CC BY
62
УДК 615.322; 616-018
ГИСТОМОРФОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА ГЕПАТОПРОТЕКТОРНОГО ДЕЙСТВИЯ ФИТОАДАПТОГЕНОВ ПРИ ТОКСИЧЕСКОМ ПОРАЖЕНИИ ПЕЧЕНИ МЫШЕЙ
ЧЕТЫРЕХХЛОРИСТЫМ УГЛЕРОДОМ НА ФОНЕ ИНТЕНСИВНОЙ ФИЗИЧЕСКОЙ НАГРУЗКИ
И. Г. Печенкина, С. В. Козин, Д. В. Буланов
Первый Московский государственный медицинский университет им. И. М. Сеченова, Европейский медицинский центр, Москва
По результатам гистоморфологического исследования печени мышей при подострой интоксикации CCL4 на фоне интенсивной физической нагрузки женьшень и элеутерококк проявили достоверные гепатопротекторные свойства, сопоставимые с препаратом сравнения — Карсилом.
Ключевые слова: гистоморфология, печень, адаптогены, четыреххлористый углерод, физическая нагрузка, мыши.
HISTOLOGICAL EXAMINATION OF HEPATOPROTECTIVE ACTIVITY OF PHYTOADAPTOGENSON CARBON TETRACHLORIDE INDUCED LIVER INJURY IN RATS INVOLVED IN STRENOUS EXERCISE
I. G. Pechenkina, S. V. Kozin, D. V. Bulanov
The findings of histological examination of mice liver in subacute CCL4 liver injury in mice involved in srenous exercise revealed reliable hepatoprotective properties of ginseng and eleuterococcus correlating with those of the comparison drug of karsil.
Key words: histological examination, liver, phytoadaptogens, carbon tetrachloride, strenous exercise, mice.
Последнее время в общей структуре заболеваний большую долю занимает патология гепатобилиар-ной системы. Одной из наиболее распространенных причин этих заболеваний являются токсические воздействия. К ним относятся лекарственные препараты, алкоголь, агенты, загрязняющие окружающую среду. Помимо токсических поражений отрицательное влияние на печень оказывают также другие неблагоприятные факторы, в частности, повышенная физическая нагрузка [1,5].
ЦЕЛЬ РАБОТЫ
В связи с этим, представляется актуальным проведение поиска и разработки гепатопротекторных средств, обладающих высокой безопасностью, низкой токсичностью даже при длительном систематическом применении, возможностью превентивного использования. К таким препаратам относятся препараты растительного происхождения, в частности фитоадаптогены [2, 7].
В рамках исследования защитного действия фи-тоадаптогенов (элеутерококка и женьшеня) при подостром поражении печени на фоне интенсивной физической нагрузки нами была проведена оценка гистоморфологической картины печени подопытных животных.
МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ
Эксперимент проводился на белых беспородных мышах-самцах массой 28—30 г. Было сформировано 5 опытных групп по 12 животных. Для гистоморфологического исследования методом случайных чисел было
отобрано по 3 животных из каждой группы. Гепатоток-син (в виде 10%-го раствора CCL4 на оливковом масле) вводили животным внутрижелудочно в дозе 30 мл/кг 2 раза в неделю в течение трех недель (6 введений). Методика подострого поражения печени CCL4 была разработана нами на основе методики, рекомендованной руководством по экспериментальному изучению новых фармакологических веществ [4]. Экспериментальные животные опытных групп внутрижелудочно получали деалкоголизированные экстракты элеутерококка и женьшеня в виде водной взвеси в дозах по 2,5 мл/кг и препарат сравнения — карсил в дозе 100 мг/кг ежедневно в течение двух недель перед началом интоксикации, а также в течение последующих трех недель на фоне введения CCL4. Интактная группа животных получала внутрижелудочно эквивалентные объемы воды и оливкового масла вместо исследуемых препаратов и токсина соответственно, контрольная группа — воду и раствор CCL4. На фоне введения препаратов и токсина экспериментальные животные подвергались еженедельному плаванию до полного утомления с грузом 7 % от массы тела животного при температуре воды 28 оС [3].
На 36-е сутки от начала опыта мышей выводили из эксперимента и забирали фрагменты ткани печени для проведения гистоморфологических исследований.
