CC BY
4© Коллектив авторов, 2013
Генетические факторы нарушений регуляции ангиогенеза у женщин с ревматоидным артритом
В.И. КОНЕНКОВ, М.А. КОРОЛЕВ, А.В. ШЕВЧЕНКО, В.Ф. ПРОКОФЬЕВ, Ю.Б. УБШАЕВА, О.С. СОКОЛОВА, Е.А. ЛЕТЯГИНА, Г.А. ДЮБАНОВА
НИИ клинической и экспериментальной лимфологии СО РАМН, Новосибирск
Genetic factors of angiogenic dysregulation in women with rheumatoid arthritis
V.I. KONENKOV, M.A. KOROLEV, A.V. SHEVCHENKO, V.F. PROKOFYEV, YU.B. UBSHAEVA, O.S. SOKOLOVA, E.A. LETYAGINA, G.A. DYUBANOVA
Research Institute of Clinical and Experimental Lymphology, Siberian Branch, Russian Academy of Medical Sciences, Novosibirsk
Резюме
Цель исследования. Изучение распределения генотипов генов — регуляторов ангиогенеза ММР и VEGF и их комбинаций с генотипами других цитокинов с проангиогенной активностью у больных ревматоидным артритом (РА) женщин и здоровых лиц. Материалы и методы. Обследовали 509 женщин европеоидной расы восточных регионов России, из них 374 здоровых женщин в возрасте 23—68 лет и 135 женщин, больных РА, в возрасте 27—66 лет. Исследовали однонуклеотидный полиморфизм (SNP) промоторного региона генов TNFA -863 C^A, TNFA -308 G^A, TNFA -238 G^A; IL1fi-31 G^T, IL4 -590 G^T, IL6 -174 G^C, IL10-1082 G^ A и IL10 -592 А^С; VEGF -2578 C^A, VEGF +936 C^J; ММР 2 -1306 С^Т, ММР 9 -1562 С^Т методом рестриктного анализа продуктов амплификации.
Результаты. У пациентов с РА преобладают комбинации генотипов индукторов синтеза факторов роста эндотелия сосудов (VEGF), ассоциированные с высоким уровнем продукции данного фактора, и генотипов деградации внеклеточного матрикса MMP2 и ММР9, характеризующие низкий базовый уровень продукции матричных металлопротеиназ (ММР) с высокой способностью к их индуцированному синтезу, что характерно для дисрегуляторных состояний системы контроля ангиогенеза. Наряду с генотипами MMP и VEGF в состав комбинаций наиболее часто входят генотипы IL1fi, IL4, IL10, IL6 и TNFA. Заключение. Для изучения патогенеза развития РА необходимо комплексное исследование роли генов факторов регуляции ангиогенеза и воспаления, при этом основное внимание должно быть уделено молекулярно-генетическим механизмам контроля базового уровня продукции данных регуляторных факторов.
Ключевые слова: полиморфизмы ММР и VEGF, гены цитокинов, ревматоидный артрит.
Aim. To study genotype distribution in the MMP and VEGF genes, angiogenesis regulators, and their combinations with genotypes in other cytokines genes with proangiogenic activity in female patients with rheumatoid arthritis (RA) and healthy individuals. Subjects and methods. 509 Europeoid women from the eastern regions of Russia, including 374 healthy women aged 23-68 years and 135 female patients aged 27-66 years with RA, were examined. TNF-a gene promoter single nucleotide polymorphisms (SNP) -863 C^A, TNFA -308 G^A, TNFA -238 G^A; IL1fi -31 C^T, IL4 -590 C^T, IL6 -174 G^C, IL10-1082 G^ A and IL10 -592 A^C; VEGF -2578 C^A, VEGF +936 C^J; ММР 2-1306 С^Т, ММР 9 -1562 С^Т were investigated by the restriction analysis of amplification products.
Results. The patients with RA show a preponderance of the combinations of genotypes in vascular endothelial growth factor (VEGF) synthesis inducers, which are related to the high-level production of this factor, and those of genotypes in the degradation of the extracellular matrix of MMP2 and MMP9, which characterize the low baseline elaboration of matrix metalloproteinases (MMP) with a high capability for their induced synthesis, which is specific to the dysregulated states of the angiogenesis control system. Along with MMP and VEGF genotypes, the combinations most commonly contain IL1fi, IL4, IL10, IL6, and TNF-a genotypes. Conclusion. The study of the pathogenesis of RA must comprehensively investigate the role of the genes of the factors involved in the regulation of angiogenesis and inflammation, with particular emphasis on molecular genetic mechanisms for monitoring the baseline level of production of these regulatory factors.
Key words: MMP and VEGF polymorphisms, cytokine genes, rheumatoid arthritis.
ВКМ — внеклеточный матрикс РБ — ревматические болезни
ДИ — доверительный интервал Сп — специфичность
ОШ — отношение шансов ММР — матричные металлопротеиназы
РА — ревматоидный артрит VEGF — фактор роста эндотелия сосудов
Для ревматических болезней (РБ) характерны нарушения состояния капиллярных и сосудистых кровеносных и лимфатических сетей. Возможно, внедрение в клиническую практику лекарственных средств, направленных на регуляцию ангиогенеза и васкулогенеза, позволит оптимизировать тактику лечения больных РБ. Однако для применения таких лекарственных средств потребуется уточнение данных о характере и выраженности нарушений ангиогенеза у каждого пациента в рамках концепции персонализированной медицины. Вместе с тем определение активности и концентраций регуля-
торных факторов ангиогенеза в биологических жидкостях затруднено ввиду высокой динамичности и вариабельности этих показателей у пациента. Нам представляется, что более предпочтительным послужит исследование регуляторных областей генов гуморальных факторов регуляции ангиогенеза, связанных с базовым уровнем продукции этих факторов.
При воспалительном процессе у пациентов с ревматоидным артритом (РА) в синовиальной оболочке среди внеклеточного матрикса (ВКМ), содержащего скопления про-теогликана, содержатся синовиальные клетки (фибробла-
Полиморфизм генов регуляции ангиогенеза при РА
сты и макрофаги), а также сеть лимфатических сосудов и капилляров. Синовиальная оболочка инфильтрирована клетками лимфогемопоэтического происхождения, в основном Т-хелперами, В-клетками и макрофагами. Объем синовиальной жидкости возрастает вследствие отека, что приводит к припухлости и боли в суставе. Наряду с высокой метаболической активностью инфильтрирующих синовию клеток отек и сдавление, повышение внутрисуставного давления служат факторами, приводящими к высокой степени ишемии тканей сустава и развитию тканевой гипоксии.
