Генетический полиморфизм HLA DRB1 специфичностей у беременных с гриппом a(H1N1)pdm2009 Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

УДК 612.6.05:616.921.5-618.3

ГЕНЕТИЧЕСКИЙ ПОЛИМОРФИЗМ ИЬЛ БКБ1 СПЕЦИФИЧНОСТЕЙ У БЕРЕМЕННЫХ С ГРИППОМ Л(ИШ1)РБМ2009

© 2014 Д.А. Тарбаева, Т.Е.Белокриницкая

Читинская государственная медицинская академия

Поступила в редакцию 07.12.2014

Проведено HLA-генотипирование локуса DRB1 у 163 заболевших гриппом A (H1N1)pdm2009 беременных. Обнаружена протекторная роль в отношении гриппа AH1N1pdm2009 генотипов HLA DRB1*01*04, DRB1*07*08, DRB1*11*13 (р<0,05). Присутствие в фенотипе у беременных женщин DRB1*07*15 ассоциировано с осложненным течением гриппа (ОР=3,4; 95% ДИ 0,8-7,5). Генотип *16*16 отмечен только в 1 случае с крайне тяжелым течением гриппа.

Ключевые слова: грипп A (H1N1)pdm2009, система HLA, DRB1-генотип, беременность

Проблема гриппа A (H1N1)2009, вызвавшего пандемию, остается актуальной по настоящее время, поскольку ее печальные последствия, в том числе у беременных, еще не подведены. По данным официальной статистики в этот период в России переболело гриппом и ОР-ВИ 4,09% (13,26 млн.) населения [3]. В Забайкалье эта цифра составила 11,8% (128 463 случая). В целом в период эпидемии переболело гриппом 27,9% беременных края, у 9,4% из которых инфекционное заболевание осложнилось вирусно-бактериальными пневмониями. Среди заболевших беременных летальность была выше 0,12%, чем в общей популяции 0,05% (рх2=0,05) [4].

В настоящее время установлено, что индивидуальные различия в характере иммунного реагирования на один и тот же антиген обусловлены генетически. Восприимчивость людей к инфекционным агентам всегда носит полигенный характер и определяется частотами встречаемости генов, которые варьируют в популяции, определяя варианты форм проявления болезни (легкое, среднетяжелое, тяжелое). При этом большое значение придается одной из наиболее полиморфных генетических систем человека - генам главного комплекса гистосовме-стимости (HLA - Human Leucocyte Antigens). Ген DR локуса DRB1* насчитывает более 400 аллельных вариантов и именно ему отводится роль одного из основных генов иммунного ответа человека [1]. Общепризнанно, что существуют HLA специфичности (аллели), обладающие

Тарбаева Долгорма Александровна, кандидат медицинских наук, ассистент кафедры акушерства и гинекологии педиатрического факультета. E-mail: dolgorma35@mail.ru

Белокриницкая Татьяна Евгеньевна, доктор медицинских наук, профессор, заведующая кафедрой акушерства и гинекологии педиатрического факультета. Email: tanbell24@mail.ru

положительной ассоциацией с заболеванием, и, напротив, выполняющие роль «протекторов».

Цель исследования: выявление HLA маркеров предрасположенности к гриппу A(H1N1)pdm2009 и вариантам его течения у беременных женщин.

Материалы и методы исследования. Проведение исследования одобрено локальным этическим комитетом Читинской государственной медицинской академии (протокол №4 от 17.11.12 г.). Для реализации поставленной цели обследовано 163 женщины (основная группа), перенесших грипп А(H1N1)pdm09 во время беременности, из них 67 женщин перенесли грипп тяжелой степени, 66 - средней степени тяжести, 30 - легкой степени. В группу сравнения были включены путем случайного отбора 44 женщины, проживающие в г. Чите, которые в эпидемию 2009 г. были беременными и не заболели гриппом А(НШ1)р<1т09 и ОРВИ. Женщины обеих групп были сопоставимы по паритету и возрасту.

Молекулярно-генетическое типирование для выявления 14 групп аллелей гена DRB1 главного комплекса тканевой совместимости человека проведено на ДНК, полученной из периферической крови. В качестве метода исследования использована полимеразная цепная реакция с детекцией результатов в режиме реального времени (Амплификатор «ДТ-96», ООО «ДНК-Технология», Москва) с использованием комплекта реагентов для выделения ДНК ПРОБА-ГС-ГЕНЕТИКА и ПРОБА-РАПИД-ГЕНЕТИКА (ООО «НПО ДНК-Технология»). Статистический анализ выполнен в Центре БИОСТАТИСТИКА (руководитель В.П. Леонов). Для сравнения распределений частот генотипов и аллелей в двух группах использовался

критерий х2 с поправкой Йетса. Об ассоциации аллелей или генотипов с предрасположенностью к изучаемой патологии судили по величине относительного риска заболевания (ОР). Границы 95%-го доверительного интервала (CI) вычисляли методом B. Woolf. Значения уровня p<0,05 рассматривались как статистически значимые.

