CC BY
276
ГЕПАТОПРОТЕКТОРЫ В УСТРАНЕНИИ АЛКОГОЛЬНЫХ ПОВРЕЖДЕНИЙ ПЕЧЕНИ
Василевская А. С., Бутов М. А., Узбекова Д. Г., Мнихович М. В., Никифоров А. А.
ГБОУ ВПО РязГМУ Минздрава России, НИИ морфологии человека РАМН
Анна Станиславовна Василевская 390027, Рязань, ул. Быстрецкая, 21, кв. 28 Тел. (920) 971-71-67 E-mail: [email protected]
РЕЗЮМЕ
При моделировании хронической алкогольной интоксикации наилучший гепатопротективный эффект оказывает комбинированное назначение «Эссенциале форте Н», «Гептрала» и «Апилака», проявляющийся в незначительных морфологических изменениях структуры печени и неизменных биохимических показателях.
Ключевые слова: хроническая алкогольная интоксикация;гепатопротекторы; «Эссенциале форте Н»; «Гептрал», «Апилак»
SUMMARY
The best hepatoprotective effect has combined appointment Essentiale forte N, Heptral and Apilak at rats with chronic alcohol intoxication. Use of these drugs is characterized by minor morphological changes in structure of liver and constant biochemical parameters.
Keywords: chronic alcohol intoxication; hepatoprotectors; Essentiale forte N; Heptral; Apilak
Заболевания печени представляют серьезную проблему для здравоохранения. Данная актуальность во многом определяется высокой заболеваемостью токсическими и вирусными гепатитами, которые поражают в основном лиц трудоспособного возраста, приводя к частому развитию хронического гепатита, цирроза, гепатоцеллюлярной карциномы [1, 2]. Алкоголь относят к наиболее частой причине, приводящей к токсическому повреждению печени. Злоупотребление алкоголем и хронические вирусные гепатиты считаются ведущей причиной развития цирроза, однако, по данным многих авторов [3 - 5], алкогольная болезнь печени имеет худший прогноз.
К экзогенным факторам риска, обусловленным неправильным поведением больных, доминирующее значение имеют гиподинамия и гиперкалорическое питание, что приводит к увеличению массы жировой ткани и повышенному ее отложению в области внутренних органов. Содержание жира в паренхиме печени положительно коррелирует с избыточным накоплением жира во внутрибрюшной полости [6]. Согласно проведенному исследованию [7] у пациентов, получавших гипокалорийную диету с пониженным содержанием жиров, отмечалось
снижение содержания жира в паренхиме печени на 81%. Таким образом, при нерациональном питании с высоким содержанием жиров (> 30%) отмечается пропорциональное отложение триглицери-дов в гепатоцитах, приводящие к воспалительным явлениям в паренхиме печени.
Традиционно для лечения заболеваний печени применяются препараты, относящиеся к группе гепатопротекторов, которые усиливают ее обезвреживающую функцию, повышают устойчивость печени к патологическим воздействиям. Однако как известные соединения, широко применяющиеся в настоящее время в медицине, так и менее распространенные на российском рынке препараты изучены не в полной мере. В этой связи представляется актуальным исследование по сопоставлению гепа-топротективного действия наиболее известных лекарственных средств, а также по оценке выраженности гепатопротективного действия веществ, относящихся к продуктам пчелиного происхождения.
Цель исследования: Оценить влияние длительной алкоголизации животных на морфофункцио-нальное состояние печени. Сравнение гепатопро-тективного действия препаратов адеметионина («Гептрал», «Эбботт С. р. Л.», Италия), эссенциальных
Б >■
о
So
1_ ° ов
<s 02
U о
Hjg
¡5-
n È
О ь
^
I- Ш U
га
L Б
га
X
л
<
га
I-
х ш 2 s а ш с и
CD CO
фосфолипидов («Эссенциале форте Н», АуепШ, Франция — Германия) и маточного молочка пчел («Апилак», «Вифитекс», Россия) у крыс в условиях хронической алкогольной интоксикации.
