Газохроматографическое определение жирных кислот в сухой сыворотке крови Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

5. Мухин А. // Рус. мед. журн. -1997. - Т. 5, № 3. - С. 184-185.

6. Рейнгардене Д. И., Пилвинис В. К., Стасюкинене В. Р. // Тер. арх. - 2004. - № 11. - С. 97-99.

7. Терещенко И. В. // Клин. мед. - 2008. - № 7. - С. 47-51.

8. Титов В. Н. // Клин. лаб. диагн. - 1995. - № 2. - С. 3-7.

9. Титов В. Н. // Успехи соврем. биол. - 2008. - Т. 128, № 5. - С. 435-452.

10. Эндокринология и метаболизм / Под ред. Ф. Фелига и др. - М., 1985.

11. Holm C. N., Jepsen J. M., SjogaardG., HessovI. // Hum. Nutr. Clin. Nutr. - 1987. - Vol. 41, N 4. - P. 301-306.

12. http://www.severyanka.spb.ru/

13. Mansmann H. C. // Lab. Diagn. Magnesium Deficiency. http://bart-tersite.org 2008, June 8.

14. Trauninger A., PfundZ, Koszegi T., Czopf J. // Headache. - 2002. -Vol. 42, N 2. - P. 114-119.

Поступила 30.06.11

© И. А. ПЕТРОВА, Л. В. КУЗНЕЦОВА, 2012 УДК 616.153.295-074:543.544.45

И. А. Петрова, Л. В. Кузнецова

газохроматографическое определение жирных Кислот в сухой сыворотке Крови

ФГУН Нижегородской НИИ гигиены и профессиональной патологии Роспотребнадзора

Разработан газохроматографический способ определения состава жирных кислот (ЖК) в сухой сыворотке крови. Проведен сравнительный анализ содержания кислот в свежеотобранной и сухой сыворотке. Изучена стабильность состава ЖК в сухой сыворотке при ее хранении в течение 2 мес. Показано, что качественный и количественный состав ЖК в свежей и сухой сыворотке идентичен и остается неизмененным в течение 1 мес.

Ключевые слова: жирные кислоты, газохроматографический анализ

I.A. Petrova, L.V. Kuznetsova THE GAS CHROMATOGRAPHY DETECTION OF FAT ACIDS IN DRY BLOOD SERUM The article discusses the development ofgas chromatography method of detecting the composition of fat acids in dry blood .serum. The comparative analysis of con-tent of fat acids in freshly selected and dry serum. The stability of composition of fat acids in dry serum under its conservation during 2 months was examined. It is demonstrated that qualitative and quantitative compound of fat acids in fresh and dry serum is identical and continue to be unchanged during one month.

Key words: fat acid, gas chromatography analysis

При оценке метаболических нарушений и диагностике разных заболеваний, связанных с изменением обменных процессов, в медицинских исследованиях часто применяется газохроматографическое определение качественного и количественного состава жирных кислот (ЖК) в биологических средах человека. В качестве анализируемого материала используют желчь, пот [6], кровь [2, 4], конденсат выдыхаемого воздуха [5], а также биоптаты кожи [3]. Однако в большинстве случаев анализируют сыворотку крови. При проведении массовых исследований не всегда удается выполнить анализ в день отбора пробы, кроме того, часто возникает необходимость в повторении анализа. Поэтому вопрос сохранения образцов сыворотки является актуальным. В настоящее время для этих целей прибегают к замораживанию сыворотки при -20- -18°С. Однако известен и другой способ хранения сыворотки - в сухом виде. Такой способ был применен для получения ИК-спектров крови при разработке способов ранней диагностики ряда заболеваний [1].

Задача: разработка газохроматографического метода определения состава жирных кислот (ЖК) в сухой сыворотке крови, сравнительный анализ содержания кислот в свежео-тобранной и сухой сыворотке, оценка стабильности ЖК в

Для корреспонденции:

Петрова Ирина Александровна, мл. науч. сотр.

