CC BY
7Проблемы медицинской микологии. 2020, Т.22. №3
MORPHOLOGICAL STRUCTURE OF STAPHYLOCOCCUS EPIDERMIDIS BIOFILM Stepanov М.С.
Acad. E.A. Wagner Perm State Medical University, Perm, Russia
Существующие методы визуализации биопленок не позволяют дифференцировать их компонентный состав, а также изучить особенности внутренней структуры.
Цель исследования - апробация нового способа морфологической оценки микробной биопленки.
Материалы и методы. Для формирования биопленок использовали подход, когда предметное стекло располагали по отношению к чашке Петри под углом в 30о-45о, а в пространство между чашкой Петри и предметным стеклом заливали взвесь тест-штаммов Staphylococcus epidermidis АТСС28922 в мясо-пептонном бульоне. После 24 ч инкубации при 37 оС стекло извлекали и после промывки и фиксации окрашивали по методу Грама. Микроскопирование осуществляли с помощью видеоокуляра DCM 310 и программы Scope photo x86, 3.1.312.
Результаты. Установлено, что биопленка S. epidermidis имеет слоистое строение и можно дифференцировать 4 слоя, отличающиеся по размеру, густоте заселения микроорганизмами и содержанию матриксного вещества. Самый наружный слой (193±20 мкм), образовавшийся на границе двух сред и имеющий интенсивную окраску, содержит фрагменты биопленки на разной стадии отрыва от основной структуры. Следующий слой - плотный, значительно больше первого (269±41 мкм; p<0,05). Через всю толщу биопленки проходят каналы разного диаметра (от 10 до 24 мкм), которые в ряде случаев сливаются в большие цистерны. Предпоследним слоем является слой матриксного вещества (508±50 мкм; p<0,05), содержащий лишь единичные вкрапления микроорганизмов на большом протяжении, поскольку служит местом запасания питательных веществ. Последний слой составляют сами клетки-персистеры. Биопленки, полученные таким путем, могут быть окрашены разными красителями, что позволяет, кроме морфологической структуры, оценить биохимический состав отдельных элементов пленки.
Заключение. Предлагаемый способ формирования биопленок удобен для их визуализации и оценки их структуры. Кроме этого, такой способ может быть использован для изучения действия антимикробных препаратов на бактериальные пленки.
ГИСТОЛОГИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ RHIZOPUS MICROSPORUS, ИНФИЦИРУЮЩИХ ЛЕГКИЕ МЫШЕЙ
Степанова А.А.,| Васильева Н.В., Босак И.А., Авдеенко Ю.Л., Чилина Г.А., Выборнова И.В.
НИИ медицинской микологии им. П.Н. Кашкина Северо-Западного государственного медицинского университета им. И.И. Мечникова, Санкт-Петербург, Россия
HISTOLOGICAL INVESTIGATION OF RHIZOPUS MICROSPORES, INFECTED MURINE LUNG
Stepanova А.А.,| Vasilyeva N.V., Bosak I.A., Avdeenko Y.L., Chilina G.A., Vy-bornova I.V.
Kashkin Research Institute of Medical Mycology of North-Western State Medical University named after I.I. Mechnikov, St. Petersburg, Russia
Rhizopus microsporus v. Tiegh вызывает широкий спектр микотических поражений у человека.
Цель исследования - попытка моделирования экспериментального мукор-микоза с использованием мышей, изучение особенностей гистологической картины микотического поражения легких данным видом гриба.
Материал и методы. Подробности моделирования экспериментального му-кормикоза были освещены в работе Босак И.А с соавторами «Изучение вирулентности мукоромицетов в экспериментальной модели на животных». Использовали штамм PKnrF-1538 («Российская коллекция патогенных грибов»). Кусочки легких мышей через 5 дней после инфицирования фиксировали 3 часа в 3% растворе глутарового альдегида, затем пост-фиксировали 6 часов в 1% растворе осмиевой кислоты, обезвоживали в серии спиртов и ацетоне, заключали в смесь эпоксидных смол эпон-аралдит. Полутонкие эпоксидные срезы получали с помощью стеклянных ножей на приборе Pyramitom, окрашивали толуидиновым синим и изучали в световом микроскопе Leica DM LB2 со встроенной камерой DFC320 (Leica, Германия).
Результаты. В ткани легких хаотично ориентированные, широкие (5-10 мкм) гифы гриба формировали небольшие по площади скопления. Профили гиф были ровные или слегка искривленные, часто формировали скученные по типу «розеток» латеральные ответвления, располагающиеся под прямым углом. Иногда наблюдали одиночные интеркалярные хламидоспоры бочонковидной формы (5х7 мкм). Септы выявляли редко, в основном вблизи вертикально расположенных формирующихся спорангиеносцев. Латеральные клеточные стенки и септы отличались высоким контрастом, что делало гифы гриба легко различимыми на срезах
легких. В сосудах разного калибра обнаружили обильные скопления хаотично ориентированных гиф (4-5 мкм). Иногда наблюдали картины проникновения гиф гриба через стенку сосуда. Воспалительная реакция умеренная, представлена макрофагами и нейтрофилами, последние доминировали.
