CC BY
66
Научный журнал КубГАУ, №99(05), 2014 года
1
УДК 575.222.73
ГИБРИДОЛОГИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ИЗМЕНЧИВОСТИ ЧАСТОТЫ РЕКОМБИНАЦИИ (rf) В ПОПУЛЯЦИИ F2 ГИБРИДОВ РАСТЕНИЙ ТОМАТА
Лыско Ирина Анатольевна к.б.н.
Щербаков Николай Алексеевич к.с.-х.н.
Всероссийской научно-исследовательский институт биологической защиты растений, Краснодар, Россия
Проведен анализ динамики изменчивости частоты рекомбинации в популяции расщепляющихся F2 межвидовых и внутривидовых гибридов растений томата. Обнаружено, что частота рекомбинации зависит от компонентов скрещивания. Установлено, что мутантные формы Мо 393,
Мо 628 и межвидовой гибрид F1 Мо 628 х L. esculentum var. racemigerum целесообразно использовать в селекционном процессе в качестве индуктора генотипической изменчивости
Ключевые слова: ТОМАТ, ГИБРИД, ЧАСТОТА РЕКОМБИНАЦИИ, КРОССИНГОВЕР, ХРОМОСОМА, СЕГМЕНТ, ГЕНЕТИЧЕСКАЯ КАРТА
UDC 575.222.73
HYBRID ANALYSIS OF VARIABILITY OF RECOMBINATION FREQUENCY (RF) IN THE POPULATION OF F2 TOMATO HYBRIDS
Lysko Irina Anatolievna Cand.Biol.Sci.
Scherbakov Nikolay Alexeevich Cand.Agr.Sci.
All-Russian Research Institute of Biological Plant Protection, Krasnodar, Russia
The analysis of the variability dynamics of recombination frequency in the population of splitting F2 interspecific and intraspecific tomato hybrids has been carries out. It was discovered that recombination frequency depends on the components of cross breeding. It has been established that it is reasonable to use mutant forms of Мо 393, Мо 628 and interspecific hybrid F1 Мо 628 х L. esculentum var. racemigerum in selection process as an inductor of genotypic variability
Keywords: TOMATO, HYBRID, RECOMBINATION FREQUENCY, CROSSING-OVER, CHROMOSOME, SEGMENT, GENETIC MAP
Основным источником генотипической изменчивости у высших организмов является рекомбинация. Практически все сорта сельскохозяйственных растений и породы животных, а также значительная часть полезных штаммов микроорганизмов созданы с использованием рекомбинации. Изменение моногибридных расщеплений представляет определенный интерес для практической селекции как метод управления процессом формообразования.
К настоящему времени в научной литературе накоплены весьма многочисленные данные, указывающие на возможность отклонения расщеплений в F2 от ожидаемых, вызванных изменением частоты и спектра мейотической рекомбинации под воздействием как экзо-, так и эндогенных факторов воздействия [1 - 6].
http://ej.kubagro.ru/2014/05/pdf/32.pdf
Научный журнал КубГАУ, №99(05), 2014 года
2
При сцепленном наследовании генов характер моногибридного расщепления в F2 зависит от многих факторов: расстояния между генами, частоты кроссинговера в микро- и макроспороцитах, типа гетерозиготы, наличия в генотипе перестроек хромосом и специфических мутаций; внешних условий - температуры, облучения и т.д. [7, 8].
Значительные отклонения моногибридных расщеплений от ожидаемых соотношений чаще всего наблюдаются при отдаленной гибридизации. При скрещивании отдаленных форм возможно проявление аномальной изменчивости, при которой кроссинговер может разделить очень тесно сцепленные участки и в результате возникает совершенно новое сочетание с «мутантным» фенотипическим проявлением [9 - 12]. При внутривидовых скрещиваниях нарушения в расщеплении могут быть обусловлены рядом причин, включающим пенетрантность, мейотический дрейф, элиминацию части гамет и др. В связи с этим могут меняться частоты кроссинговера между маркерными генами [7, 13].
Главной причиной изменчивости частоты рекомбинации является генотипическая среда, чем сильнее генетическое различие между исходными формами, тем меньше частота кроссинговера в маркированном сегменте [14, 15].
Цель настоящей работы заключалась в проведении анализа изменчивости частоты рекомбинации в популяции F2 межвидовых и внутривидовых гибридов растений томата.
