцером для сбора проб выдыхаемого воздуха (для ИК-спектрометрии) —
2 шт., инструкцию по применению тест-набора «ХЕЛИ-КАРБ». Вариант Б включал флакон объемом 70—100 мл с порошком 13С-мочевины 99% изотопного обогащения в количестве 50 мг — 1 шт., пробирки-вакутей-неры для сбора проб выдыхаемого воздуха (для масс-спектрометрии) — 2 шт., пластиковую трубочку для сбора проб выдыхаемого воздуха в пробирки-вакутей-неры — 1 шт., инструкцию по применению тест-набора «ХЕЛИКАРБ». В последующем нами были проведены испытания по взятию проб выдыхаемого воздуха в одноразовые пакеты и пробирки-вакутейнеры. Установлено, что в пробирках положительную пробу выдыхаемого воздуха можно получить только в 94—95% случаев, в 5—6% проба оказывается пустой. Это, на наш взгляд, связано с нечетким выполнением пациентами инструкций по взятию проб. В одноразовых пакетах со штуцерами пробы оказались положительными в 100% случаев. Эти факторы заставили разработчиков практически отказаться от комплектации тест-набора «ХЕЛИКАРБ» в варианте Б и оставить для промышленного производства только вариант А с одноразовыми пакетами.
Для упаковки тест-набора разработан дизайн индивидуальной коробки, включающий данные о названии и комплектности, номер ТУ, номер серии и дату производства набора, срок годности, реквизиты производителя, а также краткую инструкцию по применению с рисунками.
4. Разработка и утверждение нормативных документов
4.1. Технические условия
В соответствии с межгосударственным стандартом ГОСТ 2.114—95 для тест-набора «ХЕЛИКАРБ» разработан нормативный документ ТУ 9398-00134586784—2015, в котором определены следующие требования к тест-наборам: а) технические требования; б) требования безопасности; в) требования охраны окружающей среды; г) требования по утилизации отходов; д) правила приемки и отбора проб; е) методы испытаний; ж) правила транспортировки и хранения; з) указания по эксплуатации; и) гарантии производителя [8]. ТУ 9398-001-34586784—2015 утверждены производителем (ООО «ИЗОКАРБ»), согласованы в испытательном лабораторном центре ФГБУН «НИИ физико-химической медицины» ФМБА России и зарегистрированы в Федеральном агентстве по техническому регулированию и метрологии (каталожный лист № 007896 от 05.03.15).
4.2. Инструкция по применению
В соответствии с приказом Минздрава России от 09.01.14 № 2н разработана инструкция по применению
тест-набора «ХЕЛИКАРБ» 50 мг с 13С-мочевиной 99% обогащения для 13С-УДТ на H. pylori, которая содержит следующие разделы: а) полное наименование изделия;
б) перечень нормативных документов; в) назначение тест-набора; г) механизм действия; д) комплектность;
е) оборудование и материалы для работы с набором;
ж) показания к применению; з) противопоказания; и) диагностическая информативность; к) методика проведения теста; л) регистрация и интерпретация результатов; м) условия хранения, эксплуатации набора и утилизации отходов; н) информация о производителе. Инструкция по применению утверждена ООО «ИЗО-КАРБ» 19.06.2015 г.
4.3. Опытно-промышленный регламент производства
В соответствии с отраслевым стандартом ОСТ 6402-003—2002 «Продукция медицинской промышленности. Технологические регламенты производства. Содержание, порядок разработки, согласования и утверждения» разработан опытно-промышленный регламент производства тест-набора «ХЕЛИКАРБ», в который вошли следующие разделы: а) характеристика продукта; б) технологическая схема производства;
в) аппаратурная схема производства и спецификация оборудования; г) характеристика сырья, вспомогательных материалов и полупродуктов; д) технологический процесс; е) переработка и обезвреживание отходов производства; ж) контроль производства и контроль качества; з) безопасная эксплуатация производства; и) охрана окружающей среды; к) перечень производственных инструкций; л) технико-экономические нормативы.