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Эксперименты проводили в осенний период на 42 аутбредных белых крысах-самцах линии "Шз1аг массой 180 - 200 г. Животных содержали в стандартных условиях вивария при естественном освещении, свободном доступе к воде и пище. При проведении исследования руководствовались рекомендациями по экспериментальной работе с использованием животных Минздрава России, рекомендациями ВОЗ. Продолжительность исследования составила 90 дней, на протяжении эксперимента все крысы взвешивались и осматривались. Животных разделили на 7 групп по 6 особей в каждой:
1-я группа — интактные животные.
2-я группа — крысы с хронической алкогольной интоксикацией, которую моделировали внутриже-лудочным введением 40%-ного этанола в расчете 0,015 мл/г массы [8].
3-ю группу составили животные, которые вместе с этанолом получали гиперкалорическую пищу с повышенным содержанием жиров.
4-я группа представлена крысами, которым через зонд в желудок вместе с этанолом вводили «Апилак» в дозе 50 мг/кг [9].
5-я группа включала животных, которым вну-трижелудочно вводили «Эссенциале форте Н» в дозе 80 мг/кг и этанол [10].
6-ю группу составили крысы, которые на фоне алкогольной интоксикации получали в/м «Гептрал» в дозе 20 мг/кг [11].
7-я группа — крысы, которые вместе с этанолом получали комбинированную терапию гепато-протекторов («Эссенциале форте Н» и «Гептрал») и «Апилак» в соответствующих дозах.
Забой крыс проводили под эфирным наркозом, кровь забирали из бифуркации брюшной аорты.
О функциональном состоянии печени судили по изменению активности трансаминаз (АсАТ, АлАТ), у-глутамилтранспептидазы (у-ГТП), уровня общего билирубина в плазме крови с применением индикаторных систем анализатором «Рефлотрон Плюс». Для морфологического подтверждения развития моделируемого патологического процесса проводили патогистологическое исследование печени опытных животных с окраской гематоксилином и эозином, гематоксилином и пикрофук-сином по ван Гизону по общепринятой методике. Морфологическое исследование проводили с помощью микроскопа Leica DMI 4000 B с видеозахватом камерой Leica.
Результаты обрабатывали методом параметрической статистики с использованием программы StatSoft Statistica.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Результаты биохимического исследования представлены в таблице. При интоксикации этанолом у крыс развивалось тяжелое поражение печени с синдромом цитолиза, характеризующееся достоверным увеличением в сыворотке (относительно контрольной группы) активности АсАТ (в 1,9 раза, на 89%), АлАТ (в 1,5 раза, на 50%), а также уровня общего билирубина (в 2,2 раза).
У животных, получавших одновременно с этанолом гепатопротекторы («Эссенциале форте Н» и «Гептрал»), отмечено достоверное уменьшение (относительно группы, получавших алкоголь) активности трансаминаз: АлАТ (в 1,5 раза, на 34 и 32% соответственно) и АлАТ (в 1,25 раза, на 20 и 17%).
При введении «Апилака» крысам с экспериментальной хронической алкогольной интоксикацией активность АсАТ была на 28% (в 1,4 раза), а АлАТ — на 13% (в 1,15 раза) достоверно ниже,
БИОХИМИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ СЫВОРОТКИ КРОВИ КРЫС
Оцениваемые показатели Группы экспериментальных животных
контроль (n = 6) алкоголь (n = 6) алкоголь + «Гептрал» (n = 6) алкоголь + «Эссенциале» (n = 6) алкоголь + «Апилак» (n = 6) алкоголь + «Эссенциале» + «Гептрал» + «Апилак» (n = 6) алкоголь + усиленная диета (n = 6)
АсАТ (мккат/л) 1,82 ± 0,09 3,45 ± 0,99' 2,35 ± 0,361Д 2,27 ± 0,1912 2,46 ± 0,361Д 1,89 ± 0,1212 2,6 ± 0,3
АлАТ (мккат/л) 0,77 ± 0,09 1,15 ± 0,16! 0,95 ± 0,14й 0,92 ± 0,131,2 1 ± 0,221Д 0,8 ± 0,12й 1,03 ± 0,15
Билирубин (мккат/л) 8,55 18,16 ± 5,9 < 8,55 < 8,55 < 8,55 < 8,55 12,11 ± 3,29
у-ГТП (мккат/л) < 0,083 < 0,083 < 0,083 < 0,083 < 0,083 < 0,083 < 0,083
1 Отличие от показателей у интактных животных (р < 0,05).
