CC BY
55
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2014 УДк 578.833.11:578.5].083.2
Альховский С.В., Львов Д.К., Щелканов М.Ю., Щетинин А.М., Дерябин П.Г., Гительман А.К., Ботиков А.Г.,
Самохвалов Е.И.
Генетическая характеристика вируса Кызылагач (KYZV -Kyzylagach virus) (Togaviridae, Alphavirus, серогруппа Синдбис),
изолированного от комаров Culex modestus Ficalbi, 1889 (Culicinae), собранных в колонии цаплевых птиц (Ardeidae Leach,
1820) в Азербайджане
ФГБУ «НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского» Минздрава России, 123098, г. Москва
Проведено полногеномное секвенирование вируса Кызылагач (KYZV - Kyzylagach virus) (штамм LEiV-65A), который был изолирован из пула комаров Culex modestus Ficalbi, 1889 (Culicinae), собранных в колонии цаплевых птиц (Ardeidae Leach, 1820) на побережье залива Кызыл-Агач Каспийского моря в южной части Азербайджана. KYZV обладает высокой гомологией (около 99%) с китайским изолятом вируса Синдбис (SiNV - Sindbis virus) XJ-160, изолированным от комаров Anopheles spp. в Синьцзян-Уйгурском регионе на Северо-востоке Китая. Гомология KYZV и XJ-160 c европейскими изолятами SiNV составляет 82 и 93% по нуклеотидным и белковым последовательностям соответственно (GenBank iD:KF981618). С австралийским изолятом SiNV/SW6562 дивергенция KYZV по нуклеотидным последовательностям составляет 19%, а по аминокислотным это значение достигает 12%. Поскольку изолят XJ-160 обладает такой высокой гомологией с KYZV, его можно рассматривать как штамм KYZV. География выделения KYZV и XJ-160 и их генетическая обособленность от европейских вирусов позволяют предположить, что KYZV является топо-типным вариантом SiNV (генотип iV), характерным для Закавказья и Средней Азии.
Ключевые слова: Togaviridae; Alphavirus; вирус Кызылагач (KYZV); вирус Синдбис (SINV); Culicinae; Culex modestus; цаплевые; Ardeidae; Азербайджан; полногеномное секвенирование.
Complete genome characterization of the Kyzylagach virus (KYZV) (Togaviridae, Alphavirus, Sindbis serogroup) isolated from mosquitoes Culex modestus Ficalbi, 1889 (Culicinae) collected in a colony of herons (Ardeidae Leach, 1820) in Azerbaijan
Alkhovsky S. V., Lvov D. K., Shchelkanov M. Yu., Shchetinin A. M, Deryabin P. G., Gitelman A. K.,
Botikov A. G., Samokhvalov E. I.
D.I. Ivanovsky Institute of Virology, Ministry of Health of the Russian Federation, 123098, Moscow, Russia
Complete genome sequencing of the Kyzylagach virus (KYZV) LEiV-65A strain isolated from the Culex modestus Ficalbi, 1889 (Culicinae), which was collected in the colony of the Ardeidae Leach, 1820 birds on the coast of Caspian sea, Kyzyl-Agach bay, in the southern part of Azerbaijan, was carried out. KYZV has high homology (about 99%) with the Chinese XJ-160 strain of the Sindbis virus (SiNV) isolated from Anopheles sp. in Xinjiang Uyghur autonomic region (north-eastern China). Homologies of KYZV and XJ-160 with European SiNV strains are 82% and 93% for the nucleotide and amino acid sequences, respectively (GenBank iD:KF981618). The difference between the nucleotide sequences of KYZV and Australian SiNV/SW6562 strain is 19%; amino acid sequences, 12%. Since XJ-160 strain is extremely similar to KYZV, the first could be considered as the KYZV strain. The geography of the KYZV and XJ-160 isolation points and their genetic distance from the European viruses allow the KYZV to be suggested as a SiNV (genotype iV) topotypic variant typical of Transcaucasia and Central Asia.
Key words: Togaviridae; Alphavirus; Kyzylagach virus (KYZV); Sindbis virus (SINV); Culicinae; Culex modestus; herons; Ardeidae; Azerbaijan; complete genome .sequencing.