Адрес: 603005, Н. Новгород, ул. Семашко, 20

Телефон: 436-35-93

E-mail:[email protected]

сухой сыворотке. Отобрано и проанализировано 12 образцов крови.

Материалы и методы. Венозную кровь для исследований отбирали в шприц в количестве 10 см3 утром натощак. К 2 см3 крови добавляли равный объем антикоагулянта (3% водный раствор цитрата натрия) и отделяли плазму от эритроцитов центрифугированием в течение 5 мин со скоростью 3000 об/ мин. Оставшуюся в шприце кровь оставляли на сутки в темноте при комнатной температуре до полного оседания эритроцитов. Затем верхний слой сыворотки в количестве 2 см3 помещали на чашку Петри и оставляли для высыхания при 18-20°С. Высушенную таким образом сыворотку растирали в фарфоровой ступке, помещали в бюксы и хранили в темноте при комнатной температуре.

При проведении сравнительного анализа состава ЖК свежей и сухой сыворотки крови использовали 0,5 см3 плазмы с антикоагулянтом и 0,05 г сухой сыворотки. Дальнейшую пробоподготовку свежей и сухой сыворотки крови проводили в идентичных условиях. Пробу помещали в пробирку и экстрагировали двумя объемами (по 4 см3) метанол-эфирной смеси (3:1) путем встряхивания в течение 20 мин на перемешивающем устройстве. Экстракты объединяли, помещали в стеклянный пузырек, упаривали досуха в потоке азота на водяной бане при 70°С. К сухому остатку доливали 5 см3 1% серной кислоты в метаноле, пузырек закрывали пробкой с фторопластовой прокладкой, помещали в металлический патрон с герметично закрывающейся крышкой и термостатировали при 80°С 30 мин. После инкубации пробу охлаждали и извлекали метиловые эфиры ЖК: добавляли по 1 см3 дистиллированной воды и гексан-эфирной смеси (1:1), интенсивно встряхивали 5 мин, далее для более чет-

БИОХИМИЯ

Свежая сыворотка Сухая сыворотка через один месяц хранения

Свежевысушенная сыворотка ЦЩ Сухая сыворотка через два месяца хранения

Жирно-кислотный состав сыворотки крови.

