CC BY
38
УДК [616.314.96616.314.19] - 053.3/.4 О.В. Шешукова
ХАРАКТЕР В1ДПОВ1Д1 1МУННИХ КЛ1ТИН ПРИКОРЕНЕВО1 ГРАНУЛЯЦ1ЙНО1 ТКАНИНИ НА ОКРЕМ1 ПАРОДОНТОПАТОГЕНН1 М1КРООРГАН1ЗМИ ПРИ ПЕР1ОДОНТИТАХ ТИМЧАСОВИХ ЗУБ1В У Д1ТЕЙ
Вищий державний навчальний заклад Укра'ни „Укра'нська медична стоматолопчна академiя"
При хронiчному запаленнi перюдонта у вiдповiдь на iнфекцiю захисш механiзми макроорганiзму формують прикореневу грануляцшну тканину. На основi проведених дослщжень ми продемонстрували iнфiльтрацiю прикоренево!' грануляцшно!' тканини при загостреннi хронiчного перюдонтиту тимчасових зубiв основними субпопуляцiями лiмфоцитiв та ДК у [4]. Установлена корелящя мiж загальною Т-клiтинною та В-клггинною популяцiями з переважанням СБ3+ шфшьтраци в осередку запалення перюдонта тимчасових зубiв. Важливо зiставити !х зi спектром пародонтопатогенiв, як1 слугують етiологiчним чинником дослiджуваного захворювання i викликають певну вiдповiдь iз боку тканин перюдонта [3, 7, 8, 12]. Для визначення основних ланок патогенезу захворювання необхщно виявити тип локально! iмунноl вщповщ на основш пародонтопатогени при перюдонтитах тимчасових зубiв.
Мета до^дження: визначити зв'язок мiж наявнiстю того чи iншого м^ооргашзму в кореневому каналi та характером локально!' iмунноl вiдповiдi при хрошчному запаленнi перiодонта тимчасових зубiв для визначення основних ланок патогенезу захворювання.
Матерiали i методы до^дження
Обстежено 40 дггей вiком вiд 2 до 10 роюв iз захворюваннями перiодонта тимчасових зубiв, як1 зверталися по допомогу в дитячу стоматолопчну полiклiнiку м. Полтави. Дiагноз визначали за мiжнародною
класифжащею стоматолопчних хвороб на 0CH0Bi МКХ-10, залучаючи класифiкацiю перiодонтитiв у дггей за Т.Ф. Виноградовою (1968). Дiагноз установлювали на пiдставi з'ясування скарг, анамнезу, результат об'ективного обстеження, а також рентгенографп.
За наявностi показань проводили видалення тимчасового зуба, шд час якого методом iнцизiйноi бюпси отримували бiоптати мiжкореневоi та/або перiапiкальноi грануляцiйноi тканини, як1 локалiзувалися в дшянщ деструкцп, та видаляли ix разом iз причинним зубом. Визначили 5 основних пародонтопатогенних мiкроорганiзмiв (Porphyromonas gingivalis, Prevotella intermedia, Bacteroides forsythus, Treponema denticola, Actinomyces аctinomycetеmcomitans) методом ПЛР за допомогою набору реагенпв для як1сного визначення ДНК мiкрооргваанiзмiв (ООО НПФ „ГЕНТЕХ") за стандартною методикою [2]. Забiр матерiалу проводився шляхом уведення стерильного паперового тну ("Paper points", "Maillefer", Швейцарiя) в кореневий канал тимчасового зуба на 6-8 сек., який шсля його вилучення використовували для визначення анаеробноi мiкрофлори за допомогою методу ПЛР.