Введение
Прототипный штамм LEIV-65A вируса Кызылагач (KYZV - Kyzylagach virus) изолирован из пула комаров Culex modestus Ficalbi, 1889 (Culicinae), собранных летом 1969 г. в колонии цаплевых птиц (Ardeidae Leach, 1820) на территории Кызылагачского заповедника (39°10' с.ш., 48°58' в.д.) [1, 2], который расположен на побережье залива Кызыл-Агач Каспийского моря в южной части Азербайджана (Ленкоранский район) [3]. По данным электронной микроскопии KYZV отнесен к сем. Togaviridae, а по результатам серологического исследования - к серогруппе Синдбис (SINV - Sindbis virus) рода Alphavirus [1, 2, 4].
На основании современной классификации KYZV рассматривается как один из региональных вариантов
SINV наряду с вирусами Бабанки (BNKV - Babanki virus), Окельбо (OCKV - Ockelbo virus) и карельской лихорадки (KAFV - Karelian fever virus) [5-7]. SINV и его варианты широко распространены в Европе, на Ближнем Востоке, в Африке, Юго-Восточной Азии, Австралии, на Филиппинах. Известны изоляции этого вируса в Азербайджане и Таджикистане, а в Российской Федерации - в Астраханской области, Западной Сибири (в среднем течении реки Оби). SINV вызывает у людей заболевание с острым началом, лихорадкой, сыпью, но с благоприятным исходом [6-11].
Альфавирусы в основном являются арбовирусами и связаны с комарами и птицами, что обеспечивает возможность их трансконтинентального переноса. К альфа-вирусам принадлежат опасные патогенны человека или
Для корреспонденции: Львов Дмитрий Константинович, д-р мед. наук, проф., акад. РАН; e-mail: dk_lvov@mail.ru Correspondence to: Dmitry Lvov, MD, PhD, DSc, prof., Academician of RAS; e-mail: dk_lvov@mail.ru
животных, такие как вирусы SINV, вирусы восточного энцефалита лошадей (WEE - Western equine encephalitis), Чикунгунья (CHIKV - Chikungunya virus), Гета (GETV - Getah virus), Уна (UTAV - Uta virus) [5].
Геном альфавирусов представлен одноцепочечной РНК позитивной полярности длиной около 11,5 тыс. н.о. Вирусная РНК кэпирована на 5'-конце и полиаде-нилирована на З'-конце. Большая часть генома альфавирусов (около 2/3 со стороны 5'-конца) кодирует неструктурные белки, формирующие вирусный репликативный комплекс (белки nsP1, nsP2, nsP3 и nsP4). Структурные белки (core, ЕЗ, E2, 6К и E1) транслируются с субгеномной РНК (26S РНК), которая образуется в процессе репликации вируса и соответствует З'-концевой (около 4 тыс. н.о.) части генома [5].
В настоящей работе мы впервые определили полную последовательность генома KYZV, используя метод полногеномного секвенирования. На основании проведенного анализа показано, что KYZV является топо-типным для Закавказья и Средней Азии вариантом SINV (генотип IV).
Материалы и методы
Прототипный штамм KYZV/LEIV-65A получен из Государственной коллекции вирусов РФ ФГБУ НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского Минздрава России в виде лиофилизированной мозговой суспензии. Восстановленной суспензией (0,2 мл) проводили интрацеребральное заражение новорожденных беспородных белых мышей. После развития симптомов поражения ЦНС (2-4-е сутки) мышей забивали в соответствии с правилами этичного содержания и использования лабораторных животных.
Выделение РНК.. Фрагменты мозга (около 30 мг) помещали в 700 мкл лизирующего буфера RLT (QIAGEN, Германия) и гомогенизировали в гомогенизаторе TyssueLyser LT (QIAGEN, Германия). Далее РНК выделяли набором «RNeasy mini kit» (QIAGEN, Германия) на автоматической станции QIAcube (QIAGEN, Германия) из 350 мкл буфера в соответствии с инструкцией. Концентрацию РНК измеряли с помощью флюориметра Qubit (Invitrogen, США).
