Генетическая характеристика вирусов гриппа A/H3N2 и в, циркулировавших в России в 2013 - 2015 гг Текст научной статьи по специальности «Агробиотехнологии»

11. Mokrousov I., Narvskaya O., Limeshenko E. et al. Efficent discrimination within Corynebacterium diphtheriae clonal group by a noval macroarray-based method. J. Clin. Microbiol. 2005,43, № 4: 662-668.

12.Popovic T., Kombarova S. J., Reeves M. W. et al. Molecular epidemiology of diphtheria in Russia. J. Infectious Diseases. 1997, 174:1064-1072.

13.Spratt B. G., Maiden M. C. Bacterial population genetics, evolution and epidemiology. Philosophical Transactions Royal Society B. 1999, 354:701-710.

14. Viguetti S., Pacheco L., Santos L. et al. Multilocus sequence types of invasive C. diphtheriae isolated in the Rio de Janeiro urban area, Brazil. J. Epidemiol. Infect. 2011, 53: 1-4.

15. Wagner K., White J., Lucenko I. et al. Diphtheria in postepidemic period, Europe, 2000 — 2009. J. Emeig. Infect. Dis. 2012,18 (2): 217-225.

16.Zakikhany K., Efstratiou A. Diphtheria in Europe: current problems and new challenges. Future Microbiol. 2012, 7 (5): 595-607.

17.Zoysa A., Efstratiou A., Hawkey P. H. et al. Molecular characterization of diphtheria toxin repressor (dtxR) genes present in nontoxigenic Corynebacterim diphtheriae strains isolated in the United Kingdom. J. Clinical Microbiology. 2005,43,1: 223-228. ■

Поступила 01.06.16

Контактная иформация: Чагина Ирина Алексеевна, 125212, Москва, ул.Адмирала Макарова, 10, р.т. (499)747-64-84

© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2016

С.Б.Яцышина, А.Н.Рентеева, А.В.Валдохина, М.А.Елькина, А.С.Сперанская, Е.В.Пимкина, Р.Р.Минтаев, М.Л.Маркелов, В.В.Малеев

ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ВИРУСОВ ГРИППА A/H3N2 И В, ЦИРКУЛИРОВАВШИХ В РОССИИ В 2013 - 2015 ГГ.

Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии, Москва

Цель. Установить генетическую характеристику, провести филогенетический анализ и определение молекулярных маркеров резистентности к этиотропным препаратам вирусов гриппа A/H3N2 и В, циркулировавших в России в 2013 — 2015 гг. Материалы и методы. Исследованы 80 биологических образцов, содержащих РНК вируса гриппа A/H3N2, и 31 образец, содержащий РНК вируса гриппа В. Секвенирование фрагментов ПЦР выполнялось на ABI-3100 PRIZM™ GeneticAnalyzer (AppliedBiosystems, США) и с использованием MiSeq (Illumina, США), Обработка и анализ данных проводились с помощью программ CLC v.3.6.5., DNASTAR и BioNumerics v.6.5. Результаты. В 2013 — 2014 гг. доминировали вирусы гриппа A/H3N2 клайда ЗС.З, подобные вакцинному штамму A/Texas/50/2012, 10% принадлежали к субклайду ЗС.2а и 10% — к ЗС.ЗЬ. Подавляющее большинство (81%) вирусов 2014 — 2015 гг. вошли в клайд ЗС.2а, доля вирусов, относящихся к ЗС.ЗЬ и ЗС.За, составляла 9% и 10%. Среди исследованных вирусов гриппа В превалировали Ямагата-подобные, лишь 1 вирус в 2014 — 2015 гг. относился к линии Виктория, обнаружен 1 реассортант линий Ямагата и Виктория. Во всех вирусах гриппа A/H3N2 выявлена мутация устойчивости к ремантадину S31N (белок М2). Мутации, определяющие устойчивость к озельтамивиру (ген NA), вирусов гриппа A/H3N2 и В обнаружены не были. Заключение. Подъем заболеваемости гриппом в 2014 — 2015 гг. обусловлен появлением вирусов гриппа A/H3N2 и В, отличающихся по антигенному составу от циркулировавших ранее и от вошедших в вакцину, что привело к решению ВОЗ заменить компоненты A/H3N2 и В вакцины 2015 - - 2016 гг. Одновременная циркуляция двух линий вируса гриппа В и появление их реассортантов свидетельствует о целесообразности применения четырехвалентной вакцины, включающей обе линии.

Журн. микробиол., 2016, № 5, С. 60—72

Ключевые слова: вирусы гриппа, ПЦР, филогенетический анализ

S.B. Yatsyshina, A.N.Renteeva, A. V. Valdokhina, M.A.Elkina, A.S.Speranskaya, E.V.Pimkina, R.R.Mintaev, M.L.Markelov, V.V.Maleev

GENETIC CHARACTERISTICS OF INFLUENZA A/H3N2 AND В VIRUSES THAT HAD CIRCULATED IN RUSSIA IN 2013 - 2015

Central Research Institute of Epidemiology, Moscow, Russia

Aim. Establish genetic characteristics, carry out phylogenetic analysis and determination of molecular markers of resistance to etiotropic preparations against influenza A/H3N2 and В viruses that had circulated in Russia in 2013 — 2015. Materials and methods. 80 biological samples containing influenza A/H3N2 virus RNA and 31 samples containing influenza В virus RNA were studied. Sequencing of PCR fragments was carried out in ABI-3100 PRIZMTM GeneticAnalyzer (AppliedBiosystems, USA) and using MiSeq (Illumina, USA). Data treatment and analysis was carried out using CLC v.3.6.5., DNASTAR and BioNumerics v.6.5. programs. Results. In 2013 - 2014 A/Texas/50/2012-like clade 3C.3 influenza A/H3N2 viruses dominated, 10% belonged to subclade 3C.2a and 10% — to ЗС.ЗЬ. Most of the viruses (81%) of 2014 - 2015 were of 3C.2a clade, the portion of viruses belonging to ЗС.ЗЬ and ЗС.За was 9 and 10%. Yamagata-like viruses predominated among the studied influenza В viruses, only 1 virus of 2014 — 2015 belonged to Victoria lineage, 1 reassortant of Yamagata and Victoria lineages was detected. Rimantadine-resistance mutation S31N (M2 protein) was detected in all the influenza A/H3N2 viruses. Mutations determining resistance to oseltamivir (NA gene) were not detected in influenza A/H3N2 and В viruses. Conclusion. Increase of influenza morbidity in 2014 — 2015 was determined by the emergence of influenza A/H3N2 and В viruses, antigenically distinct from those that had circulated previously and those included into the vaccine, thus resulting in the WHO decision to change А/ H3N2 and В components of the 2015 — 2016 vaccine. Simultaneous circulation of 2 lineages of influenza В virus and emergence of their reassortants gives evidence on the necessity of use of quadrivalent vaccines, containing both lineages.