Для достижения данной цели были поставлены следующие задачи:
1) провести отбор маркерных мутантных форм томата с четким проявлением фенотипических признаков на ранней стадии онтогенеза;
2) оценить динамику рекомбинационной изменчивости расщепляющихся F2 гибридов потомства самоопыленных растений F1 гибридов;
http://ej.kubagro.ru/2014/05/pdf/32.pdf
Научный журнал КубГАУ, №99(05), 2014 года
3
3) выявить возможность индуцированного изменения генетической
изменчивости рекомбиногенами.
Материалы и методы
Экспериментальную работу выполняли в 2011 - 2012 гг. в лаборатории «Изучение и поддержание генетической коллекции томата», а также на экспериментальной базе ГНУ ВНИИ биологической защиты растений (г. Краснодар).
Для проведения исследований использовали дикие виды (L. esculentum var. racemigerum (Lange) Brezh., L. hirsutum var. glabratum C.H. Mull.), мутантные формы (Мо 393, Мо 628, Мо 755), культурный сорт Марглоб и 8 полученных на их основе межвидовых и внутривидовых гибридов F2.растений томата.
Описание диких видов растений томата приведено по А.А. Жученко и др. [16], мутантных форм в соответствии с каталогом Н.И. Бочарниковой [17].
Расщепляющиеся гибридные комбинации F2 выращивали в условиях защищенного грунта в лизиметрах. При достижении сеянцами фазы 3 - 4 настоящих листьев проводили идентификацию по маркерным признакам. Согласно методике Ю.И. Авдеева [18], анализировали не менее 50 - 100 растений одного исследуемого образца.
Частота рекомбинации рассчитывалась на основе идентификации проростков F2 с использованием пакета статистических программ “Биостат”. Эта программа позволяет подсчитывать частоту рекомбинации методом максимального правдоподобия с учетом наиболее вероятных гипотез о причинах нарушений (жизнеспособность гамет, зигот, неполная пенетрантность маркеров) [19].
Математическую обработку экспериментальных данных маркерного анализа осуществляли на персональном компьютере по программам, разработанным А.Б. Королем и И. А. Прейгелем (ИЭГ АН Молдова, 1985).
http://ej.kubagro.ru/2014/05/pdf/32.pdf
Научный журнал КубГАУ, №99(05), 2014 года
4
При статистической обработке полученных результатов применяли критерии Стьюдента и % [20].
Результаты исследований
В наших исследованиях у гибридов F2 растений томата анализ
фенотипических маркерных признаков выявил отклонение их
2
наследования от ожидаемого (3:1), так как экспериментальные значения х
2
превышали критическую точку х st=3,84 (таблица 1).
Таблица 1 - Моногенное расщепление по отдельным признакам у гибридов F2 растений томата, ГНУ ВНИИБЗР (2011 - 2012 гг.)
№ п/п Вариант Количество растений в F2, шт. Маркер Соотношение расщеп. 3:1 D/R Доля рецес., % X2 (3:1)
1 2 3 4 5 6 7
1 Марглоб х Мо 393 814 c 3,17 23,9±1,50 0,47
m-2 3,05 24,7±1,51 0,04
Мо 393 х c 2,28 30,5±2,19 7,08
2 L. esculentum var. racemigerum 443 m-2 3,14 24,2±2,03 0,17
3 Мо 393х L. hirsutum 484 c 3,28 23,4±1,92 0,71
var. glabratum m-2 12,44 7,4±1,19 79,61
aa 7,28 12,1±1,49 42,71
4 Марглоб х Мо 755 814 wv 5,00 16,7±1,70 17,78
d 3,75 21,0±1,86 4,01
Мо 755 х aa 5,73 14,9±1,25 44,59
5 L. esculentum var. 814 wv 5,96 14,4±1,23 49,02
racemigerum d 3,93 20,3±1,41 9,71
http://ej.kubagro.ru/2014/05/pdf/32.pdf
Научный журнал КубГАУ, №99(05), 2014 года
5
Продолжение таблицы 1
1 2 3 4 5 6 7
6 Мо 755* L. hirsutum var. glabratum 290 aa 7,79 11,4±1,86 28,69
wv 2,05 32,8±2,76 9,31
d 3,75 21,0±2,39 2,43
7 Марглоб * Мо 628 580 e 3,33 23,1±1,75 1,11
ful 2,77 26,6±1,83 0,74
hl 4,86 17,1±1,56 19,46
a 7,53 11,7±1,34 54,52
8 Мо 628 * L. esculentum var. racemigerum 659 e 1,80 35,7±1,87 39,94
ful 1,30 43,4±1,93 118,98
hl 2,33 30,1±1,79 8,95
a 3,54 22,0±1,61 3,16
Примечание. Теоретический ожидаемый %2=3,84.
