CC BY
6
научно обоснованную картину реакции организма па внешнее воздействие химического агента.
Литература
1
2
3
Агаева Т. М. //Учен, записки Азерб. мед. ин-та.— 1972.—Т. 36.— С. 6—7.
Лнина И. А. // Токсикология и фармакология пестицидов и других химических соединений. — Киев, 1967. —
С. 11 —14.
Береток М. Гистохимия ферментов: Пер. с англ. М., 1965.
4. Бонашевская Т. И., Ламентова Т. Г., Фетисов В. В. и др.//Гиг. и сан. — 1986.—№6. — С. 16—19.
5. Пирс Э. Гистохимия: Пер. со 2-го англ. изд. — М., 1962.
6. Ромейс Б. Микроскопическая техника: Пер. с нем. — М, 1954.
7. Цапко В. Г. II Гигиена применения, токсикология пестицидов и клиника отравлений: Киев, 1970. — Вып. 8.—
С. 234—239.
8. Шицкова А. П., Николаева Н. И., Гадалина И. Д. // Гиг. и сан. — 1986. — № 6. — С. 4—7.
Поступила 14.08.87
УДК 615.285.7.099.015.4:[616.36-008.931 + 616.153.1]:577.152.1
А. И. Крысанова, С. Н. Кравченок
ИЗМЕНЕНИЯ АКТИВНОСТИ ГЛЮКОЗО-6-ФОСФАТДЕГИДРОГЕНАЗЫ В ПЕЧЕНИ И КРОВИ
ЕРЖАЩИМИ
ПЕСТИЦИДАМИ
Белорусский научно-исследовательский санитарно-гигиенический институт, Минск
Поиски возможностей прижизненной оценки состояния определенных метаболических процессов в органах по активности ферментов в крови при воздействии химических веществ на организм в эксперименте и натурных исследованиях признаются в настоящее время весьма актуальными [5, 8). Особый интерес представляет изучение ключевых ферментных систем, так как изменение их активности влечет за собой нарушения всего метаболического звена, что оказывает существенное влияние на организм в целом.
Целью настоящей работы явилось сравнительное изучение активности ключевого фермента пентозофосфатного пути глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы (Г-6-ФДГ) в печени и гемолизатах крови белых крыс в условиях острого и хронического воздействий хлорсодержашими пестицидами. Исследование активности этого фермента для решения токсикологических и гигиенических, задач, по нашему мнению, вполне обосновано, так как Г-6-ФДГ является основной формой регуляции метаболического пути, конечным продуктом функционирования которого является НАДФХ ХН+ — непременный участник процессов детоксикации, в значительной мере влияющий на их течение.
Эксперименты пповедены на половозрелых белых крысах обоего пола. Для определения активности Г-6-ФДГ использовали 10 % гомогенат печени декапитированных животных. Гемолизат крови готовили, смешивая 20 мкл крови, взятой из вены хвоста крысы, с 400 мкл дистиллированной воды, предварительно охлажденной до 1 — 2 °С.
Активность фермента изучали через 1, 6, 24 и 72 ч по-
сле однократного внутрижелудочного введения бутилового эфира 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислоты (2,4-Д) в дозах 1/2 и 1/20 ЬО50 (323 и 32 мг/кг соответственно), а также при хроническом (9 мес) воздействии метоксихлора (1,1-ди(4-метокси/-фенил)-2,2,2-трихлорэтан] в дозах 1/100, 1/1000 и 1/10000 ЬО50 (18,5, 2,0 и 0,2 мг/кг соответственно).
Активность Г-6-ФДГ определяли спектрофотометриче-ским методом, используя состав инкубационной среды, предложенный Н. И. Разумовской [6], и выражали в наномолях НАДФ-Н+ на 1 мг гемоглобина или белка при определении активности фермента в гемолизатах крови или гомогенатах печени соответственно. Гемоглобин определяли унифицированным гемоглобинцианидным методом, белок — спектрофотометрически [3].
Статистическую обработку полученных данных проводили общепринятыми методами [7].
