ГЕТЕРОГЕННОСТЬ ЭКСПРЕССИИ ГЕНА NES В МЕЗЕНХИМНЫХ КЛЕТКАХ-ПРЕДШЕСТВЕННИЦАХ ИЗ КОСТНОГО МОЗГА ЧЕЛОВЕКА Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

2B2

МАТЕРИАЛЫ V НАЦИОНАЛЬНОГО КОНГРЕССА ПО РЕГЕНЕРАТИВНОЙ МЕДИЦИНЕ

нейровоспаления [2]. Для получения нейронов и гли-альных клеток в настоящее время используют индуцированные плюрипотентные клетки (ИПСК) человека. Уникальность этого подхода состоит в том, что клеточный материал, полученный от пациентов с генетическими нарушениями, для получения ИПСК будет транслировать эти нарушения во все дифференцированные производные. Таким образом, можно изучать влияние определенной генетической мутации в разных клеточных популяциях, дифференцированных из одной и той же уникальной линии ИПСК.

Ранее нами был показан ряд изменений в профиле экспрессии большого количества генов в дофаминерги-ческих нейронах дифференцированных из индуцированных плюрипотентных стволовых клеток (ИПСК) пациентов с разными мутациями, приводящими к БП [3].

В настоящей работе были получены глиальные культуры, дифференцированные из ИПСК пациентов с мутациями в генах GBA (глюкоцереброзидаза), PARK2 (паркин) и LRRK2 (дардарин), приводящих к БП, и здоровых доноров. Полученные культуры клеток были охарактеризованы с помощью иммуноцитохимического анализа и ПЦР в реальном времени. Была обнаружена дифференциальная экспрессия ряда генов у здоровых доноров и у пациентов с БП. Показано, что в ответ на воспалительные стимулы глиальные клетки меняют экспрессию генов и секреторный профиль, тем самым проявляя свойства иммунокомпетентных клеток.

Работа выполнена при финансовой поддержке Министерства науки и высшего образования Российской Федерации в рамках соглашения № 075-15-2021-1357.

Литература:

1. Cookson M.R., Handy J., Lewis P.A. International journal of clinical and experimental pathology, 2008.V. 1. P. 217-231.

2. Booth H., Hirst W.D., Wade-Martins R. Trends in neunoscienc-es, 2017. V. 40. P. 358-370.

3. Novosadova E.V., Nenasheva V.V. et al. Journal of Molecular Neuroscience, 2020. V. 70. P. 514-521.

ГЕТЕРОГЕННОСТЬ ЭКСПРЕССИИ ГЕНА NES В МЕЗЕНХИМНЫХ КЛЕТКАХ-ПРЕДШЕСТВЕННИЦАХ ИЗ КОСТНОГО МОЗГА ЧЕЛОВЕКА

И.Н. Шипунова1, А.И. Дорофеева1, Т.Ф. Савватеева2, Л.А. Кузьмина1, Е.Н. Паровичникова1

1 ФГБУ НМИЦ гематологии Минздрава России, Москва, Россия

2 ГБОУ Московская школа на Юго-Западе № 1543, Москва, Россия

e-mail: iranifontova@yandex.ru

Ключевые слова: мезенхимные стромальные клетки, коло-ниеобразующие единицы фибробластов, экспрессия генов, нестин.

Кроветворные микроокружение костного мозга (КМ) — это некроветворные клетки, необходимые для успешного функционирования стволовых клеток крови в течение всей жизни организма. Большую часть кроветворного микроокружения составляют стро-мальные клетки — потомки мезенхимной стволовой клетки (МСК). Иерархия стромальных предшественников охарактеризована скудно, in vivo выделяют мультипотентные мезенхимные стромальные клетки

(ММСК) и колониеобразующие единицы фибробла-стов (КОЕф). МСК не имеют уникального сочетания поверхностных антигенов, что затрудняет их выделение в виде чистой популяции. Показано, что экспрессия нестина, изначально выявленная в нейральных предшественниках, характерна и для МСК. Часто экспрессия гена нестина (NES) используется в качестве маркера этих стромальных предшественников. Целью работы было оценить уровень экспрессии гена NES в ММСК и их потомках — КОЕф, а также выяснить, как изменяется этот показатель при переходе от олигопо-тентных клеток-предшественниц, способных к осте-огенной и адипогенной дифференцировкам, к моно-потентным клеткам-предшественницам, способным осуществлять дифференцировку только в одну из указанных линий.

Из КМ 19 доноров (11 мужчин, 8 женщин, 29,5 ± 2,7 лет) получали ММСК и КОЕф по стандартным методикам. Из ММСК и КОЕф выделяли РНК. Из тех же образцов КМ были получены индивидуальные клоны КОЕф. Для этого по 15 ООО клеток КМ культивировали в лунках 96-луночной платы. Клетки из лунок, где был выявлен рост одного клона, по достижении конфлуентности пересаживали в ячейки 6-луночной платы. Затем, конфлуентную ячейку рассаживали на 3 и через 2-3 дня в 2 ячейки добавляли стандартные смеси индукторов костной и жировой дифферен-цировок. В 1 ячейке контрольные клетки культивировали в стандартной среде. Через 14 дней из клеток выделяли РНК. Ответ на индукторы дифференциров-ки определяли по изменению относительного уровня экспрессии (ОУЭ) маркерных генов (ALPL и PTHR для остео- и FABP4 и PPARG для адипо- дифференцировок). ОУЭ маркерных генов и гена NES анализировали при помощи ПЦР в реальном времени. Было проанализировано 299 индивидуальных клонов КОЕф.

Оказалось, что средний ОУЭ NES достоверно не отличается в ММСК (0,41 ± 0,13) и в суммарной популяции КОЕф (0,24 ± 0,05). В индивидуальных клонах КОЕф ОУЭ был недостоверно выше, чем в суммарной популяции (0,31 ± 0,04). При анализе КОЕф, различающихся по дифференцировочному потенциалу, наивысший ОУЭ гена NES выявлен в группе монопотентных остеогенных предшественников, тогда как в олигопо-тентных предшественниках его экспрессия была статистически достоверно ниже.

Итак, экспрессия гена NES в мезенхимных стромальных предшественниках из костного мозга не является специфичной для МСК и не может быть использована в качестве уникального маркера этого типа клеток. Работа поддержана грантом Российского Научного Фонда (проект № 22-15-00018).

ПЛАЦЕНТАРНЫЕ МАКРОФАГИ И ТУЧНЫЕ КЛЕТКИ В УСЛОВИЯХ ЭНДОГЕННОГО ДИСБАЛАНСА БИОГЕННЫХ АМИНОВ ПРИ ПРЕЭКЛАМПСИИ

А.И. Шорников1, Л.М. Меркулова2

1 ФГБОУ ВО Марийский государственный университет, Йошкар-Ола, Россия

2 ФГБОУ ВО ЧГУ им. И.Н. Ульянова, Чебоксары, Россия

e-mail: drsorn@mail.ru

Ключевые слова: беременность, биогенные амины, плацента, преэклампсия, макрофаги, тучные клетки.

Гены & Клетки XVII, №3, 2G22