5. Производство опытных серий тест-наборов
Для проведения технических и токсикологических испытаний тест-наборов «ХЕЛИКАРБ» компания ООО «ИЗОКАРБ» совместно с ООО «Ростхим» в лабораторных условиях в сентябре 2014 г. произвела три опытные серии тест-наборов с 13С-мочевиной 99% обогащения (серия № 140901 — 50 шт., серия № 140902 — 50 шт., серия № 140903 — 50 шт.). Для проведения клинических испытаний в июне—июле 2015 г. были произведены две опытно-промышленные серии тест-наборов «ХЕЛИКАРБ» (серия № 150601 — 100 шт., серия № 150702 — 100 шт.). Все серии наборов прошли предварительные технические испытания на лабораторной базе производителя 13С-мочевины в соответствии с ТУ 9398-001-34586784—2015 с оформлением соответствующих паспортов качества.
6. Выбор оптимальных приборов
для выполнения "c-уреазного дыхательного теста
В настоящее время для определения соотношения 13CO2/12CO2 в выдыхаемом воздухе при выполнении 13С-УДТ применяются масс-спектрометры, ИК-спектрометры и лазерные спектрометры. Все виды спектрометров имеют свои преимущества и не-
достатки, отличаются друг от друга принципом работы, но суть измерения остается неизменной. 13C определяется в виде отношения изотопов 13CO2/12CO2 и выражается как дельта над базовой линией (DOB) в промилле по отношению к международному стандарту PDB (отношение 13C/12C в стандарте PDB установлено Крейгом и составляет 0,0112372 ат.%). С целью сравнения результатов ИК-спектрометрии и масс-спектрометрии при проведении 13С-УДТ, определении диагностической чувствительности, специфичности и точности ИК-спектрометрии по отношению к масс-спектрометрии и оценке возможностей внедрения ИК-спектрометрии для выполнения 13С-УДТ в диагностике хеликобактериоза в 2015 г. нами выполнен 13С-УДТ у 20 добровольцев (6 мужчин и 14 женщин) в возрасте от 18 до 60 лет с применением масс-спектрометрии и ИК-спектрометрии.Результаты исследования показали, что ИК-спектрометрия практически не уступает в точности масс-спектрометрии (по качественному критерию — 96,3%, по количественному критерию — 94,4%), но при этом является существенно менее дорогостоящей и более простой в выполнении. Эти факторы позволили рекомендовать ИК-спектрометры IRIS (Kibion, Швеция) и HCBT-01(Headway, Китай) для применения совместно с тест-набором «ХЕЛИКАРБ» при проведении 13С-УДТ. Материалы исследования опубликованы в журнале «Клиническая медицина» [9].
7. Технические испытания
Технические испытания тест-набора «ХЕЛИКАРБ» проведены в период с 02.02.15 по 11.02.15 в испытательном лабораторном центре ФГБУН «НИИ физико-химической медицины» ФМБА России в форме проведения испытаний, оценки и анализа данных изделия ««ХЕЛИКАРБ» на соответствие национальным законодательным и нормативным документам в части требований безопасности и эффективности (ГОСТР 51088—2013, ГОСТ Р 51352—2013), а также нормированным техническим характеристикам изделия (ТУ 9398-001-34586784—2015).
7.1. Программа и методика испытаний
Для проведения технических испытаний разработаны и утверждены программа и методика приемочных технических испытаний, включающие рассмотрение и изучение технической и эксплуатационной документации, а также экспериментальные исследования в лабораторных условиях с экспертной оценкой образцов тест-набора «ХЕЛИКАРБ».