2 Отличие от показателей при интоксикации алкоголем (р < 0,05).
чем у животных с хронической алкогольной интоксикацией
Обращает на себя внимание тот факт, что у крыс, получавших этанол и диету с повышенным содержанием жиров, отмечалось повышение биохимических показателей: гипербилирубинемия — повышение уровня билирубина в 1,4 раза, а также транс-аминаз — АсАТ в 1,5 раза (на 42%) и АлАТ в 1,3 раза (на 33%), чем у интактных животных. При этом активность АсАТ в 1,3 раза (на 24%), АлАТ в 1,1 раза (10%), уровень билирубина в 1,5 раза (33%) ниже, чем у крыс, получавших этанол и находившихся на стандартном рационе вивария.
При оценке лечебного эффекта комбинированного назначения гепатопротекторов и «Апилака» установлено, что биохимические показатели у этих животных статистически значимо не отличались от нормы (показатели животных, не получавших этанол).
Морфологическое изучение состояния печени вышеперечисленных групп животных на 90-е сутки после окончания экспериментальных воздействий проводилось с помощью гистологических методов.
У крыс с хронической алкогольной интоксикацией гистологическая структура печени характеризовалась умеренно выраженной дискомплекса-цией печеночных балок, отеком паренхимы (рис. 1, см. цветную вклейку). Портальные тракты были расширены за счет отека и воспалительной инфильтрации. В перипортальной зоне определялась незначительная лимфоидно-гистиоцитарная инфильтрация с формированием одиночных очагов некрозов. Отдельные печеночные клетки находились в состоянии выраженной жировой и баллонной дистрофии, наблюдалось умеренное количество двуядерных гепатоцитов. В поврежденных портальных трактах отмечались деструктивные изменения желчных протоков. Воспаление иногда распространялось в порто-портальном направлении, имелись одиночные внутридольковые инфильтраты. Большинство синусоидов расширены и содержали цепочки лимфоцитов, наблюдалось увеличение количества клеток Купфера. Центральные вены были полнокровны, их эндотелий с признаками десква-мации, базальная мембрана утолщена.
У животных, получавших алкоголь и «Гептрал» (рис. 2), при морфологическом исследовании печени выявлена печеночная ткань с частичной диском-плексацией печеночных балок. Гепатоциты (70%) с явлениями жировой дистрофии и единичные клетки с признаками баллонной дистрофией ге-патоцитов. Портальные тракты умеренно расширены с остатками желчи. Единичные двуядерные гепатоциты, умеренный отек паренхимы, в основном соединительнотканных элементов, умеренное расширение пространств Диссе. В перипортальной зоне определялась умеренно выраженная лимфо-идно-гистиоцитарная инфильтрация, преимущественно очагового характера.
При применении «Эссенциале форте Н» у крыс с хронической алкогольной интоксикацией морфологическая картина печени представлена следующими изменениями (рис. 3): отек паренхимы незначителен, имеется расширение пространств Диссе и незначительная дискомплексация печеночных балок. Количество двуядерных гепатоцитов умеренное, отдельные гепатоциты находятся в состоянии гидропической дистрофии. В части портальных трактов — умеренная воспалительная лимфоид-но-гистиоцитарная инфильтрация, иногда с распространением в перипортальные зоны, одиночные фокусы воспаления встречались внутри долек.
При гистологическом изучении препаратов печени животных группы крыс при одновременном введении этанола и «Апилака» гистологическая структура печени (рис. 4) представлена умеренным выраженным отеком паренхимы, отсутствием дис-комплексации балок, с умеренными расширениями пространств Диссе. Некоторые гепатоциты с признаками гидропической и жировой дистрофии. В части портальных трактов выявлялась умеренная воспалительная лимфоидно-гистиоцитарная инфильтрация. Единичные, местами встречающиеся, внутридоль-ковые фокусы воспаления. В некоторых портальных трактах пролиферации желчных протоков, дистрофические изменения эндотелия сосудов, синусоиды были расширены, оптически пусты. По сравнению с группой крыс, получавших этанол и «Гептрал», у животных, получавших этанол и «Апилак», количество двуядерных гепатоцитов меньше.