Результаты и их обсуждение. Сравнительный анализ частот DRB1-специфичностей между заболевшими гриппом A(H1N1)2009 и здоровыми беременными женщинами, а также изучение полиморфизма в зависимости от степени перенесенной инфекции не выявил значимой разницы. Отмечена лишь некоторая тенденция в сторону накопления среди заболевших пациенток аллелей DRB1 *04 (27,6% против 20,5% в контроле), DRB1*01 (23,3 vs 18,2%), DRB1*03 (19 vs 13,6%), DRB1*09 (6 vs 0%) (табл. 1).

Сложность выявления вариантов генов системы Н^А, ассоциированных с благоприятным и неблагоприятным исходом различных инфекционных заболеваний, заключается в том, что гены Н^А обладают высоким полиморфизмом и

Носительство генотипа DRB1*01*04 отмечено только у 9,1% здоровых резидентов при отсутствии такового среди беременных с гриппом (р=0,001). Аналогично этому протекторами выступили генотипы DRB1*07*08 (р=0,042; ОР=11,11), DRB 1*11* 13(р=0,032; ОР=3,7) (табл. 2). И, наоборот, генотипы *01*11, *07*15, *04*04, *04*13, *07*15 замечены только среди лиц с гриппом при их отсутствии в группе сравнения. В целом анализ распространенности генотипов в зависимости от степени тяжести перенесенной инфекции не выявил значимой разницы (табл. 3), однако риск тяжелого течения гриппа при носительстве генотипа DRB1*07*15 увеличивался в 3,4 раза (ОР=3,4; 95% ДИ 0,87,5). Генотип *16*16 встречался только у 1 едва не умершей женщины с тяжелым течением гриппа.

это далеко не единственный фактор, определяющий исход инфекционного процесса. Следует учитывать, что изобретение эффективных противоинфекционных препаратов усложняет поиск ассоциаций Н^А и исхода заболевания [1].

Таблица 1. HLA-фенотип у заболевших (по степени тяжести) и незаболевших гриппом беременных

\Группы HLA-\ фенотип \ Контрольная группа, n=44 Основная группа, n=163 Основная группа по степени тяжести перенесенной инфекции

легкое течение, n=30 среднетяжелое течение, n=66 тяжелое течение, n=67

абс.число (%), частота гена абс.число (%), частота гена абс.число (%), частота гена абс.число (%), частота гена абс.число (%), частота гена

01 8 (18,2%) 0,09 38 (23,3%) 0,12 10 (33,3%) 0,17 16 (24,2%) 0,12 12 (17,9%) 0,09

03 6 (13,6%) 0,07 31 (19,0%) 0,1 4(13,3%) 0,07 16 (24,2%) 0,12 11 (16,4%) 0,08

04 9 (20,5%) 0,10 45 (27,6%) 0,14 6 (20,0%) 0,1 18 (27,3%) 0,14 21 (31,3%) 0,16

06 0 1 (0,6%) 0,00 1 (3,3%) 0,02 0 0

07 18 (40,9%) 0,20 45 (27,6%) 0,14 5 (16,7%) 0,09 17 (25,8%) 0,13 23 (34,3%) 0,17

08 4 (9,1%) 0,05 10 (6,1%) 0,03 3 (10,0%) 0,05 3 (4,5%) 0,02 4 (6,0%) 0,03

09 0 6 (3,7%) 0,02 1 (3,3%) 0,02 1 (1,5%) 0,01 4 (6,0%) 0,03

10 0 6 (3,7%) 0,02 2 (6,7%) 0,04 3 (4,5%) 0,02 1 (1,5%) 0,01

11 10 (22,7%) 0,11 36 (22,1%) 0,11 9 (30,0%) 0,15 16 (24,2%) 0,12 11 (16,4%) 0,08

12 2 (4,5) 0,02 7 (4,3%) 0,02 1 (3,3) 0,02 3 (4,5%) 0,02 3 (4,5%) 0,02

13 15 (34,1%) 0,17 42 (25,8%) 0,13 10 (33,3%) 0,17 15 (22,7%) 0,11 17 (25,4%) 0,13

14 2 (4,5%) 0,02 11 (6,7%) 0,03 2 (6,7%) 0,04 4 (6,1%) 0,03 5 (7,5%) 0,04

15 9 (20,5%) 0,11 39 (23,9%) 0,12 4 (13,3%) 0,07 19 (28,8%) 0,14 16 (23,9%) 0,12

16 5 (11,4%) 0,06 9 (5,5%) 0,03 2 (6,7%) 0,04 1 (1,5%) 0,01 6 (9,0%) 0,04

Примечание: сравнения частот HLA-фенотипов всех групп имеют значения р>0,05.