Так, у гибрида Мо 393* L. hirsutum var. glabratum по маркерному гену m-2 это значение составило 79,61; у Мо 393 * L. esculentum var. racemigerum в сегменте с - 7,08; у Мо 755* L. hirsutum var. glabratum в сегменте аа - 28,69; wv - 9, 31; у Мо 755* L. esculentum var. racemigerum в этом же сегменте - 49,02; в сегменте аа - 44,59; d - 9,71; у Марглоб * Мо 755 в сегменте аа - 42,71; wv - 17,78. У гибрида Мо 628 * L. esculentum var. racemigerum по маркерному гену е значение х составило 39,94; в сегменте ful - 118,98; hl - 8,95; у Марглоб * Мо 628 в этом же сегменте - 19,46; а -54,52.
При анализе частоты мейотической рекомбинации (rf) в комбинациях скрещивания диких видов с мутантными формами обнаружены некоторые отклонения от значений классической генетической карты (таблица 2).
Таблица 2 - Частота кроссинговера у межвидовых и внутривидовых гибридов F2 растений томата, ГНУ ВНИИБЗР (2011-2012 гг.)
http://ej.kubagro.ru/2014/05/pdf/32.pdf
Научный журнал КубГАУ, №99(05), 2014 года
6
Вариант Кол- во раст., шт. Рекомбинация в сегментах, %
c — m-2 (27) tcm
Марглоб * Мо 393 814 24,8±2,84
Мо 393 * L. esculentum var. racemigerum 443 32,5±4,67 1,40
Мо 393 * L. hirsutum var. glabratum 484 37,5±4,56 2,35*
aa — wv (9) tcm wv — d (29) tcm aa — d (20) tcm
Марглоб * Мо 755 814 4,2±1,28 16,9±2,82 14,5±2,58
Мо 755 * L. esculentum var. racemigerum 814 5,7±1,14 0,90 14,7±1,98 0,62 16,4±2,11 0,56
Мо 755 * L. hirsutum var. glabratum 290 8,8±2,72 1,54 27,8±2,43 2,96 ** 13,3±3,15 0,29
e — ful (42) tcm hl — a (20) tcm
Марглоб * Мо 628 580 30,3±3,93 25,1±3,13
Мо 628 * L. esculentum var. racemigerum 659 32,7±4,45 0,4 58,6±7,15 4,29 ***
Примечание: *, **, *** - отличия от L. esculentum (Марглоб) значимы при Р>0,05; 0,01 и 0,001 соответственно. Критические табличные значения коэффициентов Стьюдента для Р-0,95 - t-1,96; для Р-0,99 - t-2,58; для Р-0,999 - t-3,29.
Хромосома 2. По второй хромосоме в сегменте wv - d у межвидовых гибридов F2 в комбинациях скрещивания с мутантной формой Мо 755, частота кроссинговера изменялась от 14,7 ± 1,98 до 27,8 ± 2,43 (рисунок 1). При этом у гибрида F2 Мо 755* L. hirsutum var. glabratum значение rf
http://ej.kubagro.ru/2014/05/pdf/32.pdf
Научный журнал КубГАУ, №99(05), 2014 года
7
приближено, но меньше значения генетической карты. У гибридов F2 Мо 755 х L. esculentum var. racemigerum и Марглоб х Мо 755 отмечено значимое уменьшение частоты кроссинговера в 2 раза и их значение составило 14,7 ± 1,98 и 16,9 ± 2,82 соответственно.
Рисунок 1 - Частота мейотической рекомбинации (rf) в сегменте «wv - d» 2-й хромосомы в комбинациях скрещиваний между дикими видами и мутантной формой Мо 755: а) генетическая карта; b) Марглоб х Мо 755; с) Мо 755х L. hirsutum var. glabratum; d) Мо 755 х L. esculentum var. racemigeru.
