CC BY
30
2012, Т. 2, № 1-2
Современное лабораторное обеспечение.
тивогрибковым препаратам. Цель работы: идентификация и количественное определение грибов рода Candida, определение их чувствительности к анти-микотикам при обследовании амбулаторных пациентов. За 2010—2011 гг. исследовано 2073 пробы биологического материала от поликлинических больных г. Иркутска. Выделение грибов проводилось на среде Сабуро с последующей идентификацией на бактериологическом анализаторе «AutoScan4 System» (Siemens, USA). Определение чувствительности выделенных штаммов грибков к нистатину, амфотери-цину В, клотримазолу, кетоконазолу, интраконазо-лу, флюконазолу проводилось диско-диффузионным методом. В результате было выделено 172 (8,3% всех исследованных проб) культуры грибов рода Candida. Из общего числа культур 59,9% выделены из органов мочеполовой системы, 27,2% — из верхних дыхательных путей, 11,7% — из органов желудочно-кишечного тракта; культуры прочей локализации составили 1,2%. Среди выделенных культур, удельный вес C. albicans составил 86,1%, на долю C. non-albicans приходилось 13,9%, которые были представлены видами C. krusei, C. glabrata, C. tropicalis. Учитывали культуры грибов с концентрацией 104 колониеобра-зующих единиц (КОЕ) и выше в 1 мл исследуемого материала. Микст-инфицирование (грибы и бактериальная микрофлора) наблюдалось в 51,2% случаев. Выделенные штаммы C. albicans показали наибольшую чувствительность к нистатину (от 87,5 до 100%) вне зависимости от места выделения, наименьшую — интраконазолу (от 32,1 до 64,4%). Чувствительность к остальным антимикотическим препаратам колебалась от 38,4% (кетоконазол) до 84,6% (клотримозол). Таким образом, у амбулаторных пациентов наиболее часто обнаруживали C. albicans. Культуры этого микроорганизма, выделенные в г. Иркутске, характеризовались наибольшей чувствительности к анти-микотику полиенового ряда — нистатину, на фоне более низкой чувствительности к антимикотикам системного действия.
ПЕРСПЕКТИВЫ МОНИТОРИНГА БАКТЕРОИДОВ В ПЦР АНАЛИЗЕ ДЛЯ ОЦЕНКИ ФЕКАЛЬНОГО ЗАГРЯЗНЕНИЯ ПИТЬЕВОЙ ВОДЫ
А.Н. Карташева, Л.В. Черкасова, Г.А. Петрушанская, Р.А. Бурханов
Филиал ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в городе Москве» в САО города Москвы, Москва
Актуальность мониторинга фекального загрязнения воды обусловлена тем, что результаты бактериологического исследования санитарно-показательной и патогенной флоры в ряде случаев не совпадают (Ahmed W. с соавт., 2008). Описаны случаи вспышек кишечных инфекций на фоне отрицательных результатов санитарно-показательной флоры. По мнению экспертов ВОЗ, назрела необходимость в пересмотре критериев микробиологической безопасности воды и поиске более надежных лабораторных показателей (Nusca A соавт., 2008). С помощью ПЦР анализа в воде открытых водоемов и в водопроводной воде определяются токсоплазмы, хели-кобактер пилори, вирус гепатита А, энтеробактерии и энтеровирусы, риккетсии и легионеллы,многие из которых,по-видимому, нежизнеспособны и не представляют опасности. Вместе с тем, присутствие санитарно-показательных бактерий в воде в любой
форме свидетельствует о фекальном загрязнении воды и о потенциальной опасности контаминации воды патогенными микробами.Одним из перспективных тестов рассматривается индикация бактероидов, которые детектируются в воде открытых водоемов и в питьевой воде чаще других микроорганизмов (Ahmed W. с соавт. ,2008, Bower P. с соавт., 2005). Цель настоящего исследования заключалась в индикации ДНК бактероидов в водопроводной воде, в том числе горячей, бакпосевы которой, как правило, отрицательны.
