CC BY
14Ученые записки Таврического национального университета им. В. И. Вернадского Серия «Биология, химия». Том 22 (61). 2009. № 4. С. 50-53.
УДК 577.121:547
ХАРАКТЕРИСТИКА ОТДЕЛЬНЫХ МЕТАБОЛИЧЕСКИХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ЭРИТРОЦИТОВ В УСЛОВИЯХ ИНИЦИАЦИИ ОКИСЛИТЕЛЬНЫХ РЕАКЦИЙ IN VITRO В ПРИСУТСТВИИ ГЛЮКОЗЫ РАЗНОЙ КОНЦЕНТРАЦИИ
Ёлкина Н.М.1, Коношенко С.В2., Плотникова Е.В.2, Казакова В.В.3
1 Крымский факультет Запорожского национального университета, Симферополь, Украина
2 Таврический национальный университет им В.И. Вернадского, Симферополь, Украина 3 Крымский государственный медицинский университет им С.И. Георгиевского, Симферополь,
Украина
В условиях инициации окислительных реакций in vitro в эритроцитах человека снижается интенсивность гликолитического пути утилизации глюкозы. Присутствие в среде, генерирующей активные формы кислорода, 5 мМ и 10 мМ глюкозы способствует усилению гликолитических реакций в эритроцитах.
Ключевые слова: эритроциты человека, среда Фентона, активные формы кислорода, глюкоза, гликолитические реакции.
ВВЕДЕНИЕ
Проблема окислительного стресса является одной из наиболее актуальных в современной биологии и медицине [1 - 3]. Известно, что развитие окислительного стресса осуществляется в результате усиленного генерирования в клетках активных форм кислорода (АФК) и азота или снижения активности антиоксидантных систем, действие которых направлено на поддержание прооксидантно-антиоксидантного равновесия [4]. В связи с проблемой окислительного стресса важно понять не только механизмы гиперподукции свободных радикалов в клетках разного типа, но и характер регуляции в них метаболизма в экстремальных условиях, формирования защитных реакций, направленных на нейтрализацию повреждающего фактора и активизацию тех метаболических путей, которые ведут к восстановлению гомеостаза.
Ранее было показано, что в условиях инициации окислительных реакций с участием АФК в эритроцитах существенно снижается уровень глюкозы и этот процесс сопровождается метаболической перестройкой эритроцитов, а также изменениями в состоянии их антиоксидантной системы [5, 6].
Учитывая это, целью настоящей работы явилось изучение отдельных метаболических показателей эритроцитов, находящихся в среде, генерирующей АФК, в условиях притока глюкозы извне (система Фентона, содержащая глюкозу разной концентрации).
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Материалом для исследований служили эритроциты доноров станции переливания крови г. Симферополя.
С целью инициации окислительных реакций эритроциты помещали в среду Фентона, генерирующую АФК (10 мМ FeSO4 • 7H2O и 3 мМ Н2О2) [7]. Наряду с этим эритроциты инкубировали в среде Фентона в присутствии 5 мМ и 10 мМ глюкозы. Инкубацию проводили при температуре 37°С в течение 4-х часов. Гемолиз эритроцитов осуществляли с использованием метода Драбкина [8]. В гемолизатах эритроцитов определяли содержание фосфоенолпирувата (макроэргического метаболита гликолиза) и АТФ [9]. Статистическую обработку экспериментальных данных выполняли с использованием t-критерия Стьюдента.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Как показали результаты исследований (табл.), при инкубации эритроцитов в среде Фентона, генерирующей АФК, в эритроцитах снижается содержание фосфоенолпирувата (ФЕП) и АТФ: в 1,86 и 2,18 раза, соответственно, по сравнению с контролем (эритроциты, не инкубированные в среде Фентона). Изменение этих показателей свидетельствует о снижении интенсивности гликолитических реакций утилизации глюкозы, играющих важную роль в энергообеспечении эритроцитов и их функционировании [10].
Таблица.
