CC BY
131
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ РАСТЕНИЯ
© ЧУКАЕВ С.А., НИКОЛАЕВ С.М., РОДНАЕВА O.A., НАГАСЛАЕВА Л.А. -
ГЕПАТОПРОТЕКТОРНОЕ ДЕЙСТВИЕ СУХОГО ЭКСТРАКТА ЛИСТЬЕВ
ОБЛЕПИХИ КРУШИНОВИДНОЙ
С.А. Чукаев, С.М.Николаев, О.А.Роднаева, Л.А.Нагаслаева
(Институт общей и экспериментальной биологии СО РАН; Бурятский государственный университет, г.Улан-Удэ,
ректор - проф. В.М.Корсунов)
Резюме. В экспериментальных исследованиях установлена фармакотерапевтическая эффективность сухого экстракта листьев облепихи крушиновидной при остром токсическом гепатите. Выявлено, что применение фито-средства в диапазоне экспериментально-терапевтических доз обусловливает повышение активности ферментов детоксикации ксенобиотиков и снижение интенсивности перекисного окисления липидов, что способствует нормализации структуры печеночной ткани и биохимических показателей крови. Ключевые слова. Облепиха крушиновидная, сухой экстракт листьев, гепатопротектор.
Актуальной задачей современной медицинской науки является поиск биологически активных веществ с гепатопротекторной активностью и разработка на их основе новыгх выгсокоэффективныгх лекарственный средств. Согласно существующим теоретическим представлениям, в данном аспекте наибольший интерес представляют природные соединения, обладающие выграженныши антиоксидантныши свойствами и способностью индуцировать ферменты метаболизма ксенобиотиков [10,11]. Имеющиеся данные позволяют утверждать, что перспективными объектами фармакологических исследований могут являться некоторые представители флоры Сибири, в частности, облепиха кру-шиновидная [8,9]. Более известны и широко используются в клинической практике целебные свойства фитопрепаратов, получаемых из плодов данного растения [8]; в то же время следует указать, что целыш ряд биологически активных веществ содержится и в других его частях: коре, листьях и др. [9]. Показана фармакотерапевтическая эффективность препаратов облепихи кру-шиновидной при ряде заболеваний желудочно-кишечного тракта, при патологиях, сопровождающихся активацией свободнорадикальныгх процессов [8]; в ранее проведенных нами и другими исследователями экспериментах показано наличие антиоксидантных свойств у композиции природный соединений, содержащихся в листьях данного растения [9]. В то же время малоизученным является вопрос о характере их влияния на активность ферментных систем детоксикации ксенобиотиков.
Исходя из вышеизложенного целью данной работы явилась оценка фармакотерапевтической эффективности сухого экстракта листьев облепихи крушиновидной при остром токсическом гепатите в условиях эксперимента.
Материалы и методы
Исследования были проведены на белых крысах линии Wistar обоего пола массой 180-200 г. Острый токсический гепатит вызывали путем четырехкратного подкожного введения лабораторным животныш 50% масляного раствора тетрахлорметана (СС14) в объеме 0,4 мл на 100 г массы тела, 1 раз в сутки [7].
В работе оценивали антитоксический эффект сухо-
го экстракта листьев облепихи крушиновидной, полученного в лаборатории медико-биологических исследований Института общей и экспериментальной биологии СО РАН (г.Улан-Удэ) методом трехкратной экстракции лекарственного растительного сыгрья в 40% этиловом спирте. Фитоэкстракт вводили внутрижелудоч-но в разовый дозах 100 и 300 мг/кг массы тела животных ежедневно в течение 7 суток. Животным контрольной группы вводили дистиллированную воду в эк-виобъемном количестве.