Подготовка библиотек и секвенирование. Для депле-ции рибосомальной РНК использовали набор GenRead rRNA depletion Kit (QIAGEN, Германия) в соответствии с инструкцией. Для получения кДНК 50 нг деплециро-ванной РНК фрагментировали в 15 мкл реакционной смеси для обратной транскриптазы с гексапраймером при 85°С в течение 5 мин, после чего помещали в лед. К фрагментированной РНК добавляли 200 ед. фермента RevertAid Premium (Thermo Scintific, США) и 20 ед. ингибитора РНаз RNasin (Promega, США). Инкубировали при 25°С в течение 10 мин, далее при 42°С в течение 60 мин. Реакцию останавливали прогреванием при 70°С в течение 10 мин. Синтез второй цепи кДНК проводили с помощью набора «NEBNext® mRNA Second Strand Synthesis Module» (NEB, США) в соответствии с инструкцией. Полученную дцДНК очищали, используя набор «MinElute PCR Purification Kit» (QIAGEN, Германия) на автоматической станции QIAcube.
Для получения ДНК-библиотек из дцДНК использовали набор «TruSeq DNA Sample Prep Kits v2» (Illumina, США) в соответствии с инструкцией. Полученные библиотеки визуализировали на станции автоматического электрофореза «QIAxcel Advanced System» (QIAGEN, Германия). Молярность полученных библиотек измеряли методом полимеразной цепной реакции в реальном времени (2х SsoFast EvaGreen Supermix (Bio-Rad, США; прибор Bio-Rad CFX1000) согласно рекомендациям, изложенным в руководстве «Sequencing Library qPCR Quantification Guide» (Illumina, США).
Секвенирование ДНК-библиотек осуществляли на приборе MiSeq (Illumina, США) с использованием набора «MiSeq Reagent Kits v2 (300PE)» в соответствии с инструкцией производителя.
Биоинформационный анализ. Обработку данных полногеномного секвенирования, сборку контигов и картирование ридов проводили с помощью программы «CLC Genomics Workbench 5.5» (CLC bio, США). Предварительный поиск гомологичных последовательностей проводили, используя сервис BLASTX (http//blast.ncbi. nlm.nih.gov). Для подбора праймеров, множественного
Генетическая дистанция (p-distance) между различными изолятами вируса Синдбис фШУ) по полноразмерной нуклеотидной последовательности, кодирующей области геномной РНК (неструктурные белки)
Вирусы SINV 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
Kyzylagach virus / LEIV-65A 1 0,01 0,19 0,19 0,19 0,19 0,18 0,19 0,25 0,37 0,42
Sindbis virus / XJ-160; AF103728 2 0,01 0,19 0,18 0,18 0,18 0,18 0,18 0,25 0,37 0,42
Sindbis virus / LEIV-9298 (Россия); JQ771799 3 0,07 0,07 0,01 0,01 0,01 0,03 0,03 0,23 0,36 0,41
Sindbis virus (Германия); JX570540 4 0,07 0,07 0,01 0,01 0,01 0,03 0,03 0,23 0,36 0,41
Ockelbo virus (Швеция); M69205 5 0,07 0,07 0,01 0,01 0,01 0,03 0,03 0,23 0,36 0,41
Sindbis virus (Финляндия); JQ771797 6 0,07 0,07 0,01 0,01 0,01 0,03 0,03 0,23 0,36 0,41
Babanki virus (Камерун); HM147984 7 0,07 0,07 0,01 0,01 0,01 0,01 0,03 0,23 0,37 0,41
Sindbis-like virus (Южная Африка); U38305 8 0,07 0,07 0,01 0,01 0,01 0,01 0,01 0,23 0,36 0,41
Sindbis virus / SW6562 (Австралия); AF429428 9 0,12 0,13 0,11 0,11 0,11 0,11 0,11 0,11 0,36 0,42
Aura virus (Бразилия); NC003900 10 0,32 0,32 0,31 0,31 0,31 0,31 0,31 0,31 0,31 0,43
Chikungunya virus; EU037962 11 0,40 0,40 0,40 0,40 0,40 0,40 0,40 0,40 0,41 0,41
Примечание. Правая верхняя часть - нуклеотидные последовательности, левая нижняя - аминокислотные; вирусы Аура (AURAV) и Чикунгунья (CHIKV) представлены как внешняя группа.