Для iмуногiстологiчного дослiдження бiопсiйний матерiал помiщали в стерильнi пластиковi пробiрки з охолодженим до 2-4°С стерильним фiзiологiчним розчином i протягом 1 год. (в термош з кригою) транспортували до лабораторп, де проводили дослщження на тканинних крiостатниx зрiзаx товщиною 5-7 мкм, виготовлених iз бiоптатiв грануляцiйноi тканини. Дослiдження основних iмуноцитiв здшснювали за допомогою моноклональних антитiл (мкАТ) проти HLA-DR-, CD3-, CD4-, CD8-, CD20-антигенiв iмуноцитiв («Сорбент», Рошя) для визначення антигенпрезентуючих дендритних клiтин (HLA-DR+ ДК), загальноi Т-клiтинноi популяцп (CD3+), Т-лiмфоцитiв-xелперiв (CD4+), цитотоксичних лiмфоцитiв (CD8+) i В-кттин (CD20+). Вiдповiдно оцiнювали основнi кштини-представники iндуктивноi та ефекторноi ланок iмунiтету [1].
Iмуногiстохiмiчним методом були дослiдженi прикореневi грануляцп (38 бюптапв, а з кожними мкАТ1 - анти-HLA-DR, CD3, CD4, CD8, CD20 усього було дослщжено бшьше 190 препарапв).
Локалiзацiю первинних мкАТ виявляли за допомогою стрептовщин-бiотин-пеpоксидазного комплексу ("Sigma", USA) з подальшою обробкою зpiзiв амiноетилкаpбазоном ("Sigma", USA) з червоно-бурим забарвленням, забезпечуючи вiзуалiзацiю pеакцii.
На наступному етат ми контрастували тканиннi зpiзи гематоксилшом або метиленовим синiм, помiщали в гуммьсироп пiд покривне скло й ощнювали iмуноpеактивнi клiтини пiд мжроскопом («ЛЮМАМ-Р11», Росiя). Визначали вiдносну штенсившсть iнфiльтpацii iмуноцитами, особливостi локалiзацii, ознаки активностi, особливостi будови. Для зручност облiку i статистичноi обробки кшьюсних характеристик iмунних клiтин ми видшили декiлька piвнiв iнфiльтpацii: в загальних рисах, найменшу iнфiльтpацiю зi вшх виявлених позначали «1», помipний piвень - «2» i piзко виражену - «3». Результати дослiдження документували фотографуванням на фотоплiвку "Konica VX 400" за допомогою мжрофотонасадки МФН-10 («ЛОМО», Росiя).
Для визначення зв'язку мiж наявнiстю того чи шшого мiкpооpганiзму в кореневому каналi, визначених методом ПЛР, та наявшстю iмунних клiтин був проведений непараметричний кореляцшний статистичний аналiз iз визначенням коефщенлв Kendall Tau i Gamma.
Результати до^дження. Ми встановили позитивш кореляцп для B.forsythus i CD3+ шфшьтраци в гpануляцii (Kendall Tau=0,458131, р=0,022471) i для P.gingivalis i CD20+ клiтин (Kendall Tau=0,421637, p=0,035684), що може демонструвати певний тип локально!' iмунноi pеакцii на iнфекцiйнi агенти: CD3+-тип - на B.forsythus, С D20+-тип (В - кл^инний) - на P.gingivalis. Примггно, що як i при корелящях з морфолопчними особливостями гpануляцiйноi
тканини [13], на перше мюце виходять показники CD3+ i CD20+ клггин, що свiдчить про можливий вплив мiкроорганiзмiв через iмунну вiдповiдь на запальну перебудову тканин.
З л^ературних даних вщомо, що P.gingivalis здатний локально модулювати профiль iмунноi вщповщ [16], B.forsythus володie цитолiтичною актившстю на лейкоцити людини [6], проте немае даних, що характеризують тип локальноi iмунноi вiдповiдi при перюдонтш! Однак, при генералiзованих формах пародонтиту Wassenaar A. et al. (1995) отримали з тканин пародонта CD4+ i CD8+ Т-лiмфоцити, реактивнi до бактершних антигенiв P.gingivalis, P.intermedia i A.actinomycetemcomitans [15], що демонструе переважно клiтинноопосередковану локальну iмунну вiдповiдь.
