CC BY
63
УДК 619:636.38:611.36
Ключевые слова: печень, овца, гистология, гистохимия, инвазия
Key words: liver, sheep, histology, histochemistry, invasion
Ван Бэнь, Донкова Н. В.
ГИСТОЛОГИЧЕСКИЕ И ГИСТОХИМИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ПЕЧЕНИ ОВЕЦ ПРИ ИНВАЗИЯХ
HISTOLOGICAL AND HISTOCHEMICAL CHARACTERISTICS OF LIVER OF INFESTED SHEEP
'Цзилинский аграрный научно-технический институт Адрес: КНР, г. Цзилинь, Экономико-технологический район, Ханлин роуд, 77 'Jilin Agricultural Science and Technology College Address: China, Jilin, Economic Technology District, Hanlin Road, No.77 2ФГБОУ ВПО «Красноярский государственный аграрный университет» Адрес: 660049, Россия, г. Красноярск, ул. Мира, 90
2Krasnoyarsk State Agrarian University Address: 660049, Russia, Krasnoyarsk, Mira str., 90
Ван Бэнь, аспирант1 / Wang Вen, Postgraduate' Донкова Наталья Владимировна, д. в. н., проф., зав. кафедрой анатомии, патологической анатомии и хирургии2. E-mail: dnv-23@mail.ru
Donkovа Natalja V., Doctor of Veterinary Medicine, Professor, Head of the Dept. of Anatomy, Pathological Anatomy and Surgery2. E-mail: dnv-23@mail.ru
Аннотация. В статье представлены результаты гистологических и гистохимических исследований печени овец тувинской короткожирнохвостой породы в условиях Республики Хакасия при эхинококкозе, дикроцелиозе и строн-гилятозе. Установлено, что микроструктурные изменения паренхимы печени овец при инвазиях сопровождаются нарушением синтеза гликогена, развитием дистрофических и некробиотических процессов в гепатоцитах. Summary. The article presents the results of histological and histochemical studies of the liver of sheep with echinococcosis, dicroceliasis and strongylatosis. The sheep of Tuvinian short-fat tailed breed were raised in the Republic ofKhakassia. It was found that the microstructural changes of the liver parenchyma of the infested sheep are accompanied by the abnormality in glycogen synthesis and the development of dystrophic and necrobiotic processes in hepatocytes.
Введение
Овцеводство является основной, высокодоходной и развивающейся отраслью животноводства в мире. Однако развитие овцеводства в регионах в значительной мере сдерживается различными инфекционными и паразитарными болезнями овец [7]. Гельминтозы животных имеют широкое распространение и наносят огромный экономический ущерб животноводству, который складывается не только из гибели животных, недополучения приростов, снижения мясной и молочной продуктивности и уменьшения настрига шерсти, но и от получения продукции низкого качества [5, 9]. Н. А. Зиборов отмечает, что у молодняка овец зараженность монезиями составляет 33,4 %, нематодами желудочно-кишечного тракта — 66,7 % и эймерия-ми - 100 % [4].
Наиболее часто патологическому воздействию токсинов гельминтов и самих гельминтов подвергается печень как центральный орган метаболизма. Некоторые гельминты (фасциолы, дикроцелии и эхинококки), паразитируя в организме животных, могут повреждать анатомические структуры печени [1] и влиять на ее функцию [6, 3]. При этом в научной литературе сведения о микроструктурных изменениях в печени овец при инвазиях немногочисленны и противоречивы [8], что и послужило поводом к их изучению.
Целью нашего исследования явилось изучение гистологических и гистохимических особенностей печени овец при инвазиях: эхинококкозе, дикроцелиозе, стронгилоидозе.