Филогенетический анализ нуклеотидных последовательностей генома вируса Синдбис (SINV).
а - дендрограмма, построенная методом ближайшего соседа, для полных нуклеотидных последовательностей кодирующей части 826-субгеномной РНК (структурные белки); б - дендрограмма для полных нуклеотидных последовательностей кодирующей части геномной РНК ЗГЫУ (неструктурные белки); вирусы Аура (AURAV) и Чикунгунья (СШКУ) представлены как
внешняя группа.
выравнивания, анализа нуклеотидных и аминокислотных последовательностей использовали пакет программ «Lasergene Core Suite» (DNAstar, США). Последовательности выравнивали по алгоритму ClustalW [12]. Генетическую дистанцию определяли по модели p-distance с попарным удалением гэпов. Филогенетический анализ и построение дендрограмм проводили с использованием программы Mega5 по методу ближайшего соседа (модель p-distance) с бутстреп-тестированием 1000 [13].
Результаты и обсуждение
В результате проведенного секвенирования определили практически полную последовательность генома KYZV, включая открытые рамки считывания (ОРС) для структурных и неструктурных белков. Поскольку у альфавирусов структурные и неструктурные белки кодируют разные ОРС, молекулярно генетический и филогенетический анализ генома KYZV провели для каждой из них отдельно. Ранее для KYZV были частично определены последовательности структурных генов, на основании чего установлены его филогенетические связи с другими изолятами SINV [14]. В настоящей работе мы определили полную последовательность генома KYZV, что дало возможность про-
вести анализ также и на основе неструкутрной части генома KYZV.
На основе сравнения частичной последовательности поверхностного белка Е2, несущего основные нейтрализующие детерминанты, SINV были разделены на пять генотипов [15]. Филогенетическое разделение SINV на генотипы в целом соответствует их географическому распространению и связано с основными направлениями миграции птиц, которые являются основными позвоночными хозяевами SINV. Генотип I включает SINV из Европы и Африки. К генотипу II отнесены изоляты из Австралии и Океании, а к генотипу III - из Индии и Филиппин. Генотип V представлен единственным изолятом SINV М78 из Новой Зеландии. KYZV вместе с китайским штаммом SINV XJ-160 были отнесены к генотипу IV. В структуре генотипа I можно выделить два субкластера, один из которых включает SINV из Северной Европы и субсахариальной Африки, а другой - вирусы средиземноморского региона (Южная Европа, Северная Африка, Ближний Восток) [15]. Генетическая дистанция между вирусами разных генотипов SINV (например, между европейскими и австралийскими изолятами) составляет не более 23% по нуклеотидной последовательности генома (см. таблицу). В то же время SINV,
изолированные в одном географическом регионе, характеризуются очень высокой степенью гомологии. Так, штаммы SINV, выделенные в России, Германии, Швеции (OCKV), Финляндии, обладают гомологией около 99% и по нуклеотидным и аминокислотным последовательностям неструктурной части генома (см. таблицу) [16-19]. BNKV из Камеруна, который также принадлежит генотипу I, имеет около 98% гомологии с европейскими вирусами SINV . Несмотря на высокий уровень гомологии, можно полагать, что существуют связанные с генотипом генетические детерминанты патогенности SINV, поскольку заболеваемость людей лихорадкой Синдбис (карельская лихорадка, болезнь Окельбо, болезнь Погоста, болезнь Бабанки) связана только с вирусами I генотипа европейско-южноафриканского субкластера. В то же время заболеваемость лихорадкой Синдбис на эндемичных территориях может быть обусловлена экологическими особенностями [11, 17].
