CC BY
62
ЛИТЕРАТУРА
1. Гумарова Ж.Ж. Эколого-гигиеническая опасность химического загрязнения твердых бытовых отходов //
Гигиена и санитария. — 2006. — № 2. — С.22-25.
2. Гумарова Ж.Ж., Русаков Н.В. О санитарно-эпидемиологической опасности твердых бытовых отходов // Ги-
Адрес для переписки:
664003, г. Иркутск, ул. Красного Восстания, 1, Игнатьева Лариса Павловна — заведующая кафедрой коммунальной гигиены и гигиены детей и подростков, д.б.н., профессор, т. (3952) 24-07-78
гиена и санитария. — 2006. — № 1. — С.64-65.
3. СекундаА.А., ИгнатьеваЛ.П. Оценка минерального состава воды реки Ангары как основного источника водоснабжения населения г. Иркутска // Вопросы экспериментальной и клинической медицины. — Иркутск, 2004. - С.52-53.
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ РЛСТЕНИЯ
© ШАНТАНОВА Л.Н., РАЗУВАЕВА Я.Г., ТОРОПОВА А.А., АЖУНОВА Т.А., НИКОЛАЕВ С.М. - 2008
ГАСТРОПРОТЕКТИВНОЕ ДЕЙСТВИЕ «ВЕНТРОФИТА» ПРИ СТРЕСС-ИНДУЦИРОВАННОМ ПОВРЕЖДЕНИИ ЖЕЛУДКА
Л.Н. Шантанова, Я.Г. Разуваева, А.А. Торопова, Т.А. Ажунова, С.М. Николаев (Институт общей и экспериментальной биологии СО РАН, г. Улан-Удэ, директор — д.б.н., проф. Л.Л. Убугунов)
Резюме. Определено гастропротективное действие комплексного растительного средства «Вентрофит» при стресс-индуцированном повреждении желудка. Установлено, что «Вентрофит» препятствует повреждению слизистой оболочки желудка, ингибируя процессы перекисного окисления липидов (ПОЛ) и повышая активность антиоксидантной системы организма. Кроме того, исследуемое фитосредство оказывает неспецифическое протекторное действие, предотвращая повреждение внутренних органов животных «триады Селье».
Ключевые слова: иммобилизационный стресс, язвенная болезнь, антиоксиданты.
GASTROPROTECTIVE ACTION OF «VEUNTROPHYTE» IN STRESS - INDUCED DAMAGE OF A STOMACH
L.N. Shantanova, J.G. Razuvaeva, A.A. Toropova, T.A. Azhunova, S.M. Nikolaev (Institute of the General and Experimental Biology of the Siberian Branch of the Russian Academy of Science,
Ulan-Ude)
Summary. It has been determined gastroprotective action of complex vegetative remedy «Ventrophyte» in stress - induced damage of a stomach. It is established, that «Ventrophyte» prevents damage of a mucous membrane of a stomach, inhibiting processes lipid peroxidation (FLOOR) and raising activity of antioxidant system of an organism. Besides researched phytoremedy renders nonspecific protective action, preventing damage of internal bodies of animals «triads Selje».
Key words: immobilisation stress, a stomach ulcer, antioxidizers.
В последнее время становится все более очевидной роль эмоционального стресса (ЭС) и активации стресс-реализующей системы в этиологии язвенной болезни желудка и других патологических состояний. Так, в результате эмоционального стресса в организме происходит чрезмерное образование свободных радикалов и последующее усиление процессов свободнорадикального окисления (СРО), сопровождающихся морфофункциональными нарушениями биологических мембран. На уровне желудочно-кишечного тракта индукция СРО приводит к образованию язвенных поражений желудка и двенадцатиперстной кишки [6,10,12,14].
В настоящее время основным методом комплексного лечения гастропатий является лекарственная терапия, воздействующая одновременно на различные звенья язвообразования. Одним из рациональных подходов к решению данной проблемы является применение средств растительного происхождения, имеющих ряд преимуществ перед химиопрепаратами: поливалентностью действия, низкой токсичностью, отсутствием негативных побочных эффектов при длительном приеме
[4,11].