7.2. Устройство для моделирования in vitro стабильно-изотопных дыхательных тестов. Патент на полезную модель
Для выполнения технических испытаний тест-набора «ХЕЛИКАРБ» в лабораторных условиях разработано и собрано устройство для моделирования in vitro стабильно-изотопных дыхательных тестов (см. рисунок), включающее трехгорлую колбу 3, установленную на магнитной мешалке с нагревателем 4. Каждая
Устройство для моделирования in vitro стабильно-изотопных дыхательных тестов.
Описание в тексте.
из трех горловин колбы герметично закрыта пробкой с запорным механизмом 6. Первая горловина выполнена с возможностью поступления в колбу смеси воздуха и углекислого газа и подсоединена через регулятор расхода газа 2 к баллону со смесью воздуха и углекислого газа 1. Вторая горловина выполнена с возможностью внесения в колбу 13С-мочевины и уреазы определенной активности посредством бюретки 5. Третья горловина выполнена с возможностью выхода из колбы газовой смеси, содержащей 13CO2, для последующего анализа на ИК-спектрометре. При этом газоотводная линия третьей горловины снабжена краном с тонким капилляром, выполненным с возможностью присоединения пакета для сбора пробы выдыхаемого воздуха 7.
Устройство работает следующим образом. В трехгорлую колбу 3 емкостью 2 л, установленную на магнитной мешалке 4 и снабженную трубкой для подачи газа из баллона 1, из бюретки 5 вносят 30 мл фосфатного буфера и расчетное количество раствора уреазы определенной активности. Колбу 3 герметизируют, включают перемешивание, нагрев и при температуре 40°С через раствор в колбе 3 начинают пропускать газ из баллона 1 («выдыхаемый воздух») со скоростью 120— 150 мл/с. Через 5 мин отбирают пробу выходящего газа в вакуумированный пакет 7 объемом 175 мл; при этом соединительную линию предварительно продувают отбираемым газом в течение 3—5 с. Кран штуцера пакета 7 закрывают. Далее, не выключая перемешивание и не прекращая продувку газа, в колбу 3 вводят 50 мл заранее приготовленного анализируемого водного раствора, содержащего 50 мг 13С-мочевины; колбу 3 закрывают, прекращают подачу газа и продолжают перемешивание реакционной массы. Через 30 мин из колбы 3 отбирают пробу газа в вакуумированный пакет 7, присоединенный к капилляру газоотводной линии. Штуцер пакета герметизируют (закрывают кран). Выключают перемешивание и обогрев колбы 3. Полученные пробы газа анализируют на ИК-спектрометре.
На описанное устройство получен патент на полезную модель №155158, приоритет от 04.03.15.
7.3. объем и результаты технических испытаний
В процессе приемочных технических испытаний определялись следующие характеристики: комплектность, упаковка и маркировка тест-наборов, растворимость 13С-мочевины в воде, температура плавления, соответствие ИК-спектра 13С-мочевины спектру эталона, определение массовой доли основного вещества, изотопной чистоты, микробиологической чистоты, влажности 13С-мочевины, аналитической чувствительности теста, а также стабильности изделия при хранении и транспортировке в различных температурных условиях (режимах). Проведенные технические испытания позволили сделать заключение о соответствии тест-набора «ХЕЛИКАРБ» требованиям нормативной, технической и эксплуатационной документации.
8. Токсикологические испытания
Токсикологические испытания тест-набора «ХЕ-ЛИКАРБ» проведены в период с 28.01.15 по 11.02.15 в испытательном лабораторном центре ФГБУН «НИИ физико-химической медицины» ФМБА России. Тест-набор испытан на соответствие национальным законодательным и нормативным документам — ГОСТ ^010993-1—2011 «Изделия медицинские. Оценка биологического действия медицинских изделий», ГОСТ Р 52770—2007 «Изделия медицинские. Требования безопасности. Методы санитарно-химических и токсикологических испытаний» и др. Выполнены санитар-но-химические испытания образцов с исследованием физико-химических показателей (рН, оптическое поглощение, апирогенность, содержание тяжелых металлов, метилового спирта, формальдегида) и токсикологические испытания на лабораторных животных с исследованием биологических показателей (раздражающее действие на кожу и слизистые оболочки, определение острой токсичности, гемолитической активности и индекса токсичности). Результаты токсикологических испытаний показали соответствие тест-набора «ХЕЛИКАРБ» требованиям безопасного применения.