В Новом свете антигенно-ближайшим к SINV вирусом можно считать вирус Аура (AURAV - Aura virus), с которым SINV имеет около 70% гомологии по белковым последовательностям (см. таблицу) [20]. AURAV был изолирован только из комаров, и сведения о его позвоночных хозяевах отсутствуют. В настоящей работе AURAV вместе с CHIKV был использован в филогенетическом анализе в качестве внешней группы (см. рисунок).
KYZV обладает высокой гомологией (около 99%) с китайским изолятом SINV XJ-160, изолированным от комаров Anopheles spp. в Синьцзян-Уйгурском регионе на Северо-востоке Китая [21]. Дивергенция KYZV и XJ-160 от европейских изолятов SINV составляет 18 и 7% по нуклеотидным и аминокислотным последовательностям соответственно (см. таблицу). С австралийским изоля-том SINV SW6562 дивергенция KYZV по нуклеотид-ным последовательностям составляет 19%, а по аминокислотным это значение достигает 12%. Поскольку изо-лят XJ-160 обладает такой высокой гомологией с KYZV, его можно рассматривать как штамм KYZV. География выделения KYZV и XJ-160 и их генетическая обособленность от европейских вирусов позволяют предположить, что KYZV является топотипным вариантом SINV, характерным для Закавказья и Средней Азии.
Результаты филогенетического анализа, проведенного на основе полноразмерных ОРС SINV, доступных в базе данных GenBank, представлены на рисунке. Топология расположения на дендрограмме филогенетической ветви KYZV отдельно от SINV других географических регионов подтверждает его обособленный топотипный статус. При этом видно, что эволюционное разделение KYZV и европейских вариантов SINV произошло позже отделения от них австралийской группы.
Экология SINV тесно связана с орнитофильными комарами: в Египте - Culex univittatus Theobald, 1901, Cx. antennatus Becker, 1903, Anopheles pharoensis Giles, 1899; Уганде - Coq. fuscopennata Theobald, 1901; Mалайзии - Cx. bitaeniorhynchus Giles, 1901; Австралии - Cx. annulirostris Skuse, 1889, Aedes normanensis Taylor, 1915, Ae. vigilax Scuse, 1889. В дельте Волги SINV изолирован от Culex pipi-ens Linnaeus, 1758 в антропогенных и Anopheles hyrcanus Pallas, 1771 и Coquillettidia richiardii Ficalbi, 1889 - в природных биоценозах [8, 9]. Основное значение как хозяев SINV среди позвоночных принадлежит птицам водного и околоводного комплексов: веслоногим (Pelecaniformes Sharpe, 1891), голенастым (Ciconiiformes Bonaparte, 1854) и пластинчатоклювым (Anseriformes Wagler, 1831). Показана хроническая инфекция у птиц, что обеспечивает трансконтинентальный перенос вируса [10].
Зондирование территории Закавказья проводили в рамках Программы по биобезопасности и изучения био-
разнообразия в различных экосистемах Северной Евразии и пополнения базы данных Государственной коллекции вирусов [4, 6, 7, 10, 11].
Работа выполнена при финансовой поддержке РФФИ, проект № 13-04-01749а.
ЛИТЕРАТУРА
1. Львов Д.К., Громашевский В.Л., Скворцова Т.М., Березина Л.К., Закарян В.А., Кондрашина Н.Г. и др. Вирус Кызыл-Агач (семейство Тогавириде, род Альфавирусов) - новый арбовирус, изолированный из комаров Culex modestus, отловленных в Азербайджанской ССР. Вопросы вирусологии. 1979; 5: 519-23.
2. Kyzylagach virus. In: Karabatsos N., ed. International catalogue of arboviruses and some others viruses of vertebrates. San Antonio (Texas): American Society of Tropical Medicine and Hygiene; 1985: 595-6.
3. Кызылагачский государственный заповедник им. С.М. Кирова: к 50-летию заповедника. Баку: Азербайджанское гос. изд-во; 1979.
4. Lvov D.K. Arboviral zoonoses of Northern Eurasia (Eastern Europe and the Commonwealth of Independent States). In: Beran G.W., ed. Handbook of zoonoses. Section B: Viral. Boca Raton, London, Tokyo: CRC Press; 1994: 237-60.