Таблица 2. Частоты ОКБ 1 генотипов ИЬЛ у заболевших и незаболевших

гриппом беременных

Незаболев- Заболевшие ОР

Генотип шие беременные п=44 гриппом беременные п=163 х2 Р (95% ДИ)

абс., (%) абс., (%)

*01*04 4 (9,1%) 0 10,6 0,001* -

*01*01 0 5 (3%) 0,38 0,53

*01*07 2 (4,5%) 3 (1,8%) 0,2 0,6

*01*11 0 9 (5,5%) 1,39 0,24

*01*13 2 (4,5%) 3 (1,8%) 0,23 0,62

*01*15 1 (2,2%) 6 (3,7%) 0,00 0,9

*03*04 0 4 (2,4%) 0,19 0,67

*03*07 2 (4,5%) 5(3,1%) 0,00 0,9

*04*04 0 5 (3,1%) 0,3 0,5

*04*07 4(9,1%) 7 (4,3%) 0,77 0,37

*04*13 0 9 (5,5%) 1,38 0,24

*07*08 3 (6,8%) 1 (0,6%) 4,14 0,04* 11,11 (0,4;12,6)

*07*15 0 9 (5,5%) 1,39 0,24

*11*13 6 (13,6%) 6(3,6%) 4,59 0,03* 3,7 (0,6;6,5)

*11*15 2(4,5%) 2(1,2%) 0,64 0,42

*12*13 2 (4,5%) 0 3,48 0,06

*13*15 1 (2,3%) 6 (3,7%) 0,00 0,9

*16*16 0 1(0,6%) 0,5 0,48

Примечание: ОР - относительный риск , 95% ДИ - 95% доверительный интервал; р<0,05.

■ уровень значимости

Таблица 3. Частоты ИЬЛ ОКБ 1 генотипов у заболевших гриппом беременных в зависимости от степени тяжести гриппа

Генотип Степень тяжести гриппа 1-2 1-3 2-3

легкая п=30 абс. (%) средняя п=66 абс.(%) тяжелая п=67 абс.(%) х2 р х2 р х2 р

*01*01 1 (3,3%) 1 (1,5%) 3 (4,4%) 0,04 0,53 0,08 1,0 0,21 0,64

*01*11 3 (10%) 3 (4,5%) 3(4,4%) 0,32 0,57 0,34 0,56 0,16 0,69

*03*04 0 2 (2,9%) 2 (2,9%) 0,04 1,0 0,03 1,0 0,24 0,62

*04*13 0 6 (9%) 3 (4,4%) 1,5 0,17 0,29 0,55 0,51 0,47

*07*08 0 0 1 (1,4%) - - 0,16 1,0 0,00 0,94

*07*15 0 2 (2,9%) 7 (10,4%) 0,1 0,6 3,3 0,07 1,84 0,175

*11*13 1 (3,3%) 3 (4,5%) 2 (2,9%) 0,07 1,0 0,2 1,0 0,00 0,98

*16*16 0 0 1 (1,4%) - - 0,17 1,0 0,00 0,99

Примечание: 1-2 - сравнение частот генотипов ИЬЛ БКБ1 при легком и среднетяжелом течении гриппа; 1-3 - сравнение частот генотипов ИЬЛ БКБ1 при легком и тяжелом течении; 2-3- сравнение частот генотипов ИЬЛ ОКБ 1 при среднетяжелом и тяжелом течении гриппа

В настоящее время опубликовано довольно много работ, посвященных поиску ассоциаций генетической системы ИЬЛ с ОРВИ. Показано, что молекулярно-генетическими предикторами заболеваемости ОРВИ у рабочих нефтега-зопромыслов являлись А10, В18, DR1, а маркерами резистентности - антигены Н^А-А9, В7, В27, В40 [2]; фенотип ИЬЛ-Б14 детерминирует повышенный риск возникновения повторных ларинготрахеитов при ОРВИ [5]. Индивидуумы с фенотипом ИЬЛ-Б15 относительно резистентны к повторным заболеваниям. Тяжелое течение гриппа А чаще регистрировалось у юношей-носителей ИЬЛ-локусов -А10, -В8, -В14. Вместе

с тем, среди пациентов с тяжелыми осложнениями гриппа в виде пневмонии со сливной формой инфильтрации Н^А-Б8 встречался в 2 раза реже, чем в целом в группе госпитализированных [6]. Тяжёлый острый респираторный синдром (ТОРС, атипичная пневмония), вызванный особым типом коронавирусов в 2002 году в Китае с летальностью до 4%, был ассоциирован с Н^А-Б*4601[7], а генам Н^А 1 класса локуса С - С-^502 и 2 класса локуса DR - 0301 присвоена протекторная роль [8].

