CC BY
54
ГИСТОХИМИЧЕСКОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ ОСТЕОПОНТИНА И АГГРЕКАНА В ХРЯЩЕ УШНОЙ РАКОВИНЫ ПРИ УСТАНОВЛЕНИИ ВОЗРАСТА
С.В. Савченко1, В.П. Новоселов1, Е.В. Пяткова2, Е.В. Царенко1
1ГОУ ВПО Новосибирский государственный медицинский университет Минздравсоцразвития России 2ГОУ ВПО Красноярский государственный медицинский университет Минздравсоцразвития России
E-mail: sme@sibsme.ru
HISTOCHEMICAL DETERMINATION OF THE CONTENT AND OSTEOPONTIN AND AGGREKAN IN CARTILAGE HELIX IN THE ASSESSMENT OF AGE
S.V. Savchenko1, V.P. Novoselov1, E.V. Pyatkova2, E.V. Tsarenko1
Novosibirsk State Medical University Krasnoyarsk State Medical University
В работе представлены данные о показателях среднего значения интенсивности флуоресценции остеопонтина и аггрекана, которые отражают увеличение содержания изучаемых протеогликанов в хрящевой ткани. Изменения содержания которых непосредственно зависит от увеличения интенсивности флуоресценции и имеет корреляционную связь с возрастом. Фрагменты хрящевой ткани ушной раковины являются информативными объектами для исследования возрастных морфо-гистохимических изменений в хрящевой ткани и могут быть использованы для определения возраста человека при идентификации личности.
Ключевые слова: гистохимия, протеогликаны, хрящ ушной раковины, идентификация возраста.
The paper presents the data on indicators of the average fluorescence intensity of osteopontin and aggrekan. It represents an increase of the studied proteoglycan in cartilage helix. Changes in these indicators directly related to the increase in fluorescence intensity and is correlated with age. Fragments of cartilage ear are informative subjects for the study of age-morpho-histochemical changes in articular cartilage helix and can be used to determine a person’s age when personal identity.
Key words: histochemistry, proteoglycan, cartilage helix, personal identity.
Современные возможности идентификации личности основаны на индивидуальных особенностях каждого человека, к ним относятся пол, возраст, расовая принадлежность, особенности анатомического строения, антропометрические показатели, антигенные свойства, наличие определенных заболеваний, следы различных повреждений и некоторые другие особенности [1, 2, 5]. Проблема определения возраста, как одного из этапов судебно-медицинской идентификации личности, в последнее время приобрела большое значение [3, 4].
Материал и методы
С целью определения возраста для целей идентификации личности нами была проведена оценка результатов по определению содержания стабильных протеогликанов - остеопонтина и аггрекана в хряще ушной раковины с использованием гистохимической методики. Ма-
териалом для исследования послужили фрагменты хряща ушной раковины, полученные при аутопсии трупов лиц погибших в возрасте от 17 до 74 лет, поступивших в танатологическое отделение ГБУЗ НСО “Новосибирское Областное бюро судебно медицинской экспертизы”. Материал был систематизирован по следующим возрастным группам: 1-я группа - 17-21 год, 2-я группа - 22-35 лет, 3-я группа - 36-49 лет, 4-я группа - 50-60 лет, 5-я группа
- 61-74 года.
Количественное определение содержания остеопонтина и аггрекана в хряще проводилось с использованием методики непрямой иммунофлуоресценции. Фрагменты хрящевой ткани изымали непосредственно из ушной раковины трупа, отсекая ее в месте проекции треугольной ямки, верхней и нижней ножек противозавитка, межко-зелковой вырезки, верхней полости ножки завитка, диаметром 0,8 см. После этого из каждого фрагмента на аппарате “Microm НМ 550” (Carl Zeiss, Германия), готови-
Сибирский медицинский журнал, 2011, Том 26, № 1, Выпуск 2
лись криостатные срезы толщиной 10 мкм. Срезы помещали на предметные стекла в одной плоскости обработанные поли^-лизином. После этого осуществлялась инкубация с первичными антителами “остеопонтин АЬ” и “антиаггреган Ab” (R&D, mause анти human) в течение 60 минут. Затем проводилась трехкратная отмывка фрагментов в PBS. После этого исследуемый материал был окрашен вторичными антителами “Texas Red” (rabbit анти mouse), полученный субстрат заключался в 10% раствор глицерина, для более прочного прилегания срезов. Также использовался дополнительный метод окрашивания “DAPI”. Инкубация первичными и вторичными антителами проводилась при температуре 24 °С на термошейкере (Biosan). Флуометрия образцов также осуществлялась при стандартных условиях, при температуре 24 °С на микроскопе ‘Axioscop FL40” с использованием filter set 00 (569\ 613).