О фармакотерапевтической эффективности экстракта листьев облепихи крушиновидной при остром токсическом гепатите судили по динамике изменения ряда морфометрических и биохимических показателей. Так, на парафиновый срезах, окрашенных гематоксилин-эозином, производили подсчет общей площади, занимаемой некротизированными гепатоцитами, и площади, занимаемой измененными паренхиматозными клетками (с вакуализацией цитоплазмы различной интенсивности, компактизацией или резким просветлением ядра), используя морфометрическую сетку Г.Г. Автандилова [1]. Активность монооксигеназной системы печени оценивали по скорости р-гидроксилирова-ния анилина [2] и ^деметилирования амидопирина [15] в микросомах печени крыс, которые выщеляли методом низкоскоростного центрифугирования. Ряд биохимических показателей определяли в гомогенатах печени крыс. Динамику изменения интенсивности реакций перекисного окисления липидов (ПОЛ) контролировали посредством определения уровня ТБК-реактив-ных продуктов (ТБКРП) [4]. Активность каталазы (КФ 1.11.1.6) определяли по методу М.А.Королюк и соавт. [5]. Исследование уровня восстановленного глутатио-на проводили по методу Веийег и соавт. [12]. Активность глутатион^-трансферазыг (ГТ, КФ 2.5.1.18) определяли с помощью методики, предполагающей использование в качестьве субстрата динитрохлорбензола (ДНХБ) [13]; активность ферментов: аланинаминотран-сферазы (АлАТ), аспартатаминотрансферазы (АсАТ), щелочной фосфатазы (ЩФ), а также концентрацию холестерина в сыворотке — используя общепринятые биохимические методы [3]; содержание белка в микросомах и гомогенатах печени — по методу O.N.Lowry и соавт. [14].
Статистическую обработку полученных результатов проводили с использованием общепринятых методов. Для оценки степени достоверности полученных результатов использовали и-критерий Вилкоксона-Манна-Уитни.
Результаты и обсуждение
Как свидетельствуют полученные результаты, четырехкратное введение тетрахлорметана обусловливает характерное изменение ряда биохимических показателей. Так, на 7-е сутки эксперимента оксидазная и деме-тилазная виды активности цитохрома Р450 снижаются в 8,7 раза и в 7,6 соответственно, а активность ГТ — в 2,1
Таблица 1
Динамика изменения морфометрических показателей в условиях воздействия тетрахлорметана и применения сухого экстракта листьев облепихи крушиновидной
ных свидетельствует о том, что использованная экспериментальная модель вызывает тяжелое токсическое повреждение печеночной ткани, причиной которого, очевидно, являются метаболические превращения тетрахлорметана [11].
Результаты проведенного морфометрического исследования печени крыс свидетельствуют о наличии у экстракта листьев облепихи крушиновидной гепатоп-ротекторной активности. Так, курсовое применение фитоэкстракта в разовых дозах 100-300 мг/кг в течение 7 суток обусловливает уменьшение оцениваемой площади как некрозов (в среднем на 34,8-43,5%), так и не-
Группы животных S некрозов, % от общей S паранекрозов, % от общей
площади полей зрения площади полей зрения
Позитивный контроль (CCl4) 13,8+0,84* 47,3+3,21*
ЭОК 100 + CCl4 7,8+0,31* 21,4+1,12*
ЭОК 100 + CCl4 9,0+0,84* 28,8+1,91*
Примечание: здесь и далее: х - различия достоверны по сравнению с показателями в ин-тактной группе животных; * - различия достоверны по сравнению с показателями в позитивном контроле (р<0,05).
(табл. 3), что свидетельствует о рассогласованности фун- кробиотических поражений печеночной ткани (в сред-кционирования ферментов первой и второй фаз мета- нем на 39,1-54,8%) (табл.1). Экстракт листьев облепи-болизма ксенобиотиков и снижении эффективности хи крушиновидной предупреждает развитее признаков работы детоксициру- Таблица 2
ющеи системы в це Влияние сухого экстракта облепихи на биохимические показатели сыторотки крови при
лом. резкая интенси- токсическом поражении печени
фикация накопления
ТБКРП в гомогенатах печени на фоне снижения активности ка-талазы и содержания восстановленного глу-татиона указывает на параллельно развивающееся нарушение
Группы животных Активность АлАТ, ммоль/л*ч Активность АсАТ, ммоль/л*ч Активность щелочной фосфатазы, ед/л Содержание холестерина, ммоль/л
Интактный контроль 1,53+0,082 1,25+0,111 156,5+12,20 1,55+0,152
Позитивный контроль (CCl4) 3,64+0,342х 3,04+0,277* 484,7+6,82х 2,78+0,254х
ЭОК 100 + CCl4 2,33+0,031* 1,47+0,272* 389,0+7,35* 1,59+0,085*
ЭОК 100 + CCl4 2,42+0,070* 2,01+0,124* 414,7+6,14* 1,61+0,049*
антиоксидантного статуса организма (табл.4). Выраженная активация сывороточных ферментов: АлАТ, АсАТ, ЩФ и рост содержания холестерина (табл.2) свидетельствуют о развитии цитолитического и холестатическо-го синдромов. При морфометрических исследованиях выявляются выраженные очаги повреждений печеночной ткани (табл. 1). Вся совокупность приведенных дан-
Активность ферментов метаболизма ксенобиотиков в
сухого экстракта листьев
цитолиза и холестаза: при повреждении печени белых крыс тетрахлорметаном фитосредство, примененное в дозе 300 мг/кг снижает активность АлАТ на 33,5%, АсАТ — на 33,9%, щелочной фосфатазы — на 14,3%; концентрация холестерина уменьшается на 42,1% по сравнению с показателями в группе позитивного контроля (табл.2).