Это сопровождается активацией семейства генов фактора транскрипции, гипоксией индуцированного фактора, контролирующих такие физиологические процессы, как регенерация, апоптоз, вазомоторные реакции, эритропоэз, энергетический обмен и ангиогенез [1]. Именно ишемия вызывает гиперпродукцию целого ряда биологических веществ, среди которых значимое место занимают матричные металлопротеиназы (ММР) — мощные индукторы продукции факторов роста эндотелия сосудов (VEGF), стромального фактора 1-го типа, фактора роста пигментного эпителия и т.п., баланс которых и определяет состояние сосудистого русла в тканях [2].
При РА отмечено значительное повышение концентрации VEGF как в сыворотке крови, так и в синовиальной жидкости, причем это повышение коррелирует как с клиническими признаками деструкции суставов, так и с уровнем таких лабораторных показателей активности РА, как скорость оседания эритроцитов или уровень С-реактивного белка [3, 4]. В культуре клеток показана значительно более высокая продукция VEGF мононукле-арами у пациентов с тяжелым РА по сравнению с клетками пациентов с легким течением болезни [5].
ММР — группа протеолитических ферментов, они активно участвуют в процессах ремоделирования ВКМ, разрушают такие его компоненты, как коллаген, эластин и т.д. Большое значение в деградации ВКМ отводится ММР2 и ММР9 (желатиназа А и желатиназа В соответственно), которые, облегчая проникновение моноцитов через эндотелий и их накопление, способствуют активации тромбоцитов и каскаду коагуляции. ММР9 активна против денатурированного коллагена (желатина), IV, V и XI типов коллагена [6, 7]. Регуляция экспрессии ММР2 и ММР9 происходит прежде всего на транскрипционном уровне, в про-моторном регионе гена и зависит от влияния эндотелиаль-ных факторов роста и цитокинов [8]. Выявлен функциональный полиморфизм ММР9 С/Т в области промотора в
Сведения об авторах:
Коненков Владимир Иосифович — д.м.н., проф., акад. РАМН, дир. ФГБУ НИИКЭЛ СО РАМН, зав. лаб. клинической иммуногене-тики
Королев Максим Александрович — к.м.н., врач-ревматолог, зам. дир. ФГБУ НИИКЭЛ СО РАМН
Шевченко Алла Владимировна — к.б.н., с.н.с. лаб. клинической иммуногенетики ФГБУ НИИКЭЛ СО РАМН Убшаева Юлия Борисовна — зав. консультативным отд-нием клиники ФГБУ НИИКЭЛ СО РАМН
Соколова Ольга Сергеевна — врач-ревматолог клиники ФГБУ НИИКЭЛ СО РАМН
Летягина Елена Алексеевна — к.м.н., зав. терапевтическим отд-нием клиники ФГБУ НИИКЭЛ СО РАМН
Дюбанова Галина Александровна — к.м.н., гл. врач клиники ФГБУ НИИКЭЛ СО РАМН
положении —1562, причем наличие в генотипе минорного аллеля *Т обеспечивает высокую транскрипционную активность гена [9]. В промоторном регионе ММР2 выявлено несколько полиморфных сайтов и показано, что замена MMP2 C/T в положении —1306 носит функциональный характер, причем аллельный вариант *C ассоциирован с высокой промоторной активностью [10].
Имеется незначительное число работ по изучению полиморфизма генов — индукторов ангиогенеза при РА, однако все они посвящены исследованию отдельных полиморфизмов, что значительно снижает их значимость для оценки генетических основ регуляции ангиогенеза в целом [11, 12].
Учитывая взаимообусловленность индукции ангиогенеза последовательно продуктами генов MMP, VEGF, про-ангиогенных цитокинов (IL1ß, TNFA, IL6), мы провели комплексное исследование в целях выявления единого комплекса этих генов—регуляторов ангиогенеза в геноме пациенток с РА в сопоставлении со здоровыми женщинами.
Материалы и методы
Принимая во внимание, что распространенность РА у женщин значительно превышает таковую у мужчин, в данное исследование для сравнительного анализа распределения генотипов MMP VEGF, IL1ß, TNFA, IL6, IL4, IL10, включили 509 женщин. Среди них 374 здоровых женщины европеоидной расы в возрасте от 23 до 64 лет (контрольная группа) и 135 женщин с достоверным РА в возрасте от 27 до 66 лет.
Диагноз РА соответствовал критериям Американской ревматологической ассоциации (1987) [13].
Распределение больных по рентгенологическим стадиям (Steinbrocker) было следующим: II стадия — у 32,6%, III— у 41,5% и IV— у 25,9%. Преобладали больные с недостаточностью суставов II и III функциональных классов (Американская коллегия ревматологов, 1992). Степень активности с учетом индекса активности DAS28 (Disease Activity Score, оценка 28 суставов) в 38,5% случаев определена как минимальная и умеренная, в 61,5% — как высокая и в среднем составила 5,58+1,22 балла. Пациенты находились на постоянной базисной терапии. Работа проведена с соблюдением принципов добровольности и конфиденциальности, получено разрешение локального этического комитета.
Генотипирование. Исследовали однонуклеотидный полиморфизм (SNP) промоторного региона генов TNFA —863 C^A, TNFA -308 Gr^A, TNFA -238 G^A; ILlß -31 С-^T, IL4 -590 С-^T, IL6-174 Gr^C, IL10-1082 G-A и IL10-592А^С; VEGF-2578 C^A ММР2-1306 С^Т ММР9-1562 С^Г. Генотипирование осуществляли методом рестриктного анализа продуктов амплификации, как описано ранее [14—16].
Статистика. При статистическом анализе данных использовали такие показатели, как распространенность генов, генотипов и их комбинаций, специфичность (Сп), отношение шансов (ОШ) с расчетом 95% доверительного интервала (ДИ).
Частоту аллелей генов цитокинов вычисляли методом прямого подсчета [17]. Распределение генотипов по исследованным полиморфным локусам проверяли на соответствие равновесию Харди—Вайнберга [18]. Достоверность различий частот распределения изучаемых признаков в альтернативных группах определяли по критерию х2 с поправкой Йетса на непрерывность и двустороннему варианту точного метода Фишера для четырехпольных таблиц [19].