В отделе биологически активных веществ ИОЭБ СО РАН разработано комплексное гастропротективное
средство на основе широко применяемых в гастроэнтерологической практике растений, условно названное «Вентрофит». В его состав входят сухие экстракты девяти видов лекарственных растений: Сгataegus sanguinea Pall. (плоды); Inula helenium L. (корни); Calendula officinalisL. (соцветия); Hippophae rhamnoidesL. (плоды); Glycyrrhiza uralensis Fisch. (корни); Rosa sp. (плоды); Plantago major L. (листья); Gnaphalium uliginosum L. (трава); Coriandrum sativum L. (плоды).
Целью данной работы явилось изучение гастропро-тективной активности растительного средства «Вентрофит» при экспериментальном стресс-индуцирован-ном повреждении желудка.
Материалы и методы
Эксперименты проведены на крысах линии Wistar обоего пола массой 180-200 г. Модель иммобилизационного стресса воспроизводили общепринятым методом путем фиксации животных в положении на спине в течение 24 часов [17]. «Вентрофит» в форме водного раствора в дозе 50 мг/кг вводили внутрижелудочно животным опытных групп в течение 7 дней до иммобилизации 1 раз в сутки, последнее введение осуществляли за 1 час до стрессорно-го воздействия. Крысы контрольной группы получали эквивалентное количество дистиллированной воды по аналогичной схеме. В качестве препарата сравнения исполь-
зовали плантаглюцид (ПГ), представляющий собой сухой экстракт из листьев подорожника, применяемый в медицине для лечения язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки при нормальной или пониженной кислотности [7,9]. Препарат сравнения применяли в дозе 300 мг/кг.
Выраженность стрессорных повреждений внутренних органов определяли путем оценки классической «триады Селье»: степени гипертрофии надпочечников, инволюции тимуса, появлению язвенных поражений в слизистой оболочке желудка (СОЖ). Деструкции СОЖ подразделяли на точечные кровоизлияния и эрозии. Рассчитывали среднее количество каждого вида деструкций на 1 животное в группе. Для каждого вида повреждений подсчитывали интегральный показатель масштабов деструкции — индекс Паулса (ИП) [1].
Для проведения гистологических и гистохимических исследований материал фиксировали в 10% нейтральном формалине, обезвоживали в спиртах восходящей концентрации и заливали в целлоидин-парафин. Срезы окрашивали гематоксилин-эозином, азур-эозином, по ван Гизону, толуидиновым синим и основным коричневым [7]. Для определения степени повреждения на гистологических срезах, окрашенных азур-эозином, проводили подсчет количества полиморфно-ядерных лейкоцитов (ПЯЛ) в СОЖ, количество тканевых базофилов (ТБ) в мышечной оболочке желудка и степень их дегрануляции.
Для оценки влияния «Вентрофита» на состояние анти-оксидантной системы организма и процессов перекисно-го окисления липидов (ПОЛ) в крови определяли активность каталазы [3] и супероксиддисмутазы (СОД) [16], содержание восстановленного глутатиона [17] и ТБК-актив-ных продуктов [15].
Полученные данные обработаны статистически с использованием Ц-критерия Манна-Уитни [5,13]. Различия считали значимыми при р<0,05.
Результаты и обсуждение
Результаты исследований показали, что 24-часовая иммобилизация белых крыс сопровождается развитием комплекса дистрофических изменений внутренних органов, характерных для стрессорной реакции, т.н. «триады Селье»: инволюцией иммунокомпетентных органов, гипертрофией надпочечников и появлением деструкций в СОЖ. Так, у крыс контрольной группы масса тимуса и селезенки снижается на 32 и 40%, а масса надпочечников увеличивается в 1,5 раза по сравнению с данными у интактных животных (табл. 1). В слизистой оболочке желудка крыс контрольной группы на-
Влияние «Вентрофита» на выраженность изменений внутренних органов белых крыс при иммобилизационном стрессе
Таблица 2
Влияние «Вентрофита» на выраженность повреждений слизистой оболочки желудка белых крыс при стресс-индуцированном повреждении
Группы животных Индекс Паулса
точечные кровоизлияния эрозии
Контрольная (стресс + Н2О) (п=10) 22,2 30,2
Опытная (стресс+ «Вентрофит») (п=10) 0,20 2,0
Опытная (стресс+ плантаглюцид) (п=10) 10,7 6,9
Группы животных Масса, мг|100 г
тимуса надпочечников селезенки
Интактная (п=8) 153,5+7,21 20,0+1,54 991,2+13,62
Контрольная (стресс+Н20) (п=10) 104,4+9,80 31,1+1,06 594,4+25,05
Опытная (стресс+ «Вентрофит») (п=10) 135,6+10,40* 22,5+1,03* 850,0+20,14*
Опытная (стресс+ плантаглюцид) (п=10) 119,6+7,10 21,3+2,42* 635,3+57,08*
Примечание: здесь и далее * - различия значимы по сравнению с показателями у живот ных контрольной группы при р<0,05, п-количество животных в группе.