Более заметное улучшение функционального состо-
Таблица 3
условиях воздействия тетрахлорметана и применения облепихи крушиновидной
Группы Оксидазная активность, Деметилазная активность, Активность глутатион-S-
животных нмоль/мин*мг белка нмоль/мин*мг белка трансферазы, IU/мг белка
Интактный 1,66+0,145 3,19+0,579 0,39+0,0015
контроль
Позитивный 0,19+0,012х 0,42+0,021х 0,19+0,011х
контроль (СО)
ЭОК 100 + 0,29+0,007* 0,72+0,028* 0,25+0,013*
СС14
ЭОК 300 + 0,22+0,015 0,53+0,021* 0,21+0,022*
СС14
яния печени наблюдается в группе животных, получавших экстракт листьев облепихи в разовой дозе 100 мг/ кг; активность сывороточных ферментов: АлАТ, АсАТ и ЩФ снижается в данном случае на 36,0%, 51,6% и 19,8% соответственно, а содержание холестерина в данной экспериментальной группе в 1,8 раза ниже, чем в контроле.
При оценке изменения скоростей цитохром Р450-
бораторных животных, о чем свидетельствует некоторое восстановление уровня GSH и достоверное повышение активности глутатионтрансферазы (табл.3,4).
Таким образом, назначение экстракта листьев облепихи крушиновидной в диапазоне экспериментально-терапевтических доз на фоне острого токсического гепатита, вызванного введением тетрахлорметана, обусловливает значительное снижение скоростей накопле-
Таблица 4
Влияние сухого экстракта листьев облепихи крушиновидной на показатели, характеризующие
антиоксидантный статус организма
Группы животных Содержание ТБКРП, нмоль МДА/мг белка Активность каталазы, Шх104/мг белка Содержание восстановленного глутатиона, нмоль/мг белка
Интактный 0,62+0,054 0,69+0,025 6,31+0,253
контроль
Позитивный 3,00+0,288Х 0,38+0,030Х 2,14+0, 159х
контроль (СС14)
ЭОК 100 + 1,35+0,118* 0,49+0,015* 2,90+0,147*
СС1Д
ЭОК 300 + 1,84+0,152* 0,44+0,011* 2,38+0,134*
СС14
зависимой гидроксилирующей системы окисления ксенобиотиков в микросомах печени лабораторных животных установлено, что экстракт листьев облепихи кру-шиновидной умеренно стимулирует процессы детокси-кации (табл.3). Деметилазная и оксидазная виды активности цитохрома Р450 микросомальной фракции печеночной ткани под влиянием экстракта облепихи при курсовом введении в разовой дозе 100 мг/кг увеличиваются в 1,7 раза и 1,5 соответственно по сравнению с соответствующми контрольными показателями. В группе животных, получавших экстракт листьев облепихи крушиновидной в дозе 300 мг/кг, изменение регистрируемых параметров менее выгражено: скорость р-гидро-ксилирования анилина возрастает в сравнении с контролем на 15,8%, скорость ^деметилирования амидопирина — на 26,2%.