Zh. Mikrobiol. (Moscow), 2016, No. 5, P. 60-72

Key words: influenza viruses, PCR, phylogenetic analysis

ВВЕДЕНИЕ

Сезонные эпидемии гриппа ежегодно охватывают значительную часть на- ' селения как России, так и всего мира. Этиологическая структура гриппа варьирует от сезона к сезону, в эпидемическом процессе участвуют вирусы гриппа А (субтипы H3N2 и H1N1) и вирусы гриппа В.

Вирус гриппа A/H3N2 циркулирует в популяции людей с 1968 г. (пандемия, названная «гонконгским гриппом») [10]. Периодически он вызывает значительные эпидемии, как, например, в сезоне 2003 — 2004 гг. [18].

В настоящее время циркулируют две антигенные линии вируса гриппа В, обозначаемые B/Victoria/2/1987-like (Викторианская линия) и B/Yamagata/ 16/1988-like (линия Ямагата) [17]. По-видимому, их разделение произошло в 1970-х годах, когда в Китае впервые был обнаружен вирус гриппа В Викторианской линии [8]. До середины 1980-х доминировала линия Ямагата, с 1987 по 1989 преобладала линии Виктория. В 1990-е годы превалировали вирусы линии Ямагата, за исключением эпидемии в Азии в сезоне 1996— 1997 гг. В период 2001 — 2006 гг. доминировали вирусы линии Виктория. Начиная с сезона 2006 — 2007 гг. в северном полушарии преобладает линия Ямагата [9]. Вирусы гриппа В обычно не доминируют в этиологической структуре сезонного гриппа.

Анализ этиологической структуры гриппа в США с 1976 по 2007 гг. показал, что в этот временной промежуток грипп А доминировал чаще, чем грипп В

[9]. Грипп В превалировал примерно один раз в 3 — 4 сезона. Среди вирусов гриппа А ведущую позицию значительно чаще занимал субтип A/H3N2, чем субтип A/H1N1.

С 2009 года циркулируют вирусы гриппа А двух субтипов: A/H3N2 и А/ HlNlpdm09 и вирусы гриппа В двух линий (Ямагата-подобные и Виктория-подобные) [6]. В сезоне 2009 2010 гг., названном пандемическим, во всем мире превалировал вирус субтипа A/HlNlpdm09 (98,7%), в конце сезона выявлялся вирус гриппа В. В постпандемическом сезоне 2010 — 2011 гг. доля : вируса А/Н IN lpdm09 снизилась (56%), но он все еще продолжал преобладать [22]. В сезонах 2011 — 2012, 2012 — 2013 гг. в России отмечалась низкая интенсивность эпидемического подъема заболеваемости гриппом: смеийнной

ЭТИОЛОГИИ. :••,;...■:■ , ' .

Впервые, после 2009 г. эпидемия гриппа была вызвана вирусом гриппа субтипа A/H3N2 (65%) в сезоне 2012 - 2013 гг. в США [16]. В России субтип A/H3N2 стал превалировать в этиологической структуре гриппа (47,2%), начиная с сезона 2013 — 2014 гг., доля вируса гриппа В составляла 7,8% [4]. Эпидемический сезон 2014 — 2015 гг. в России был умеренным. В структуре идентифицированных вирусов гриппа доля вируса гриппа A/H3N2 составила 69,5%, вируса гриппа В — 25,0%, а вируса гриппа A/H lNlpdm09 — всего 5,5% [5]. Летальных случаев, зарегистрированных в России, вызванных вирусами гриппа A/H3N2 и гриппа В, значительно меньше, чем вызванных вирусом гриппа A/H lNlpdm09.

В данной работе проведен молекулярно-генетический анализ вирусов гриппа А субтипа H3N2 и гриппа В, циркулировавших в России в эпидемические сезоны 2013 — 2014, 2014 — 2015 гг. и их сравнение с вакцинными штаммами A/Texas/50/2012 (A/H3N2), B/Massachusetts/02/2012 (линия Ямагата), B/Brisbane/60/2008 (линия Виктория гриппа В) и между собой. Проведен филогенетический анализ генов гемагглютинина и нейраминидазы, анализ генома вирусов гриппа на наличие молекулярных маркеров резистентности к противовирусным препаратам.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Обнаружение РНК вирусов гриппа A/H3N2 и В в клиническом и посмертном материале производилось в лабораториях Центров гигиены и эпидемиологии 17 субъектов РФ методом ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией с использованием наборов реагентов «АмплиСенс Influenza virus А/В», «АмплиСенс Influenza virus A-тип-FL» (ЦНИИЭ). В Референс-центре по мониторингу за инфекциями верхних и нижних дыхательных путей на базе ЦНИИЭ в Москве образцы материала исследовались повторно для подтверждения типа (субтипа) вирусов гриппа A/H3N2 и В и выполнялся молекулярно-генетический анализ.

В сезоне 2013 — 2014 гг. были исследованы 10 клинических образцов (от выздоровевших пациентов), содержащих РНК вируса гриппа A/H3N2, и 2 клинических образца, содержащих РНК вируса гриппа В (от летальных случаев). В сезоне 2014 — 2015 гг. — 70 образцов гриппа A/H3N2 (среди них 11 от летальных случаев) и 29 образцов гриппа В (среди них 10 от летальных случаев).

Экстракцию нуклеиновых кислот из биологического материала (мазки со слизистой носоглотки и ротоглотки, посмертный материал (образцы легких, трахеи, бронхов, печени и селезенки) с последующей реакцией обратной транскрипции выполняли с использованием наборов «Рибо-преп» и «Реверта-L» («АмплиСенс», ЦНИИЭ). Проводилось секвенирование генов

HA, NA и М2 вирусов гриппа А, а также генов НА и NA вирусов гриппа В. Использовались праймеры, образующие в процессе амплификации набор перекрывающихся фрагментов ПЦР:

HAF22H3N2 gcaggggataattctattaàccatg, HAR683H3N2 gittgttggcttcttttggtag, HAF399H3N2 actggagtttaiciatgaaagcttc, HAR1080H3N2 ctcccàaccattttctatgaaacc, HAF892H3N2 atcactccaaatggaagcattcc, HAR 1723H3N2 caagggtgtttttaattaatgcactc, NAFH3N2 ccagcagaatacagaa-attggtc, NARH3N2 gagaaaataccagaataaccggacc, HAlFlB atgaaggcaataattgtactactc, HA1RB caatgg-cttgggctgtc, HA2FB gaacctcagggtcttgcccta, HA2R1B atgggaaggaatgattgcagg, HAF954B caaaagcaag-ccttactacacag, HAR1759B cccttatagaeagatggagc, NAEB ctttcagaäagcactcctaattagc, NARB gtaccatytctatcccaatacagg. 1 . . ^ • ! '■<■.. . ;

ПЦР выполняли на приборах-«Терцию» (ДНК-технология) с использованием реагентов производства «АмплиСенс» (ЦНИИЭ). Секвенирование фрагментов ПЦР осуществлялось методом «cycle sequence» с набором ABI PRISM Big Dye™ v.3.1 (Applied Biosystems, GUIA) на секвенаторе ABI-3100 PRIZM™ Genetic Analyzer (Applied Biosystems, США). Анализ нуклеотидных последовательностей выполнялся с использованием блока программ DNASTAR.