Контактная информация:
Прокофьев Виктор Федорович — к.м.н., в.н.с. лаб. клинической иммуногенетики ФГБУ НИИКЭЛ СО РАМН; 630117 Новосибирск, ул. Тимакова, д. 2; тел.: +7(383)227-0194; e-mail: vprok@ngs.ru
оо
Таблииа 1. Комбинированные генотипы VEGF и ММР, ассоциированные с предрасположенностью к развитию РА
I
а з
-с
я §
& ь.
I
со
IV) о
Полиморфизм Комбинации генотипов PA, % зд,% ОШ 95% ДИ р{ tmF,) Си, %
VEGF2578:MMP2-1306:MMP9-1562 CA-TT-CT 6,15 0,00 30,04 От 1,72 до 525,06 0,0003 100,00
VEGF2578:MMP2-1306:ILlB-31:IL4-590 CA-TT-TC-CC 6,15 0,00 30,04 От 1,72 до 525,06 0,0003 100,00
VEGF2578:MMP9-1562:TNF-308:IL10-592 CA-CT-GA-CA 4,55 0,00 28,83 От 1,61 до 515,65 0,0010 100,00
VEGF-936:MMP2-1306:MMP9-1562:IL4-590 CC-TT-CC-CT 6,11 0,00 27,87 От 1,59 до 487,21 0,0005 100,00
VEGF2578:MMP2-1306:MMP9-1562:TNF-308 CA-TT-CT-GG 5,38 0,00 26,30 От 1,49 до 464,37 0,0010 100,00
VEGF2578:MMP2-1306:TNF-308:IL1B-31:IL4- 590 CA-TT-GG-TC-CC 5,38 0,00 26,30 От 1,49 до 464,37 0,0010 100,00
VEGF2578:MMP2-1306:TNF-238:IL6-174 CA-TT-GG-GG 5,38 0,00 25,81 От 1,46 до 455,82 0,0010 100,00
VEGF2578:MMP2-1306:MMP9-1562:TNF-238 CA-TT-CT-GG 5,38 0,00 25,45 От 1,44 до 449,40 0,0011 100,00
VEGF2578:MMP2-1306:TNF-238:IL1B-31:IL4- 590 CA-TT-GG-TC-CC 5,38 0,00 25,45 От 1,44 до 449,40 0,0011 100,00
VEGF2578:VEGF-936:MMP2-1306:ILlB-31:IL4-590 CA-CC-TT-TC-CC 5,43 0,00 24,31 От 1,38 до 429,38 0,0013 100,00
VEGF2578:MMP9-1562:TNF-863:TNF-308:IL10-592 CA-CT-CC-GA-CA 3,79 0,00 24,20 От 1,33 до 440,99 0,0032 100,00
VEGF2578:MMP9-1562:TNF-308:IL6-174 CA-CT-GA-GC 3,76 0,00 24,18 От 1,33 до 440,65 0,0032 100,00
VEGF-936:MMP2-1306:MMP9-1562:TNF-238:IL4-590 CC-TT-CC-GG-CT 5,34 0,00 23,80 От 1,35 до 420,32 0,0015 100,00
VEGF2578:MMP9-1562:TNF-308:TNF-238:IL10-592 CA-CT-GA-GG-CA 3,79 0,00 23,25 От 1,28 до 423,74 0,0037 100,00
VEGF2578:MMP9-1562:TNF-308:TNF-238:IL6-174 CA-CT-GA-GG-GC 3,76 0,00 23,24 От 1,28 до 423,54 0,0037 100,00
VEGF2578:MMP2-1306:TNF-863:IL6-174 CA-TT-CC-GG 4,62 0,00 22,92 От 1,28 до 410,30 0,0025 100,00
VEGF2578:MMP2-1306:MMP9-1562:TNF-863 CA-TT-CT-CC 4,62 0,00 22,61 От 1,26 до 404,71 0,0026 100,00
VEGF2578:MMP2-1306:MMP9-1562:TNF-308:IL4-590 CA-CC-CT-GA-CC 4,62 0,00 22,61 От 1,26 до 404,71 0,0026 100,00
VEGF2578:MMP2-1306:TNF-863:ILlB-31:IL4-590 CA-TT-CC-TC-CC 4,62 0,00 22,61 От 1,26 до 404,71 0,0026 100,00
VEGF2578:MMP2-1306:TNF-863:TNF-238:IL6-174 CA-TT-CC-GG-GG 4,62 0,00 22,19 От 1,24 до 397,25 0,0028 100,00
VEGF2578:MMP2-1306:MMP9-1562:TNF-308:TNF-238 CA-TT-CT-GG-GG 4,62 0,00 21,88 От 1,22 до 391,66 0,0030 100,00
VEGF2578:MMP2-1306:TNF-308:TNF-238:ILlB-31:IL4-590 CA-TT-GG-GG-TC-CC 4,62 0,00 21,88 От 1,22 до 391,66 0,0030 100,00
VEGF2578:VEGF-936:MMP2-1306:MMP9-1562 CA-CC-TT-CT 4,65 0,00 21,21 От 1,18 до 379,82 0,0033 100,00
VEGF2578:VEGF-936:MMP2-1306:MMP9-1562:TNF-308 CA-CC-TT-CT-GG 4,65 0,00 21,21 От 1,18 до 379,82 0,0033 100,00
VEGF-936:MMP2-1306:MMP9-1562:TNF-863:IL4-590 CC-TT-CC-CC-CT 4,58 0,00 20,98 От 1,17 до 375,58 0,0035 100,00
VEGF-936:MMP2-1306:MMP9-1562:TNF-308:IL4-590 CC-TT-CC-GG-CT 4,58 0,00 20,98 От 1,17 до 375,58 0,0035 100,00
VEGF-936:MMP2-1306:TNF-308:IL4-590:IL6-174 CC-CC-GA-CC-CC 4,58 0,00 20,98 От 1,17 до 375,58 0,0035 100,00
VEGF-936:MMP2-1306:MMP9-1562:IL4-590:IL10-592 CC-TT-CC-CT-CC 4,62 0,00 20,94 От 1,17 до 374,89 0,0035 100,00
VEGF2578:VEGF-936:MMP2-1306:TNF-308:ILlB-31:IL4-590 CA-CC-TT-GG-TC-CC 4,65 0,00 20,89 От 1,17 до 374,18 0,0035 100,00
VEGF-936:MMP2-1306:TNF-308:ILlB-31:IL4-590 CC-TT-GG-TC-CC 4,58 0,00 20,67 От 1,15 до 370,04 0,0036 100,00
VEGF2578:VEGF-936:MMP2-1306:TNF-238:ILlB-31:IL4-590 CA-CC-TT-GG-TC-CC 4,65 0,00 20,37 От 1,14 до 364,79 0,0039 100,00
VEGF-936:MMP2-1306:TNF-238:ILlB-31:IL4-590 CC-TT-GG-TC-CC 4,58 0,00 20,15 От 1,13 до 360,80 0,0040 100,00
VEGF2578:MMP9-1562:TNF-308:IL4-590:IL10-1082 CA-CC-GG-CT-AA 6,40 0,00 18,59 От 1,06 до 325,67 0,0032 100,00
VEGF2578:MMP9-1562:TNF-308:TNF-238:IL4-590:IL10-1082 CA-CC-GG-GG-CT-AA 6,40 0,00 18,59 От 1,06 до 325,67 0,0032 100,00
VEGF2578:MMP2-1306:MMP9-1562:TNF-308 CA-CC-CT-GA 6,92 0,46 15,99 От 2,00 до 127,75 0,0008 99,54
VEGF-936:MMP2-1306:IL10-1082 CC-TT-AA 10,57 0,88 13,24 От 1,70 до 102,91 0,0015 99,12
VEGF2578:MMP2-1306:IL10-1082 CA-TT-AA 9,84 0,86 12,55 От 1,60 до 98,11 0,0028 99,14
VEGF2578:MMP2-1306:IL6-174 CA-TT-GG 5,38 0,46 12,41 От 1,51 до 102,02 0,0049 99,54
VEGF-936:MMP2-1306:TNF-238:IL10-1082 CC-TT-GG-AA 9,76 0,88 12,11 От 1,55 до 94,70 0,0030 99,12
I
а
-с
Я §
& ь.