блюдается появление деструктивных повреждений в виде эрозий и точечных кровоизлияний, индекс Паулса для которых составляет 30,2 и 22,2 соответственно (табл. 2).
Профилактическое введение «Вентрофита» на фоне нейрогенного язвенного повреждения желудка, оказывает выраженное антистрессорное действие, о чем свидетельствует уменьшение выраженности «триады Селье»: масса надпочечников уменьшается на 28%, масса тимуса и селезенки увеличивается соответственно на 29 и 43% по сравнению с данными у животных конт-
рольной группы (табл. 1).
Наряду с этим, превентивное введение испытуемого средства оказывает гастропротективное действие, задерживая развитие деструкций слизистой оболочки желудка белых крыс. Так, индекс Паулса для точечных кровоизлияний у животных, получавших «Вентрофит», меньше, чем таковой у животных контрольной группы и животных, получавших плантаглюцид, и составляет
0,2 против 22,2 и 10,7 (табл. 2).
Патоморфологическое исследование желудка крыс контрольной группы показало, что 24-часовой иммо-билизационный стресс, приводит к возникновению структурных дефектов СОЖ в виде эрозий во всех отделах желудка. Эрозии характеризуются некрозом и отторжением эпителия с интенсивной воспалительной инфильтрацией, представленной в основном ПЯЛ, что является одним из основных критериев воспалительного процесса. Морфометрический анализ СОЖ показал, что у животных контрольной группы количество ПЯЛ в поле зрения составляет 7,6±0,67, что в 2,5 раза больше такового у животных интактной группы (табл. 3).
На фоне курсового введения «Вентрофита» воспалительные изменения в стенке желудка менее выражены, в клеточном составе также доминируют ПЯЛ, равномерно пронизывая слизистую оболочку желудка. Количественный анализ показал, что содержание полиморфно-ядерных лейкоцитов в собственной пластинке СОЖ и в подслизистой основе у крыс, получавших
Таблица 1 исследуемое средство и план-
таглюцид, на 36 и 25% соответственно ниже по сравнению с таковым у животных контрольной группы (табл. 3).
Об интенсивности воспалительного процесса можно также судить по функциональной активности популяции ТБ, биологически активные вещества которых влияют на систему микроциркуляции, проницаемость капилляров и функциональное состояние клеток (лимфоцитов, гистиоцитов, фибробла-стов и эндотелиоцитов), которые непосредственно участвуют в повреждении СОЖ [2]. Показано, что курсовое введение «Вентрофита» сопровождается уменьшением количества тканевых базофилов на 58%, а также снижением степени их дегрануляции на 16% по сравнению с аналогичными показателями у животных контрольной группы (табл. 3). Показано, что противовоспалительное действие испытуемого фитосредства было сопоставимо с эффективностью препарата сравнения.