Секвенирование вируса A/Moscow/CRIE-141/2015(H3N2) проводилось методом полногеномного секвенирования (MiSeq, Illumina). Получение ДНК-библиотек проводилось с помощью оригинальной методики с использованием реагентов производства «АмплиСенс» (ЦНИИЭ). Секвенирование ДНК-библиотек проводили на приборе MiSeq (Illumina, США) с использованием набора «MiSeq Reagent Kits V2 (250PE)». Обработку данных полногеномного секвенирования, сборку контигов и картирование ридов осуществляли с помощью программы «CLC Genomics Wbrkbench 3.6.5» (CLCbio, США).

. Филогенетический анализ проводился с помощью программы BioNumerics v.6.5. методом Neighbour-Joining с выполнением Bootstrap Test of Phylogeny (1000 репликаций). i

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

В сезонах 2013 — 2014 и 2014 — 2015 гг. был проведен анализ методом секвенирования клинических образцов вирусов гриппа A/H3N2 и гриппа В, обнаруженных в европейской части России. В сезоне 2013 — 2014 гг. проанализировано: 10 полных сегментов гемагглютинина (НА),6 фрагментов гена нейраминидазы (NA), 10 полных сегментов MP вирусов гриппа А субтипа А/ H3N2; 2 полных сегмента НА, 2 фрагмента гена NA вирусов гриппа В. В сезоне 2014 —2015 гг. проанализировано: 70 полных сегментов НА, 8 полных сегментов NA, 44 фрагмента гена NA вирусов гриппа А субтипа A/H3N2; 29 полных сегментов НА, 28 фрагментов гена NA вирусов гриппа В.

Последовательности нуклеотидов депонированы в базу данных GISAID EpiFlu™. Сезон 2013 - 2014 гг.: Influenza virus A/H3N2: EPI545223-EP1545226, EPI545228, EPI545229, EPI545231-EPI545233, EPI545235, EPI545255, EPI545256, EPI545258-EPI545260, EPI545263, EPI545266, EPI545275, EPI545350-EPI545352, EPI545572, EPI545573, EPI547700-EPI547702; Influenza virus В: EPI545298, EPI545325, EPI545400, EPI548481. Сезон 2014 - 2015 гг.: Influenza virus A/H3N2: EPI623748, EPI623749, EPI623754, EPI623755, EPI623757, EPI623759, EPI623762, EPI623763, EPI623765, EPI623766, EPI623770, EPI623771, EPI623774, EPI623776, EPI623780, EPI623781, EPI623783-EPI623786, EPI623789, EPI623790, EPI623792, EPI623794, EPI623797-EPI623799, EPI623804-EPI623808, EPI623813-EPI623816, EPI623822, EPI623826-EPI623836, EPI623839-EPI623847, EPI623852, EPI623853, EPI623865, EPI623868, EPI623870, EPI623877, EPI623878, EPI623880, EPI623882, EPI623884, EPI623885, EPI623888, EPI623890, EPI623894, EPI623895, EPI623898, EPI623899, EPI623903, EPI623910-EPI623913, EPI638285,

EPI638286-EPI638288, EPI623914-EPI623929, EPI638289-EPI638296, EPI623930-EPI623933, EPI623936, EPI623945-EPI623958; Influenza virus В: EPI638433-EPI638450, EPI643153-EPI643191.

Последовательности нуклеотидов полного генома вируса A/Moscow/ CRIE-141/2015(H3N2) депонированы в базу данных GenBank: KU198896-KU198903.

Результаты секвенирования генов НА вирусов A/H3N2 сезона 2013 — 2014 гг. показали их принадлежность к вирусу гриппа А субтипа H3N2 с высокой гомологией (98,6 — 99,0%) с вакцинным штаммом сезона 2013 — 2014 гг. A/Texas/50/2012(H3N2) [20]. В сезоне 2014 — 2015 гомология вирусов, обнаруженных в РФ, с вакцинным штаммом снизилась (97,4 — 98,1%). Процент гомологии по нуклеотидному составу NA вирусов, по сравнению с вакцинным штаммом, был достаточно высок и практически не изменился за 2 сезона (сезон 2013 - 2014: 98,9 - 99,6% ; сезон 2014 - 2015: 98,3 - 99,1%).

Среди современных вирусов гриппа А субтипа H3N2 выделяют несколько генетических групп — клайдов [15], которые отмечены на рис. 1, с. 65: «Дендро-грамма по гену гемагглютинина вирусов гриппа А субтипа H3N2 (данные ECDC, Референс-центра ЦНИИЭ 2013 — 2015 гг.). A/Texas/50/2012 _ вакцинный штамм сезонов 2013 — 2014 и 2014 — 2015 гг. На дендрограмме показаны аминокислотные замены в НА1 субъединице гемагглютинина, курсивом с подчеркиванием выделены замены в НА2 субъединице НА».

Состав аминокислот в структуре НА исследованных вирусов и их соответствие определенным клайдам представлено в табл.

Вирусы, обнаруженные в сезоне 2013 — 2014 гг., принадлежали к следующим клайдам: ЗС.З (8 вирусов, 80%), ЗС.ЗЬ (1 вирус, 10%), ЗС.2а (1 вирус, 10%); всезоне 2014 — 2015 гг. превалировал субклайд ЗС.2а — 81% (57 вирусов), также встречались субклайд ЗС.За — 10% (7 вирусов), субклайд ЗС.ЗЬ — 9% (6 вирусов). Вакцинный штамм A/Texas/50/2012 отнесен к клайду ЗС.1. -

Начиная с сезона 2012 — 2013 гг. внутри группы ЗС сформировались 3 клайда с характерными аминокислотными заменами: ЗС.1 (Q33R, S145N and N278K), ЗС.2 (как в ЗС.1 + N145S), ЗС.З (как в ЗС.2 + Т128А (-СНО) (утрата потенциального сайта гликозилирования), R142G) [11].

В сезоне 2013 — 2014 гг. произошло их дальнейшее подразделение на суб-клайДы: ЗС.2а, ЗС.За и ЗС.ЗЬ. Характерные аминокислотные замены субклай-дов вирусов гриппа A/H3N2 [21]: ЗС.2а: L3I, N144S (-СНО), N145S, F159Y, К160Т (+СНО) (приобретение потенциального сайта гликозилирования), V186G, N225D, Q311H; ЗС.За: Т128А (-СНО), A138S, R142G, N145S, F159S, V186G, N225D; ЗС.ЗЬ: Е62К, K83R, N122D (-СНО), Т128А(-СНО), R142G, N145S, L157S, V186G (в НА1) и М18К (в НА2).