Результаты сравнительного анализа ЖК в свежей и сухой сыворотке крови

№ пробы Содержание жирных кислот, масс%

12:0 14:0 15:0 15:1 16:0 17:0 17:1 18:0 18:1 18:2 18:3 20:0

1 Свеж. 0,15 1,50 0,33 2,63 30,07 0,17 0,15 18,27 35,21 7,98 0,52 3,03

Сух. 0,12 1,38 0,22 2,63 30,80 0,23 0,16 18,75 33,11 9,33 0,58 2,70

2 Свеж. 0,12 1,03 0,46 2,16 25,43 0,57 0,71 30,10 24,22 10,49 0,40 4,31

Сух. 0,11 0,86 0,22 2,62 25,24 0,33 0,55 26,54 26,64 10,55 1,11 5,21

3 Свеж. 0,28 1,06 0,17 2,34 27,16 0,38 0,25 30,63 19,31 11,06 1,20 6,15

Сух. 0,13 0,87 0,33 2,55 30,03 0,23 0,05 26,98 27,08 10,02 0,42 1,31

4 Свеж. 0,28 1,06 0,17 2,34 24,16 0,38 0,25 33,63 19,31 11,06 1,20 6,15

Сух. 0,32 1,20 0,26 2,87 27,02 0,51 0,50 26,84 21,48 12,19 1,16 5,64

5 Свеж. 0,18 0.81 0,26 0,92 26,33 0,23 0,24 37,17 18,03 10,18 1,00 4,64

Сух. 0,15 0,76 0,16 0,92 24,22 0,51 0,20 35,42 21,52 9,82 0,60 5,73

6 Свеж. 0,53 0,74 1,20 2,48 30,26 1,26 1,46 28,67 22,80 8,77 0,00 1,83

Сух. 0,40 0,64 0,55 2,15 30,98 1,05 1,00 29,21 24,82 7,62 0,00 1,59

7 Свеж. 0,07 0,96 0,15 2,33 26,78 0,52 0,57 26,67 27,49 9,33 0,20 4,95

Сух. 0,09 1,00 0,17 2,49 26,23 0,33 1,02 27,90 26,69 8,29 0,99 4,80

8 Свеж. 0,13 0,62 0,07 2,67 22,75 0,14 0,32 30,89 23,32 8,44 1,66 9,00

Сух. 0,19 0,59 0,13 2,16 24,36 0,40 0,41 29,90 24,30 8,52 1,36 7,69

9 Свеж. 0,12 0,83 0,11 3,29 24,57 0,54 0,11 31,81 24,14 9,51 0,32 4,66

Сух. 0,19 0,80 0,19 3,16 24,25 0,74 0,15 30,89 25,77 8,58 0,71 4,57

10 Свеж. 0,25 0,73 0,09 1,23 24,55 0,35 0,28 38,21 23,38 8,21 0,34 2,36

Сух. 0,28 0,67 0,24 1,59 26,56 0,70 0,03 36,51 21,62 8,76 0,40 2,65

11 Свеж. 0,54 1,16 0,37 0,65 27,54 0,40 0,30 9,29 17,51 41,13 0,68 0,42

Сух. 0,15 0,68 0,25 0,79 27,20 0,31 0,43 8,45 17,92 42,99 0,30 0,52

12 Свеж. 0,11 0,86 0,36 0,51 24,50 0,44 0,24 8,46 17,34 46,60 0,31 0,26

Сух. 0,13 0,79 0,33 0,43 24,31 0,37 0,19 8,42 18,64 45,89 0,26 0,25

кого разделения фаз вносили 1 см3 0,74% водного раствора Измерения проводили на газовом хроматографе. Кристалл

хлорида калия. В испаритель хроматографа вводили 1 мкл 5000.1 с пламенно-ионизационным детектором и капиллярной гексан-эфирного слоя. колонкой Zebron 30 м х 0,32 мм х 0,5 мкм с привитой фазой

5% фенол - 95% диметилполисилоксан. Условия анализа: температура колонки 190°С, температура испарителя 200°С, температура детектора 200°С. Идентификацию ЖК осуществляли по времени удерживания с использованием стандартных образцов. Обработку хроматографических данных проводили на аппаратно-программном комплексе Хроматэк-Аналитик. Результаты выражали в относительных процентах от общей суммы ЖК. Данные статистически обрабатывали в программе Statistica 6.1 с применение парного критерия Стьюдента.

Результаты и обсуждение. В исследованных пробах крови (свежей и сухой) идентифицировано 12 ЖК: лауриновая С 0, миристиновая С0, пентадекановая С , пентадекае-новая С , пальмитиновая С , маргариновая С , гептаде-канолевая С , стеариновая С , олеиновая С , линолевая С2, линоленовая С , арахиновая С . При высушивании и хранении сыворотки крови до 2 мес качественный состав ЖК не меняется.

Результаты сравнительного анализа количественного содержания ЖК в свежей и сухой сыворотке представлены в таблице. Рассчитанный для каждой кислоты парный критерий Стьюдента показал, что их концентрации в свежей и сухой сыворотке являются результатом разброса одной величины (р < 0,05).

С целью оценки стабильности состава ЖК прово-

дили повторный анализ сухой сыворотки через 1 нед, 2 нед, 1мес и 2 мес хранения. Как видно из рисунка, при хранении сухой сыворотки в течение 1 мес не наблюдается изменение содержания ЖК. Однако через 2 мес хранения фиксируется увеличение содержания пальмитиновой, олеиновой и линолевой кислот на фоне снижения уровня стеариновой, линоленовой и арахиновой кислот. Расчет парного критерия Стьюдента подтвердил достоверность изменений количества указанных кислот по истечении 2 мес.

ЛИТЕРАТУРА

1. Гордецов А. С. // Соврем. технол. в мед. - 2010. - № 1. - С. 84-98.