I
со
IV) о
Таблица 1. Продолжение
Полиморфизм Комбинации генотипов РА, % зд,% ОШ 95% ДИ р{ ИпР,) Сп, %
УЕОР2578:ММР9-1562:ЮТ-863:ЮТ-308 СА-СТ-СС-ОА 6,02 0,69 9,15 От 1,92 до 43,71 0,0021 99,31
УЕОР2578:ММР2-1306:11ЛВ-31 СА-ТТ-ТС 7,69 0,93 8,92 От 1,92 до 41,37 0,0014 99,07
УЕОР2578:ММР9-1562:ЮТ-308 СА-СТ-ОА 8,27 1,04 8,57 От 2,35 до 31,25 0,0003 98,96
УЕОР2578:УЕОР-936:ММР2-1306:ТМР-238:1Ь4-590 СА-СС-ТТ-ОО-СС 7,75 1,01 8,24 От 1,77 до 38,23 0,0021 98,99
УЕОР2578:ММР2-1306:ТОТ-308:11ЛВ-31 СА-ТТ-ОО-ТС 6,92 0,93 7,96 От 1,69 до 37,43 0,0031 99,07
УЕОР-936:ММР2-1306:ЮТ-238:11ЛВ-31 СС-ТТ-ОО-ТС 7,63 1,03 7,93 От 1,71 до 36,83 0,0043 98,97
УЕОР2578:ММР2-1306:ТОТ-238:11ЛВ-31 СА-ТТ-ОО-ТС 6,92 0,96 7,70 От 1,64 до 36,22 0,0037 99,04
УЕОР2578:УЕОР-936:ММР2-1306:ТМР-863:1Ь4-590 СА-СС-ТТ-СС-СС 6,98 0,99 7,54 От 1,60 до 35,47 0,0041 99,01
УЕОР2578:ММР9-1562:ЮТ-308:ЮТ-238 СА-СТ-ОА-ОО 6,77 1,08 6,63 От 1,76 до 24,91 0,0027 98,92
УЕОР2578:ММР2-1306:ЮТ-238:1Ь4-590 СА-ТТ-ОО-СС 8,46 1,40 6,50 От 1,78 до 23,77 0,0030 98,60
УЕОР2578:УЕОР-936:ММР9-1562:11Л 0-1082 СА-СС-СС-АА 13,71 2,46 6,30 От 1,80 до 22,10 0,0017 97,54
УЕОР2578:УЕОР-936:ММР2-1306:1Ь4-590 СА-СС-ТТ-СС 8,53 1,48 6,21 От 1,70 до 22,73 0,0033 98,52
УЕОР-936:ММР2-1306:1ЫВ-31 СС-ТТ-ТС 8,40 1,51 5,99 От 1,64 до 21,90 0,0037 98,49
УЕОР2578:ММР2-1306:ЮТ-238 СА-ТТ-ОО 14,62 2,80 5,93 От 2,30 до 15,29 0,0001 97,20
УЕОР2578:УЕОР-936:ММР9-1562:ТМР-238:11ЛО-Ю82 СА-СС-СС-ОО-АА 12,90 2,46 5,88 От 1,67 до 20,72 0,0031 97,54
УЕОР2578:ММР2-Ш6 СА-ТТ 15,38 3,17 5,56 От 2,28 до 13,55 0,0001 96,83
УЕОР2578:ММР2-1306:1Ь4-590 СА-ТТ-СС 9,23 1,81 5,52 От 1,74 до 17,49 0,0023 98,19
УЕОР2578:УЕОР-936:ММР2-Ш6:ТМР-238 СА-СС-ТТ-ОО 12,40 2,53 5,47 От 1,95 до 15,32 0,0007 97,47
УЕОР-936:ММР2-Ш6:1Ь6-174 СС-ТТ-ОС 9,92 1,98 5,45 От 1,74 до 17,11 0,0018 98,02
УЕОР2578:ММР2-1306:ТМР-308:ТМР-238 СА-ТТ-ОО-ОО 10,77 2,34 5,04 От 1,77 до 14,36 0,0013 97,66
УЕОР2578:УЕОР-936:ММР2-Ш6 СА-СС-ТТ 13,18 2,96 4,98 От 1,91 до 13,01 0,0006 97,04
УЕОР2578:ММР9-1562:11ЛО-Ю82 СА-СС-АА 16,80 3,91 4,97 От 1,81 до 13,63 0,0008 96,09
УЕОР2578:ММР9-1562:ТОТ-238:11ЛО-1()82 СА-СС-ОО-АА 16,00 3,91 4,69 От 1,70 до 12,92 0,0013 96,09
УЕОР2578:ММР2-Ш6:ЮТ-863 СА-ТТ-СС 11,54 2,71 4,67 От 1,77 до 12,37 0,0017 97,29
УЕОР2578:ММР2-1306:ТМР-308 СА-ТТ-ОО 11,54 2,71 4,67 От 1,77 до 12,37 0,0017 97,29
УЕОР2578:ММР9-1562:ТОТ-863:11ЛО-1()82 СА-СС-СС-АА 12,80 3,13 4,55 От 1,48 до 14,02 0,0048 96,88
УЕОР-936:ММР2-Ш6:ТМР-238 СС-ТТ-ОО 15,27 4,02 4,30 От 1,83 до 10,09 0,0005 95,98
УЕОР2578:ММР2-1306:ТМР-863:ТМР-238 СА-ТТ-СС-ОО 10,77 2,80 4,18 От 1,57 до 11,18 0,0035 97,20
УЕОР-936:ММР2-Ш6 СС-ТТ 16,79 4,90 3,92 От 1,79 до 8,57 0,0005 95,10
УЕОР-936:ММР9-1562:1ЫО-1082 СС-СС-АА 20,63 7,32 3,29 От 1,47 до 7,36 0,0032 92,68
ММР2-1306 ТТ 18,94 7,14 3,04 От 1,56 до 5,93 0,0010 92,86
Примечание. Здесь и в табл. 2: РА — частота комбинаций генотипов у больных РА; ЗД -генотипов в группах сравнения по двустороннему варианту точного метода Фишера.