5. Powers A., Huang H., Roehrig J., Strauss E., Weaver S. Family Togaviri-dae. In: King A.M.Q., AdamsM.J., CarstensE.B., LefkowitzE.J., eds. Virus taxonomy : 9th Report of the International Committee on Taxonomy of Viruses. London, San Diego: Elsevier Science; 2011: 1103-10.
6. Львов Д.К., Дерябин П.Г., Аристова В.А., Бутенко А.М., Галкина И.В., Громашевский В.Л. и др. Атлас распространения возбудителей природно-очаговых вирусных инфекций на территории Российской Федерации. М.: МЗ РФ; 2001.
7. Щелканов М.Ю., Громашевский В.Л., Львов Д.К. Роль эколого-вирусологического районирования в прогнозировании влияния климатических изменений на ареалы арбовирусов. Вестник РАМН. 2006; 2: 22-5.
8. Львов Д.К. Экология вирусов. В кн.: Львов Д.К., ред. Вирусы и вирусные инфекции. М.: МИА; 2013: 66-86.
9. Колобухина Л.В., Львов Д.Н. Лихорадка Синдбис. В кн.: Львов Д.К., ред. Вирусы и вирусные инфекции. М.: МИА; 2013: 290-4.
10. Львов Д.К. Природные очаги связанных с птицами арбовирусов СССР. В кн.: Львов Д.К., Ильичев В.Д., ред. Миграции птиц и перенос возбудителей инфекции. М.: Наука; 1979: 37-101.
11. Львов Д.К., ред. Организация эколого-эпидемиологического мониторинга территории Российской Федерации с целью противоэпидемической защиты населения и войск. Методические рекомендации. М.: МЗ РФ, Федеральное Управление медико-биологических и экстремальных проблем, НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН; 1993.
12. Thompson J.D., Higgins D.G., Gibson T.J. CLUSTAL W: improving the sensitivity of progressive multiple sequence alignment through sequence weighting, position-specific gap penalties and weight matrix choice. Nucleic Acids Res. 1994; 22 (22): 4673-80.
13. Tamura K., Peterson D., Peterson N., Stecher G., Nei M., Kumar S. Mega5: molecular evolutionary genetics analysis using maximum likelihood, evolutionary distance, and maximum parsimony methods. Mol. Biol. Evol. 2011; 28 (10): 2731-9.
14. Weaver S.C., Kang W., Shirako Y., Rumenapf T., Strauss E.G., Strauss J.H. Recombinational history and molecular evolution of western equine encephalomyelitis complex alphaviruses. J. Virol. 1997; 71 (1): 613-23.
15. Lundstrom J.O., Pfeffer M. Phylogeographic structure and evolutionary history of Sindbis virus. Vector Borne Zoonotic Dis. 2010; 10 (9): 889-907.
16. Sane J., Kurkela S., Putkuri N., Huhtamo E., Vaheri A., Vapalahti O. Complete coding sequence and molecular epidemiological analysis of Sindbis virus isolates from mosquitoes and humans, Finland. J. Gen. Virol. 2012; 93 (Pt 9): 1984-90.
17. Hubalek Z. Mosquito-borne viruses in Europe. Parasitol. Res. 2008; 103 (Suppl. 1): S29-43.
18. Jost H., Bialonski A., Storch V., Gunther S., Becker N., Schmidt-Cha-nasit J. Isolation and phylogenetic analysis of Sindbis viruses from mosquitoes in Germany. J. Clin. Microbiol. 2010; 48 (5): 1900-3.
19. Shirako Y., Niklasson B., Dalrymple J.M., Strauss E.G., Strauss J.H. Structure of the Ockelbo virus genome and its relationship to other Sindbis viruses. Virology. 1991; 182 (2): 753-64.
20. Rumenapf T., Strauss E.G., Strauss J.H. Aura virus is a New World representative of Sindbis-like viruses. Virology. 1995; 208 (2): 621-33.
21. Liang G.D., Li L., Zhou G.L., Fu S.H., Li Q.P., Li F.S. et al. Isolation and complete nucleotide sequence of a Chinese Sindbis-like virus. J. Gen. Virol. 2000; 81 (Pt 5): 1347-51.