Курсовое введение экстракта листьев облепихи кру-шиновидной животным с острым токсическим гепатитом сопровождается достоверным снижением интенсивности перекисного окисления липидов мембран клеток. В группах животных, получавших растительный экстракт, наблюдается значительное снижение скорости накопления ТБКРП (табл.4). Так, экстракт облепихи крушиновидной в дозе 100 мг/кг массы тела снижает, по данным ТБК-теста, содержание продуктов ПОЛ в гомогенатах печени к окончанию эксперимента в среднем в 2,2 раза, а, будучи введенным в дозе 300 мг/ кг, он уменьшает концентрацию МДА в 1,6 раза по сравнению с контрольными показателями.
Наряду с этим фитоэкстракт повышает активность эндогенной системы антиоксидантной защиты организма. Так, экстракт лдистьев облепихи крушиновидной в дозе 100 мг/кг способствует повышению активности каталазы в гомогенатах печени лабораторных животных на 29,0%, в дозе 300 мг/кг — на 15,8% по сравнению с позитивным контролем соответственно. Кроме этого, применение фитосредства оказытает благоприятное влияние на систему глутатиона в печени ла-
ния продуктов реакций свободнорадикального окисления. При этом фитосредство в наибольшей степени ингибирует процессы ПОЛ при курсовом применении в режиме 100 мг/кг ежедневно в течение 7 суток.
На основании проведенного анализа полученных результатов можно заключить, что курсовое применение экстракта листьев облепихи крушиновидной при токсическом повреждении печени тетрахлорметаном в диапазоне экспериментально-терапевтических доз (100-300 мг/кг) вызывает выграженный гепатопротек-торный эффект, что, по-видимому, объясняется синергизмом действия содержащихся в растении биологически активных веществ (тритерпенов, стеринов, флаво-ноидов: кверцетина и изорамнетина, а также урсоло-вой и олеаноловой кислот, танидов и др.).
Результаты проведенных исследований свидетельствуют о том, что наиболее оптимальный фармакоте-рапевтический эффект наблюдается в группе животных, получавших экстракт облепихи крушиновидной в дозе 100 мг/кг массы тела ежедневно в течение 7 суток.
Положительное влияние фитосредства на течение острого токсического гепатита, очевидно, обусловлено наличием у него антиоксидантных свойств, что обеспечивает стабилизацию мембран гепатоцитов, способствует стимуляции детоксицирующей функции печени и оптимизирует, таким образом, течение регенеративных процессов. Наряду с этим, экстракт листьев облепихи крушиновидной, снижая цитотоксическое действие четыреххлористого углерода, предотвращает развитие цитолитического и холестатического синдромов и благоприятно влияет на морфофункциональное состояние печени. Под влиянием фитосредства не только улучшаются параметры, отражающие морфофунк-циональное состояние печеночной ткани, но и повышается выживаемость лабораторных животных, являющаяся интегральным показателем общего состояния организма.
HEPATOPROTECTTVE ACTIVITY OF DRY EXTRACT OF HIPPOPHAE RHAMNOIDES L.
S.A. Chukaev, S.M.Nicolaev, O.A.Rodnaeva, L.A.Nagaslaeva (Instittute of General and Experimental Biology SD RAS, Buryat State University, Ulan-Ude)
Pharmacotherapeutical efficiency of dry extract of Hippophae rhamnoides l. leafs in acute toxic hepatitis has been established in experimental condition. Use of phytoextract in the range of experimental therapeutical dose result in increase of enzymes of toxic agents metabolism as well as in decrease of reactions of lipid peroxidation. These effects promote normalization of structure of liver tissue and biochemical parameters of blood.
ЛИТЕРАТУРА
1. Автандилов Г.Г. Медицинская морфометрия. — М., 1990. - 336 с.
2. Карузина ИИ, Арчаков АИ Методы измерения гид-роксилазной активности. // Совр. методы в биохимии. - М.: Медицина, 1977. - С.53-57.
3. Колб В.Г., Камышников B.C. Справочник по клинической химии. — Минск, 1982. — 366 с.
4. Колесова O.E., Маркин АА., Федорова Т.Н. Перекис-ное окисление липидов и методы определения продуктов липопероксидации в биологических средах. // Лаб. дело. - 1984. - №9. - С.540-546.
5. Королюк М.А., Иванова Л.И., Майорова И.Г. и др. Метод определения каталазы. // Лаб. дело. - 1988. -№ 1. - С. 16-19.