Заключение. Для анализируемого случая мукормикоза характерна тропность гиф гриба к сосудам с последующим их тромбозом. Плотность расположения гиф гриба была наибольшей в просвете сосудов; в ткани легких мышей гифы гриба выявляли редко, что, возможно, и объясняет наличие слабовыраженной воспалительной реакции. Присутствие гиф гриба в сосудах позволяет предположить наличие генерализованной формы мукормикоза.
УЛЬТРАСТРУКТУРА КЛЕТОК ВЕГЕТАТИВНОГО МИЦЕЛИЯ TRICHOPHYTON SIMII
Степанова А.А.,| Васильева Н.В., Разнатовский К.И., Чилина Г.А., Шадрина К.Ю.
Северо-Западный государственный медицинский университет им. И.И. Мечникова, Санкт-Петербург, Россия
ULTRASTRUCTURE OF THE CELLS OF VEGETATIVE MYCELIUMOF THE TRICHOPHYTON SIMII
Stepanova A.A.,| Vasilyeva N.V., Raznatovsky K.I., Chilina G.A., Shadrina K.Y.
North-Western State Médical University named after I.I. Mechnikov, St. Petersburg, Russia
Trichophyton simii (Pinoy) Stockdale вызывает заболевания у человека и животных, может быть причиной онихомикоза, опоясывающего лишая, а также микоза гладкой кожи туловища. Данные по особенностям ультраструктурной организации клеток вегетативного мицелия данного вида гриба в литературе отсутствуют.
Цель - изучение тонкого строения зрелых клеток вегетативного мицелия T. simii, выращенных in vitro.
Материал и методы. Штамм (PWTF-317) T. simii был выделен от больного онихомикозом. Кусочки с разных зон колоний гриба c фрагментом питательной среды фиксировали для трансмиссионной электронной микроскопии по стандартной методике через 10 и 15 дней после культивирования на среде Сабуро при 28 °С. Ультратонкие срезы получали на ультратоме LKB V и исследовали в микроскопе Jem 100 CX.
Результаты. В центральной части зрелой клетки воздушного и субстратного вегетативного мицелия расположено одно интерфазное ядро округлой (2,0 мкм) формы. Для него характерно наличие диффузного хроматина и одного эксцентричного ядрышка (0,2 мкм) с неровным контуром. Последнее состоит из гранулярного и фибриллярного компонентов, представленных в равной мере. Вакуолизация клеток умеренная. Вакуоли средних размеров, светлые либо равномерно заполненные темным фибриллярным материалом. Митохондрии в числе 7-9 на медианном срезе клетки. Они в основном одиночные, редко - в группах по 2-3, с плотным матриксом и многочисленными светлыми, хаотично ориентированными кристами. Запасные вещества в виде умеренного количества округлой формы (0,2-0,3 мкм) светлых липидных включений, собранных в немногочисленные группы. Компоненты эндомембраной системы в виде редких одиночных светлых пузырьков, приуроченных к двухслойной (0,02 мкм) клеточной стенке.
В целом особенности ультраструктурной организации зрелых клеток вегетативного мицелия воздушного и субстратного мицелия у объекта настоящего исследования были сходными. Различия состоят в большей насыщенности последних запасными липидами и наличии снаружи их клеточных стенок отложений в виде редких мелких темных неправильной формы включений.
Заключение. Ультраструктурный облик зрелых клеток T. simii в условиях культуры определяет присутствие одного ядра, умеренное количество митохондрий и запасных веществ, бедность компонентами эндомембранной системы и наличие тонкой клеточной стенки.
CRYPTOCOCCUS NEOFORMANS: ЦИТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ В ХОДЕ IN VITRO^IN VIVO ТРАНСФОРМАЦИИ ДРОЖЖЕВЫХ КЛЕТОК ШТАММОВ РАЗНОЙ ВИРУЛЕНТНОСТИ
Степанова А.А.|', Васильева Н.В.1, Ямагучи М.2, Босак И.А.1
1Северо-Западный государственный медицинский университет им. И.И. Мечникова, Санкт-Петербург, Россия; 2Центр исследований по медицинской микологии, Университет г. Чиба, Япония
CRYPTOCOCCUS NEOFORMANS: CYTOLOGICAL PECULIARITES DURING IN VITRO^IN VIVO TRANSFORMATION OF YEAST CELLS WITH DIFFERENT VIRULENCE
Stepanova AAj.1, Vasilyeva N.V.1, Yamaguchi M.2, Bosac Y.A.1
1North-Western State Medical University named after I.I. Mechnikov, St. Petersburg, Russia; 2Medical Mycology Research Center, Chiba University, Japan