Поступила 26.10.13
REFERENCES
1. Lvov D.K., Gromashevskii V.L., Skvortsova T.M., Berezina L.K., Zakaryan V.A., Kondrashina N.G. et al. Kyzylagach virus (Togaviri-dae, Alphavirus) - a new arbovirus isolated from mosquitoes Culex modestus, collected in Azerbaydzhanskaya SSR. Voprody viruso-logii. 1979; (5): 519-23. (in Russian)
2. Kyzylagach virus. In: Karabatsos N., ed. International Catalogue of arboviruses and some others viruses of vertebrates. San Antonio (Texas): American Society of Tropical Medicine and Hygiene; 1985: 595-6.
3. Kyzylagach State Reserve im. S.M. Kirova: to 50 years of reserve. Baku: Azerbaydzhan state publishing house; 1979. (in Russian)
4. Lvov D.K. Arboviral zoonoses of Northern Eurasia (Eastern Europe and the Commonwealth of Independent States). In: Beran G.W., ed. Handbook of zoonoses. Section B: Viral. Boca Raton, London, Tokyo: CRC Press; 1994: 237-60.
5. Powers A., Huang H., Roehrig J., Strauss E., Weaver S. Family Toga-viridae. In: King A.M.Q., Adams M.J., Carstens E.B., Lefkowitz E.J., eds. Virus taxonomy. 9th Report of the International Committee on taxonomy ofviruses. London, San Diego: Elsevier Science; 2011: 1103-10.
6. Lvov D.K., Deryabin P.G., Aristova V.A., Butenko A.M., Galkina I.V., Gromashevsky V.L. et al. Atlas of distribution of natural-focal viruses infection on the territory of Russian Federation. Moscow: Minzdrav RF; 2001. (in Russian)
7. Shchelkanov M.Yu., Gromashevsky V.L., Lvov D.K. The role of ecovirological zoning in prediction of the influence of climatic changes on arbovirus habitats. Vesstnik RAMN. 2006; 2: 22-5. (in Russian)
8. Lvov D.K. Ecology of viruses. In: Lvov D.K., ed. Handbook of virology. Viruses and viral infections of human and animals [Virusy i virusnye infektsii]. Moscow: MIA; 2013: 66-86. (in Russian)
9. Kolobukhina L.V., Lvov D.N. Sindbis fever. In: Lvov D.K., ed. Viruses and viral infections. Moscow: MIA; 2013: 290-4. (in Russian)
10. Lvov D.K. Natural foci of arboviruses, related with the birds in USSR. In.: Lvov D.K., Ilyichev V.D., eds. Migration of the birds and transduction of contagium (Migratsii ptits i perenos vozbuditeley infektsii). Moscow: Nauka; 1979: 37-101.
11. Lvov D.K., ed. Organization of ecological-epidemiological monitoring in Russian Federation for anti-epidemic defense of the civilians and army. Moscow: Minzdrav RF, The Federal Office of Biomedical and Extreme Problems, The D.I. Ivanovsky Institute of Virology; 1993. (in Russian)
12. Thompson J.D., Higgins D.G., Gibson T.J. CLUSTAL W: improving the sensitivity of progressive multiple sequence alignment through sequence weighting, position-specific gap penalties and weight matrix choice. Nucleic Acids Res. 1994; 22 (22): 4673-80.
13. Tamura K., Peterson D., Peterson N., Stecher G., Nei M., Kumar S. Mega5: molecular evolutionary genetics analysis using maximum likelihood, evolutionary distance, and maximum parsimony methods. Mol. Biol. Evol. 2011; 28 (10): 2731-9.
14. Weaver S.C., Kang W., Shirako Y., Rumenapf T., Strauss E.G., Strauss J.H. Recombinational history and molecular evolution of western equine encephalomyelitis complex alphaviruses. J. Virol. 1997; 71 (1): 613-23.
15. Lundstrom J.O., Pfeffer M. Phylogeographic structure and evolutionary history of Sindbis virus. Vector Borne Zoonotic Dis. 2010; 10 (9): 889-907.