частота комбинаций генотипов у здоровых женщин; — значенияр разности частот комбинаций
со
Результаты
Выявлено, что в контрольной выборке и в выборке больных наблюдаемое распределение генотипов всех изученных полиморфных вариантов генов—регуляторов ан-гиогенеза соответствовало каноническому распределению Харди—Вайнберга. Сравнительный генетический анализ показал, что с РА ассоциировано 936 комбинированных генетических признаков, включающих генотипы VEGF, MMP2 и MMP9 с уровнем достоверности различий р<0,05 по двустороннему критерию Фишера и удовлетворяющих условию 95% ДИ для ОШ. Отбор из числа последних высокоспецифичных (более 90%) генетических комбинаций уменьшило число обсуждаемых признаков до 103 с одновременным значительным повышением силы их связи, что отражается в колебании показателя ОШ для отдельных признаков в интервале от 3,04 до 30,04.
При рассмотрении генотипов ранних индукторов синтеза VEGF в случае постишемической гипоксии MMP2 и MMP9, вошедших в число позитивно ассоциированных с РА комбинированных генетических комплексов (табл. 1), обращает внимание преобладание среди них аллельных вариантов и генотипов, ассоциированных с изначально низким базовым уровнем продукции ММР. Так, среди всех генотипов MMP2 в точке полиморфизма —1306 С/Т в 95% случаев выявлен гомозиготный вариант ТТ, ассоциированный с низким уровнем продукции этой желатина-зы-2 [10]. Среди всех генотипов MMP9 в точке полиморфизма —1562 С/Т в 1005 случаях выявлено наличие аллеля С или гомозиготного генотипа СС, также ассоциированных с низким исходным уровнем продукции этой желати-назы В [9]. Гомозиготный вариант ТТ среди позитивно ассоциированных с развитием РА не выявлен ни в одном случае. Как правило, низкий исходный уровень продукции белковых макромолекул обеспечивает высокую степень индуцибельности продукции при стимуляции клеток-продуцентов.
Это правило хорошо согласуется с полученными нами данными по изучению распространенности аллельных вариантов гена VEGF. Анализ этих данных выявил, что хотя генотипы VEGFв точке полиморфизма —2578А/С среди позитивно ассоциированных с РА комбинаций встречаются исключительно в гетерозиготном варианте АС, генотип VEGF в точке полиморфизма +936 С/Т представлен в 100% исключительно гомозиготным вариантом СС, ассоциированным с высоким уровнем продукции VEGF [20, 21].
Генотипы TNFA среди группы позитивно ассоциированных с РА признаков во всех трех исследованных точках полиморфизмов в основном представлены генотипами, ассоциированными с низким уровнем продукции фактора. Так, в точке полиморфизма —863 А/С в 100% случаев выявлен гомозиготный вариант СС, в точке —238 A/G в 100% случаев — гомозиготный вариант GG, в точке полиморфизма —308 A/G в 100% — аллель G в составе генотипов AG и GG. Генотип ILlfi —31 Т/С представлен гетерозиготным вариантом ТС. В генотип другого провоспали-тельного цитокина IL6 в основном входят аллели G, ассоциированные с высокой провоспалительной и прангио-генной активностью [22].
Помимо генов цитокинов с проангиогенной активностью в составе позитивно ассоциированных с РА геноти-
пов выявлены гены с противоангиогенной активностью — IL4 и IL10. Так, генотипы IL4 выявляются в 34,3% случаев и все они содержат аллель С в гомозиготном варианте СС (70,8%) или гетерозиготном варианте СТ. Аллель С, как известно, ассоциируется со сниженной способностью продуцировать IL4 [21]. Сходные данные получены и для аллельного полиморфизма гена IL10. Во всех 100% случаев среди позитивно ассоциированных с РА генетических комбинаций выявляются гомозиготные генотипы АА в полиморфной позиции этого гена —1082 A/G, ассоциированные с низкой способностью клеток лиц с таким генотипом продуцировать IL10 [23]. В то же время среди всех позитивно ассоциированных признаков в 100% случаев выявлены генотипы, содержащие аллель С в полиморфной позиции IL10 —592А/С, связанные с высокой продукцией этого цитокина. Необходимо отметить, что в составе одной генетической комбинации генотипы в этих двух полиморфных позициях никогда не выявляются.
При анализе состава генетических комбинаций, негативно ассоциированных с развитием РА, т.е. тех комбинаций, частота которых достоверно снижена в группе пациентов по сравнению со здоровыми лицами, выявляются другие закономерности (табл. 2). Так, если в группе позитивно ассоциированных признаков генотип VEGF в точке полиморфизма —2578А/С выявлен более чем в 75% случаев, то в данной группе признаков он выявляется лишь в 18% , причем в его состав входят не только гетерозиготные варианты АС, но гомозиготные варианты АА. Закономерности, характерные для генотипа этого гена в точке +963 Т/С для группы как позитивно, так и негативно ассоциированных признаков, выглядят сходным образом. Иные закономерности обнаружены для генотипов генов MMP. В этой группе преобладают генотипы, содержащие аллель С в точке полиморфизма —1306 Т/С.