Полученные нами результаты носят предварительный характер и требуют дальнейших популяционных исследований. Некоторые

ассоциативные связи Н^А с гриппом, выявлен- 1. ные нами, объяснимы, с одной стороны, множественностью антигенных детерминант у возбудителя инфекции, с другой - полигенным кон- ^ тролем иммунного ответа, что ограничивает реализацию биологических эффектов, детерминированных различными генами системы HLA. Возможно, генотипы, обнаруженные только у заболевших гриппом беременных, такие как *01*11, *04*04, *04*13, *07*15 могут претендо- 1 вать на статус молекулярно-генетических маркеров повышенной восприимчивости к вирусу гриппа, а генотипы DRB1*01*04, *07*08, 4. * 11*13, напротив, могут выступать самостоятельными протекторами. При этом детерминанты HLA*07*15, *16*16 ассоциированы с тяжелым течением гриппа A(H1N)pdm2009.

Выводы: 5

1. Носительство генов HLA DRB1*01*04, . DRB1*07*08, DRB1*11*13 выполняет протекторную роль в отношении гриппа A(H1N1)pdm2009. 6.

2. Присутствие в фенотипе у беременных женщин DRB1*07*15 ассоциировано с тяжелым течением гриппа.

3. Генотип DRB 1*16*16 выявлен только в 1 7. случае едва не умершей женщины с гриппом A(H1N1)pdm2009.

8.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ:

Болдырева, М.Н. HLA (класс II) и естественный отбор. "Функциональный" генотип, гипотеза преимущества "функциональной" гетерозигот-ности: Автореф. дис. докт. мед. наук. - М., 2007. 47 с. Ильинских, Н.Н. Маркеры системы HLA у больных респираторными инфекциями у рабочих нефтега-зопромыслов севера Томской области / Н.Н. Ильинских, Е.Н. Ильинских, Е.В. Ямковая и др. // Сборник научных трудов «Актуальные проблемы современной науки». - Томск, 2013. С. 67-68. О санитарно-эпидемиологической обстановке в Российской Федерации в 2009 году: Государственный доклад. - М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2010. 456 с. Родина, Н.Н. Клинико-эпидемиологическая характеристика гриппа A(H1N1)09 / Н.Н. Родина, Е.М. Скрипченко, А.А. Дорожкова // Мат. Всеросс. научно-практической конференции с международным участием «Итоги эпидемии гриппа». - Чита, 2010. С. 165-167.

Савченко, Н.А. Клинико-генетические аспекты острых стенозов гортани, трахеи и бронхов при острых респираторных вирусных инфекциях у детей: Автореф. дисс. канд.мед. наук. - СПб., 1994. 15 с. Цыбалова, Л.М. Значение гетерогенности человеческой популяции по антигенам гистосовместимо-сти и некоторых экологических факторов для эпидемического процесса при гриппе и ОРЗ: дисс... докт. мед. наук. - СПб., 2003. 329 с. Lin, M. Association of HLA class I with severe acute respiratory syndrome coronavirus infection / M. Lin et al. // BMC Medical Genetics. 2003. V. 4. Р. 9. Wang, S.F. Human-leukocyte antigen class I Cw 1502 and class II DR 0301 genotypes are associated with resistance to severe acute respiratory syndrome (SARS) infection / S.F. Wang et al. // Viral Immunol., 2011. V. 24, N 2. P. 421-426.

GENETIC POLYMORPHISM OF HLA DRB1 SPECIFICITY AT PREGNANT WOMEN WITH INFLUENZA A(H1N1)PDM2009

© 2014 D.A. Tarbaeva, T.E. Belokrinitskaya Chita State Medical Academy

Frequency of HLA-DRB1 locus was study in 163 cases of influenza A (H1N1) pdm2009 pregnant. Genotypes HLA DRB1*01*04, DRB1*07*08, DRB1*11*13 have a protective role from influenza AH1N1pdm2009 (p<0,05). HLA DRB1*07*15 was associated with severe complicated flu (H1N1)pdm09 at pregnant women (RR = 3.4; 95% CI 0,8-7,5). Genotype DRB1*16*16 was observed only in one near miss case of influenza.

Key words: influenza A (H1N1) pdm2009, HLA system, genotype DRB1, pregnancy

Dolgorma Tarbaeva, Candidate of Medicine, Assistant at the Department of Obstetrics and Gynecology at Pediatrics Faculty. E-mail: dolgorma35@mail.ru

Tatiana Belokrinitskaya, Doctor of Medicine, Professor, Head of the Department of Obstetrics and Gynecology at Pediatrics Faculty. E-mail: tanbell24@mail.ru