Материалы и методы
Работа выполнена на кафедре анатомии, патологической анатомии и хирургии
Красноярского государственного аграрного университета в 2014 году. Объектом исследования являлись овцы (валухи) тувинской короткожирнохвостой породы 6,5-месячного возраста, разводимые в Аскизском районе Республики Хакасия. Материалом для исследования послужила печень. Во время убоя животных печень осматривали с диа-фрагмальной и висцеральной поверхности и на разрезе, взвешивали, измеряли линейные размеры и отбирали кусочки для гистологического исследования. При осмотре печени иногда обнаруживали эхинококковые кисты. При исследовании кала в некоторых образцах обнаружены яйца стронгилят и дикроцелий.
Для гистологических и гистохимических исследований кусочки печени фиксировали в 10%-м растворе нейтрального формалина, промывали под проточной водой в течение суток, обезвоживали путем применения спиртов различной крепости, заливали в парафин и изготавливали срезы толщиной 8-10 мкм на микротоме с электроприводом и микропроцессорным управлением МЗП-01 «Техном». Для получения обзорных препаратов гистологические срезы окрашивали гематоксилином Эрлиха и эозином. Колла-геновые волокна соединительной ткани выявляли по методу Ван Гизон и по методу Маллори [10]. Фосфолипиды выявляли суданом черным Б. Для выявления гликогена использовали ШИК-реакцию. Количество гликогена в гепатоцитах определяли полуколичественным методом.
Препараты просматривали под микроскопом «Микмед-5» при объективах 10*, 40* и 90*. Микрофотосъемку проводили с использованием камеры Canon.
Результаты исследований
Ранее нами было показано [2], что анатомически печень овец тувинской короткожир-нохвостой породы 6,5-месячного возраста имеет буро-красный цвет; на ее тупом крае имеются неглубокие вырезки: пищеводная и вырезка для каудальной полой вены. Со стороны острого края печень разделена вырезками на левую и правую доли. На правой доле различаются хвостатая доля
с хвостатым и сосцевидным отростками и квадратная доля. Сосцевидный отросток нависает над воротами печени. В печени овцы, у которой выявлена в правой доле эхинококковая киста диаметром до 3 см (рис. 1), микроструктурные изменения обусловлены сдавливанием кистой паренхимы печени, кровеносных сосудов и желчных путей с развитием дистрофических изменений и атрофией тканей печени.
При микроскопическом исследовании печени овец, свободных от гельминтов, установлено, что орган снаружи покрыт соединительнотканной капсулой, основу которой составляют коллагеновые волокна. При окрашивании срезов печени по методу Ван Гизон коллагеновые волокна капсулы, располагающиеся преимущественно продольно, приобретали красный цвет (рис. 2).
Слаборазвитые соединительнотканные перегородки, которые делят печень на дольки, представлены единичными волокнами, количество которых увеличивается в зоне портальных трактов. Дольчатая структура печени выявляется особенно хорошо при окрашивании срезов по методу Ван Гизон. В центре печеночной дольки, а иногда эксцентрично, расположена центральная вена, которая относится к венам безмышечного типа, ее стенка выстлана прерывистым эндотелием. Форма центральной вены от округлой до овальной, просвет хорошо выражен, в просвете центральной вены иногда встречаются остатки крови (рис. 2).
В печени овцы, у которой выявлена эхинококковая киста, основные изменения связаны с компрессией печеночных пластинок, атрофией гепатоцитов, при этом количество и размеры синусоидальных клеток значительно увеличено, а в зоне синусоидных капилляров обнаруживаются скопления лимфоцитов, гистиоцитов, плазматических клеток и нейтрофилов. В центральной вене печеночной дольки значительное скопление сгустков крови - признак плохого обескровливания (рис. 3).
В междольковой соединительной ткани печени овец, свободных от гельминтов, портальные тракты представлены сосудами триады: артериями, венами и желчными
протоками. Вены в триаде имеют наибольший просвет неправильной, чаще вытянутой формы, эндотелиальная выстилка гладкая ровная, мышечная оболочка представлена узким слоем из гладких миоцитов. Артерии в зоне триады мелкие, просветы узкие, внутренняя оболочка (интима) извилистая, выстлана плоскими эндотелиоцитами. Желчные протоки в зоне триады мелкие, просветы выстланы кубическими эпителиоцитами, что отличает их от артерий. В зоне триады (портальной зоне) иногда встречаются скопления лейкоцитов. При окраске по Малло-ри вокруг сосудов триады выявляются извилистые коллагеновые волокна синего цвета (рис. 4).