Все вирусы гриппа А субтипа H3N2, обнаруженные в России в сезоны 2013 — 2014 и 2014 — 2015 гг., принадлежащие к клайдам ЗС.2 и ЗС.З и производным от них субклайдам ЗС.2а, ЗС.За, ЗС.ЗЬ, имели три аминокислотные замены: N53D, N145S, P198S. (табл.). Исключение составляли 4 вируса, обнаруженные в Москве в сезоне 2014 — 2015 гг., не несущие мутацию N53D.

Замены N53D, N145S находятся в антигенном сайте А [14], P198S — в антигенном сайте Е [ 14]. По литературным данным известно, что замена N145S играет ключевую роль в ускользании вируса от иммунного ответа организма человека. Аминокислотное положение 145 находится в локусе, вовлеченном во взаимодействие с клеточным рецептором. Аминокислотный остаток в 145 положении является одним из семи остатков, имеющих основное значение в антигенном дрейфе вирусов гриппа А субтипа НЗ у людей [13].

В сезоне 2013 — 2014 гг. в России доминировали вирусы, принадлежавшие

НА

N144R

N144S

T10S,I192T,S265G

N144R

N145S.V186G D160N. Q311H

S45N,T48I, K62E,K144N, L183H,G186V, A198S,T212A,

S214I,V223I, N312S

L3I,N144R/S,

E159Y,K160T,

N225D,Q311H

A212S,R261Q, A201V

Q33R N278K

E62K,N122D, R2610.VJ8K

V18M D160N

j A/Kostroma/CRIE-88/2015 I A/Kurek/CRIE-91/2015 j A/Archangelsk/CRIE-85/2015 I A/Ufa/CRIE-100/2015 ■ A/Joshkar-Ola/CRIE-75/2015 i A/Joshkar-Ola/CRIE-76/2015

- A/Syktyvkar/CRIE-11/2015

- АЯиа/CRIE-130/2015

- A/Tula/CRIE-131/2015 j A/Kurek/CRIE-31/2015

I A/Kursk/CRIE-98/2015

- A/Moscow/CRIE-12/2015

- A/Moscow/CRIE-13/2015

- A/Stavropol/CRIE-121 /201S

- A/Tuia/CRJE-125/2015

- A/Tula/CRIE-128/2015 j A/Vologda/CRIE-14/2015 ~> A/Votogda/CRIE-22/2015

- A/Kursk/CRIE-30/2015

- A/Moscow/CRIE-141/2015 A/Vologda/CRIE-15/2015 A/Kurek/CRIE-32/2015 A/Kursk/CRIE-97/2015 A/Votogda/CRIE-20/2015 A/Ufa/CRIE-101/2015 A/Samara/CRIE-104/2015 A/Joshkar-Ola/CRIE-79/2015 A/Joshkar-Ola/CRIE-80/2015 A/Kostmma/CRIE-27/2015

D53№ A/Moscow/CRIE-24W2015

_«Li < A/Moseow/CRIE-25-M/2015

— A/Moscow/CRIE-13-M/2015

- A/Moscow/CRIE-139/2015

- A/Hong Kong/5738/2014 (3CJ!a)

- A/Hong Kong/146/2013 (3C.2) |

A/Orenburg/CRIE-1 -M/2015 A/Orertburg/CRIE-7-M/2015 A/Orenburç/CRIE-16-M/2015 A/Switzerland/9715293/2013 (3C.3a A/Petrozavodsk/CRIE-61/2015 A/Petrozavodsk/CRIE-65/2015 A/Petraavocft*/CRIE-73/2015 A/Stockholm/28/2014 (ЗС.ЗЬ) A/Samara/CRIE-17/2014 A/Smolensk/CR:2-22/2014 A/Samara/73/2013 (3C.3) A/Samara/CRIE-13/2014 A/Samata/CRIE-16/2014 A/Moscow/CRIE-11/2014 A/Tambov/CRIE-20/2014 AA/ictoria/361/2011 A/Texas/50/2012 (3C. 111

3C.2a

3C.2

F159S

'Д—I d

K83R

с

DffiO

1

ЗС.За

ЗС.ЗЬ

ЗС.З

3C.1

A/PeitW16/2009

5.ЖМЭИ 5 МЬ26-2016

65

Распределение по клайдам вирусов гриппа A/H3N2, обнаруженных в России в сезоны 2013 — 2014 m, 2014 — 2015 гг., и соответствующие позиции аминокислот в НА

Антигенный сайт (субьединица НА1) С E E А А в А А A A в в В Е в D E E с НА2

Аминокислотные позиции по номенклатуре НЗ 3 10 33 53 62 83 122 124 128 138 142 144 145 157 159 160 192 198 212 225 261 265 311 326 1S ш 201

Название образца Клайд Кол-во образцов

A/Perth/l6/2009 1 L T Q D К К N S+ т+ А R K- N L F К I А T N "R S" Q "к V D A

A/ftxaj/50/2012 (икцнн. штамм) 3C.1 — L T R N E к N S+ N- А R N+ N L F К I Р . A. N R S' Q V N A

A/Hong Kong/146/2013 3C.2 — L T" *• D E к N. S+ т+ А R N+ S L F К I S A- N R Q к V- N A

A/Hong Kong/5738/2014 3C.2a — Л T R О E к N S+ т+ А R S- S L Y Т+ I S A, D R ; - S.- ;;H к V N- A

A/Syklyvltar/CRIE-10,11/2015 3Ç2a - 2 I T; R D E к: N S+ т+ А R R-,S- S L Y к I S A"; D ■R ' : S:: H к V]. 1 A

A/Moccow/CRIE-12,13/2015 3C.2a 2 I T R; D E к N S+ т+ А R R- s L Y Т+ I s ' A D R :: • s". H "К V N A

A/4>logda/CRIE-14-22/2015 3C.2a 8- -i : T. R О E К: N- S+ т+ А R S- s L Y Т+ I s A- D Я ; s-. '. H .к V" № A

A/Samara/CR1E-18/2014 3C.2a 1. i T К D "e К N S+ т+ А R s- s L Y Т+ I s a.: D R" ■■Si- H .к V A

A/Ko$troma/CRIE-27/2015 3C.2a 1 I; T R D "È К N S+ т+ А R R- s L Y Т+ I s ' ; AT D : R H к V -N A

A/Kuisk/CRIE-30-35/2015 3C.2a 4- ■ I T: R D E к X S+ т+ А R R-,S- s L Y Т+ I s A; D R; -■s ; H к У. N A

A/Petrozavodsk/CRI E-62-64/2015 3C.2a з : i; t. R D E к N S+ т+ А R R-,S- s L Y Т+ I s a: D R H -К V N A

A/Joshkar-Ola/CRI E-75-78/2015 3C.2a 4 •a'. T R D E к N S+ т+ А R R- s L Y Т+ I s A D R "s. H к V N À

A/Joshkar-Ola/CRI E-79-80/2015 3C.2a- • 2 i s R D E к N. S+ т+ А R R- s L Y Т+ T s A D R G я к V' N A

A/Archangebk/CRJ E-85/2015 3C.2a 1 I; T R D E к N S+ т+ А R R- s L Y Т+- I s A D " R ; H к V N A