9. Сравнительный анализ тест-набора
«ХЕЛИКАРБ» и аналогов, зарегистрированных для применения в Российской Федерации
Сравнительный анализ тест-набора «ХЕЛИКАРБ»
осуществлен с двумя тест-наборами с 13С-мочевиной
для 13С-УДТ, зарегистрированными Росздравнадзо-ром и разрешенными к применению на территории РФ, а именно: «13С-КАРБАМИД-ТЕСТ» (регистрационное удостоверение № ФСР 2008/01640 от 27.02.08 по ТУ 9398-002-23448306—2006) и «ПИЛОРИ-ТЕСТ» (регистрационное удостоверение № ФСР 2010/07591 от 04.05.10 по ТУ 9398-001-8946443— 2010). Тест-набор«13С-КАРБАМИД-ТЕСТ» содержит 13С-мочевину 28—32% обогащения по изотопу 13С, что является существенным недостатком, так как может
приводить к ложноотрицательным результатам теста по причине недостаточной концентрации изотопа 13С, необходимого для преодоления пороговых значений DOB. Для нивелирования этого недостатка, а также с целью активизации в желудке реакции 13С-мочевины с уреазой, выделяемой H.pylori, в «13С-КАРБАМИД-ТЕСТЕ» применяется лимонная кислота (1—2 г). Это повышает достоверность теста, но одновременно ограничивает его применение у детей и людей с повышенной кислотностью.
Другим тест-набором для проведения 13С-УДТ как у взрослых, так и у детей является «ПИЛОРИ-ТЕСТ». Он содержит 13С-мочевину 99% обогащения, что обеспечивает его высокую достоверность. При этом доза 13С-мочевины (80 мг) разделена на 2 флакона по 40 мг, что увеличивает удобство проведения теста у детей с использованием дозы 40 мг. Вместе с тем тест-набор «ПИЛОРИ-ТЕСТ» тоже имеет ряд существенных недостатков. Технология производства тест-набора полностью зависит от импортных поставок 13С-мочевины, производимой компанией Cambridge Isotope Laboratories (США), что в современных условиях исключает возможность промышленного производства тест-набора «ПИЛОРИ-ТЕСТ», способного обеспечить потребность российского медицинского рынка в тест-наборах для 13С-УДТ.
Оба тест-набора («13С-КАРБАМИД-ТЕСТ» и «ПИЛОРИ-ТЕСТ») включают в свой состав только про-бирки-вакутейнеры, применение которых без строгого соблюдения инструкций по применению в некоторых случаях (до 5%) приводит к получению так называемых нулевых проб (без выдыхаемого воздуха).
Сравнительный анализ тест-набора «ХЕЛИКАРБ» с аналогами представлен в таблице.
10. Клинические и клинико-лабораторные испытания
10.1. Первый этап экспертизы и разрешение Федеральной службы по надзору в сфере здравоохранения (росздравнадзор) на проведение клинических испытаний
По результатам технических и токсикологических испытаний, проведенных Росздравнадзором, проведен первый этап экспертизы тест-наборов «ХЕЛИКАРБ», на основании которого выдано разрешение на проведение клинических испытаний № 663/2015 от 15.07.2015. Клинические испытания проводились в период с 28.07.15 по 2.10.15 в ФГБУЗ «Центральная клиническая больница Российской академии наук». Полномочия на проведение работ по испытаниям:
• лицензия на медицинскую деятельность от 19.03.14 № ФС 99-61-008816;
• включение в Перечень медицинских организаций, проводящих клинические испытания медицинских изделий, в соответствии с приказом Минздрава России от 16.05.13 №300н.