Установлено, что при острохм отравлении белых крыс, вызванном введением бутилового эфира 2,4-Д в дозе 7г ЬО50, .наблюдается .повышение активности; Г-6-ФДГ в обеих изученных тканях. Максимальных значений активация достигала в одни и те же сроки (1 и 24 ч) и сохранялась на протяжении всего периода наблюдений (72 ч). Воздействие препарата в дозе, не вызывающей клинических проявлений отравления ('/20 ЬО50), приводило к таким же по направленности, но менее выраженным количественно нарушениям активности фермента как в печени, так и в крови. Корреляционный анализ полученных данных позволил выявить достоверную положительную связь
изученных показателей (табл. 1).
Таблица 1
Активность Г-6-ФДГ в печени и крови белых крыс, затравленных однократно бутиловым эфиром 2,4-Д
Срок после затравки, ч 1/2 Ьр5а 1/20 1Х>5П
печень кровь Г печень кровь г
Контроль 329,0+16,5 143,3+4,6 0,90 329,0± 16,5 143,3±4,6 0,90
1 6 24 72 494,4± 3,4** 427,4+8,9** 451,04-10,5** 379,4-4-7,8* 187,74-2,4** 1*3.0+4,5** 1*9,1-ьЗ,0** 176,6+5,7* 0,76* 0,79* 0,82* * 0,90** 375,1 ¿9,0*^ 365,4+5,7** 441,5+8,0** 411,2+5,4* 171,6+2,0** 175,9+4,3** 189,1+2,7** 182,7+4,2* 0,90** 0,83* 0,84** 0,75*
Примечание. Здесь и в табл. 2: одна звездочка — две звездочки — р^0,001.
Таблица 2
Активность Г-6-ФДГ в печени и крови белых крыс при хроническом воздействии метоксихлора
Доза введенного препарата, LD50 Печень Кровь г
Контроль 329,0± 16,5 143,3=Ь4,6 0,90
1/100 1/1000 1/10000 190,2± 10,3** 250,1± 14,7** 369,5±40,1 90,0±3,9** 100,9±2,7** 125,8±2,7 0,80** 0,73* 0,84**
Данные табл. 2 свидетельствуют о том, что хроническое воздействие метоксихлора в течение 9 мес в дозе VIоо ЬБбо приводило к угнетению активности Г-6-ФДГ в ^изученных тканях. Достоверное угнетение активности фер-мента наблюдалось при введении в 10 раз меньшей дозы препарата. В дозе 1/юооо ЬОб0 метоксихлор не оказывал влияния на изученную ферментативную активность. Анализ этих данных позволил проследить, как и при воздействии бутилового эфира 2,4-Д, наличие положительной корреляционной связи между изменениями активности изученного ферментативного звена в печени и гемолизатах крови.
Поскольку практически вся активность Г-6-ФДГ, обнаруживаемая в гемолизатах крови, является эритроцитар-ной, по существу прослеживается связь нарушений активности в печени и эритроцитах [1]. Общие черты метаболического профиля этих тканей — значительная скорость процессов детоксикации в них [2], а также анаэробный
тип обмена [4] — облегчают понимание обнаруженных однонаправленных изменений.
Таким образом, приведенные результаты и их анализ свидетельствуют о том, что по активности Г-6-ФДГ в гемолизатах крови можно судить о состоянии в печени пентозофосфатного пути — важного метаболического звена, как уже указывалось, тесно связанного с процессами детоксикации. Высокая чувствительность Г-6-ФДГ к химическому воздействию, простота методики ее определения сочетаются с возможностью проведения анализа в небольшом (20 мкл) объеме крови. Последний факт представляется весьма важным, так как исключает необходимость взятия крови из вены человека, а в эксперименте позволяет обеспечить прижизненный контроль.
Литература
1. Вилкинсон Д. Принципы и методы диагностической эн-зимологии: Пер. с англ. — М., 1981.
2. Голиков С. Н., Саноцкий И. В., Тиунов Л. А. Общие механизмы токсического действия. — Л., 1986.
3. Кочетов Г. А. Практическое руководство по знзимоло-гии / Под ред. С. Е. Северина. — М., 1971.—С. 312— 314.