Гистологическая структура печени группы крыс, получавших на фоне хронической алкогольной интоксикации усиленное питание (диета с высоким содержанием жиров) (рис. 5), характеризовалась частичной дискомплексацией печеночных балок, умеренным отеком паренхимы. Большинство гепатоцитов (более 50%) с умеренно выраженной жировой дистрофией. Имеются клетки с баллонной дистрофией гепатоцитов. Отмечается умеренное расширение пространств Диссе и двуядерные гепа-тоциты. В портальных трактах стазы желчи и умеренная воспалительная, преимущественно лим-фоидная инфильтрация. В перипортальной зоне определялась незначительная лимфоидно-гисти-оцитарная инфильтрация. В портальных трактах отмечались дистрофические изменения эндотелия сосудов. Центральные вены полнокровны, их эндотелий с признаками десквамации, базальная мембрана утолщена. Большинство синусоидов расширены и содержали цепочки лимфоцитов. Однако у этих животных не выявлялись очаги некрозов, обнаруживаемые у животных, получавших этанол на фоне обычной диеты вивария.
На фоне комбинированной терапии «Эссенциале форте Н» + «Гептрал» + «Апилака» у крыс с алкогольной интоксикацией морфологическая картина печени характеризовалась (рис. 6) отсутствием дис-комплексации печеночных балок, умеренным расширением пространств Диссе в отдельных полях
Б >■
о
5 о
I- О ОВ
<5 02
и о Нв
¡Е-
п ^
О ь
0-
1- й и га
I. Б
га х
л
<
га
I-
х ш 2 5
-
Ш С
и
OJ CO
зрения. Единичные, в отдельных полях зрения двуядерные гепатоциты. В некоторых портальных трактах выявлялась умеренная воспалительная инфильтрация в виде прерывистых цепочек клеток, отдельные синусоиды расширены.
ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ
На основании экспериментальной модели хронического поражения печени у крыс, вызванного введением алкоголя, выявлено статистически значимое увеличение содержания в сыворотке крови билирубина, а также повышение активности трансаминаз.
На морфологическом уровне токсическое действие алкоголя подтверждено наличием признаков воспаления, жировой и баллонной дистрофии, очагов некроза. Выраженные морфологические признаки жировой дистрофии печени отмечены у животных, получавших гиперкалорическую диету с повышенным содержанием жиров. У этих животных отмечались признаки цитолиза (гиперферментемия) и гипербилирубинемия.
Животные на фоне хронической алкогольной интоксикации, получавшие «Эссенциале форте Н» и «Гептрал», имели менее выраженные признаки поражения печени по всем оцениваемым показателям. При оценке влияния на динамику индикаторных ферментов гепатопротективное свойства «Эссенциале форте Н» сопоставимы с гепатопротек-тивными свойствами «Гептрала». На морфологическом уровне гепатопротективное действие в отдельных препаратах в небольшой степени оказалось выше в группе «Эссенциале форте Н», проявляющееся в менее выраженной картине жировой дистрофии.
При введении «Апилака» с лечебной целью на фоне хронической алкогольной интоксикации достоверно улучшились морфологические и функциональные показатели печени, что подтвердило наличие у препарата гепатозащитных свойств.
Наилучший гепатопротективный эффект у животных, длительно получавших этанол, отмечен
ЛИТЕРАТУРА
1. МаевскаяМ. В., Морозова М. А., Ивашкин В. Т. Алгоритм ведения пациентов с алкогольной болезнью печени // Рос. журн. гастроэнте-рол., гепатол., колопроктол. — 2007. — Т. 17, № 6. — С. 1 - 10.
2. Коршунова Г. С. Эпидемическая ситуация по вирусным гепатитам В, С, D в Российской Федерации // Гепатит В, С, D: проблемы диагностики, лечения и профилактики. — М., 1999. — С. 111 - 112.
3. Хазанов А. И. Важная проблема современности: алкогольная болезнь печени // Рос. журн. гастроэнтерол., гепатол., колопроктол. — 2003. — Т. 13, № 2 — С. 13 - 20.
4. Хазанов А. И. К вопросу об алкогольных поражениях печени // Рос. мед. вести. — 1998. — № 1. — С. 40 - 44.
5. O'Shea R. S., Dasarathy S. Alcoholic liver disease // AASLD practice guidelines. — 2010. — Vol. 51, № 1. — Р. 307 - 328.