Грунтуючись на власних результатах про найбшьш виражену CD3+-клiтинну iнфiльтрацiю [5], ii кореляцiю з виявленими мжрооргашзмами [4], а також на л^ературних вiдомостях про Т-клiтинну реакцiю на пародонтопатогени [17], ми вважаемо, що при хротчному перюдонтит молочних зубiв локально розвиваеться переважно Т-клiтинна вщпов^ (у виглад CD3+ iнфiльтрацii).
Для P.intermedia показана здатнють стимулювати потужну пролiферацiю CD4+ Т-клiтин, що вщбуваеться за VP-специфiчним типом [10]. У свою чергу, активащя й експаншя Т-клiтин може вести до продукцп великих к1лькостей регуляторних i ефекторних цитоюшв, здатних викликати порушення нормального функщонування макроорганiзму [ 9, 17]. Унаслщок масивно!' акумуляцii CD4+ Т-китин може вiдбуватися клональна делецiя антигенспецифiчних Т-клiтин, що, зрештою, веде до зменшення специфiчноi вiдповiдi, яка захищае вiд iнфекцii [11, 17]. У нашому дослщженш спостерiгався достовiрний взаемозв'язок P.intermedia i к1льк1сного показника загальноi популяцii CD3+ клiтин (Kendall Tau=-0,416667, р=0,037918), куди входять i CD4+ Т-лiмфоцити.
Про локальну модуляцш iMyHHOi вiдповiдi св^ать лiтературнi данi про здатнiсть P.intermedia i P.gingivalis iндyкyвати посилену продукцш фiбробластами 1Л-8 (потужного хемоатрактанту для нейтрофшв), а також прозапального цитоюну 1Л-6 [13, 14]. Отже, специфiчна iнфекцiя перiодонта може порушувати локальний iмyнний захист при хронiчномy перюдонтит молочних 3y6iB.
Висновок. На основi проведених дослiджень можна визначити, що характер бактерiальноi флори впливае на тип локально!' iмyнноi вiдповiдi при хрошчному перiодонтитi тимчасових зyбiв у дгтей. У бiльшостi випадкiв у дтей локально розвиваеться Т-клiтинна реакщя на визначенi основнi пародонтопатогени.
Лггература
1. Декларацiйний пат. Укра'ни 58163 А, МПК 7 А61С17/00. Спошб оцiнки iмyнологiчного стану слизово!' оболонки порожнини рота:Пат.58163, А, МПК 7 А61С17/00 /Кайдашев 1.П. Шинкевич В.1. (Укра'на).-№2002108169; заявл.15.10.02; опубл.15.08.03. Бюл.№8.
2. Методи клiнiчних та експериментальних дослiджень в медицинi; за ред. проф. Кайдашева I. П.- Полтава: Полiмет, 2003.-319 с.
3. Диагностика хронического периодонтита с помощью полимеразной цепной реакции и перспективы эндодонтического применения макролидов и цефалоспоринов / Царев В.Н. Митронин А.В., Максимовский Ю.М. [и др.] // Стоматология для всех.-2004.-№ 1.-С.8-11.
4. Шешукова О.В. Зв'язок мiж наявшстю пародонтопатогенно!' iнфекцii у кореневих каналах i гiстологiчними особливостями грануляцшно!' тканини при хронiчномy перюдонтш! тимчасових зyбiв / Шешукова О.В., Кайдашев 1.П., Шинкевич B.I. //Вюник проблем бiологii i медицини.-2006.-№2.-С.413-416.
5. Шешукова О.В. Характеристика iMyHHrn кштин прикоренево!' гранyляцiйноi тканини при перюдонтитах тимчасових 3y6iB у дiтей / Шешукова О.В. //Вюник проблем бюлогп i медицини.-2009.-.№2.-С.314-319.
6. Novel apoptosis-inducing activity in Bacteroides forsytus: a comparative study with three serotypes of Actinobacillus actinomycetemcomytans / Arakawa S., Nakajima T., Ishikura Y. [et.al. ] // Infection and Immunity.-2000 .-Vol.68, N8.- P.4611-4615.