В помощь практическому врачу
сравнительный анализ тест-наборов для "C-удт
Показатель «13С-КАРБАМИД-ТЕСТ» «ПИЛОРИ-ТЕСТ» «ХЕЛИКАРБ»
Производитель ООО «TSD ISOTOPES Ltd.», Россия ООО «Центр медицинских проектов», Россия ООО «ИЗОКАРБ», Россия
Стадия производственного процесса Производится и продается (+) Не производится (-) Подан на регистрацию, готовится к производству (±)
Происхождение 13С-мочевины Россия (+) США (компания CIL) (-) Россия (+)
Изотопное обогащение по изотопу 13С 28—32% (-) 98% (±) 99% (+)
Доза 13С-мочевины (порошок) 75 мг (±) 80 мг (40 мг х 2) (-) 50 мг (+)
Емкость для 13С-мочевины Маленькие (5—10 мл) флаконы с порошком препарата (необходимость пересыпки порошка в другую емкость для растворения в воде) (-) Пенициллиновые (2S10 мл) флаконы с порошком препарата (необходимость пересыпки порошка в другую емкость для растворения в воде) (-) Флакон объемом 75 мл с порошком препарата (растворение водой непосредственно во флаконе) (+)
Емкости для взятия проб выдыхаемого воздуха Пробирки-вакутейнеры (риск получения пустых проб) (-) Пробирки-вакутейнеры (риск получения пустых проб) (-) Одноразовые пакеты (нет риска получения пустых проб) (+)
Потребность в адъювантах для улучшения результатов теста Лимонная кислота (2 г) — плохо переносится пациентами с высокой кислотностью и детьми (-) Отсутствует(+) Отсутствует (+)
Итого ... + + - ±--- - - ± - - - + ± + + + + + +
10.2. исследование диагностической чувствительности, специфичности и точности теста
На первом этапе клинических испытаний выполнено исследование диагностической чувствительности, специфичности и точности 13С-УДТ, которые определяются следующими формулами.
• Чувствительность (Ч) — это способность диагностического метода давать правильный результат, который определяется как доля истинно положительных результатов (по отношению к золотому стандарту) среди всех проведенных тестов. Рассчитывается по формуле: Ч = ИПР/ОКТ • 100%, где ИПР — количество истинно положительных результатов теста; ОКТ — общее количество выполненных тестов.
• Специфичность (С) — это способность диагностического метода не давать при отсутствии заболевания ложноположительных результатов, что определяется как доля истинно отрицательных результатов (по отношению к золотому стандарту) у здоровых обследованных в группе. Рассчитывается по формуле: С = ИОР/ ОКЗ • 100%, где ИОР — количество истинно отрицательных результатов теста; ОКЗ — общее количество здоровых обследованных (неинфицированных).
• Точность (Т) — это доля правильных результатов теста (т.е. сумма истинно положительных и истинно отрицательных результатов) среди всех обследованных пациентов. Рассчитывается по формуле: Т = (ИПР + ИОР)/(ОКЗ + ОКБ) • 100%, где ИПР — количество истинно положительных результатов теста; ИОР — количество истинно отрицательных результатов теста; ОКЗ — общее количество здоровых обследованных (неинфицированных); ОКБ — общее количество больных (инфицированных). Осуществлен
анализ успешного клинического применения 13С-УДТ в мире в период с 1987 по 2015 г. (43 источника литературы) более чем у 7000 пациентов. Установлено, что диагностическая специфичность метода, по оценкам разных авторов, колеблется от 83 до 93 — 100%, чувствительность — от 84 до 97—100%, точность — от 94,8 до 100%. Диагностическая чувствительность, специфичность и точность тест-набора «ХЕЛИКАРБ» определены в ходе клинико-лабораторных испытаний, выполненных в ФГБУЗ «Головной центр гигиены и эпидемиологии» ФМБА России в период с 18.11.15 по 26.01.16. В процессе клинико-лабораторных испытаний исследовались 67 пар проб выдыхаемого воздуха пациентов с применением тест-набора «ХЕЛИКАРБ» по отношению к эндоскопическому исследованию с биопсией и быстрым УДТ. С доверительной вероятностью 95% специфичность метода составила 97,06%, чувствительность — 100%, точность — 98,5%.