Единственным отличием от группы позитивно ассоциированных с развитием РА генотипов гена TNFA является 100% представительство гомозиготного варианта GG в точке полиморфизма —308 A/G. Среди генов других ци-токинов с провоспалительной и проангиогенной активностью можно отметить 100% выявление генотипа GC в точке полиморфизма —174 гена IL6 (табл. 3).
Для генов с противоангиогенной активностью выявлено 100% представительство гомозиготного варианта СС гена IL4 в точке полиморфизма —590 С/Т, характерного для лиц с низким уровнем продукции IL4, для гена IL10 в точке полиморфизма —1082 A/G — 100% представительство гетерозиготного варианта AG, а для генотипа IL10 —592 A/C — 100% представительство гомозиготного варианта СС, ассоциированного с высоким уровнем продукции IL10.
Обсуждение
Полученные результаты показывают, что генотипы лиц, предрасположенных к развитию РА, включают ал-лельные варианты генов-индукторов синтеза VEGF и деградации ВКМ MMP2 и ММР9, характеризующие низкий базовый уровень продукции ММР с высокой способностью к их индуцированному синтезу. Генотипы VEGF включают преимущественно аллели, ассоциированные с высоким уровнем продукции этого сосудистого фактора роста. Гены провоспалительных и проангиогенных цито-
I
а
-с
Я §
& ь.
I
со
IV) о
Таблица 2. Комбинированные генотипы УЕСР и ММР, ассоциированные с устойчивостью к развитию РА
ю
Полиморфизмы Комбинации генотипов РА, % зд,% ош 95% ДИ р{\т¥2) Сп, %
УЕОР-936:ММР9-1562:ТМР-308:1Ь4-590:1Ы0-1082 СС-СТ-ОО-СС-АО 0,00 10,57 0,03 От 0,00 до 0,55 0,0001 100,00
УЕОР-936:ММР9-1562:ТМР-308:ТМР-238:1Ь4-590:1Ы0-1082 СС-СТ-ОО-ОО-СС-АО 0,00 10,57 0,03 От 0,00 до 0,55 0,0001 100,00
УЕОЕ2578:ММР2-1306:1Е1В-31:ПЛ0-1082 СС-ТС-ТС-АО 0,00 7,08 0,05 От 0,00 до 0,89 0,0025 100,00
УЕОГО578:ММР2-1306:ТОТ-238:11ЛВ-31:11Л0-1082 СС-ТС-ОО-ТС-АО 0,00 7,08 0,05 От 0,00 до 0,89 0,0025 100,00
УЕОР-936:ММР2-1306:ММР9-1562:1Е6-174:ПЛ0-592 сс-тс-сс-ос-сс 0,00 6,57 0,05 От 0,00 до 0,89 0,0022 100,00
УЕОР-936:ММР9-1562:ТМР-863:ТМР-308:1Е10-1082 СТ-СС-СС-ОО-АО 0,00 6,50 0,05 От 0,00 до 0,94 0,0031 100,00
УЕОР-936:ММР9-1562:1ЫВ-31:1Ь4-590:1Ы0-1082 СС-СТ-ТС-СС-АО 0,00 6,67 0,05 От 0,00 до 0,92 0,0028 100,00
УЕОР-936:ММР9-1562:ТМР-863:ТМР-308:1Е4-590:1Е10-1082 СС-СТ-СС-ОО-СС-АО 0,00 7,32 0,05 От 0,00 до 0,83 0,0015 100,00
УЕОР-936:ММР9Л562:ТОР-308:1Ь4-590:11Л0-1082:11Л0-592 СС-СТ-ОО-СС-АО-СС 0,00 6,50 0,05 От 0,00 до 0,94 0,0031 100,00
УЕОР-936:ММР9-1562:ТОР-238:1ЫВ-31:1Ь4-590:1Ы0-1082 СС-СТ-ОО-ТС-СС-АО 0,00 6,67 0,05 От 0,00 до 0,92 0,0028 100,00
УЕОР-936:ММР9-1562:ТМР-863:ТМР-308:ТМР-238:1Е4-590:1Е10-1082 СС-СТ-СС-ОО-ОО-СС-АО 0,00 7,32 0,05 От 0,00 до 0,83 0,0015 100,00
УЕОР-936:ММР9-1562:ТМР-308:ТМР-238:1Е4-590:1Е10-1082:1Е10-592 СС-СТ-ОО-ОО-СС-АО-СС 0,00 6,50 0,05 От 0,00 до 0,94 0,0031 100,00
УЕОР2578:ММР9-1562:11ЛВ-31:1Ь6-174:11ЛО-592 СА-СС-ТС-ОС-СС 0,00 5,95 0,06 От 0,00 до 0,97 0,0020 100,00
УЕОР-936:ММР2-1306:11ЛВ-31:11Л0-1082:11Л0-592 СС-ТС-ТС-АО-СС 0,00 6,36 0,06 От 0,00 до 0,99 0,0047 100,00
УЕОР-936:ММР2-1306:ТОР-238:1ЫВ-31:1Ы0-1082:1Ы0-592 СС-ТС-ОО-ТС-АО-СС 0,00 6,36 0,06 От 0,00 до 0,99 0,0047 100,00
УЕОР-936:ММР2-1306:1Е6-174:ПЛ0-592 сс-тс-ос-сс 0,77 9,00 0,08 От 0,01 до 0,59 0,0011 99,23
УЕОР-936:ММР9-1562:ТМР-308:ПЛ0-1082 СТ-СС-ОО-АО 0,79 8,13 0,09 От 0,01 до 0,72 0,0049 99,21
УЕОР-936:ММР9-1562:1Е1В-31:ПЛ0-1082 СС-СТ-ТС-АО 0,79 8,33 0,09 От 0,01 до 0,70 0,0045 99,21
УЕОР2578:ММР2-1306:ТКР-308:11ЛВ-31:Ш>-174 СА-СС-ОО-ТС-ОС 0,77 7,94 0,09 От 0,01 до 0,68 0,0024 99,23
УЕОР-936:ММР2-1306:ТМР-238:1Е6-174:1Е10-592 сс-тс-оо-ос-сс 0,77 8,21 0,09 От 0,01 до 0,66 0,0020 99,23
УЕОР-936:ММР9-1562:ТКР-238:1ЫВ-31:11Л 0-1082 СС-СТ-ОО-ТС-АО 0,79 8,33 0,09 От 0,01 до 0,70 0,0045 99,21
УЕОР-936:ММР2-1306:ММР9-1562:ТМР-308:ТМР-238:1Е4-590 сс-сс-ст-оо-оо-сс 0,76 8,12 0,09 От 0,01 до 0,66 0,0020 99,24
УЕОР2578:ММР2-1306:ММР9-1562:1Е6-174:ПЛ0-592 СА-СС-СС-ОС-СС 0,78 7,58 0,10 От 0,01 до 0,73 0,0039 99,22