A/Kostroma/CRIE-86,88/2015 3C.2a 2 I T R D £ к N S+ т+ А R R-,S- s L Y Т+ I s A. D R S- H к V N' A

A/Kurck/CRI E-91 -99/2015 3C.2a 9 I T R D £ к N S+ т+ А R R-,S- s L Y Т+ I s . A D R" ■ s H к N A

A/Ufa/CRIE-I00/2015 3C.2a 1 I T R D E к N S+ т+ А R R- s L Y Т+ I s A D R ■ s • H ■к V N- A

A/Ufa/CRIE-101/2015 3C.2a 1 I T Q D E к N S+ т+ А R R- s L Y Т+ I s A D R s; H к V N A

A/Samara/CRIE-104/2015 3C.2a 1 I T Q D E к N ' S+ т+ А R R- s L Y Т+ I s A D. R S' H к V. N A

A/Stavropol/CRIE-121/2015 3C.2a 1 I T R D E к N S+ т+ А R R- s L Y Т+ I s A. D R s H к V N A

A/Tula/CRIE-125-133/2015 3C.2a 7 I T R D E к N S+ т+ А R R-,S- s L Y Т+ I s A D R s H к V N A

A/Moseow/CRIE-138,139,141,145/2015 3C.2a 4. I T R D E к N S+ т+ А R R-,S- s L Y Т+ I s . A. D -R s H к V N A

A/Moscow/CRIE-13-M-25-M/2015 3C.2a 4 I T R N E к N S+ т+ А R R- s L Y Т+ I s - A D R s H к V N A

A/Samara/73/2013 3C.3 — L T R D E к N S+ А- А G N+ s L F К I s A: N R s' Q к V D A

A/Moseow/CRIE-11/2014 3C.3 1 L T R D E к N S+ А- А G N+ s S F К 1 s ■ A N R s Q к M N A

A/Samara/CRIE-13-17/2014 3C.3 5 - L T, R D E к N S+ А- А G N+ s S F К I s, A N R s Q к M N A

A/Tambov/CRIE-20/2014 3C.3 1 L T R D E к N S+ т+ А G N+ s S F К 1 s A N R s Q к M D A

A/Smolensk/CRIE-22/2014 3C.3 1 . L T R D E к N S+ т+ А G N+ s L F К I . s A N R s Q к M N A

A/Switzerland/9715293/2013 ЗС.За - L T R О E к N S+ А- S G N+ s L S К I s A D R s Q R V D A

A/Orenbuig/CRIE-1-M-21-M/2015 ЗС.За 7 L T R D E к N S+ А- S G N+ s L • S К I s S D Q s Q R V D V

A/Stockholm/28/2014 3C.3b L T R D К к D- S+ А- А G N+ s S F К I s A Ñ Q s Q к к D A

A/Petrozavodsk/CRIE-60,61,65-73/2015 3C.3b 6 L T R D К R* D- •S+ А- А G N+ s S F К 1 s A N Q s Q к к D A

к клайду ЗС.З, подобные вакцинному штамму A/Texas/50/2012. По нашим данным в сезоне 2013 — 2014 гг. только 1 вирус (10%) принадлежал к субклай-ду ЗС.2а и один вирус (10%) являлся дрейф-вариантом этого клайда — ЗС.ЗЬ.

Вирусы гриппа сезона 2014—1015гг. отличались значительным диетическим разнообразием. Подавляющее большинство (81%) исследованных нами вирусов гриппа A/H3N2 были генетически родственны штамму A/Hong Kong /5738/2014, представителю субклайда ЗС.2а. Доля вирусов, относящихся к субклайдам ЗС.ЗЬ и ЗС.За, являющихся эволюционным продолжением ЗС.З клайда, соответствовала и 10%.- - - ; - ■ - -

Значимых различий по нуклеотидным последовательностям НА и NA между вирусами гриппа, выявленными у больных с разными исходами заболевания, обнаружено не было.

Практически все вирусы, обнаруженные в России в сезонах 2013 — 2014 и 2014 — 2015 гг. и относящиеся к ЗС.З клайду, имели в НА аминокислотные замены: Т128А (у 91% образцов), R142G (у 100%). Замена Т128А приводит к утрате потенциального сайта гликозилирования. Замена R142G, находящаяся в антигенном сайте А, приводит к смене заряда аминокислотного остатка. Она была характерна для вирусов, выделенных в предыдущие сезоны. Отмечена циркуляция вирусов, содержащих замену L157S в антигеном сайте В1, а также в субъединице НА2: замены VI8М или VI8К и N160D.

Отдельную группу составили вирусы, обнаруженные в Оренбурге в сезоне 2014 — 2015 гг. (10% от всех вирусов A/H3N2 этого сезона), подобные штамму A/Switzerland/9715293/2013, рекомендованному ВОЗ для производства вакцин в сезоне 2015 — 2016 гг., они отнесены к субклайду ЗС.За. Для этих вирусов были характерны аминокислотные замены: A138S, F159S (антигенный сайт В), N225D, K326R, A201V. Замена A138S, находящаяся в антигеном сайте А, была зарегистрирована всего у 6,6% вирусов (от всех вирусов гриппа A/H3N2, депонированных в базы GenBank, GISAID. [2]. Мутация A138S является доминантным фактором, определяющим эффективность заражения вирусами гриппа A/H3N2 эпителиальных клеток дыхательных путей свиней [7].

Другая группа была образована шестью вирусами из девяти, обнаруженными в Петрозаводске. По генетическим характеристикам эти вирусы относились к субклайду ЗС.ЗЬ, представителем которого, является штамм A/Stockholm/28/2014. У данных вирусов присутствовали характерные для этого субклайда замены: Е62К, K83R, N122D, L157S, R261Q и V18K. Замены Е62К, K83R, R261Q расположены в антигенном сайте Е, L157S — в антигенном сайте В. Замена N122D, находящаяся в антигенном сайте А, приводит к утрате потенциального сайта гликозилирования. N122D была отмечена всего у 12% вирусов, зарегистрированных в базах данных, преимущественно в США [1].

Российские вирусы гриппа в сезоне 2014 — 2015 гг., имели ряд замен в НА, общих для субклайда ЗС.2а: L3I, N53D, N144R/S, N145S, F159Y, К160Т, P198S, N225D, Q311H.