Установлено также, что введение «Вентрофита» на фоне стресс-индуцированной язвы оказывает выражен-
Таблица 3
Влияние «Вентрофита» на выраженность воспалительных изменений в стенке желудка у белых крыс при стресс-индуцированном повреждении
Группы животных Содержание ПЯЛ в 1 поле зрения СОЖ Тканевые базофилы
общее количество количество дегранули- рованных % дегрануляции
Интактная (п=8) 3,1±0,58 18,5+0,87 3,0+0,11 16,2
Контрольная (стресс+Н20) (п=10) 7,6±0,67 74,3+6,91 38,3+3,06 51,5
Опытная (стресс+ «Вентрофит») (п=10) 4,9±0,32* 31,0+2,13* 11,0+1,09* 35,5
Опытная (стресс+ плантаглюцид) (п=8) 5,7±0,12* 37,6+2,17* 13,6+1,14* 36,1
Таким образом, полученные данные свидетельствуют о том, что растительное средство «Вентрофит» обладает гастропро-тективным действием, препятствуя развитию деструкции слизистой оболочки желудка и способствуя ускорению регенерации стенки желудка на фоне иммобилизаци-онного стресса. Морфологическим подтверждением гаст-ропротективного
ное антиоксидантное действие, ингибируя процессы ПОЛ. В частности об этом свидетельствует снижение концентрации ТБК-активных продуктов сыворотке крови крыс опытной группы на 39% по сравнению с данными у животных контрольной группы (табл. 4).
Очевидно, что одним из аспектов антиоксидантно-
действия исследуемого фитосредства является снижение количества полиморфно-ядерных лейкоцитов в СОЖ, а также количества и степени дегрануляции тканевых базофилов в мышечной оболочке желудка. Можно полагать, что гастрозащитное действие «Вентрофита» обусловлено его неспецифическим стресс-протек-
тивным дейТаблица 4 ствием, связан-
Влияние «Вентрофита» на показатели перекисного окисления липидов и состояние ньш с °граниче-
антиоксидантной системы белых крыс при стресс-индуцированном повреждении тавТ и^^как
центральных, так и периферических механизмов стресс-реа-лизующих систем при нейрогенном язвенном повреждения желудка. В частности на это указывает уменьшение выраженности таких компонентов «триады Се-лье» как гиперт-
Группы животных Показатели
Соде ржание Активность
ТБК-активные продукты, нмоль/мл восстановленный глутатион, мкмоль/мл СОД, мкмоль/мл каталаза, мкат/л
Интактная (п=8) 7,4+0,48 354,2+25,81 21,1+1,10 1,7+0,05
Контрольная (стресс + Н20) (п=10) 14,9+0,38 218,8+19,03 6,7+0,52 1,1+0,07
Опытная (стресс + «Вентрофит») (п=10) 9,1+0,90* 295,6+18,55* 15,0+0,82* 1,5+0,02*
Опытная (стресс + плантаглюцид) (п=8) 11,3+0,23* 234,2+15,41 10,5+0,43* 1,2+0,09
го действия «Вентрофита» является его способность активировать антиоксидантную систему организма. Так, у животных получавших исследуемое средство, наблюдается увеличение содержания восстановленного глу-татиона в крови на 35%, а также повышение активности каталазы и СОД соответственно на 36% и в 2,2 раза по сравнению с аналогичными показателями у животных контрольной группы. Препарат сравнения — плантаглюцид оказывает менее выраженное антиоксидант-ное действие: концентрация ТБК-активных продуктов под его влиянием снижается на 24%, а содержание восстановленного глутатиона и активность каталазы в крови увеличивается на 6 и 9% соответственно по сравнению с данными контрольной группы (табл. 4).
рофия надпочечников и инволюция иммунокомпетен-тных органов животных. Периферическим молекулярно-клеточным механизмом стресс-протективного действия «Вентрофита» является ингибирование процессов свободнорадикального окисления, повышение потенциала эндогенной антиоксидантной системы организма. Следует отметить, что фармакотерапевтическое действие испытуемого фитоэкстракта сопоставимо, а по ряду параметров превосходит эффекты препарата сравнения — плантаглюцида, что обусловливает перспективность его дальнейших исследований и внедрения в клиническую практику в качестве нового эффективного средства, предназначенного для лечения и профилактики язвенной болезни желудка.
ЛИТЕРАТУРА
1. Амосова Е.Н., Зуева Е.П., Разина Т.Г. и др. Поиск новых противоязвенных средств из растений Сибири и Дальнего Востока // Эксперим. и клин. фармакол. — 1998.