Морфологическое исследование фиксированных забуференным 10%-м формалином фрагментов ткани печени включало в себя микроскопическое исследование серийных срезов толщиной 3 И. Г.4 мкм, окрашенных рутинными методами (гематоксилин-эозин) [6].
78
Выпуск 2 (50). 2014
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Изучение гистоморфологической картины печени у контрольных животных выявило ряд сильно выраженных изменений общей структуры печени по сравнению с интактом (рис. 1—2). Наблюдаются признаки компенсаторно-приспособительных реакций печени на токсическое воздействие в виде формирования нодулей, участков мелкоузловой перестройки печеночной паренхимы. При этом сохраняются зоны альтерации, которые характеризуются вакуольной дистрофией, изменениями ядер гепатоцитов, увеличением количества куп-феровских клеток и их гиперплазией. Следует отметить выраженное, но неравномерное полнокровие центральных вен и сосудов триад, полнокровие печеночных синусов с участками заболачивания эритроцитами. Расширение и полнокровие межбалочных капилляров более выраженное по сравнению с группой интактных животных. Появляются рассеянные инфильтраты, представленные лимфоцитами и значительным количеством сегментоядерных лейкоцитов. Наблюдается массивный цитолиз, без образования фиброзных изменений стромы.
Таким образом, можно сказать, что у группы мышей, получавших CCL4, в печени развивается подострый
субтотальный паренхиматозно-интерстициальный токсический гепатит с частичной узелковой трансформацией.
На гистоморфологической картине печени животных, получавших карсил на фоне введения CCL4, отсутствуют многие изменения, наблюдаемые в контрольной группе: общая структура печени сохранена, лишь местами наблюдается некоторая тенденция к микронодулярности ткани печени, значительно менее выражена вакуольная дистрофия, большинство ядер гепатоцитов сохранены, отсутствует изменение количества купферовских клеток, меньше очагов воспалительной инфильтрации (рис. 3).
В результате изучения гистоморфологической картины печени у животных, получавших экстракт элеутерококка в дозе 2,5 мл/кг, были выявлены следующие отличия от контрольной группы: общая структура печени значительно более сохранна, однако, если сравнить с гистоморфологической картиной печени животных, принимавших карсил, вакуольная дистрофия более выраженная. Также сохраняется слабо выраженная тенденция к микронодулярности. Полнокровие центральных вен, сосудов триад и межбалочных капилляров незначительно, расширения межбалочных капилляров не наблюдалось. Ядра имеют минимальные изменения.
а
б
Рис. 1. Гистоморфологическая картина печени интактных животных: а — увеличение х 200, б — увеличение х 400 (окрашивание гематоксилин-эозином)
а б
Рис. 2. Гистоморфологическая картина печени животных, получавших CCL4 на фоне интенсивной физической нагрузки (контрольная группа): а — увеличение х 200, б — увеличение х 400 (окрашивание гематоксилин-эозином)
Выпуск 2 (50). 2014
79
а б
Рис. 3. Гистоморфологическая картина печени животных, получавших карсил (препарат сравнения) на фоне под острой интоксикации CCL4 в условиях интенсивной физической нагрузки: а — увеличение х 200, б — увеличение х 400 (окрашивание гематоксилин-эозином)
Сохраняется зернистость цитоплазмы гепатоцитов. Вакуолизация микрокапельная, слабо выраженная. Наблюдается умеренная гиперплазия купферовских клеток, и их количество несколько повышено. Воспалительная инфильтрация практически отсутствует (рис. 4).
Сравнение микропрепаратов печени мышей, получавших экстракт женьшеня в дозе 2,5 мл/кг, с микропрепаратами контрольной группы дало следующие результаты: морфологическая структура печени по со-
хранности практически сопоставима с таковой у мышей, получавших препарат сравнения. Однако локально наблюдается более выраженная воспалительная инфильтрация. Отсутствует тенденция к микронодуляр-ности. Центральные вены и сосуды триад умеренно полнокровны. Ядра гепатоцитов практически нормальны. Зернистость цитоплазмы сохранена, наблюдаются небольшие участки с микрокапельной вакуолизацией. Количество купферовских клеток в норме (рис. 5).