Анализ частоты расщепления rf между генами aa - wv локализованными во 2-ой хромосоме показал, что частота кроссинговера изменялась от 4,2 ± 1,28 до 8,8 ± 2,72. При этом у гибрида F2 Мо 755х L. hirsutum var. glabratum значение rf на уровне контроля (рисунок 2). У гибридов F2 Мо 755 х L. esculentum var. racemigerum и Марглоб х Мо 755 частоты кроссинговера достоверно значительно ниже значения генетической карты.
http://ej.kubagro.ru/2014/05/pdf/32.pdf
Научный журнал КубГАУ, №99(05), 2014 года
8
Рисунок 2 - Частота мейотической рекомбинации (rf) в сегменте «aa - wv» 2-й хромосомы в комбинациях скрещиваний между дикими видами и мутантной формой Мо 755: а) генетическая карта; b) Марглоб х Мо 755; с) Мо 755х L. hirsutum var. glabratum; d) Мо 755 х L. esculentum var. racemigerum
При анализе rf в сегменте aa - d, локализованном во второй хромосоме показал, что у межвидовых гибридов F2 в комбинациях скрещивания диких видов с мутантной формой Мо 755 частота кроссинговера достоверно отличалась от значений генетической карты и варьировала от 13,3 ± 3,15 до 16,4 ± 2,11 (рисунок 3).
■ a
■ b
■ c d
Рисунок 3 - Частота мейотической рекомбинации (rf) в сегменте «aa - d» 2-й хромосомы в комбинациях скрещиваний между дикими видами и мутантной формой Мо 755: а) генетическая карта; b) Марглоб х Мо 755; с) Мо 755х L. hirsutum var. glabratum; d) Мо 755 х L. esculentum var. racemigerum
Хромосома 4. Анализ частоты расщепления rf в сегменте e - ful, локализованном в четвертой хромосоме показал, что частота мейотической рекомбинации в потомстве межвидовых гибридов F2 достоверно отличалась от значений генетической карты и была существенно ниже (рисунок 4).
http://ej.kubagro.ru/2014/05/pdf/32.pdf
Научный журнал КубГАУ, №99(05), 2014 года
9
сегмент e - ful
a
b
c
Рисунок 4 - Частота мейотической рекомбинации (rf) в сегменте «е - ful»
4-й хромосомы в комбинациях скрещиваний между дикими видами и мутантной формой Мо 628: а) генетическая карта; b) Марглоб х Мо 628; с) Мо 628 х L. esculentum var. racemigerum
Хромосома 6. Анализ частоты rf между маркерными локусами с - m2, локализованными в хромосоме 6 показал, что у межвидовых гибридов F2 в комбинациях скрещивания диких видов с мутантной формой Мо 393 частота кроссинговера достоверно значительно выше, чем у контроля. У гибридов F2 Мо 393 х L. hirsutum var. glabratum и Мо 393 х L. esculentum var. racemigerum его значение составило 37,5 ± 4,56 и 32,5 ± 4,67 соответственно. У гибрида F2 Марглоб х Мо 393 частота кроссинговера была приближена к значению генетической карты и равнялась 24,8 ± 2,84 (рисунок 5).
Рисунок 5 - Частота мейотической рекомбинации (rf) в сегменте «c - m-2» 6-й хромосомы в комбинациях скрещиваний между дикими видами и мутантной формой Мо 393: а) генетическая карта; b) Марглоб х Мо 393;
http://ej.kubagro.ru/2014/05/pdf/32.pdf
Научный журнал КубГАУ, №99(05), 2014 года
10
с) Мо 393x L. hirsutum var. glabratum; d) Мо 393 x L. esculentum var. racemigerum
Хромосома 11. При анализе частоты мейотической рекомбинации в 11 хромосоме rf в сегменте hl - a достоверно выше, чем у контроля. При этом у гибрида F2 Марглоб x Мо 628 значение rf приближено, но больше значения генетической карты. У Мо 628 x L. esculentum var. racemigerum отмечено увеличение частоты кроссинговера более чем в 2 раза и его значение составило 58,6 ± 7,15 (рисунок 6).