10.3. определение оптимальной дозы 13C-моче-вины 99% обогащения в составе тест-набора
С целью изучения зависимости результатов теста от дозы 13С-мочевины и определения минимально оптимальных доз препарата, позволяющих получить высокоточные результаты теста, выполнен 13С-УДТ у 23 добровольцев (8 мужчин и 15 женщин) с дозами 13С-мочевины 75, 50 и 25 мг и пороговыми значениями соотношения "C/1^ в пробах выдыхаемого воздуха, принятыми в мировой стабильно-изотопной диагностике (4%о). Установлено, что применение дозы 50 мг дает такие же результаты, как доза 75 мг (чувствительность, специфичность и точность — 100%), в то время как применение дозы 25 мг влечет за собой достоверное снижение абсолютных значений 5 DOB в сравне-
нии с дозой 75 мг (р < 0,05) и появление ложноотрица-тельных результатов. Чувствительность теста с дозой 25 мг по отношению к стандартной дозе 75 мг составила 57,1%, специфичность — 100%, точность — 73,9%. Полученные результаты дали основание рекомендовать для проведения 13С-УДТ дозу 13С-мочевины 50 мг, которая была принята при разработке тест-набора «ХЕЛИКАРБ».
11. Разработка и публикация пособия для врачей по применению "c-уреазного дыхательного теста в практической медицине
Проведенные исследования и испытания легли в основу разработки пособия для врачей по применению 13С-УДТ в практической медицине, которое было опубликовано в издательстве «Медпрактика-М» в 2015 г. [5].
12. Государственная регистрация тест-набора
с получением регистрационного удостоверения
На основании успешных испытаний Росздравнад-зором в соответствии с п. 34 Правил государственной регистрации медицинских изделий, утвержденных постановлением правительства РФ от 27.12.12 № 1416, выдано регистрационное удостоверение № РЗН 2016/3773 (приказ от 29.02.16 № 1641), которое дает право производства и медицинского применения тест-набора «ХЕЛИКАРБ» на территории РФ.
Таким образом, результатом настоящего исследования явилась разработка первого российского тест-набора для 13С-уреазного дыхательного теста на H. pylori с 13С-мочевиной 99% обогащения отечественного производства. Время от создания концепции до внедрения в практическую медицину составило 18 мес. Применение тест-набора «ХЕЛИКАРБ» позволит улучшить диагностику хеликобактериоза, распространить 13С-УДТ во все регионы РФ, существенно снизить финансовые затраты на выполнение теста и обеспечить эффективную канцеропревенцию путем своевременной эрадикационной терапии.
ЛИТЕРАТУРА
1. Graham D.Y., Klein P.D., Evans D.J. Jr. et al. Campylobacter pylori detected non-invasivelyby the 13C-urea breath test. Lancet. 1987; 1: 1174—7.
2. Malfertheiner P., Megraud F., O'Morain C. et al. The European Helicobacter pyloriStudyGroup (EHPSG). Current concepts in the management of Helicobacter pylori in fection. —The Maastricht
Guidelines for practitioners
2-2000 consensus report. Aliment. Pharmacol. Ther. 2002; 16: 167—80.
3. Available at: http://www.helico.com/epidemiology.html (дата обращения 16.11.2015)
4. Эльман А.Р., Рапопорт С.И. Стабильно-изотопная диагностика в России: итоги и перспективы. 13С-препараты, приборы, методы. Клин. мед. 2014; 92(7): 5—11.
5. Плавник Р.Г. J3C-уреазный дыхательный тест в диагностике хеликобактериоза (пособие для врачей). М.: ИД «МЕДПРАКТИКА-М»; 2015.