УЕОР2578:ММР2-1306:ТКР-308:11ЛВ-31:1Ь4-590:Ш>-174 СА-СС-ОО-ТС-СС-ОС 0,77 7,48 0,10 От 0,01 до 0,73 0,0040 99,23
УЕОР-936:ММР2-1306:1Е4-590:ПЛ0-1082 СС-ТС-СС-АО 1,63 11,50 0,13 От 0,03 до 0,58 0,0023 98,37
УЕОР-936:ММР2-1306:ММР9-1562:ТМР-308:1Е4-590 сс-сс-ст-оо-сс 1,53 9,90 0,14 От 0,03 до 0,61 0,0025 98,47
УЕОР-936:ММР2-1306:ТМР-238:1Е4-590:1Е10-1082 СС-ТС-ОО-СС-АО 1,63 10,62 0,14 От 0,03 до 0,64 0,0044 98,37
УЕОР-936:ММР9-1562:ЮТ-308:11Л0-1082 СС-СТ-ОО-АО 2,38 13,01 0,16 От 0,05 до 0,58 0,0016 97,62
УЕОР-936:ММР9-1562:ТМР-308:ТМР-238:1Е10-1082 СС-СТ-ОО-ОО-АО 2,38 13,01 0,16 От 0,05 до 0,58 0,0016 97,62
УЕОР-936:ММР2-1306:ПЛ0-1082:1Е10-592 СС-ТС-АО-СС 2,44 12,39 0,18 От 0,05 до 0,63 0,0043 97,56
УЕОР-936:ММР2-1306:ТМР-238:1Е10-1082:1Е10-592 СС-ТС-ОО-АО-СС 2,44 12,39 0,18 От 0,05 до 0,63 0,0043 97,56
УЕОР-936:ММР2-1306:ПЛ0-1082 СС-ТС-АО 7,32 20,35 0,31 ОтО,14до 0,70 0,0041 92,68
УЕОР-936:ММР2-1306:ПЛ0-592 сс-тс-сс 6,92 17,82 0,34 От 0,16 до 0,74 0,0049 93,08
Таблица 3. Различия по частоте выявления генотипов отдельных факторов регуляции ангиогенеза в составе комплексных генетических признаков, позитивно и негативно ассоциированных с развитием РА
Полиморфизм Позитивные Негативные
N п % N п %
VEGF2578 70 53 75,71 33 6 18,18 0,0001
СС 53 0 0,00 6 2 33,33 0,0088
СА 53 53 100,00 6 4 66,67 0,0088
АА 53 0 0,00 6 0 0,00
VEGF-936 70 28 40,00 33 27 81,82 0,0001
СС 28 28 100,00 27 25 92,59
СТ 28 0 0,00 27 2 7,41
ТТ 28 0 0,00 27 0 0,00
ММР2-1306 70 54 77,14 33 18 54,55 0,0235
ТТ 54 51 94,44 18 0 0,00 0,0001
ТС 54 0 0,00 18 13 72,22 0,0001
СС 54 3 5,56 18 5 27,78 0,0201
ММР9-1562 70 30 42,86 33 19 57,58
СС 30 13 43,33 19 5 26,32
СТ 30 17 56,67 19 14 73,68
ТТ 30 0 0,00 19 0 0,00
ТОТ-863 70 11 15,71 33 3 9,09
СС 11 11 100,00 3 3 100,00
СА 11 0 0,00 3 0 0,00
АА 11 0 0,00 3 0 0,00
ТОТ-308 70 24 34,29 33 14 42,42
GG 24 13 54,17 14 14 100,00 0,0026
GA 24 11 45,83 14 0 0,00 0,0026
АА 24 0 0,00 14 0 0,00
ТОТ-238 70 25 35,71 33 12 36,36
GG 25 25 100,00 12 12 100,00
GA 25 0 0,00 12 0 0,00
АА 25 0 0,00 12 0 0,00
ШВ-31 70 15 21,43 33 11 33,33
ТТ 15 0 0,00 11 0 0,00
ТС 15 15 100,00 11 11 100,00
СС 15 0 0,00 11 0 0,00
1Ы-590 70 24 34,29 33 13 39,39
СС 24 17 70,83 13 13 100,00 0,0378
СТ 24 7 29,17 13 0 0,00 0,0378
ТТ 24 0 0,00 13 0 0,00
1Ь6-174 70 8 11,43 33 7 21,21
GG 8 4 50,00 7 0 0,00
GC 8 3 37,50 7 7 100,00 0,0256
СС 8 1 12,50 7 0 0,00
1Ы0-1082 70 11 15,71 33 23 69,70 0,0001
АА 11 11 100,00 23 0 0,00 0,0001
AG 11 0 0,00 23 23 100,00 0,0001
GG 11 0 0,00 23 0 0,00
Ш0-592 70 4 5,71 33 12 36,36 0,0002
СС 4 1 25,00 12 12 100,00 0,0071
СА 4 3 75,00 12 0 0,00 0,0071
АА 4 0 0,00 12 0 0,00
Примечание. N — общее число комбинаций или генотипов; п — число конкретных генотипов среди комбинаций генотипов; % — частота генотипов.
кинов TNFA, 1Ь-1, 1Ь6 представлены генотипами со сбалансированным уровнем продукции цитокинов, тогда как гены противовоспалительных и противоангиогенных факторов 1Ь4 и 1Ь10 — в основном аллелями с противопо-
ложным характером связи с уровнем продукции соответствующих интерлейкинов.
Все это свидетельствует о том, что генотип индивидуумов, предрасположенных к развитию РА, находится в не-
Полиморфизм генов регуляции ангиогенеза при РА
оптимальном составе и характерен для дисрегуляторных состояний системы контроля ангиогенеза. Генотип лиц, резистентных к развитию РА, характеризуется большим представительством аллелей С в генотипе MMP2, MMP9 и VEGF, ассоциированных с более высоким уровнем продукции этих регулирующих ангиогенез макромолекул. Провоспалительный и проангиогенный потенциал регу-ляторных областей генов TNFA и IL6 находится на более низком уровне, тогда как противоангиогенный и противовоспалительный потенциал промоторных областей генов IL4 и IL10 усилен за счет большего представительства соответствующих аллельных вариантов.