d
Н
О
н
о
d
5Ґ
_ 0х
Ж Л о К w к
О Да я
^ к
ё к о
о
80
60
40
20
0
58,6
сегмент hl - a
■ a
b
c
Рисунок 6 - Частота мейотической рекомбинации (rf) в сегменте «hl - a» 11-й хромосомы в комбинациях скрещиваний между дикими видами и мутантной формой Мо 628: а) генетическая карта; b) Марглоб x Мо 628; с) Мо 628 x L. esculentum var. racemigerum
Таким образом, частота рекомбинации между разными парами локусов может значительно варьировать в различных гибридных комбинациях. Анализ моногибридных расщеплений маркерных локусов в F2 выявил, что частота кроссинговера в большинстве сегментов (2, 4, 6) у исследуемых гибридов F2 чаще значительно уменьшается и даже в несколько раз. Более низкие значения rf имели гибриды F2, по сравнению с контролем, где в качестве отцовской формы использовали мутантные формы или L. esculentum var. racemigerum. Исключением были гибриды F2 Мо 628 x L. esculentum var. racemigerum и Марглоб x Мо 628, у которых
http://ej.kubagro.ru/2014/05/pdf/32.pdf
Научный журнал КубГАУ, №99(05), 2014 года
11
наблюдалось компенсаторное существенное увеличение rf относительно контроля. В случаях, когда мутантная форма Мо 393 выступала в качестве материнской формы частота мейотической рекомбинации увеличивалась. Дикий вид L. hirsutum var. glabratum не оказывал существенного влияния на частоту рекомбинации. У гибридов F2 с отцовской формой L. hirsutum var. glabratum значение частоты рекомбинации приближено к контролю.
Для увеличения частоты рекомбинации в селекционном процессе целесообразно использовать мутантные формы Мо 393, Мо 628 и межвидовой гибрид F1 Мо 628 х L. esculentum var. racemigerum.
Список литературы:
1. Mather K. Species crosses in Antirrhinum. I. Genetic isolation of the species Majus, Gluti-nosum and Oronlium./Heredity. 1947. Vol. 1. P. 175-186.
2. Stephens S.G. Genetics. 1961. Vol. 46. № 2. P. 1438-1500.
3. Король А.Б., Прейгель И.А., Прейгель С.И. Изменчивость кроссинговера у высших организмов. Кишинев: Штиинца, 1990. 404 с.
4. Anderson L. K., Reeves A., Webb L. M., Ashley С.М. Distribution of crossovers on mouse chromosomes using immuno-fluorescent localization of MLH1 protein/ Genetics. 1999. V. 151. P. 1569-1579.
5. Богданов Ю.Ф. Изменчивость и эволюция мейоза/ Генетика. 2003. Том 39. №4. С. 453-473.
6. Akhunov, E.D., Goodyear A.W., Geng S., Echalieret B. et al. The organization and rate of evolution of wheat genomes are correlated with recombination rates along chromosome arms/ Genome Res. 2003. V. 13. P. 753-763.
7. Жученко А.А. Генетика томатов. Кишинев: Штиинца, 1973. 663 с.
8. Жученко А.А.мл. Архитектура репродуктивной системы томата. Кишинев: Штиинца, 1990. 201 с.
9. Жученко А.А., Король А.Б. Рекомбинация в эволюции и селекции. М.: Наука, 1985. 400 с.
10. Stebbins G.L. The cytological analysis of species hydrids/ Botanical Review. 1945. V. 11. P. 463-485.
11. Rogers J.C. The inheritance of photoperiodic response and tillering in maize-teosinte hybrids/ Genetics. 1950. V. 35. P. 513-540.
12. Rick C.M. Further studies on segregation and recombination in backcross derivatives of a tomato species hybrid/ Biol. Zbl. 1972. V.91. №.2. P. 209-220.
13. Harland S.C. The genetical conception of the species/ Biology Reviews. 1963. V. 11. №1. P. 83 - 112.
14. Ananiev E.V., Riera-Lizarazu O., Rinesand H.W., Phillips R.L. Oat-maize chromosome addition lines: A new system for mapping the maize genome/ Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1997. V. 94. P. 3524-3529.
15. Mezard C. Meiotic recombination hotspots in plants/ Biochem. Soc. Transact. 2006. V. 34. P. 531-534.
http://ej.kubagro.ru/2014/05/pdf/32.pdf
Научный журнал КубГАУ, №99(05), 2014 года
12
16. Дикие виды и полукультурные разновидности томатов и использование их в селекции/ А. А. Жученко, Е.Я. Глущенко, В.К. Андрющенко и др. - Кишинев: Картя молдовеняскэ, 1974. 139 с.
17. Бочарникова Н.И. Генетическая коллекция мутантных форм томата и ее использование в селекционно-генетических исследованиях/ ВНИИССОК. М.: Издательство ВНИИССОК, 2011. 120 с.