2. Мансурова И. Д., Брюзгина Т. С., Рева С. Н. // Клин. лаб. диагн.

- 1998. - № 6. - С. 17-18.

3. Матусис П. И. // Лаб. дело. - 1988. - № 6. - С. 26-30.

4. Новгородцева Т. П., Караман Ю. К., Жукован Н. В. и др. // Клин.

лаб. диагн. - 2010. - № 10. - С. 20-21.

5. РыбаковаЕ. В., Сидельников В. И. // Лаб. дело. - 1991. - № 4. - С.

74-75.

6. Соловская С. С., Варус В. И., Брюзгина П. С. // Клин. лаб. диагн.

- 2007. - № 5. - С. 20-21.

Поступила 03.05.11

© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2012 УДК 616.9-022-053.1-078.33

И. А. Ботвиньева, Л. В. Ренге, Р. М. Зорина, Л. Г. Баженова, В. Н. Зорина

белки острой фазы воспаления в прогнозе состояния новорожденного при беременности, осложненной многоводием, и при риске внутриутробной инфекции

МЛПУ Зональный перинатальный центр, Новокузнецкий государственный институт усовершенствования врачей Росздрава

Изучено содержание а2-макроглобулина (МГ), ассоциированного с беременностью а-гликопротеина (АБГ), а-антитрипсина (АТ) и лактоферрина (ЛФ) в сыворотке крови беременных женщин и пуповинной сыворотке при многоводии и риске развития внутриутробной инфекции у плода (ВУИ). Показано, что при наличии в крови беременной G-антител к C. trachomatis в низких титрах (1:20, 1:40) повышение уровня МГ, АБГ, АТ и особенно ЛФ в сывороте беременных свидетельствует о высоком риске наличия ВУИ и вероятности рождения ребенка с низкой оценкой по шкале Апгар.

Ключевые слова: беременность, внутриутробная инфекция, Chlamydia trachomatis, лактоферрин, белки острой фазы, многоводие

I.A. Botvinyeva, L.V. Renge, R.M. Zorina, L.G. Bazhenova, V.N. Zorina

THE PROTEINS OF FAST PHASE OF INFLAMMATION IN PROGNOSIS OF CONDITION OF NEWBORN IN CASE OF PREGNANCY COMPLICATED BY HYDRAMNION AND UNDER THE RISK OF INTRAUTERINE

INFECTION

The content of a-macroglobulin associated with pregnancy, a2-glycoprotein, a1-antitripsin, and lactoferrin in blood serum of pregnant women and umbilical serum under hydramnion and risk of development of intrauterine infection of fetus is in-vestigated. It is demonstrated that in case of presence in blood of pregnant woman of G-antibodies to C. trachomatis under low titers (1:20, 1:40) the increase of lev-els of a-macroglobulin, a2-glycoprotein, a1-antitripsin and especially of lactoferrin in serum of pregnant women testifies the high risk ofpresence of intrauterine in-fection of fetus and probability of birth of child with low values on Apgar scale.

Key words: pregnancy, intrauterine infection, chlamydia trachomatis, lactoferrin, acute phase proteins, hydramnion

В структуре смертности новорожденных инфекционная патология является определяющей (от 11 до 45% случаев), при этом мертворождаемость достигает 16%. В среднем вну-

Для корреспонденции:

Ботвиньева Ирина Анатольевна, зав. клин-диагн. лабораторией Адрес: 654 005, Новокузнецк Кемеровской обл., ул. Сеченова, 26 Телефон: 79-69-38

триутробно инфицированы от 27 до 36% детей, рожденных живыми, в числе которых более 2/3 недоношенных [1]. Необходимо учитывать, что большая часть заболеваний беременных, приводящих к внутриутробному инфицированию плода, протекает в субклинической форме, что значительно затрудняет диагностику патологии в антенатальном периоде. Особенности клинического течения внутриутробной инфекции плода, включающие многофакторное (специфическое и неспецифическое) воздействие инфекционного агента