- Т61, № 6. - С.31-35
2. Аруин Л.И., Капуллер Л.Л., Исаков В.А. Морфологическая диагностика болезней желудка и кишечника. — М., 1998. — 483 с.
3. КоролюкМ.А., ИвановаЛ.И., МайороваИ.Г., ТокаревВ.Е. Метод определения активности каталазы // Лаб. дело.
— 1988. — №° 6. — С.16-19.
4. Крылова С.Г., Зуева Е.П., Разина Т.Г. и др. Перспективы создания новых противоязвенных препаратов из растений Сибири и Дальнего Востока // Бюлл. эксперим. биол. и медицины. — 2003. — № 2. — С.5-11.
5. Майборода А.А., Калягин А.Н., Зобнин Ю.В., Щербатых
А.В. Современные подходы к подготовке оригинальной статьи в научный журнал медико-биологической направленности в свете концепции «доказательной медицины» // Сибирский медицинский журнал (Иркутск). — 2008. — Т76, № 1. — С.5-8.
6. Махакова Г.Ч., Орлов В.А., Николаев С.М. Фармакологическая регуляция свободнорадикальных процессов при язвенной болезни. — Улан-Удэ, 2001. — 196 с.
7. Машковский М.Д. Лекарственные средства: Пособие для врачей. — М.: Новая волна, 2002. — 459 с.
8. Микроскопическая техника: Руководство / Под ред. Д.С. Саркисова, Ю.Л. Перова. — М.: Медицина, 1996.
— 544 с.
9. Минаева В.Г. Лекарственные растения Сибири. — Новосибирск, 1991. — 431 с.
10. Опарин А.Г., Опарин А.А. Окислительный стресс в механизме реализации психосоматических расстройств
при дуоденальной язве у студентов // Тер. архив. — Т. 77, № 2. — С.25-28.
11. Пушкарский С.В., Пашинский В.Г., Поветьева Т.Н. и др. Стресс-модулирующий эффект алкалоидов АсотШш Ъаюа1ете (Капипси1асеае) при воспалении и иммобилизации // Раст. ресурсы. — 2006. — Вып. 2. — С.115-119.
12. Пшенникова М.Г. Феномен стресса. Эмоциональный стресс и его роль в патологии // Пат. физиол. и экспе-рим. терапия. — 2001. — № 1. — С.29-31.
13. Сергиенко В.И., Бондарева И.Б. Математическая статистика в клинических исследованиях. — М., 2000. — 263 с.
14. Судаков К.В. Индивидуальная чувствительность к эмоциональному стрессу. — М., 1998. — 179 с.
15. ТемирбулатовР.А., СелезневЕ.И. Метод повышения ин-
Адрес для переписки:
тенсивности свободнорадикального окисления липидсодержащих компонентов крови и его диагностическое значение // Лаб. дело. — 1981. — № 4. — С.209-211.
16. Чевари С., Чаба И., Секкей Й. Роль супероксиддисму-тазы в окислительных процессах клетки и метод определения ее в биологических материалах // Лаб. дело. — 1985. - № 11. - С.678-681.
17. Юматов Е.А., Скоцеляс Ю.Г. Сравнительный анализ устойчивости функций сердечно-сосудистой системы у крыс разных линий при иммобилизации // Журн. высш. нервн. деят. - 1979. - № 2. - С.345-350.
18. Anderson R.J., Anderson R.L., Linas S.L, et al. Nonoleguric acute renal failure // N.Engl. J. Med. - 1977. - Vol. 236. -P.1134.
670031 г. Улан-Удэ, ул. Бийская, 90, кв. 78; Шантанова Лариса Николаевна — заведующий лабораторией безопасности биологически активных веществ Института общей и экспериментальной биологии СО РАН
© КОРНОПОЛЬЦЕВА Т.В., БАТОМУНКУЕВ Б.Б., ЧЕХИРОВА Г.В., АСЕЕВА Т. А. - 2008
МЕТОДИКА КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ СУММАРНОГО СОДЕРЖАНИЯ ФЛАВОНОИДОВ В НОВОМ СРЕДСТВЕ РАСТИТЕЛЬНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ «3 КРАСНЫХ»
Т.В. Корнопольцева, Б.Б. Батомункуев, Г.В. Чехирова, Т.А. Асеева (Институт общей и экспериментальной биологии СО РАН, г. Улан-Удэ, директор - д.б.н., проф. Л.Л. Убугунов)
Резюме. Разработана методика количественного определения суммарного содержания флавоноидов в пересчете на лютеолин-7-глюкозид в полиэкстракте сухом «3 красных», полученном из корневищ и корней марены красильной (Rubia tinctorum L.), красных листьев бадана толстолистного (Bergenia crassifolia (L.) Fritsch) и травы мари остистой (Teloxys aristata (L.) Moq.).