4. Мак-Мюррей У. Обмен веществ у человека: Пер. с англ. — М., 1980.
5. Меркурьева Р. В., Шатерникова И. С., Мухамбетова Л. X. // Гигиена окружающей среды. — М., 1980. — С. 19—21.
6. Разумовская Н. И. // Биохимия. — 1971. — Т. 36, № 4.—
С. 702—703.
7. Рокицкий П. Ф. Биологическая статистика. — Минск, 1967.
8. Соколов В. ВГрибова И. А., Иванова Л. А. // Гиг. труда. — 1981. — № 7. — С. 5—8.
Поступила 08.05.87
ВОЗДЕЙСТВИЕ ФОСФОРОРГАНИЧЕСКИХ СОЕДИНЕНИЙ, ОБЛАДАЮЩИХ ОТДАЛЕННОЙ НЕЙРОТОКСИЧНОСТЬЮ
УДК 615.285.7:547.241].099.076.9:[616.831-008.931:577.152.311
И. В. Кокьиарева, И. И. Ткаченко, Ю. С. Каган, М. J1. Зиновьева
ВНИИ гигиены и токсикологии пестицидов, полимеров и пластических масс, Киев
Широкое внедрение в практику новых фосфороргани-ческих соединений (ФОС) определяет необходимость еще на стадии экспериментального изучения прогнозировать их возможную опасность для здоровья людей. Особую значимость в этом плане приобретает возможность выявления развития нейротоксических эффектов, присущих целому ряду ФОС (триортокрезилфосфат — ТОКФ, лептофос, хлорофос, афос и др.) [1, 2, 5]. Эти эффекты проявляются обычно через 14—21 день и даже 1—5 лет после перенесенного острого отравления и характеризуются клинически атаксией, мышечной слабостью, парезами и параличами конечностей; морфологически — демиелинизацией волокон проводящих путей спинного мозга и периферических нервов. Механизм развития нейропатий под влиянием ФОС изучен недостаточно и не укладывается в рамки ан-тихолинэстеразного и холинергического механизмов. Доказано, что важным патогенетическим звеном поражения является фосфорилирование специфического для нервной системы белка, названного нейротоксической эстеразой (НТЭ), существенное (на 70—90 %) угнетение активности которой наблюдается задолго до проявления клинических признаков [7, 9]. Установлено однотипное влияние ФОС на НТЭ людей и птиц, что позволяет использовать кур для экспериментального моделирования отдаленного ней-ротоксического действия (ОНД). На секционном материале показано, что НТЭ людей чувствительнее в 10—100 раз . Для воспроизведения ОНД ФОС хорошей моделью
являются морские свинки [1]. При введении белым крысам нейропаралитических ФОС (ТОКФ, цианофенфос, фе-нитротион) также обнаруживается процесс демиелиниза-ции в центральной нервной системе и нарушение функционального состояния периферических нервов при отсутствии клинических признаков (атаксии) [8, 11]. В настоящей работе исследовалось влияние ФОС различной структуры на активность НТЭ головного мозга кур, морских свинок и белых крыс.
Опыты проведены на 45 курах массой 1,5—1,8 кг, 40 морских свинках массой 450—500 г и 50 белых крысах массой 180—230 г. В опытные группы входило по 6—8 животных.
Исследуемые фосфорорганические пестициды (бутифос, офунак, ортен) вводили курам в зоб, морским свинкам и крысам в желудок в дозах, составляющих LD30. Эталонными соединениями, оказывающими избирательное нейро-токсическое действие, служили ТОКФ и афос [1, 5].
Для выявления в динамике прогрессирования нейропатий в различные сроки опыта определяли скорость распространения возбуждения (СРВ) по периферическому нерву кур, морских свинок и белых крыс.
Активность НТЭ в гомогенатах головного мозга подопытных животных определяли методом [6]. В опытах на птицах функциональное состояние периферической нервной системы при введении ТОКФ и афоса (в нейропаралитических дозах) оценивали по СРВ ветви малоберцового
t