6. Seppala-Lindross A., Vehkavaara S., Hakkinen A. M. et al. Fat accumulation on the liver is associated with defects in insulin suppression of glucose production and serum free fatty acids independent of obesity in normal men // J. Clin. Endocrinol. & Metabolism. — 2002. —
P. 287 - 302.
в случае сочетания эссенциальных фосфолипидов, адеметионина и маточного молочка («Эссенциале форте Н» + «Гептрал» + «Апилак»). При биохимическом исследовании уровень билирубина, активность АсАТ, АлАТ достоверно не отличались от показателей крови интактных животных, гистологическая картина представлена незначительные морфологические признаками воспаления.
У животных, получавших гиперкалорическую диету с повышенным содержанием жиров, отмечались наиболее выраженные биохимические и морфологические изменения, отражающие значительное поражение печени.
ВЫВОДЫ
Хроническая алкогольная интоксикация лабораторных животных вызывает достоверное повышение активности трансаминаз (АсАТ, АлАТ) и билирубина, а также нарушение структуры и жировые изменения паренхимы печени.
Препараты «Эссенциале форте Н» и «Гептрал» оказали схожее гепатопротективное действие при оценке биохимических показателей, однако влияние «Эссенциале форте Н» было более эффективным по морфологическим составляющим.
Применение «Апилака» на фоне хронической алкогольной интоксикации по сравнению с «Эссенциале форте Н» и «Гептралом» оказывало менее значимый гепатопротективный эффект как по биохимическим, так и по морфологическим показателям.
Длительная интоксикация этанолом на фоне диеты с повышенным содержанием жиров у экспериментальных животных вызывала наиболее значительные морфологические изменения печени в виде жировой дистрофии.
Наибольшей гепатопротективной эффективностью при экспериментальном алкогольном поражении печени обладала комбинация применения препаратов «Эссенциале форте Н», «Гептрала» и «Апилака».
7. Буторова С. А., Елисеева А. Ю. Не алкогольная жировая болезнь печени: актуальные проекты // Ожирение и метаболизм. — 2007. — № 1. — С. 2 - 7.
8. Кононяченко В. А., Фролов В. А., Дворников В. С., Могилев-ский В. М. Клинико-экспериментальные исследования реакции сердечно-сосудистой системы на алкоголь в зависимости от режима его употребления // Кардиология. — 1983. — № 7. — С. 102 - 103.
9. Узбекова. Д. Г. Гепатопротекторное действие различных препаратов маточного молочка при экспериментальной патологии печени // Мат. IV Межд. (XII Всерос.) научно-практ. конф. «Успехи современной апитерапии», 25 - 26 мая 2006 г. — Рыбное, 2006. — С. 60 - 61.
10. Саратиков А. С., Венгеровский А. И., Батурина Н. О., Чуча-лин В. С. Эффективность гепатозащитных средств при экспериментальном хроническом гепатите // Эксперим. и клин. фарма-кол. — 1995. — № 1. — С. 24 - 26.
11. Сивоконюк О. В. Иммуноморфология печени при введении Гептрал на фоне экспериментального токсического гепатита /
О. В. Сивоконюк, А. И. Даниленко // Мир медицины и биологии. — 2008. — № 2. — Ч. III. — С. 49 - 52.
ГЕПАТОПРОТЕКТОРЫ В ЛЕЧЕНИИ АЛКОГОЛЬ-АССОЦИИРОВАННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ ПЕЧЕНИ. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ
Рис. 1. Гистологическая картина печени крыс с хронической алкогольной интоксикацией ( X 100)
Рис. 3. Гистологическая картина печени крыс, получавших одновременно с этанолом «Эссенциале форте Н» ( X 100)
Рис. 5. Гистологическая картина печени крыс, получавших одновременно с этанолом диету с повышенным содержанием жиров ( X 200)
Рис. 2. Гистологическая картина печени крыс, получавших одновременно с этанолом «Гептрал» ( X 100)
Рис. 4. Гистологическая картина печени крыс, получавших одновременно с этанолом «Апилак» ( X 100)
Рис. 6. Гистологическая картина печени крыс, получавших одновременно с этанолом «Гептрал» + «Эссенциале форте Н» + «Апилак» ( X 100)
