CC BY
14
© Коллектив авторов, 1997 г.
УДК 612.015.1:616.612-018:616.61-008.64-092.9
К.Л.Выриков, В.З.Клечиков, О.Н.Береснева
ГИСТОХИМИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ПРОКСИМАЛЬНЫХ ИЗВИТЫХ КАНАЛЬЦЕВ ПРИ ПОЧЕЧНОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТИ В ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ И КЛИНИЧЕСКОМ ИССЛЕДОВАНИЯХ
Кафедра патологической анатомии и Научно-исследовательский институт нефрологии Санкт-Петербургского государственного медицинского университета им. акад. И.П.Павлова, Россия
РЕФЕРАТ
Проведено морфофункииональное исследование состояния проксимальных извитых канальцев (ПИК) и эндотелия перитубулярных капилляров почек при развитии почечной недостаточности в эксперименте и клинике. Гистоэнзимологичес-кими методами оценивалась активность сукцинатдегидрогеназы, лактатдегидрогеназы, кислой и щелочной фосфатаз. Показано, что изменения активности исследуемых ферментов, обнаруженные как в эксперименте, так и на секционном материале, носят однонаправленный характер.
ABSTRACT
Morphofunctional investigation of proximal convoluted tubules and endothelium of peritubulary renal vessels were performed in experimental uremia and in patients during development of chronic renal. Hystochemicaly method used to appears the activity of lactat NADP , succinat NADP, acid and alkaline phosphatases. Our data showed that investigated enzymes activity distribution had similar character both in experiment and in sectional matherials.
Ключевые слова: хроническая почечная недостаточность, ферменты, проксимальные извитые канальцы.
Key words: chronic renal failure, enzymes, proximal convoluted tubule.
Введение
Существующие представления о характере структурно-функциональной перестройки нефро-нов при хронической почечной недостаточности (ХГ1Н) делают актуальным моделирование этого патологического процесса у экспериментальных животных, подвергнутых нефрэктомии ( НЭ ). Возникающие гиперфильтрация и гиперперфузия нефронов, сопровождающиеся протеинурией, гипертензией и нарастающей азотемией, сходны с патологическими состояниями организма человека при частичной утрате почечной паренхимы с последующим гломерулосклерозом [1,2]. Тем самым постулируется тезис о прямом повреждении клубочков при гемодинамических сдвигах [3 ].
Целью настоящей работы явилась морфо-функциональная оценка состояния проксимальных извитых канальцев ( ПИК ) при развитии почечной недостаточности в эксперименте и клинике.
Материал и методы
Исследован экспериментальный, биопсийный и секционный материал. Моделирование ХПН осуществлялось на половозрелых крысах-самцах линии ЭД^аг путем билатеральной двухэтапной НЭ. Животные декапитировались на 1, 7, 14, 30-е и 60-е сутки после операции. В исследование включены 15 крыс, у которых к 30-60-м суткам опыта в крови наблюдалось повышение концентрации мочевины до 19,0 + 0,9 (Р< 0,0001) и креатинина до 0,15± 0,003 (Р< 0,0001) ммоль/л. В качестве контроля использованы 10 интактных животных.
Клиническая группа представлена 48 больными хроническим гломерулонефритом ( ХНГ) в доазотемической стадии заболевания с концентрацией креатинина сыворотки не выше 0,177 ммоль/л, которым была выполнена пункционная нефробиопсия. Кроме того, изучены почки 32 человек, умерших от уремии в исходе ХШ, полученные при срочной аутопсии в пределах 1 ч с момента констатации биологической смерти.
Все образцы ткани почек замораживались в жидком азоте с последующим изготовлением криостатных срезов толщиной 10 мкм, на которых выявляли сукцинатдсгидрогеназу (СДГ), лактатдегидрогеназу (ЛДГ) по Нахлассу и Зелигману, а также кислую (КФ) и щелочную (ЩФ) фосфатазы методом азосочетания. Активность ферментов оценивалась количественно
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ
Нефрология, 1997
Е 60 : 50 40 ■ 30 20 10 0-
10 20
30 • 40
-4-
*
+
+
бЧ-э
*
а- -б
*
-э -
II
Е 60 50 40 30 20 10 О
б
10
20 ■ 30 40 -•
50 -60 ••
-Э +-
*
* 4-
э-
г *
Активность (Е) ферментов СДГ (I), ЛДГ (II), КФ (III) и ЩФ (IV) у интактных (а), нефрэктомированных (б) крыс, больных хроническим гломерулонефритом в доазотемической стадии (в) и умерших от уремии (г) в апикальных (А), базальных (Б) отделах цитоплазмы эпителия ПИК и в эндотелии (Э) перитубулярных капилляров. Достоверные отличия средних (Р < 0,05).