При анализе данных табл. 1 и 2 обращает внимание их верхняя часть, в которой содержится информация о тех комбинированных генетических признаках, которые полностью отсутствуют в сопоставляемых группах здоровых и больных РА. Для этих данных характерны и максимальные значения ОШ, и 100% Сп признаков. Если эти результаты найдут подтверждение в расширенных многоцентровых исследованиях, то можно судить о наличии генетических признаков, с высокой достоверностью разделяющих жителей европеоидной расы на лиц, у которых с рождения су-
ЛИТЕРАТУРА
1. Paleolog E.M. The vasculature in rheumatoid arthritis: cause or consequence? Int J Exp Pathol 2009; 90 (3): 249—261.
2. Повещенко А.Ф., Коненков В.И. Механизмы и факторы ангиогенеза. Успехи физиол наук 2010; 2: 68—89.
3. Sone H., Sakauchi M., Takahashi A. et al. Elevated levels of vascular endothelial growth factor in the sera of patients with rheumatoid arthritis correlation with disease activity. Life Sci 2001; 69 (16): 1861—1869.
4. Ballara S., Taylor P.C., Reusch P. et al. Raised serum vascular endothelial growth factor levels are associated with destructive change in inflammatory arthritis. Arthritis Rheum 2001; 44 (9): 2055—2064.
5. Bottomley M.J., Webb N.J., Watson C.J. et al. Peripheral blood mononuclear cells from patients with rheumatoid arthritis spontaneously secrete vascular endothelial growth factor (VEGF): specific up-regulation by tumour necrosis factor-alpha (TNF-alpha) in synovial fluid. Clin Exp Immunol 1999; 117: 171 — 176.
6. Wilhelm S.M., Collier I.E., Marmer B.L. et al. SV40-transformed human lung fibroblasts secrete a 92-kDa type IV collagenase which is identical to that secreted by normal human macrophages. J Biol Chem 1989; 264: 17213—17221.
7. Pollanen P.J., Karhunen P.J., Mikkelsson J. et al. Coronary artery complicated lesion area is related to functional polymorphism of matrix metalloproteinase 9 gene: An autopsy study. Arterioscler Thromb Vasc Biol 2001; 21: 1446—1450.
8. Kondapaka S.B., Fridman R., Reddy K.B. Epidermal growth factor and amphiregulin up-regulate matrix metalloproteinase-9 (MMP-9) in human breast cancer cells. Int J Cancer 1997; 70: 722—726.
9. Zhang B., Herrmann S.M., Eriksson P. et al. Functional polymorphism in the regulatory region of gelatinase B gene in relation to severity of coronary atherosclerosis. Circulation 1999; 99: 1788— 1794.
10. Lamblin N., Bauters Ch., Hermant X. et al. Polymorphisms in the Promoter Regions of MMP-2, MMP-3, MMP-9 and MMP-12 Genes as Determinants of Aneurysmal Coronary Artery Disease. J Am Coll Cardiol 2002; 40 (1): 43—48.
11. Han S.W., Kim G.W., Seo J.S. et al. VEGF gene polymorphisms and susceptib ility to rheumatoid arthritis. Rheumatology 2004; 43: 1173—1177.
ществует высокий риск развития РА, и группу лиц с врожденной устойчивостью к развитию этого тяжелого заболевания. Представители первой группы должны с детства входить в группы высокого риска развития заболевания и являться объектом диспансерного наблюдения для проведения профилактических мероприятий, снижения риска развития болезни и максимально раннего начала проведения соответствующей терапии.
Заключение
Полученные данные о групповых характеристиках распространенности вариантов генетических сетей факторов регуляции ангиогенеза для лиц, предрасположенных к развитию РА, могут быть избирательно применены в целях индивидуального анализа состояния ангиогенеза у пациентов с клинически развернутым заболеванием. Эти индивидуальные относительно стабильные характеристики пациента могут лечь в основу будущих разработок индивидуальных стратегий комплексной терапии РА на основе конституционально присущих пациенту вариантов баланса факторов регуляции активности воспаления и ангиогенеза.
12. Taylor P.C. Serum vascular markers and vascular imaging in assessment of rheumatoid arthritis disease activity and response to therapy. Rheumatology 2005; 44: 721—728.
13. Arnett F.C., Edworthy S.M., Bloch D. et al. The American Rheumatism Association 1987 revised criteria for the classification of rheumatoid arthritis. Arthr Rheum 1988; 31: 315—324.
14. Коненков В.И., Прокофьев В.Ф., Шевченко А.В., Голованова О.В. Полиморфизм генов цитокинов как один из факторов демографической структуры европеоидного населения Сибири. Иммунология 2011; 2: 60—65.
15. Шевченко А.В., Голованова О.В., Коненков В.И. и др. Анализ полиморфизма генов матриксных металлопротеиназ-2 и -9 у пациентов с ишемической болезнью сердца. Тер арх 2010; 1: 31—35.
16. Шевченко А.В., Коненков В.И., Голованова О.В. и др. Полиморфизм гена VEGFA (C-2578A, C+936T) у пациенток с раком молочной железы. Мед иммунол 2012; 1—2: 87—94.
17. Коненков В.И., Зонова Е.В., Леонова Ю.Б. и др. Возможности использования генотипирования цитокинов с регулирующей воспаление активностью в качестве биологических маркеров прогноза эффективности терапии ревматоидного артрита. Науч-практ ревматол 2010; 5: 19—26.
18. Вейр Б. Анализ генетических данных: дискретные генетические признаки. Пер. с англ. М: Мир 1995.
19. Гланц С. Медико-биологическая статистика. Пер. с англ. М: Практика 1998.
20. Krippl P., Langsenlehner U., Renner W. A common 936 C/T gene polymorphism of vascular endothelial growth factor is associated with decreased breast cancer risk. Int J Cancer 2003; 106: 468—471.
21. Renner W., Kotschan S., Hoffmann C. A common 936 C/T mutation in the gene for vascular endothelial growth factor is associated with vascular endothelial growth factor plasma levels. J Vasc Res 2000; 37: 443—448.
22. Bennermo M., Held C., Stemme S. et al. Genetic Predisposition of the Interleukin-6 Response to Inflammation: Implications for a Variety of Major Diseases? Clin Chem 2004; 50 (11): 2136—2140.
23. Persico M., Capasso M., Persico E. et al. Interleukin-10 — 1082 GG polymorphism influences the occurrence and the clinical characteristics ofhepatitis C virus infection. J Hepatol 2006; 45 (6): 779—785.
Поступила 11.05.2012