Содержание ФЕП и АТФ в эритроцитах в условиях инициации окислительных реакций in vitro в присутствии в среде инкубации глюкозы разной концентрации (x ± Sx )
Объект исследования ФЕП, ммоль Фнл-1 АТФ, ммоль Фн л-1
Контроль 1 (эритроциты без инкубации в среде Фентона) 0,130 ± 0,005 0,144 ± 0,003
Контроль 2 (эритроциты, инкубированные в среде Фентона в течение 4-х часов) 0,070 ± 0,005* 0,066 ± 0,003*
Эритроциты, инкубированные в среде Фентона в присутствии 5 мМ глюкозы (4 часа инкубации) 0,088 ± 0,006*** 0,085 ± 0,007*'**
Эритроциты, инкубированные в среде Фентона в присутствии 10 мМ глюкозы (4 часа инкубации) 0,105 ± 0,008*** 0,102 ± 0,007*"**
Примечание: * - достоверность различия по сравнению с контролем 1; ** - достоверность различия по сравнению с контролем 2 (р < 0,05).
При инкубации эритроцитов в среде Фентона в присутствии 5 мМ глюкозы наблюдалось незначительное, но достоверное увеличение содержания ФЕП и АТФ. Так, содержание ФЕП в этих условиях возрастало на 25,7 %, а содержание АТФ на
Ёлкина Н.М.1, Коношенко С.В2., Плотникова Е.В.2, Казакова В.В.3
28,8 % по сравнению с контролем 2 (эритроциты, инкубированные в среде Фентона в отсутствии глюкозы).
Присутствие в среде инкубации 10 мМ глюкозы приводило к дальнейшему увеличению данных показателей: содержание ФЕП возрастало на 50,0 %, содержание АТФ - на 54,5 % по сравнению с контролем 2.
Однако, по сравнению с нативными эритроцитами (не инкубированными в системе Фентона) уровень ФЕП и АТФ в инкубированных эритроцитах в присутствии 5 мМ и 10 мМ глюкозы был значительно ниже.
Как было показано ранее [5],инкубация эритроцитов в среде Фентона приводит к резкому снижению содержания в них глюкозы. Через 4 часа инкубации в этих условиях содержание глюкозы в эритроцитах снижается в 1,66 раза, что, очевидно, связано не только с утилизацией глюкозы в качестве энергетического субстрата, но и с её разрушением под действием АФК. Вместе с этим, известно, что метаболизм глюкозы в эритроцитах занимает важное место не только в энергообмене, но и в генерировании восстановительных эквивалентов (HADH и HADPH), а также 2,3-дифосфоглицерата, действие которого связано с повышением эффективности кислородо-транспортной функции гемоглобина [10].
Представленные в настоящей работе данные свидетельствуют о том, что в условиях притока глюкозы извне в эритроцитах усиливаются гликолитические реакции, интенсивность которых возрастает с увеличением концентрации глюкозы в среде Фентона.
Результаты исследований позволят также сделать заключение, что уровень глюкозы является важным звеном в биохимическом статусе эритроцитов, обеспечивающим поддержание их метаболической активности и защиту от разрушительного действия АФК.
ВЫВОДЫ
1. В условиях генерирования активных форм кислорода in vitro (среда Фентона) в эритроцитах человека снижается интенсивность гликолитического пути утилизации глюкозы.
2. Присутствие в среде, генерирующей АФК, 5 мМ и 10 мМ глюкозы способствует активизации гликолитических реакций в эритроцитах.
3. Интенсивность гликолитических реакций возрастает с увеличением концентрации глюкозы в среде инкубации эритроцитов.
Список литературы
1. Турпаев К.Т. Активные формы кислорода и регуляция экспрессии генов / К.Т. Турпаев // Биохимия. - 2002. - Т. 76, вып. 3. - С. 339-352.
2. Владимиров Ю.А. Активные формы кислорода и азота: значение для диагностики, профилактики и терапии / Ю.А. Владимиров // Биохимия. - 2004. - Т. 69, вып. 1. - С. 5-7.