В печени овец, свободных от гельминтов, радиально от центральной вены к границам дольки расположены тяжи печеночных клеток (гепатоцитов) - печеночные балки. Гепатоциты имеют 4-5-угольную, иногда овальную форму. На фоне оксифильной цитоплазмы гепатоцитов видна мелкая зернистость. Базофильное ядро (иногда два ядра) в гепатоците относительно крупное округлое или овальное, расположено, как правило, в центре клетки. На фоне слабобазофильной кариоплазмы выделяются одно или два ин-тенсивно-базофильных ядрышка. Базофиль-ный хроматин сосредоточен преимущественно у кариолеммы. Синусоидные капилляры немного расширены, синусоидальные клетки немногочисленны, их ядра уплощенные, пространства Диссе не видны (рис. 5).
В печени овцы, у которой выявлена эхинококковая киста, на гистологических препаратах отмечается дискомплексация печеночных балок. Цитоплазма содержит слабооксифильную зернистость с признаками гидропической дистрофии, ядра в состоянии пикноза и кариолиза, встречаются очаги некрозов. Синусоидные капилляры значительно расширены, синусоидальные клетки многочисленны, их ядра более округлые, пространства Диссе расширены (рис. 6).
У овец, свободных от гельминтов, при окрашивании срезов печени Шифф-йодной кислотой в гепатоцитах определяются ШИК-положительные гранулы, которые равномерно заполняют цитоплазму, гранулы мелкие
Рис. 1. Печень овцы. Висцеральная поверхность. Эхинококковая киста показана стрелочкой.
ярко-розового цвета; гликоген выявляется в большинстве гепатоцитов печеночных пластинок, но чаще в гепатоцитах, расположенных ближе к границе дольки (рис. 7).
В печени овец, у которых выявлены в кале яйца дикроцелий и стронгилят, основные изменения касаются локализации и количества гликогена в печеночной дольке. Так, количество гликогена в печени овец, у которых обнаружены яйца дикроцелий, снижено. Гранулы гликогена сосредоточены чаще в гепатоцитах, расположенных ближе к границе печеночных долек, то есть в пе-рипортальной зоне, редко - в гепатоцитах, расположенных центролобулярно (рис. 8). В печени овец, у которых выявлены яйца стронгилят, гликоген выявляется в гепатоцитах по всей длине печеночной пластинки, но большее количество гепатоцитов, заполненных гранулами гликогена, сосредоточено вокруг центральной вены печеночной дольки.
Выводы
Таким образом, микроструктурные изменения паренхимы печени овец при инвазиях
Рис. 2. Капсула печени овцы, свободной от гельминтов (показано стрелочкой). Окраска: по Ван Гизон. Об. 10х.
Рис. 3. Печень овцы. Эхинококкоз. а - воспалительный инфильтрат; б - сгустки крови. Окраска: гематоксилин и эозин. Об. 40*.
Рис. 4. Печень овцы, свободной от гельминтов. Триада: а - артерия; б - вена; в - желчный проток;
коллагеновые волокна. Окраска: по Маллори. Об. 40*.
Рис. 5. Печень овцы, свободной от гельминтов. Гепатоциты: а - с одним ядром; б - с двумя ядрами; в - синусоидальные клетки. Окраска: гематоксилин и эозин. Об. 40*.
сопровождаются нарушением синтеза гликогена, развитием дистрофических и некроби-отических процессов в гепатоцитах.
Рис. 6. Печень овцы. Эхинококкоз. Дискомплексация печеночных балок. н - некроз гепатоцитов. Окраска: гематоксилин и эозин. Об. 40*.