В Европе в сезоне 2014 — 2015 гг. преобладали вирусы, принадлежавшие к субклайдам ЗС.За и ЗС.ЗЬ (ECDC). В России преобладающее большинство вирусов относилось к субклайду ЗС.2а, и в значительно меньшем количестве в почти равной пропорции встречались вирусы ЗС.За и ЗС.ЗЬ субклайдов. В сезоне 2014 — 2015 гг. произошел антигенный дрейф вируса гриппа A/H3N2 — появились новые аминокислотные замены в НА1 домене гемагглютинина по отношению к вакцинному штамму A/Texas/50/2012 (клайд ЗС. 1 ). Большая

Виктория-подобная линия

вирусов гриппа В

К48ЯЛ108РДЯ 116К,Я 1501,

Ш65У,А181ТД)196Ы, N2028,62290,К298Е.ЕЗ12К

Ямагата-подобная линия вирусов гриппа В

клайд 1А

ВЛ/ю1опа/02/1987

.- В/Ма1ауз!а/2506/2004

1- ВЛЛс1опа/304/2006

В/ВпяЬапе/бО/гош) (с!ас1е 1А) ВЛ"и1а/СР1Е-132/2015 В/СаИогтаа/02/2015 В/Ре1гагауос1зК/СН1Е-6Э/2015 В/Ре«пжауоа5к/сгаЕ-70/2016 В/Мовсо\*/СК1Е-14(У2015 В/Башата/сгаЕ-г 1 /2014 \~J2h ВЛ/Ыдодгай/СШЕ-25/2015 В/вуМуукаг/Сга Е-83И) 15 В/8уМу\|каг/СР1Е-08/2015 вге1а1/горо1/СШЕ-ба/2015 ВЛЛай1каука2/СК1Е-45И)1б В/РИикеЦ3073/2013 (йайе 3) 172Ь В/51аУГОро|/СГОЕ-56/2015 В/Кигзк/СР|£-90/2015 ВГГи1а/СГОЕ-134/2015 В/1Чопгау/698/2015 ВЛ/о(додгаЬ/СШЕ-112/2015 В/и(а/СГОЕ-124/2015 В/Мовс<ж/СР1Е-144/2015 В/Ти!а/СК1Е-126/2015 В/8атага/СГОЕ-108/2015 В/Епд1ап<1/372/2014 ВЛ_кЬоаМ/2014 В/Кск1гота/егаЕ-19/2014 *

клайд3

N8 Виктория-подобной ЛИВИИ

Г^- &Е81оп&55&Э/ИЖ (сЫе2) клайд 2

I- В/ВгкЬапе/3/2007 (с!айе 2)

В/ВпБЬапе/3/2007 (сШе 2) В/ПогИа/4/2006 (с!а<1в 1) В/Уатада1а/16/1988

клайд 1

часть вирусов гриппа A/HЗN2 в Европе и США сезона 2014 — 2015 гг. принадлежала к субклайду ЗС.За, в связи с чем ВОЗ рекомендовала заменить вакцинный штамм А/Теха$/50/2012 на А^кгег1апё/9715293/2013 на сезон 2015 — 2016 гг. для северного полушария [20].

В России субклайд ЗС.За появился только в сезоне 2014 — 2015 гг., и на его долю приходилось только 10% по данным этого исследования. Наши данные коррелируют с результатами, полученными в НИИ гриппа по эпидсезону 2014

— 2015 гг.: к ЗС.За субклайду принадлежали 12,4 % от общего числа вирусов гриппа А/НЗШ [3].

Во всех исследованных вирусах, обнаруженных в сезоне 2013 — 2015 гг., в белке М2 выявлена мутация устойчивости к ремантадину БЗШ. При анализе последовательностей ИА вирусов гриппа А субтипа А/НЗИ2 не найдены известные мутации, определяющие устойчивость к озельтамивиру: Е119У, 1222У, Я292К, N2945, с!е1245-248, Р136К [23].

В сезоне 2013 — 2014 гг. среди исследованных образцов были выявлены только вирусы гриппа В, принадлежавшие к линии Ямагата. В сезоне 2014 — 2015 гг. один вирус принадлежал к линии Виктория, 28 вирусов — к линии Ямагата. Гомология представителей линии Ямагата по генам как НА (2013 — 2014: 97,4 - 97,9%, 2014 - 2015: 97,3 -97,8%), так и ^ (2013 - 2014: 95,2

— 97,4%, 2014 — 2015: 97,1 — 98,2%) с вакцинным штаммом В/МаБва-с1ш5еП5/02/2012 (входит в состав трехвалентной вакцины) была невысокой в

I204V.N220K, E320D.A358E

Щ . . 9 S

К343Ё ;

S295R,D329N, Г1

N340D,E358K I

Виктория-подобная линия вирусов гриппа В

Ямагата-подобная линия вирусов гриппа В

I248V.S295R

295R

N329K

D342N

T125K.K186R, R295S,E320K, К343Е

B/Ko»trom»/CRIE-1 Э/201Д* B/Uaboa/4/2014 B/England/37Z/201-« B/Tula/CRIE-137/2015

';clada 1A)

B/Vlctoria/304/200e B/Malay»ia/2508/2004 B/Vtctoria/02/1007 B/Yamagata/1 6/1988 B/Flor1daM/200e (cjada 1) B/Briabane/3/2007 (clada 2) B/Estonla/5566g/2011 (etade 2) B/Ma»»achu»atta/02/2012[ B/Ufa/CRl E-124/2015. B/Norway/e98/2015 B/Votgograd/CRIE-112/2015 B/Tula/CRIE-134/2015 B/Patrozavodafc/CRIE-«e/2015 B/Patrozavodsk/CRIE-7a/2015 B/Samara/CRIE-108/2015 B/Phukat/3073/2013 (dada 3) B/Moacow/CRI E-144/2015 B/Vladlkavkaz/CRIE-45/2015 B/Syktyvkar/CRIE-83/2015 B/Syktyvkar/CRIE-08/2015 B/StavropoJ/CRIE-58/2015 B/Moscow/CRiE-140/2015 B/3amara/CR!E-21 /2014 B/Vofcjosrad/CRIE-25/2015 B/Stavropot/CR!E-Se/2015 B/Kur*k/CRI£-90/2015

Ha Ямагата-подобной линии

клайд 1А

клайд l клайд 2

клайд 3

Рис. 2А, с. 68. Дендрограмма по гену гемагглютинина (НА) вирусов гриппа В. Рис. 2Б, с. 69. Дендрограмма по гену нейраминидазы (NA) вирусов гриппа В. Вакцинные штаммы сезонов 2013 — 2014 и 2014 — 2015 гг.: B/Massachusetts/02/2012 — Ямагата-подобной линии вирусов гриппа В, B/Brisbane/60/2008 — Виктория-подобной линии вирусов. На дендро-грамме показаны аминокислотные замены в НА1 субъединице гемагглютинина. B/Kostroma/ CRIE-19/2014 * вирус-реассортант по НА (линия Ямагата) и NA (линия Виктория).

оба эпидемические сезона (табл.). Напротив, один Виктория-подобный вирус, исследованный в данной работе, показал высокую гомологию с вакцинным штаммом этой линии B/Brisbane/60/2008 (добавочный компонент четырехвалентной вакцины) как по нуклеотидному составу гена НА (99,3%), так и фрагмента гена NA (98,9%).