Результаты и обсуждение
При микроскопическом исследовании в зависимости от особенностей гистофлуоресценции получали имиджи в цветном режиме. Интенсивность специфического свечения оценивалась в градациях красного и зеленого цветов. В результате проведенного морфо-гистохимичес-кого исследования хрящевой ткани ушной раковины были получены конкретные данные о морфологических изменениях и интенсивности флуоресценции, отражающей состояние и распределение остеопонтина и аггре-кана в хрящевой ткани ушной раковины. Среднее значение интенсивности флуоресценции остеопонтина с учетом возрастной группы представлено в таблице (рис.1).
Из представленных данных следует, что с возрастом отмечается динамичное увеличение содержания исследуемых протеогликанов. Об этом свидетельствовали данные интенсивности флуоресценции протеогликанов, в
частности - остеопонтина, в хрящевой ткани. Сравнительный анализ среднего значения флуоресценции остеопонтина показал, что в возрастной группе от 17 до 21 года он составил 911,9 усл. ед., в группе от 22 до 35 лет -950,3 усл. ед., в возрастной группе от 36 до 49 лет - 1088,6 усл. ед., от 50 до 60 лет - 1376,2 усл. ед., и от 61 до 74 лет
- 1524,7 усл. ед.
Аналогичные данные были получены при проведении исследования с использованием гистохимического метода с целью выявления количественного содержания другого протеогликана - аггрекана. Так же, как и в случае с остеопонтином, использование флуоресцирующего красителя при исследовании хрящевой ткани ушной раковины позволило выявить динамичное увеличение интенсивности флуоресценции, отражающей состояние и распределение аггрекана в структуре хрящевой ткани с возрастом. Это хорошо видно на снимках, сделанных в различных возрастных группах (рис. 2, 3 на 3-й странице обложки).
При сравнительном анализе среднего значения интенсивности флуоресценции в возрастной группе от 17 до 21 лет среднее значение показателя содержания агг-рекана составило 1385 усл. ед., от 22 до 35 лет - 1548,3 усл. ед., в возрасте от 36 до 49 лет - 1678,6 усл. ед., а в возрасте от 50 до 60 лет - 1933,4 усл. ед.
Анализируя параметры возникшей гистофлуоресценции аггрекана хрящевой ткани в последней возрастной группе, были замечены особенности изменения ее интенсивности. Причиной данных изменений может служить процесс резорбции хрящевой ткани.
Заключение
Представленные данные позволяют заключить, что при исследовании стабильных протеогликанов хряща ушной раковины, интенсивность гистофлюоресценции
Рис. 1. Изменение интенсивности флуоресценции остеопонтина в хрящевой ткани ушной раковины
В.П. Новоселов и соавт.
ГИСТОХИМИЧЕСКОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ ОСТЕОПОНТИНА...
коррелирует с содержанием остеопонтина и аггрекана. Показатели изменения количественного состава остео-понтина и аггрекана объективно отражают состояние эластических свойств структуры и морфо-гистохимичес-ких особенностей состава хрящевой ткани ушной раковины в возрастном аспекте. В процессе исследования установлено, что фрагменты хрящевой ткани ушной раковины являются информативными объектами для исследования возрастных морфо-гистохимических изменений в хрящевой ткани и могут быть использованы при идентификации личности.
Литература
1. Абрамов С.С. Выбор методов исследования при судебномедицинской остеологической идентификации // Судеб-
но-медицинская экспертиза. - 1996. - Т. 39, № 4. - С. 1320.
2. Звягин В.Н. Проблемный анализ медико-антропологической идентификации личности в судебной медицине // Судебно-медицинская экспертиза. - 2003. - № 5. - С. 6-16.
3. Фоминых С.А. Возрастная изменчивость губчатого вещества дистального отдела лучевой кости и тел поясничных позвонков : автореф. дис. ... канд. мед. наук. - Барнаул, 2010. -25 с.
4. Янковский В.Э., Пятчук С.В. О возможности определения возраста человека по длинным трубчатым костям // Актуальные вопросы судебной и клинической медицины : сборник научно-практических работ. - Ханты-Мансийск, 2002.
- Вып. 6. - С. 68-69.
5. Ianarelli A.V. Ear identification. - Fremont, CA : Paramont Publishing, 1989. - 231 p.
Поступила 26.10.2010