а б
Рис. 4. Гистоморфологическая картина печени животных, получавших препарат элеутерококк на фоне под острой интоксикации CCL4 в условиях интенсивной физической нагрузки: а — увеличение х 200, б — увеличение х 400
(окрашивание гематоксилин-эозином)
а б
Рис. 5. Гистоморфологическая картина печени животных, получавших препарат женьшень на фоне под острой интоксикации CCL4 в условиях интенсивной физической нагрузки: а — увеличение х 200, увеличение б — х 400 (окрашивание гематоксилин-эозин)
80
Выпуск 2 (50). 2014
Для объективной оценки выраженности морфологических признаков печеночной ткани экспериментальных животных была введена балльная шкала (от 0 до 5), по которой оценивались следующие признаки патологии печеночной ткани:
1) изменение общей структуры печени;
2) полнокровие центральных вен и сосудов триад;
3) расширение полнокровия межбалочных капилляров;
4) изменение ядер гепатоцитов;
5) изменение (вакуолизация) цитоплазмы гепатоцитов;
6) изменение количества купферовских клеток;
7) воспалительная инфильтрация стромы;
В табл. приведены суммы балов по семи признакам для каждого исследованного животного всех групп.
Влияние карсила, экстрактов женьшеня, элеутерококка на морфологическую сохранность печени мышей при подостром введенииCCL4 на фоне интенсивной физической нагрузки
Выраженность морфологических изменений печени в балах
интакт контроль карсил элеутерококк женьшень
5 18 12 15 7
5 16 9 12 6
5 18 7 8 6
р1 < 0,05* р1 < 0,05* р1 < 0,05* р1 < 0,05*
р2 < 0,05** р < 0,05**
*При сравнении с группой интакт;
**при сравнении с группой контроль;
Достоверность различий результатов бальной оценки морфологических признаков исследуемой печеночной ткани оценивалась с помощью U-критерия Уилкоксона-Манна-Уитни (при р < 0,05).
Как видно из данных, представленных в табл., лечебно-профилактическое применение элеутерококка и женьшеня в значительной мере снижает выраженность ССЦ,-индуцированных изменений в печени мышей, под-
вергавшихся физической нагрузке. Интересно, что по своемугепатопротекторному действию женьшень проявил эффект, сопоставимый с таковым у карсила.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Таким образом, исходя из полученных данных, можно сделать вывод, что изучаемые препараты элеутерококка и женьшеня показали достоверные гепатопротек-торные свойства в эксперименте на мышах при подостром поражении CCL4 при интенсивной физической нагрузке. Об этом свидетельствуют результаты гистоморфологического исследования печени подопытных животных.
ЛИТЕРАТУРА
1. Болдогуев В. М. Адаптогенное действие растительного средства «Адаптофит-28»: Автореф. дис. ... канд. мед. наук. — Улан-Удэ, 2011. — 22 с.
2. Корсун В. Ф., Николаев С. М., Даргаева Т. Д. и др. Лекарственные растения в гепатологии / Под ред. В.Ф. Корсуна. — М.: Русский врач, 2005. — 274с.
3. Крендаль Ф. П., Козин С. В., Левина Л. В. Сравнительная характеристика препаратов из группы фитоадаптоге-нов — женьшеня, элеутерококка и родиолы розовой / Под ред. С. В. Грачева. — М.: ПРОФИЛЬ, 2007. — 392 с.
4. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / Под общ. ред. член.-корр. РАМН, проф. Р У Хабриева. — 2-изд., пере-раб. и доп. — М.: ОАО «Изд. «Медицина», 2005. — 832 с.
5. Huang S.-C., Lee F.-T., Kuo T.-Y., et al. // Chinese Journal of Physiology. — 2009. — Vol. 52 (5). — P 316—324.
6. Maynard R., Downes N., Finney B. Histological Techniques. An Introductions for Beginners in Toxicology. — Royal Society of Chemistry Books, 2014. — 200 p.
7. Shim Ji-Y., Kim Mi-H., Kim H.-D., et al. // Toxicology and Applied Pharmacology. — 2009. — Nov. — Vol. 242. — P 318—325.
Контактная информация
Печенкина Ирина Геннадьевна — аспирант лаборатории биологически активных соединений НИИ Фармации ГБОУ ВПО Первого МГМУ им. И. М. Сеченова Минздрава России, e-mail: [email protected]
Выпуск 2 (50). 2014
81