18. Авдеев Ю.И.Генетический анализ растений. Астрахань: Издательский дом «Астрахпнский университет», 2004. 379 с.
19. Жученко А.А, Король А.Б. Индуцированное увеличение изменчивости частоты кроссинговера в F2 у томатов// Цитология и генетика. 1981. Т. 15. № 3. С. 23-28.
20. Литтл Т.М., Хиллз Ф.Дж. Сельскохозяйственное опытное дело. Планирование и анализ. М.: Колос, 1981. 320 с.
References
1. Mather K. Species crosses in Antirrhinum. I. Genetic isolation of the species Majus, Gluti-nosum and Oronlium./ Heredity. 1947. Vol. 1. P. 175-186.
2. Stephens S.G. Genetics. 1961. Vol. 46. № 2. P. 1438-1500.
3. Korol' A.B., Prejgel' I.A., Prejgel' S.I. Izmenchivost' krossingovera u vysshih organizmov. Kishinev: Shtiinca, 1990. 404 s.
4. Anderson L. K., Reeves A., Webb L. M., Ashley S.M. Distribution of crossovers on mouse chromosomes using immuno-fluorescent localization of MLH1 protein/ Genetics. 1999. V. 151. P. 1569-1579.
5. Bogdanov Ju.F. Izmenchivost' i jevoljucija mejoza/ Genetika. 2003. Tom 39. №4. S. 453473.
6. Akhunov, E.D., Goodyear A.W., Geng S., Echalieret B. et al. The organization and rate of evolution of wheat genomes are correlated with recombination rates along chromosome arms/ Genome Res. 2003. V. 13. P. 753-763.
7. Zhuchenko A.A. Genetika tomatov. Kishinev: Shtiinca, 1973. 663 s.
8. Zhuchenko A.A.ml. Arhitektura reproduktivnoj sistemy tomata. Kishinev: Shtiinca, 1990. 201 s.
9. Zhuchenko A.A., Korol' A.B. Rekombinacija v jevoljucii i selekcii. M.: Nauka, 1985. 400 s.
10. Stebbins G.L. The cytological analysis of species hydrids/ Botanical Review. 1945. V. 11. P. 463-485.
11. Rogers J.C. The inheritance of photoperiodic response and tillering in maize-teosinte hybrids/ Genetics. 1950. V. 35. P. 513-540.
12. Rick C.M. Further studies on segregation and recombination in backcross derivatives of a tomato species hybrid/ Biol. Zbl. 1972. V.91. №.2. P. 209-220.
13. Harland S.C. The genetical conception of the species/ Biology Reviews. 1963. V. 11. №1. P. 83 - 112.
14. Ananiev E.V., Riera-Lizarazu O., Rinesand H.W., Phillips R.L. Oat-maize chromosome addition lines: A new system for mapping the maize genome/ Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1997. V. 94. P. 3524-3529.
15. Mezard C. Meiotic recombination hotspots in plants/ Biochem. Soc. Transact. 2006. V.
34. P. 531-534.
16. Dikie vidy i polukul'turnye raznovidnosti tomatov i ispol'zovanie ih v selekcii/ A.A. Zhuchenko, E.Ja. Glushhenko, V.K. Andrjushhenko i dr. - Kishinev: Kartja moldovenjaskje, 1974. 139 s.
http://ej.kubagro.ru/2014/05/pdf/32.pdf
Научный журнал КубГАУ, №99(05), 2014 года
13
17. Bocharnikova N.I. Geneticheskaja kollekcija mutantnyh form tomata i ee ispol'zovanie v selekcionno-geneticheskih issledovanijah/ VNIISSOK. M.: Izdatel'stvo VNIISSOK, 2011. 120 s.
18. Avdeev Ju.I.Geneticheskij analiz rastenij. Astrahan': Izdatel'skij dom «Astrahpnskij universitet», 2004. 379 s.
19. Zhuchenko A.A, Korol' A.B. Inducirovannoe uvelichenie izmenchivosti chastoty krossingovera v F2 u tomatov// Citologija i genetika. 1981. T. 15. № 3. S. 23-28.
20. Littl T.M., Hillz F.Dzh. Sel'skohozjajstvennoe opytnoe delo. Planirovanie i analiz. M.: Kolos, 1981. 320 s.
http://ej.kubagro.ru/2014/05/pdf/32.pdf