В исследовании использованы ПЦР тест-системы производства НПФ «Литех» для определения ДНК бактероидов в режиме реального времени на амплификаторе Rotor 0епе-6000.Для пробообра-ботки использован ДНК-экспресс той же фирмы. Пробы водопроводной воды объемом 0,5Л предварительно концентрировали пропуская на вакуумной установке через фильтры с диаметром пор 0,45 мкм, после чего материал экстрагировали с поверхности фильтров и растворяли лизирующим буфером и далее следовали инструкции фирмы производителя для получения пробы ДНК. Все пробы воды параллельно исследовались на санитарно-показательную флору. В результате проведенных исследований из 36 проб воды в 4 обнаружена ДНК бактероидов (11%), при этом в 3 (из 30) в горячей и в 1 (из 6) в холодной воде. В бактериологическом исследовании все пробы были отрицательными. Дальнейшие исследования в этом направлении с применением количественного варианта ПЦР анализа позволят детально изучить информативность индикации бактероидов в воде для оценки ее безопасности.
ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ШТАММОВ ВОЗБУДИТЕЛЯ БРЮШНОГО ТИФА
Л.А. Кафтырева, С.А. Егорова, А.В. Семенов, Ю.В. Останкова, Ю.А. Артамонова
ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера, Санкт-Петербург
В настоящее время одним из методов генотипи-рования возбудителей инфекционных заболеваний, основанном на секвенировании, является MLVA (multiple-locus variable-number tandem-repeats analysis), который субтипирует штаммы, используя различия в числе тандемных нуклеотидных повторов в определенных локусах хромосомной ДНК. Метод обладает высокой дифференцирующей способностью и эпидемиологической конкордантностью.
С 2010 г. в референс-центре по мониторингу за возбудителем брюшного тифа проведено генотипирова-ние методом MLVA 65 штаммов S. Typhi, выделенных в 2005—2010 гг. на различных административных территориях РФ. Завозные случаи заболевания отмечались из Азербайджана (2006 г.), Таджикистана (2006, 2008, 2010 гг.), Абхазии (2008 г.), Кыргызстана (2010 г.), Узбекистана (2010 г.), Индии (2008, 2010 гг.), Бангладеш (2008 г.), Камбоджи (2008 г.), Египта (2008, 2010 гг.), ОАЭ (2008 г.), Пакистана (2008 г.), Непала (2010 г.) и др.
Популяция российских штаммов S. Typhi характеризовалась различными фенотипами резистентности к антимикробным препаратам и генетической неоднородностью. По результатам MLVA-генотипирования выявлено 8 кластеров (генотипов), характеризующихся репрезентативны-
Материалы X съезда ВНПОЭМП, Москва, 12-13 апреля 2012 г.
Инфекция и иммунитет
ми MLVA-профилями. Результаты MLVA-метода на основе используемых семи локусов были воспроизводимы и стабильны, что позволяет использовать этот метод для разделения на генотипы большого числа штаммов и создания компьютерной базы данных, содержащей информацию о генотипических профилях штаммов. Большинство штаммов (89,5%), характеризующихся идентичным глобально распространенным во многих странах фенотипом резистентности (сниженной чувствительностью к фтор-хинолонам), имели одинаковый MLVA-профиль, что позволило выделить их в один генотип. Такие штаммы ежегодно (2005—2010 гг.) выделялись от заболевших брюшным тифом на различных территориях РФ. Штаммы с другими фенотипами резистентно -сти или чувствительные к антибиотикам, выделенные в разные годы, относились к индивидуальным генотипам.
Полученные результаты указывают на то, что MLVA-анализ в сочетании с определением чувствительности к антибиотикам обеспечивают высокую информативность исследования штаммов возбудителей брюшного тифа и может быть рекомендован для выявления источника инфекции, путей и факторов передачи возбудителя при групповых и спорадических случаях данного заболевания. Результаты проведенной работы легли в основу создания российской базы данных биологических свойств (включая чувствительность к антимикробным препаратам выбора и генетическую характеристику), штаммов возбудителя брюшного тифа, зарегистрированного в РФ.
ИНФЕКЦИЯ, ОБУСЛОВЛЕННАЯ CLOSTRIDIUM DIFFICILE У ГОСПИТАЛИЗИРОВАННЫХ ДЕТЕЙ С ДИАРЕЕЙ
А.С. Кветная, М.К. Бехтерева, П.С. Макриди, О.И. Ныркова
ФГБУ«НИИДИФМБА России», Санкт-Петербург
Острые кишечные инфекции (ОКИ) по-прежнему остаются одними из наиболее частых инфекционных заболеваний у детей. Несмотря на ведущую роль вирусов в инфекционной патологии ЖКТ, не потеряли своей актуальности и бактериальные кишечные инфекции, но в тоже время за последние годы произошло значительное изменение их этиологической структуры. В настоящее время во всем мире как среди взрослых, так и среди детской популяции все большую актуальность приобретают антибиоти-коассоциированные диареи, в том числе, вызванные Clostridium difficile.