методом цитоспектрофотометрии в апикальных и базальных отделах цитоплазмы эпителия ПИК и в эндотелии перитубулярных капилляров. Параллельно кусочки ткани почки после фиксации в 10% нейтральном формалине заливались в парафин. Срезы толщиной 5 мкм окрашивались гематоксилином и эозином, пикрофуксином по Ван-Гизону и реактивом Шиффа.
При статистической обработке данных определялась достоверность средних величин и их различий.
Результаты
При гистологическом исследовании почек крыс наиболее выраженные изменения в эпителии ПИК развиваются к 30-м суткам эксперимента: эозинофилия цитоплазмы, гиалиново-капельная дистрофия, а также мелкие участки понефронного запустевания с лимфогистио-цитарной инфильтрацией. При изучении нефробиоптатов диапюстирован ХГН. Изменения эпителия ПИК минимальны, лишь в случае наличия нефротического синдрома наблюдалась гиалиново-капельная дистрофия. В почках умерших от уремии обнаружена картина гломерулонефритического нефросклероза.
Изменения активности исследованных дегидрогеназ и КФ при почечной недостаточности, обнаруженные как в эксперименте, так и в секционном материале, носят однонаправленный характер. Выявленное их повышение в эпителии ПИК и в эндотелии перитубулярных капилляров имеет, в основном, достоверный характер (рисунок). Активность ЩФ в почках нефрэктомированных крыс по сравнению с контролем снижена в апикальных отделах цитоплазмы эпителия и в эндотелии перитубулярных капилляров. При нефросклерозе аналогичные изменения сочетаются с повышением активности данного энзима в базальных отделах цитоплазмы эпителия исследованных канальцев.
Обсуждение
Таким образом, в исследованных вариантах почечной недостаточности обнаружен принципиально одинаковый характер изменения актив-
ности СДГ, ЛДГ, КФ и ЩФ в эпителии ПИК и в эндотелии перитубулярных капилляров, что, вероятно, свидетельствует об общих механизмах ее развития и ведущем значении в этом случае внутрипочечного кровотока. С учетом многочисленных литературных данных о связи процессов клеточного дыхания с транспортом в проксимальном сегменте нефрона, повышение активности СДГ, являющейся ключевым энзимом цикла трикарбоновых кислот, носит компенсаторный характер. Увеличение реабсорбции в этом случае приводит к снижению внутриканаль-цевого давления, облегчая клубочковую фильтрацию. Отчасти энергообеспечение транспортных процессов может осуществляться за счет иного пути утилизации глюкозы - гликолиза, основным ферментом которого является ЛДГ. Однако повышение ее активности может отражать и мозаичность повреждения, особенно, при снижении пассивного транспорта через апикальные мембраны канальцев, маркируемого ЩФ. Описанные изменения сочетаются с активацией лизисомально-вакуолярного аппарата нефроцитов, что, согласно мнению ряда исследователей, имеет важное значение в прогрес-сировании патологического процесса [4 ].
Заключение Проведенные исследования показали, что изменения, обнаруженные на секционном материале и в ткани почек экспериментальных животных, носят однонаправленный характер.
ЛИТЕРАТУРА
1. Anderson S., Meyer Т., Brenner В. The role of hemodynamic factors in the initiations and progressions of renal disease. // J. Urol.- 1985,- Vol. 133, N 3,- P.363-368.
2. Hostetter Т., Olson I., Rennke H. et al. Hyperfiltration in remnant nephrosis: A potentially adverse respouse to renal ablation. //Amer. J. Physiol.- 1981.-Vol.241, N 1,- P. 85-93.
3. Olson I., Hostetter Т., Rennke H. et al. Altered glomerulas permselectivity and progressive sclerosis following extreme ablation of renal mass. // Kidney Int.- 1982,- Vol. 22, N 2,- P. 112-126.
4. Williams P., Fass G., Bone J. Renal pathology and proteinuria determine progression in unteated mildmoderate chronic renal failure. // Qart. J. Med.- 1988,- Vol. 67, N 252.P.-343-354.