3. Пероксид водорода, образуемый внутри митохондрий, участвует в передаче апоптозного сигнала от клетки к клетке / О.Ю. Плетюшкина, Е.К. Фетисова, К.Г. Лямзаев [и др.] // Биохимия. - 2006. -Т. 71, вып. 1. - С. 75-84.
4. Меньщиков Е.Б. Окислительный стресс при воспалении / Е.Б. Меньщиков, Н.К. Зенков // Усп. совр. биол. - 1997. - Т. 117, № 2. - С. 155-169.
5. Ёлкина Н.М. Изменения отдельных биохимических показателей эритроцитов человека в условиях генерирования активных форм кислорода in vitro / Н.М. Ёлкина // Ученые записки Таврического национального университета им. В.И. Вернадского. Серия: Биология, химия. - 2005. - Т. 18(57), № 3.- С. 31-34.
6. Йолкша Н.М. Характеристика окремих показниюв внутршньоеритроцитарного метаболiзму за умов генерування активних форм кисню in vitro / Н.М. Йолкша, В.В. Казакова, С.В. Коношенко // Експериментальна та клшчна фiзiологiя i бюхшм. - 2005, N° 3. - С. 50-54.
7. Окислительная модификация белков: окисление триптофана и образование битирозина в очищенных белках с использованием системы Фентона / Е.Е. Дубинина, С.В. Гавровская, Е.В. Кузьмич [и др.] // Биохимия. - 2002. - Т. 67, вып. 3. - С. 413-421.
8. Drabkin D.A simplified technique for large scale crystallization of myoglobin and haemoglobin in the crystalline / D. Drabkin // Arch. Biochem. - 1949. - V. 21 - P. 224-226.
9. Алейникова Т.А. Руководство к практическим занятиям по биологической химии / Т.А.Алейникова, Г.В. Рубцова- М.: Высшая школа, 1988. - 223 с. (Методическое пособие для студ. высш. учебн. завед.).
10. Мак-Мюррей У. Обмен веществ человека / Мак-Мюррей У. - М.: Мир, 1980. - 366 с. (Метаболизм веществ в различных тканях организма человека).
Йолкша Н.М. Характеристика окремих метаболiчних показниюв за умов Шщацп окиснювальних реакцш in vitro у присутност глюкози рiзноï концентрацй / Н.М. Йолкша, С.В. Коношенко, О.В. Плотшкова, В.В. Казакова // Вчеш записки Тавршського нацюнального ушверситету îm. В.1. Вернадського. Серш „Бюлогш, xîmm". - 2009. - Т. 22 (61). - № 4. - С. 50-53. За умов шщаци окиснювальних реакцш in vitro в еритрощтах людини знижуеться штенсившсть глшолптичного шляху утилiзацiï глюкози. Присутшсть у середовищi, що генеруе активш форми кисню, 5 мМ та 10 мМ глюкози сприяе посиленню глiколiтичних реакцiй в еритроцитах.
Ключовi слова: еритроцити людини, середовище Фентона, активш форми кисню, глюкоза, глшолптичш реакци.
Yolkina N.M. The character of some erythrocytes metabolic indexes under initiation of oxidative reactions in vitro with different concentrations of glucose / N.M. Yolkina, S.V. Konoshenko, E.V. Plotnikova, V.V. Kazakova // Scientific Notes of Taurida V.Vemadsky National University. - Series: Biology, chemistry. - 2009. - V.22 (61). - № 4. - Р. 50-53.
Under initiation of oxidative reactions in vitro the intensivity of glycolitic reactions in human erythrocytes is lowered. The presence in the system, generated the active oxygen forms, 5 мМ and 10 мМ glucose promote the intensification of glycolitic reactions in erythrocytes.
Keywords: erythrocytes of human, Fenton's system, active oxygen forms, glucose, glycolitic reactions.
Поступила в редакцию 04.12.2009 г.