Клостридиоз диффициле — энтероколит (шифр МКБ 10 — A04.7), вызванный Clostridium difficile — острое инфекционное заболевание, вызываемое ан-тибиотикоиндуцированными штаммами Clostridium difficile, клинически проявляющееся симптомами инфекционного токсикоза, диареей вплоть до развития псевдомембранозного колита. Цель данного исследования — установить частоту встречаемости диарей у детей, вызванных токсинопродуцирующими штаммами Clostridium difficile. Исследование фекалий от детей, госпитализированных в клинику кишечных инфекций ФГБУ «НИИДИ ФМБА России», на обнаружение токсинов А&В Clostridium difficile с использованием анализатора «Vidas» проводилось у детей, у которых нельзя было исключить анти-
биотикоассоциированный характер диарей (68%) и у больных с затяжной диареей, сопровождавшейся недостаточным эффектом от проводимой традиционной стартовой терапии (амбулаторно). Всего было обследовано 217 пациентов, из них положительный результат был получен у 39 детей (18%), в том числе по клинико-лабораторным данным у 68% больных была диагностирована водянистая диарея, обусловленная Clostridium difficile, у 28,5% был верифицирован антибиотикоассоциированный колит, вызванный Clostridium difficile, а 1 пациент (2,56%) переносил псевдомембранозный колит.
97,5% пациентов были направлены в клинику с диагнозом «острая кишечная инфекция», средний возраст пациентов составил 3,65+0,55 лет, преобладали мальчики — 67%. У 52% детей выявление токсинов А&В Clostridium difficile сочеталось с обнаружением в фекалиях других этиологических агентов: диареегенных вирусов (ротавирусы, норовирусы, астровирусы) в ПЦР, патогенных (сальмонелл, диа-реегенных эшерихий, кампилобактерий) и условно-патогенных бактерий (клебсиелл) — в ПЦР или с помощью классического бактериологического метода.
ОЦЕНКА МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНОГО СОСТОЯНИЯ СЛИЗИСТЫХ ОБОЛОЧЕК НОСО- И РОТОГЛОТКИ В ПРОГНОЗИРОВАНИИ ИСХОДОВ ИНФЕКЦИОННОЙ ПАТОЛОГИИ У ДЕТЕЙ
А.С. Кветная, Л.И. Железова, О.С. Калиногорская
ФГБУ «НИИДИ ФМБА России», Санкт-Петербург
Положения и концепция последних лет об адап-тационно-регуляторных механизмах взаимодействия, определяющих антиинфекционную резистентность слизистых оболочек на начальном этапе развития инфекционного процесса, явились научным обоснованием разработанного в НИИ детских инфекций алгоритма оценки морфофункциональ-ного состояния слизистой носо-ротоглотки, основанный на качественных и количественных показателях клеточного состава секрета слизистой, степени деструкции эпителия, показателей колонизационной резистентности слизистой — индекса инфицирования (ИИ) и показателей колонизационной активности возбудителя и УПМ — индекса адгезии (ИА), показателей фагоцитарной активности ПМЯЛ и мононуклеаров — фагоцитарной активности (ФА) и фагоцитарного индекса (ФИ), уровней электрокинетической активности ядер эпи-телиоцитов (ЭлА) и IgA в секрете слизистой в прогнозировании исходов инфекционной патологии у детей. Эффективность разработанного алгоритма изучена на материале от больных детей с дифтерией (116 проб) и коклюшем (529 проб). Установлено, что отсутствие деструктивных процессов на слизистой ротоглотки, высокая степень колонизации C. diphtheriae, наличие полинуклеаров с фагоцитарной активностью по отношению, например, к S. aureus — критерии для подтверждения диагноза «ангина + бактерионосительство токсигенных дифтерийных палочек». Высокие показатели ЭЛА ядер буккаль-ного эпителия определяет благоприятный исход течения дифтерии. Низкие уровни ЭЛА формируют затяжные формы дифтерийного бактерионосительства. Выраженные деструктивные процессы, низкие показатели колонизационной резистентности слизистой, высокий ИА возбудителя и УПМ, снижение
