Гистохимический анализ листьев и корней лопуха большого (Arctium lappa L. ), произрастающего на территории Алтайского края Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

УДК 642.5

ГИСТОХИМИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ЛИСТЬЕВ И КОРНЕЙ ЛОПУХА БОЛЬШОГО (ARCTIUM LAPPA L.), ПРОИЗРАСТАЮЩЕГО НА ТЕРРИТОРИИ АЛТАЙСКОГО КРАЯ

© Л.М. Федосеева , Н.Н. Кнауб, Т.Г. Селигеева

Алтайский государственный медицинский университет, пр. Ленина, 40,

Барнаул (Россия) e-mail: ludmila@medlink.ru

Проведен гистохимический анализ листьев и корней лопуха большого. С помощью химических реакций, проведенных на срезах, определена локализация действующих веществ в изучаемом растительном сырье. Установлено наличие эфирных и жирных масел, фенольных соединений, слизи в корнях и листьях, а также инулина -в корнях.

Введение

Для установления подлинности лекарственного растительного сырья используются различные методы исследования, в частности макроскопические, микроскопические, химические, физико-химические и др. Каждый из перечисленных методов несет свою информацию и по-своему важен. Так, макроскопический анализ проводят с целью установления размера, цвета, запаха, вкуса лекарственного растительного сырья. С помощью микроскопического анализа изучается анатомическое строение растения, устанавливаются характерные диагностические анатомические признаки. Химические и физико-химические методы определения позволяют оценить наличие действующих и сопутствующих веществ и провести их идентификацию. Важной составной частью химических методов исследования является гистохимический анализ. С помощью гистохимических реакций выявляются биологически активные вещества и их локализация в тканях и органах. Исследования проводят на срезах свежего или фиксированного разными способами растительного материала [1].

Целью нашей работы являлось гистохимическое исследование наземных и подземных частей лопуха большого, произрастающего на территории Алтайского края.

Экспериментальная часть

Для изучения использовалось свежее растительное сырье, собранное в Хабарском районе Алтайского края. Гистохимические исследования проводились на поверхностных препаратах листа, срезах листа в области главной жилки и на срезах корня по описанным методикам [2]. Результаты гистохимических реакций наблюдались под микроскопом «Биолам Р1».

Обсуждение результатов Реакция с Суданом III

Судан Ш окрашивает жиры, эфирное масло в оранжево-желтый цвет.

В результате проведенной реакции обнаружено, что клеточные оболочки эпидермы, эфиромасличные железки листьев, секреторные клетки вокруг проводящих пучков в черешках, содержимое некоторых клеток паренхимы коры корня и сосуды ксилемы окрашивались в оранжево-желтый цвет (рис 1- А, Б), что говорит о наличии в них жирного либо эфирного масла.

* Автор, с которым следует вести переписку.

Рис. 1. Результат гистохимических реакций на эфирные и жирные масла с Суданом-111. А - поперечный срез корня: 1 - паренхима коры, 2 - сосуды ксилемы; Б - поперечный срез черешка: 1 - секреторные клетки, 2 - сосуды ксилемы

Реакция обнаружения эфирного масла

Для идентификации эфирных масел применялся раствор метилового синего в этиловом спирте. В результате реакции обнаруживалось, что содержимое эфирномасличных железок окрашивалось в синий цвет (рис. 2). Полученный результат свидетельствует о наличии эфирного масла в эфиромасличных железках.

Реакция Молиша

Данная реакция дает положительный результат со всеми углеводами: сахарами, крахмалом, инулином. В качестве реактивов использовались 10% раствор тимола в этиловом спирте, а также концентрированная серная кислота. Срез помещался в раствор тимола и концентрированной серной кислоты. Наблюдались включения оранжево-красного цвета по всей поверхности микропрепаратов корней и листьев.

Реакция с йодом на крахмал

Обнаружение крахмала в микропрепаратах листа и корня проводили с водным раствором иода в калия иодиде (реактив Люголя). В результате исследования характерного синего окрашивания не наблюдалось, что говорит об отсутствии крахмала.

Реакция осаждения инулина спиртом

Кусочки растительного материала фиксировались в 70% этиловом спирте в течение недели. Далее приготовленные срезы помещались в глицерин. В результате проведенной реакции в паренхиме коры корня наблюдались сферокристаллы инулина шарообразной формы, состоящие из многочисленных, тесно прилегающих друг к другу игольчатых кристаллов (рис. 3).

Рис. 2. Лист лопуха большого. 1 - эфиромасличная железка

Рис. 3. Сферокристаллы инулина

Реакция на слизь с тушью

К черной туши добавлялась вода очищенная в соотношении 1 : 10, раствор использовался для проведения реакции. После окрашивания препарата в поле зрения микроскопа наблюдались белые пятна клеток со слизью на темно-сером фоне окрашенных тканей (тушью окрашивались все ткани). Локализация слизи отмечалась в колленхиме листа - в области ребер главной жилки и проводящих пучков, а также по всей паренхиме коры корня (рис. 4).

Реакция на слизь с меди сульфатом и щелочью

Срезы помещались на 10 минут в концентрированный раствор меди сульфата, затем промывались водой и переносились в 50% раствор калия гидроксида. При этом наблюдалось окрашивание слизи в микропрепаратах в ярко-голубой цвет. Как и в результате реакции с тушью, локализация слизи отмечалась в колленхиме листа в области ребер главной жилки и проводящих пучков, а также по всей паренхиме коры корня.

Реакция на фенольные соединения с раствором калия бихромата

Кусочки сырья помещались в 10% раствор калия бихромата на неделю, затем готовились срезы. В результате проведенной реакции обнаруживались фенольные соединения, окрашивающие сердцевидные лучи в корне и колленхиму вокруг проводящих пучков на поперечном срезе черешка листа (рис. 5).

Реакция на фенольные соединения с хлоридом железа (Ш)

Поперечные срезы корня и листа в области главной жилки помещались в каплю 1% железа хлорида (Ш). При этом наблюдалось черное окрашивание по всей поверхности препаратов, что также говорит о наличии фенольных соединений.

А

Б

Рис. 4. Результат гистохимической реакции на слизь с тушью. А - поперечный срез корня лопуха большого: 1 - клетки со слизью в паренхиме коры; Б - поперечный срез листа лопуха большого:

1 - клетки со слизью

Рис. 5. Результат гистохимической реакции на фенольные соединения с калия бихроматом. А - корень лопуха, поперечный срез корня: 1 - сердцевинные лучи. Б - лист лопуха, поперечный срез черешка:

1 - обкладочные клетки проводящих пучков

Выводы

В результате проведенных гистохимических реакций на срезах листа и корня лопуха большого обнаружены эфирные масла, жирные масла, фенольные соединения, инулин, слизи, а также установлена их локализация:

- эфирные и жирные масла - в эфирномасличных железках листьев, в секреторных клетках вокруг проводящих пучков в черешках листа, в клетках паренхимы коры и сосудах ксилемы корня;

- фенольные соединения - в колленхиме вокруг проводящих пучков листа, в клетках паренхимы сердцевидных лучей, в коре корня;

- слизи - в колленхиме и паренхиме черешка листа и паренхиме коры корня;

- инулин - в паренхиме коры корня.

Список литературы

1. Гринкевич Н.И., Ладыгина Е.Я. Фармокогнозия: Атлас. М., 1989. 521 с.

2. Долгова А.А., Ладыгина Е.Я. Руководство к практическим занятиям по фармакогнозии. М., 1977. 255 с.

Поступило в редакцию 24 февраля 2004 г.