Ключевые слова: флавоноиды, растительное лекарственное средство, методика.
THE METHOD OF QUANTITATIVE DETERMINATION OF THE SUM OF FLAVONOIDS IN THE HERBAL REMEDY «3 RED»
T.V. Kornopoltseva, B.B. Batomunkuev, G.V. Chekhirova, T.A Aseeva (Institute of General and Experimental Biology SB RAS, Ulan-Ude)
Summary. The method of quantitative determination of the sum of flavonoids in the novel herbal polyextract «3 red» for standartization was elaborated. This novel herbal remedy of the roots of Rubia tinctorum L., red leaves Bergenia crassifolia (L.) Fritsch and herb of Teloxys aristata (L.) Moq. is composed.
Key words: flavounoids, the method ofquantitative determination, herbal remedy.
Профилактика и лечение заболеваний почек является актуальной проблемой современной медицины, а выбор препаратов, оказывающих нефропротекторное действие, в настоящее время весьма ограничен, что определяет необходимость разработки новых эффективных препаратов, предназначенных для лечения и профилактики заболеваний почек.
Сведения об использовании растений в народной и традиционной медицине являются надежным ориентиром в поиске новых видов лекарственного сырья с заданным спектром фармакотерапевтического влияния. При анализе информации тибетских медицинских трактатов и изучении опыта бурятских лам выявлено 10 композиций, наиболее часто назначающихся для лечения органов мочеполовой системы, в частности, при заболеваниях почек. Одной из этих композиций является трехкомпонентный сбор под условным названием «3 красных», который входит в виде блока в состав многокомпонентных прописей, таких как «Прославленный красный», «Красный отвар-11», «Полный сбор граната» и других [2,8]. В тибетской медицине бурятских лам в состав этого сбора входят корневища и корни марены красильной (Rubia tinctorum L.), красные листья бадана толстолистного (Bergenia crassifolia (L.) Fritsch) и трава мари остистой (Teloxys aristata (L.) Moq., syn. Chenopodium aristatum L.).
Препараты и извлечения из этих растений в научной и народной медицине используются в качестве спазмолитических и мочегонных средств [4,5,7], что
указывает на целесообразность применения данной композиции в качестве средства для профилактики и терапии заболеваний почек.
Целью настоящей работы явилась разработка методики стандартизации нефропротекторного экстракта под условным названием «3 красных».
Материалы и методы
Растительный материал — корни марены красильной приобретены в аптечной сети (ПФК «Фитофарм», рег. № 70/729/23, серия 010799); красные листья бадана толстолистного и трава мари остистой собраны в конце вегетации в пригороде Улан-Удэ в 2007 году. Сухой полиэкстракт получали методом кратной мацерации с учетом оптимальных параметров экстракции. Наличие основных групп биологически активных веществ определяли общепринятыми методами [3]. Определение потери в массе при высушивании проводили на дериватографе Netzsch 8ТА 449С (Германия). Спектры поглощения регистрировали на спектрофотометре ^і1еп^8453Е (США) в кварцевых кюветах с толщиной поглощающего слоя 10 мм. Метрологическую обработку результатов проводили согласно рекомендациям [3].
Результаты и обсуждение
Методом кратной мацерации с учетом оптимальных параметров экстракции получен сухой полиэкстракт. Оптимизацию процесса экстракции проводили с учетом выхода суммы экстрактивных веществ [3] и суммы флавоноидов [1]. Полиэкстракт представляет собой порошок коричневого цвета с приятным запахом и горьковатым вяжущим вкусом. Гигроскопичен, комку-