6. Крылова С.Г., Коновалова О.Н., Зуева Е.П. Коррекция экстрактом коры и побегов облепихи крушиновид-ной нарушений гормонально-метаболического статуса организма крыс в условиях стресса. // Эксперим. и клин. фармакол. - 2000. - Т.63, №№4. - С.70-73.
7. Кудрин АН., Левшин Б.И., Мехтиев М.А Фармакотерапия препаратами селена экспериментального гепатита. - Баку, 1982. - 222 с.
8. Мизина Т.Ю., Ситникова С.Г. Противолучевая актив-
ность концентрата сока плодов Hippophae rhamnoides L. // Растит. ресурсы. - 1999. - Т.35, вып.3. - С.85-92.
9. Минаева В.Г. Лекарственные растения Сибири. 5-е изд., перераб. и доп. — Новосибсрск: Наука. Сиб. отд-ние, 1991. - 431 с.
10. Саратиков АС., Венгеровский АИ. Новые гепатопро-текторы природного происхождения. //Эксперим. и клин. фармакол. - 1995. - Т.58, №1. - С.8-11.
11. Скакун Н.П., Письмо Г.Т., Мосейчук И.П. Поражение печени четыреххлористым углеродом. - М., 1989. -164с.
12. Beutler E., Duron O., Kelly B.U. Improved method for the glutathione determination. // J. Lab. Clin. Med. - 1963. -Vol. 61. - P.882-890.
13. Habig W.H., Pabst M.J., Jakoby W.B. Glutathione-S-transferases. The first enzymatic step in mercapturic acid formation. // J.Biol.Chem. - 1974. - Vol.249, №№ 22. -P.7130-7139.
14. Lowry O.N., Roserbrougt N.J., Farr A.L. et al. Protein measurements with the Folin phenol reagent. // J. Biol. Chem. - 1951. - Vol.193, №№ 2. - P.265-275.
15. Nash T. Colorimetric estimation of formaldehyde by means of the hantzsen reaction. // Biochem. J. - 1953. - Vol. 55. - P.416-421.
© ЛУБСАНДОРЖИЕВА П.Б., АЖУНОВА T.A., ШАНТАНОВА Л.Н., УНАГАЕВА A.A., МУХАНОВА Л.Х. -
АНТИОКСИДАНТНАЯ АКТИВНОСТЬ ВОДНЫХ ИЗВЛЕЧЕНИЙ АНТИЯЗВЕННОГО СБОРА ТРАВ IN VITRO
П.Б. Лубсандоржиева, Т.А. Ажунова, Л.Н. Шантанова, A.A. Унагаева, Л.Х. Муханова (Институт общей и экспериментальной биологии СО РАН, г. Улан-Удэ, директор - проф. В. М. Корсунов)
Резюме. Определена антиоксидантная активность in vitro отваров антиязвенного сбора с различным содержанием биологически активных веществ, отваров 9 отдельных компонентов сбора. Установлено, что АОА водных извлечений антиязвенного сбора определяется наличием фенольных соединений и веществ синергистов. Из изученных растений отвары шиповника, солодки, сушеницы проявляют наиболее высокую антиоксидантную активность.
Ключевые слова. Антиязвенный сбор, антиоксидантная активность, биологически активные вещества.
Практическое использование антиоксидантов (АО) растительного происхождения для регуляции свобод-норадикальных процессов при язвенной болезни желудка продиктовано важностью роли, которую играет система антиоксидантной защиты в течении трофических процессов в слизистой оболочке гастродуоденаль-ной зоны [8]. Известно, что многокомпонентные препараты проявляют более выраженный антиоксидант-ный эффект по сравнению с отдельными химическими соединениями. Этот факт объясняют одновременным комплексным действием БАВ на различные уров-
ни регуляции системы антиоксидантной защиты, усилением эффекта антиоксидантов за счет веществ — синергистов. К таким веществам можно отнести органические кислоты, свободные углеводы, которые не обладают значительной АО активностью, но в смеси с флавоноидами и другими фенольными АО повышают их суммарную АОА, регенерируя их, выводя радикалы АО из сферы реакции окисления [11,14].
Цель данной работы — определение содержания БАВ и антиоксидантной активности водных извлечений из антиязвенного сбора, отдельных компонентов сбора.