Вирусы гриппа А и В занимают одну нишу, что вызывает неизбежное взаимодействие и конкурирование одних типов вирусов с другими. На протяжении последних десятилетий отмечается динамическое преобладание определенных филогенетических линий вирусов гриппа, на основе чего делаются попытки выявить закономерности смены одних линий вирусов гриппа другими в этиологической структуре гриппа. При анализе распределения типов вирусов гриппа в США с 1976 по 2007 г. [9] четкой закономерности выявлено не было. Однако было отмечено, что вирус гриппа A/H3N2 доминировал в этиологической структуре примерно через каждые 3 — 4 сезона. Преобладание вируса гриппа В отмечалось реже, примерно через 4 — 5 сезонов. Относительно вируса гриппа В была отмечена интересная закономерность, так называемое «горлышко бутылки»: смена доминирования Виктория-подобных и Ямагата-подобных антигенных линий гриппа происходила в тот момент (или сразу после него), когда в доля вируса гриппа В в структуре гриппа была очень мала (<0,2%) [9]. Такие сезоны регистрировались в 1993 — 1994, 1997 - 1998,1999 - 2000, 2003 - 2004 гг.

В России в сезонах 2013 — 2014, 2014 — 2015 гг. обнаруженные вирусы гриппа В, принадлежащие к линии Ямагата, относились к клайду 3 (номенклатура клайдов дана в.соответствии с USCDC [21 ] (рис. 2).

Вакцинный штамм B/Massachusetts/2/2012 принадлежитк клайду 2. Все исследованные российские вирусы обоих сезонов имели аминокислотные замены й гемагглютинине: K48R, А108Р, N116K, S150I; N165Y, А181Т, D196N, N202S, G229D, К298Е, ЕЗ12R,.Все данные, замены характерны для клайда 3. Они присутствовали у референсного штамма клайда 3 — B/Phuket/3073/2013. В сезоне 2015 — 2016 гг. ВОЗ приняла решение о замене вакцинного штамма гриппа В/ Massachusetts/2/2012 на B/Phüket/3073/2013 [20] той же линии Ямагата. =

В молекуле гемагглютинина вируса гриппа В вьщеляют четыре антигенно значимых домена — петля 120 и прилегающие регионы НА1(116-+- 137), петля 150 НА1 (141 — 150), петля 160 НА1 (162 - 167), а также спираль 190 НА1 (194 — 202) и окружающие ее области. Установлено, что эта молекула содержит шесть антигенных сайтов: ВА, ВВ1, ВВ2, ВС, BD и BE [19].

Ообенно важное значение имеет ряд аминокислотных замен, обнаруженных у всех российских вирусов: N116К (петля 120), S150I (петля 150), N165Y (петля 160), D196N и N202S (спираль 190). Кроме того, аминокислотная замена D196N влияет на появление потенциального сайта гликозилирования, что приводит к изменению структуры поверхностного гемагглютинина. У 3 вирусов, обнаруженных у больных в Петрозаводске, выявлена мутация G229N. В российских вирусах, обнаруженных в сезоне 2014 — 2015 гг., найдена аминокислотная замена L172Q, в сезоне 2013 — 2014 гг. она не отмечалась. Данная аминокислотная замена обнаруживается у 53% вирусов гриппа В во всем мире. Аминокислотная замена M251V была обнаружена у 1 образца (50%) в сезоне 2013 — 2014 гг. А в последующем сезоне 2014 — 2015 гг. М251V выявлялась у 57% российских вирусов. :

Только один вирус, обнаруженный в сезоне 2014 — 2015 гг. (В/Tula/ I С RI Е-132/2015), принадлежал к викторианской линии вирусов гриппа В к клайду 1 А, который циркулирует с 2009 года по настоящее время. По сравнению с вакцинным штаммом викторианской линии сезонов 2013 — 2015 гг. В/ Brisbane/60/2008, вирус B/Tula/CRIE-132/2015 имел аминокислотные замены: N129D (петля 120), I146V (петля 150), D196N (спираль 190, появление потенциального сайта гликозилирования). Все данные замены влияют на изменение антигенных свойств вируса гриппа, но серьезных, изменений в антигенной структуре вирусов за сезоны 2013 — 2015 гг. не произошло. По рекомендациям ВОЗ, добавочный компонент для четырехвалентной вакцины B/Brisbane/60/ 2008 остался неизменным на сезон 2015 — 2016 гп [20].

Одним из механизмов эволюции вирусов гриппа В является реассортация между вирусами обеих линий. В сезоне 2014 — 2015 гг. подобные вирусы, ре-ассортанты по генам НА и NA, обнаруживались в разных частях света: Европа, Азия, Африка [12]. В нашей выборке вирус B/Kostroma/CRIE-19/2014, обнаруженный в сезоне 2014 — 2015 гг., является реассортантом, содержащим НА линии Ямагата, и NA — линии Виктория.

Проведенное исследование показало, что с сезона 2013 — 2014 гг. возросло генетическое разнообразие циркулировавших в России вирусов гриппа А/ H3N2 и В, которое еще больше увеличилось в сезоне 2014 — 2015 гп, в результате чего в циркуляции появились вирусы, значительно отличающиеся по антигенным характеристикам от циркулировавших ранее и от вошедших в вакцину, рекомендованную на сезон 2014 — 2015 гг. компонентов A/H3N2 и В. Такая ситуация была благоприятна для увеличения заболеваемости гриппом

по сравнению с предыдущим эпидемическим сезоном, поскольку анамнестический и вакцинальный иммунитет обеспечивали лишь частичную перекрестную защиту. В связи с этим, ВОЗ приняла решение о замене вакцинных компонентов вируса гриппа A/H3N2 й В в составе трехвалентной вакцины на сезон 2015 — 2016 гг. . -. ь ; ч <71. ; /

Одновременная циркуляция двух значительно отличающихся по антигенным свойствам линий вируса гриппа В и появление их реассортантов свидетельствует о целесообразности применения четырехвалентной вакцины, включающей антигенные компоненты обеих линий вируса гриппа В.

Во всех исследованных вирусах гриппа A/H3N2 сезонов 2013 — 2015 гг. была выявлена мутация устойчивости к ремантадину S31N (белок М2). Все исследованные вирусы гриппа A/H3N2 и В не имели известных мутаций в гене NA, определяющих устойчивость к озельтамивиру.

БЛАГОДАРНОСТИ: Авторы выражают благодарность за сотрудничество и предоставление биологического материала, использованного в данной работе, главным врачам и заведующим отделами и лабораториями Центров гигиены и эпидемиологии регионов РФ, в которых выполнялись первичные исследования по обнаружению и выделению вирусов гриппа: Иваненко А.В., Ярмольская М.С., Соломащенко Н.И., Хализева ВА., Спиридонов A.M., Щелокова В.Г., Тнатив Б.Р. Аникеева Л.В., Лимин Б.В., Алексеева Е.А., Зорина Д.М., Разумовский С.Л., Денисова Л.Н., Барышникова А.С., Ковальчук МЛ., Шевцова Ю.А., Пахомова Т.Н., Исаева А.А., Бастраков С.И., Гурьева Л.П., Болтенков В.П., Шишко Л А., Казак А.А., Сыса A.M., Болдырева В.В., Серегина И.В., Чайка А.Н., Русакова Н.В, Лесникова М.В., Бутаев А.К., Мамиева С. Ч., Тихонова Т.Д., Агафонова Т.В., GudopeHKoea Л.М., Михайлова И.Е.