Рис. 7. Печень овцы, свободной от гельминтов. Распределение гранул гликогена в печеночной дольке. цв - центральная вена; гликоген. ШИК-реакция. Об. 40*.
Рис. 8. Печень овцы. Дикроцелиоз. Распределение гранул гликогена вокруг триады. а - артерия; в - вена; | - гликоген. ШИК-реакция. Об. 40*.
В печени овец при эхинококкозе изменения микроструктуры органа обусловлены сдавливанием кистой паренхимы печени, увеличением размеров и количества синусоидальных клеток, расширением пространств Диссе, скоплением сгустков крови в центральной вене. Гликоген определяется лишь в некоторых гепатоцитах, сохранивших балочное строение долек, а в гепатоцитах, которые находятся в состоянии дистрофии или некроза, гранулы гликогена не выявляются.
В печени овец, у которых при копроло-гических исследованиях обнаружены яйца дикроцилиев и яйца стронгилят, основные изменения выявляются на гистохимическом уровне и связаны со снижением количества и перераспределением включений гликогена в гепатоцитах.
Список литературы
1. Белкин, Б. Л. Патоморфологическая диагностика болезней животных. Атлас-альбом / Б. Л. Белкин, А. В. Жаров, В. С. Прудников. - М. : Аквариум Принт, 2013. - 232 с.
2. Ван Бэнь. Макро- и микроморфология печени овец тувинской короткожирнохвостой породы [Текст] / Ван Бэнь, Н. В. Донкова // Вестник КрасГАУ, 2015. - Вып. 2. - С. 185-189.
3. Жаров, А. В. Патологическая физиология и патологическая анатомия животных [Текст] / А. В. Жаров, Л. Н. Адамушкина. - СПб. : Лань, 2014. - 416 с.
4. Зиборов, Н. А. Распространение, сезонная и возрастная динамика ассоциативного заболевания, вызванного эймериями, нематодами и цестодами желудочно-кишечного тракта у овец на юге Казахстана [Текст] / Н. А. Зиборов // Инновационные болезни с.-х. животных и их профилактика. - Алматы, 1996. - С. 13-23.
5. Каримов, Ф. А. Минеральный состав и биохимические свойства костей у крупного рогатого скота при фасциолезе [Текст] / Ф. А. Каримов // Материалы Всерос. науч.- метод. конф. патологоанатомов вет. медицины. - М., 2003. - С. 85-86.
6. Кошеваров, Н. И. Влияние совместного пара-зитирования фасциол и дикроцелий в печени на их размеры и плотность популяции [Текст] / Н. И. Ко-шеваров // Материалы науч. конф. Всероссийского общества гельминтологов РАН, 2010. - Вып. 11. -С. 243-245.
7. Мадиева, К. М. Степень инвазированности овец северо-восточного Казахстана личинками вольфар-товой мухи [Текст] / К. М. Мадиева, А. А. Биткеева, Д. Т. Сапенов // ПМУ ХАБАРШЫСЫ Вестник ПГУ Сер. химико-биол., 2012. № 3. - С. 51-56.
8. Нигматуллин, Р. Г. Особенности морфологических изменений в печени овец при мелофагозе после лечения медиатрином и оксиметилурацилом [Текст] / Р. Г. Нигматуллин // Вестник БГАУ, 2012. - Вып. 3. - С. 36-38.
9. Сафиуллин, Р. Т. Эффективность разных лекарственных форм фенбендазола при гельминтозах овец [Текст] / Р. Т. Сафиуллин, Е. О. Чадина // Ветеринария, 2005. - № 3. - С. 31-33.
10. Хонин, Г. А. Морфологические методы исследования в ветеринарной медицине [Текст] : Учебное пособие / Г. А. Хонин, С. А. Барашкова, В. В. Семчен-ко. - Омск, 2004. - С. 117-118.