7. Association of black-pigmented bacteria with endodontic infections / J.C. Baumgartner, B.J. Watkins, K. Bae [et.al. ] // J.Endod.-1999.-Vol.25.-P.413-415.
8. Detection of Porphyromonas endodotalis in infected root canals by 16S rRNA gene-directed polymerase chain reaction / J.C.M. Oliveira, J.F.Jr. Siqueira, G.B. Alves [ et al. ] // J.Endod.-2000.-Vol.26.-P.729-732.
9. Antigen-specific T-cell receptor V beta expression in Porphuromonas gingivalis-specific T-cell lines / Gemmell E., Grieco D.A., Cullinan M.P. [et al. ] //Oral Microbiol.Immunol.-1998.-Vol.13.-P.335-361.
10.Leung K.-P. Prevotella intermedia Stimulates Expansion of Vp-Specific CD4+ Cell / Leung K.-P., Torres B.A. // Infect.Immun.-2000.-Vol.68, N9.-P.5420-5424.
11. Influence of periodontal bacteria and disease status on V beta expression in T cells / Mathur A., Michalowicz С., Yang C. [et al.] // J. Periodontal.Res. -1995.-Vol.30.-P.369-373.
12.Microbiological analysis of infected root canals from symptomatic and asymptomatic teeth with periapical periodontitis and the antimicrobial susceptibility of some isolated anaerobic bacteria / R.C. Jacinto, B.P.F.A. Gomes, C.C.R. Ferraz [et al. ]// Oral Microbiol. Immunol.-2003.-Vol.18.-P.285-292.
13.Takeshita A. CpG Motifs in Porphyromonas gingivslis DNA Stimulate Interleukin-6 Expression in Human Gingival Fibroblasts / Takeshita A., Imai K., Hanazawa S. // Infect.Immun.-1999.-Vol.15.-P.226-231.
14. Lipopolysaccharides of Bacteroides intermedius (Prevotella intermedia) and Bacteroides (Porphyromonas) gingivalis induce interleukine-8 gene expression in human gingival fibroblast culture / Tamura V., Tocuda M., Nagaoka S. [et al. ] //Infect.Immun.- 1992.-Vol.60, N11.-P.4932-4937.
15.Cloning, characterization? And antigen specificity of T0lymphocyte subsets extract from gingival tissue of chronic adult periodontal patients/Wassenaar A., Reinhardus С, Thepen Т. [et al.] //Infect.Immun.-1995.-Vol.63, 6.-P.2147-2153.
16.Hydrolysis of interleukin-12 by Porphyromonas gingivalis major cysteine proteinases may affect local gamma interferon accumulation and the Th1 or Th2 T-cell phenotype in periodontitis/Yun P.L., Decarlo A.A., Collyer C.C. [et al.] // Infect.Immunol.-200.-Vol.69, N9.-P.5650-5660.
17. Zadeh H.H. Evidence for involvement of superantigens in human periodontal diseases: skewed expression of T cell receptor variable regions by gingival T cells/Zadeh H.H., Kreutzer D.L.// Oral Microbiol. Immunol.-1996.-Vol.11.-P.88-95.
Стаття надшшла 2.06.2009 р.
Резюме
Изучена связь между наличием пародонтопатогенов в корневом канале и характером локального иммунного ответа при хроническом периодонтите временных зубов. Выявлено, что у детей преимущественно развивается локальная Т-клеточная реакция на основные пародонтопатогены.
Ключевые слова: временный зуб, хронический периодонтит, пародонтопатогены, иммунный ответ.
Summary
The connection between the paradontopathogens in root canal and the character of local immune response in chronic periodontitis of milk teeth is studied. The prevailing development of local T-cell reaction on basic parodontopathogens in children is revealed.
Key words: milk tooth, chronic periodontitis, paradontopathogens, immune response.