ЛИТЕРАТУРА

1. База данных GISAID EpiFluTM. Электронный ресурс http://flusurver.bii.a-star.edu.sg/ MUTATIONS/H3N2_Human_2013_Switzerland9715293/HA_138_stat.html.

2. База данных GISAID EpiFluTM. Электронный ресурс http://flusurver.bii.a-star.edu.sg/ • MUTATIONS/H3N2_Human_2013_Switzerland9715293/HA_154_stat.html

3. Данные НИИ гриппа; Эпидемиологическая ситуация. Лабораторная диагностика гриппа и ОРВИ. http://www.influenza.spb.ru/system/epidemiological_situation/laboratory_ diagnostics/?year=2015&week=22. ,., ;

4. Письмо Роспотребнадзора от 30.06.2014 № 01/7281-14-32. Об итогах эпидсезона по гриппу и ОРВИ 2013/2014. http://rospotrebnadz9r.ru/upioad/iblock/088/pismo-po-itogam-sezona-gripp.pdf.

5. Письмо Роспотребнадзора от 28.07.2015 N° 1042. Об krtirax эпидсезона По гриппу и ОРВИ 2014/2015гг и задачах на предстоящий эпидсезон 2015/2016 гг. www.stupenil5. edusite.ru/E>swMedia/itogigripp-2015.doc.

6. Ambrose C.S., Levin M J. Therationale for quadrivalent influenza vaccines. Hum. \&ccin. Immunother. 2012, 8 (1): 81-88.

7. Busch M.G., Bateman A.C., Landolt G.A. et al. Identification of amino acids in the HA of H3 influenza viruses that determine infectivity levels in primary swine respiratory epithelial cells. Virus Res. 2008,133 (2): 269-279.

8. Chen J.M., Guo Y.J., Wu K.Y. et al. Exploration of the emergence of the Victoria lineage of influenza В virus. Arch. Virol. 2007,152 (2): 415-422.

9. Chen R., Holmes E.C. The evolutionary dynamics of human influenza В virus. J. Mol. Evol. 2008,66 (6): 655-663.

10. Cockburn W.C., Delon P.J., Ferreira W. Origin and progress of the 1968-69 Hong Kong influenza epidemic. Bull. Wbrld Health Organ. 1969,41 (3): 345-348.

11. ECDC European Centre. Influenza virus characterization summary Europe, July 2012. http:// ecdc.europa.eu/en/publications/Publications/CNRL-July-2012.pdf.

12. ECDC European Centre. Influenza virus characterization summary Europe, July 2015. http:// ecdc.europa.eu/en/publications/Publications/influenza-virus-characterisation-july-2015. pdf.

13. Koel B.F., Burke D.F., Bestebroer T.M. et al. Substitutions near the receptor binding site de-

termine major antigenic change during influenza virus evolution. Science. 2013, 342 (6161): 976-979.

14. Lee M-S., Chen J. S-E. Predicting antigenic variants of influenza A/H3N2 viruses. Emerg. Infect. Dis. 2004,10(8): 1385-1390.

15. Morbidity and Mortality Weekly Report. CDC Centers, USA. http://www.cdc.gov/rnmwr.

16. Review of the 2012-2013 winter influenza season, northern hemisphere. Weekly Epidemiol. Rec. 2013, 88 (22): 225-232.

17. Rota P.A., Wallis T.R., Harmon M.W. et al. Cocirculation of two distinct evolutionary lineages of influenza type В virus since 1983. Virology. 1990,175 (1): 59-68.

18. Smith D.J., Lapedes A.S., de Jong J.C. et al. Mapping the antigenic and genetic evolution of influenza virus. Science. 2004, 305 (5682): 371-376.

19. Wang Q., Han X., Chen X., Ma J. Structural basis for receptor specificity of influenza В virus hemagglutinin. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2007, 104 (43): 16874-16879.

20. WHO Influenza Centre, London. Recommended composition of influenza virus vaccines for use in the 2013-14 (2014-15) (2015-16) northern hemisphere influenza season. http://www. who.int/influenza/vaccines/virus/recommendations/2013_ 14_north/en/ (2014_ 15), (2015_16).

21. WHO Influenza Centre, London. Report prepared for the WHO annual consultation on the composition of influenza vaccine for the Northern Hemisphere 2015/16.23rd —25th February 2015.

22. WHO Influenza Centre, St Petersburg, Russia. Digest of Influenza Surveillance in Russia, Seasons 2009-2013. http://www.influenza.spb.ru/files/rii-digest-2013.pdf.

23. WHO. Summary of neuraminidase amino acid substitutions associated with reduced inhibition by neuraminidase inhibitors, http://www.who.int/influenza/gisrs_laboratory/antiviral_sus-ceptibility/avwg2014_nai_substitution_table.pdf.

Поступила 23.02.16

Контактная информация: Яцышина С.Б., к.б.н.,

111123, Москва, ул. Новогиреевская, За, р.т. (495)672-11-58

© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2016

М.Х.Алыева1, С.Я.Зверев'-2, И.В.Фелъдблюм',

Е.Ю.Носкова2, А.О.Канина3, Н.И.Маркович4 1

АССОЦИАЦИЯ НЕКОТОРЫХ ОДНОНУКЛЕОТИДНЫХ ПОЛИМОРФИЗМОВ ГЕНОВ СИСТЕМЫ АПОПТОЗА С РИСКОМ РАЗВИТИЯ КОЛОРЕКТАЛЬНОГО РАКА В РОССИЙСКОЙ ПОПУЛЯЦИИ

'Пермский государственный медицинский университет; 2Пермский краевой центр по профилактике и борьбе со СПИД и инфекционными заболеваниями; 3Пермский краевой онкологический диспансер; 4ФНЦ медико-профилактических технологий управления рисками здоровью населения, Пермь

Цель. Изучить влияние однонуклеотидных полиморфизмов генов ТР53 (гб1042522, ге1800371),СОК№А (ге3731217, п>3088440) и МОМ2 (п>2279744) на риск развития коло-ректального рака (КРР) у жителей Пермского края. Материалы и методы. Группу случай составили 198 пациентов с гистологически верифицированным КРР, контрольную группу — 205 человек, у которых-КРР исключен по результатам колоноскопии. Генотипирование ДНК, полученной из лейкоцитов венозной крови исследуемых, проводили методом ПЦР с электрофоретической детекцией результатов. Результаты. Выявлены значительные межпопуляционные различия частоты встречаемости аллелей ге 1042522, ге3088440, ге2279744 в российской популяции по сравнению с восточноази-атской и европейской (р<0,0001). Установлена ассоциация гетерозиготного (С/Т) генотипа ге2279744 с более низким риском развития КРР независимо от пола и возраста (отношение шансов=0,51, 95% доверительный интервал=0,26 — 0,97).Не определены статистически достоверные связи между развитием КРР и другими полиморфизмами. Заключение. Впервые изучена связь полиморфизмов генов системы апоптоза с риском