16. Sane J., Kurkela S., Putkuri N., Huhtamo E., Vaheri A., Vapalahti O. Complete coding sequence and molecular epidemiological analysis of Sindbis virus isolates from mosquitoes and humans, Finland. J. Gen. Virol. 2012; 93 (Pt 9): 1984-90.
17. Hubalek Z. Mosquito-borne viruses in Europe. Parasitol. Res. 2008; 103 (Suppl. 1): S29-43.
18. Jost H., Bialonski A., Storch V., Gunther S., Becker N., Schmidt-Cha-nasit J. Isolation and phylogenetic analysis of Sindbis viruses from mosquitoes in Germany. J. Clin. Microbiol. 2010; 48 (5): 1900-3.
19. Shirako Y., Niklasson B., Dalrymple J.M., Strauss E.G., Strauss J.H. Structure of the Ockelbo virus genome and its relationship to other Sindbis viruses. Virology. 1991; 182 (2): 753-64.
20. Rumenapf T., Strauss E.G., Strauss J.H. Aura virus is a New World representative of Sindbis-like viruses. Virology. 1995; 208 (2): 621-33.
21. Liang G.D., Li L., Zhou G.L., Fu S.H., Li Q. P., Li F.S. et al. Isolation and complete nucleotide sequence of a Chinese Sindbis-like virus. J. Gen. Virol. 2000; 81 (Pt 5): 1347-51.
Received 26.10.13
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2014 УДк 615.281.8.03:616.98:578.832.1].076.9
СмирновВ.С.1, Гаршинина А.В.2, Штро А.А.2, Аникин В.Б.2, Галочкина А.В.2, Беляевская С.В.2, Зарубаев В.В.2
Протективная активность комбинации глутамил-триптофана и глицирризиновой кислоты при пероральном введении на модели экспериментальной летальной гриппозной инфекции у белых мышей, вызванной осельтамивирустойчивым штаммом вируса
1ЗАО Медико-биологический научно-производственный комплекс «Цитомед», 191023, г. Санкт-Петербург, Россия; 2ФГБУ «НИИ гриппа»
Минздрава России, 197376, г. Санкт-Петербург, Россия
Вирус гриппа является ведущей причиной инфекционной респираторной патологии человека. Поиск и разработка новых противогриппозных препаратов широкого спектра активности - важная задача медицинской науки. Помимо собственно противовирусной активности соединений, большое значение имеет способ их использования. в настоящей работе изучена активность комбинации глутамил-триптофаном с глицирризино-вой кислотой (препарат ГТГК) при пероральном применении в отношении осельтамивирустойчивого штамма вируса А/Владивосток/2/09 (Н1Ш1) на модели летальной гриппозной инфекции у белых мышей. Показано, что пероральное применение ГТГК приводит к снижению специфической смертности животных (индекс защиты 43-50%), увеличению средней продолжительности жизни животных на 2,5-3,9 сут и снижению титров вируса в ткани легких на 1,5-1,9 1д ЕЮ50/2о мг в зависимости от дозы вируса. Соответствующие показатели для препарата сравнения тамифлю составили 14-25%, 1,1-1,9 сут и 0,7 1д ЕЮ50/20 мг. Применение ГТГК также приводило к достоверному повышению титров интерферона в крови инфицированных животных с 44,3 до 66,3 ед/мл. Результаты морфологического анализа показали, что курсовое пероральное введение ГТГК сопровождается нормализацией структуры ткани легких, ограничением признаков воспаления и цитодеструкции. Полученные данные позволяют рассматривать ГТГК как перспективное противогриппозное средство, активное в отношении лекарственно-устойчивых штаммов вируса и пригодное для перорального применения.
Ключевые слова: грипп; химиотерапия; глицирризиновая кислота; глутамил-триптофан; лекарственная устойчивость.
Для корреспонденции: Смирнов Вячеслав Сергеевич, д-р мед. наук, проф.; e-mail: vsmirnov@cytomed.ru Correspondence to: Vyucheslav Smirnov, MD, PhD, DSc, prof., e-mail: vsmirnov@cytomed.ru