6. ТУ 9398-001-8946443—2010. Тест-система на основе J3C-мочевины «ПИЛОРИ-ТЕСТ». М.; 2010.
7. Эльман А.Р., Корнеева Г.А., Носков Ю.Г. и др. Синтез продуктов, меченных изотопом 13С, для медицинской диагностики. Российский химический журнал.2013; 57(5): 3—24.
8. ТУ9398-001-34586784—2015. «ХЕЛИКАРБ», 50мг (тест-набор с J3C-мочевиной 99% обогащениядля 1^-уреазного дыхательного теста на Helicobacter pylori). М.; 2015.
9. Плавник Р.Г., Невмержицкий В.И., Буторова Л.И., Плавник Т.Э. Сравнительная оценка масс-спектрометрии и инфракрасной спектрометрии при проведении 13С-уреазного дыхательного теста наHelicobacterpylori.Клин. мед. 2015; 93 (9):42—5.
10. Плавник Р.Г., Невмержицкий В.И., Плавник Т.Э., Эльман А.Р. Применение разных доз 13С-мочевины в уреазном дыхательном тесте на Helicobacter pylori. Гастроэнтерология Санкт-Петербурга, 2015; 1—2: М43.
REFERENCES
1. Graham D.Y., Klein P.D., Evans D.J.Jr. et al. Campylobacter pylori detected non-invasively by the 13C-urea breath test. Lancet. 1987; 1: 1174—7.
2. Malfertheiner P., Megraud F., O'Morain C. et al. The European Helicobacter pylori Study Group (EHPSG). Current concepts in the management of Helicobacter pylori in fection. The Maastricht 2-2000 consensus report. Aliment. Pharmacol. Ther. 2002; 16: 167—80.
3. Available at: URL: http://www.helico.com/epidemiology.html (date of the application 16.11.2015)
4. El'man A.R., Rapoport S.I. Stable-isotope diagnostics in Russia: results and prospects. 13C-preparations, devices and methods. Klin. med. 2014; 92(7): 5—11. (in Russian)
5. Plavnik R.G. J3C-urea Breath Test in Diagnostis of Helicobacte-riosis (Manual for Physicians). [J3C-ureaznyy dyhatel'nyy test v diagnistike khelikobakterioza (posobie dlya vrachey]. Мoscow: ID «MEDPRAKTIKA-М»; 2015, (in Russian)
6. TU 9398-001-8946443—2010. The Test System Based on the J3C-urea «PILORI-TEST». [Test-sistema na osnove J3C-mocheviny «PILORI-TEST»]. Мoscow: 2010. (in Russian)
7. El'man A.R., Korneeva G.A., Noskov Yu.G. et al. Synthesis products labeled 13C, for medical diagnostics. Rossiyskiy khimicheskiy zhur-nal. 2013; 57(5): 3—24. (in Russian)
8. TU 9398-001-34586784—2015.»HELICARB», 50 mg (Test Kit with J3C-urea 99% Enrichment for J3C-urea Breath Test for Helicobacter pylori). [«KHELICARB», 50 мg (test-nabor s J3C-mochevinoy 99% obogascheniya dlya J3C-ureaznogo dykhatel'nogo testa na Helico-bacterpylori)]. Мoscow: 2015. (in Russian)
9. Plavnik R.G., Nevmerzhitskiy V.I., Butorova L.I., Plavnik T.E. Comparative evaluation of mass spectrometry and infrared spectrometry during the 13C-urea breath test for Helicobacter pylori. Klin. med. 2015; 93(9): 42—5. (in Russian)
10. Plavnik R.G., Nevmerzhitskiy V.I., Plavnik T.E., El'man A.R. The use of 13C-urea different doses at the urease breath test Helicobacter pylori. Gastroenterologiya Sankt-Peterburga, 2015; (1—2): М43. (in Russian)
Поступила 22.03.16 Принята в печать 22.03.16
